一种治疗大肠癌的药物组合物及其制备方法、用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种治疗大肠癌的药物组合物及其制备方法、用途，属于医药领域。
【背景技术】
[0002] 癌症是一种严重威胁人类健康和生命的常见病和多发病，人类因癌症而引起的死 亡居所有疾病死亡率的第二位，仅次于心脑血管疾病。癌症的发病机制有诸多因素参与， 目前认为细胞凋亡受抑是其中的一个途径。细胞凋亡是一种程序性细胞死亡，表现为细 胞形态缩小、染色质凝聚、细胞核破裂、染色质DNA水解成片段（180bp倍数）、形成凋亡小 体。凋亡早期，细胞线粒体膜电位降低，随后细胞色素C从线粒体内转移到细胞液中，并与 APAF1 (凋亡蛋白酶活化因子1)结合，同时线粒体功能衰退。随后，细胞色素C/APAF1复合 物激活Caspase-9,后者再激活Caspase-3和其它下游Caspase (半胱天冬酶），导致细胞膜 内侧磷脂酰丝氨酸（PS)外翻。这时细胞变小，染色质固缩（chromatin condensation)，DNA 片段化（DNA fragmentation)，形成凋亡小体，细胞起泡（cell bubbling)，细胞发生凋亡。 当细胞凋亡不足时，细胞群体内存活与死亡的平衡被破坏，癌细胞数目的净增长加大。
[0003] 中药在癌症治疗过程中有着十分重要的地位，它可以提高癌症患者免疫功能以及 抗癌能力，还可以减轻患者放、化疗时的毒副作用，提高患者对放化疗的耐受性。现代研究 表明，多种中药材及其提取物都具有预防或治疗癌症的作用。例如，姜黄素可抑制肿瘤的增 殖和扩散；活血化瘀药川芎能抑制小鼠黑色素瘤的转移；中药川乌、虎杖等煎剂制成的栓 塞注射液有明显的抑制癌细胞作用。由于中药在治疗癌症过程中机理复杂，不同的原料药 配伍产生的效果可能不相同。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种新的治疗大肠癌的药物组合物及其制备方法、用途。
[0005] 本发明提供了一种治疗大肠癌的药物组合物，它是由下述重量配比的原料药制备 而成的制剂：鳖甲18份~22份、白花蛇舌草18份~22份、莪术16份~20份、黄芪16份~ 20份。
[0006] 优选的，所述的药物组合物是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：鳖甲20 份、白花蛇舌草20份、莪术18份、黄芪18份。
[0007] 进一步的，所述的药物组合物是由鳖甲、白花蛇舌草、莪术、黄芪的原生药粉、水或 有机溶剂提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成制剂。
[0008] 更进一步的，所述的制剂是汤剂、散剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。
[0009] 本发明提供了一种制备所述药物组合物的方法，它包含如下步骤：
[0010] a、按比例取原料药，打碎；
[0011] b、用乙醇提取，制备成浸膏；
[0012] c、加入药学上常用的辅料或辅助性成分，制备成制剂。
[0013] 优选的，所述的乙醇为85%的乙醇水溶液。
[0014] 本发明提供了所述的药物组合物在制备治疗和/或预防大肠癌的药物中的用途。
[0015] 进一步的，所述药物是治疗和/或预防直肠癌、结肠癌中一种或两种癌症的药物。
[0016] 更进一步的，所述药物是抑制结肠癌细胞HCT116增殖的药物。
[0017] 更进一步的，所述药物是提高结肠癌细胞HCT116凋亡酶Caspase-9、Caspase-3 中一种或两种的活性；降低结肠癌细胞HCT116的BCL-2蛋白表达水平；提高结肠癌细胞 HCT116的BAX蛋白表达水平；诱导结肠癌细胞HCT116发生细胞凋亡的药物。
[0018] 本发明药物是将鳖甲、白花蛇舌草、莪术和黄芪特定配比用于大肠癌的治疗，具有 软坚散结、清热解毒、破血消癥、益气扶正的功效。实验证明，该药物组合物能显著抑制人结 直肠癌上皮细胞HCT116增殖，尤其500 y g/ml剂量与100 y M齐墩果酸作用强度相当，并可 以调节机体免疫。本发明药物治疗癌症，药效明确，成本低，且药材来源于动植物，临床使用 安全，避免放化疗药物的副作用，为临床提供了 一种新的用药选择。
[0019] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0020] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
【附图说明】
[0021] 图1本发明药物组合物对HCT116细胞形态的影响
【具体实施方式】
[0022] 实施例1本发明药物组合物的制备
[0023] a、称取原料药：鳖甲20g，白花蛇舌草20g，莪术18g，黄芪18g ;
[0024] b、将上述饮片打碎，用85%乙醇加热提取两次，每次lh，合并两次药液，用旋转蒸 发仪浓缩至一定浓度，用蒸发皿挥干溶剂，于烘箱中烘至恒重，浸膏的提取得率为20. 43%， 浸膏：原生药材质量=10:2. 043。
[0025] 实施例2本发明药物组合物的制备
[0026] a、称取原料药：鳖甲18g，白花蛇舌草18g，莪术16g，黄苗16g ;
[0027] b、将上述饮片打碎，用85%乙醇加热提取两次，每次lh，合并两次药液，用旋转蒸 发仪浓缩至一定浓度，用蒸发皿挥干溶剂，于烘箱中烘至恒重，浸膏的提取得率为20. 43%， 浸膏：原生药材质量=10:1. 968。
[0028] 实施例3本发明药物组合物的制备
[0029] a、称取原料药：鳖甲22g，白花蛇舌草22g，莪术20g，黄芪20g ;
[0030] b、将上述饮片打碎，用85%乙醇加热提取两次，每次lh，合并两次药液，用旋转蒸 发仪浓缩至一定浓度，用蒸发皿挥干溶剂，于烘箱中烘至恒重，浸膏的提取得率为20. 43%， 浸膏：原生药材质量=10:2. 129。
[0031] 取上述浸膏加入药学上常用的辅料或辅助性成分，制备成汤剂、散剂、丸剂、颗粒 剂、片剂或口服液。
[0032]以下通过实验例进一步说明本发明的有益效果。以下所称的鳖蛇抗癌方为根据实 施例1制备而成的组合物。
[0033] [材料]
[0034] 细胞株：人结肠癌上皮细胞HCT116,购自中国科学院上海细胞库，冻存于液氮。
[0035] 药物：鳖甲、白花蛇舌草、莪术、黄芪饮片购自同仁堂公司，经鉴定为正品。主 要仪器：恒温00 2细胞培养箱（Thermo);多功能酶标仪（Thermo Scientific Varioskan Flash, Type 3001) ;Allegra X-12 型离心机（Beckman Coulter) ;DMI 3000B 型焚光显微镜 (Leica);超净工作台（苏净安泰）；细胞培养瓶、细胞培养板等耗材由Corning提供。
[0036] 试剂：McCoy' s 5A 培养基（Sigma-Aldrich);小牛血清（Invitrogen);膜蛋白 酶（Sigma-Aldrich) ;MTT试剂盒（碧云天）；Caspase_9和Caspase-3检测试剂盒（碧云 天）；Bradford蛋白浓度测定试剂盒（碧云天）；Human Bax(BCL-2_Associated X Protein) ELISA 试剂盒和 Human BCL_2(B_cell lymphoma 2) ELISA 试剂盒（Elabscience)。Hoechst 33342染色液（凯基生物），荧光淬灭剂（凯基生物），其它试剂均为国产分析纯。
[0037] [方法]
[0038] 细胞培养
[0039] 1^116细胞用含10%小牛血清的此(：〇7'8 54完全培养基在5%〇)2、37°(：湿热条 件下培养，并用〇. 25%胰蛋白酶-EDTA消化传代。
[0040] MTT细胞增殖实验
[0041] HCT116细胞接种于96孔培养板，每孔约3X103个细胞。接种24h后，用含不同 浓度鳖蛇抗癌方（1000 y g/ml、500 y g/ml、250 y g/ml、125 y g/ml、62. 5 y g/ml、37. 25 y g/ ml、0 y g/ml)、阳性药物齐墩果酸（100 y M)、对照溶剂（0. 4% DMS0)的培养液处理细胞12h、 24h、36h、48h，每组8孔。随后吸弃培养液，每孔加100 y 1的5mg/ml MTT，孵育4h，再加入 100 y 1的Formazan溶解液。4小时后用酶标仪在570nm测吸光度值（A57QJ。细胞抑制率 (% )= 对照组^ A药物组 )/八对照组><100%〇
[0042] 细胞凋亡酶Caspase-9和Caspase-3活性的测定
[0043] HCT116细胞接种于6孔板，每孔约1X105个细胞，用含鳖蛇抗癌方（125yg/ ml、250 y g/ml、500 y g/ml)、齐墩果酸（100 y M)和对照溶剂（0? 4 % DMS0)的培养液处 理细胞48h，消化收集细胞，加入蛋白裂解液，并用Bradford法测定蛋白浓度（按试剂 盒说明书进行）。Caspase-3和Caspase-9活性检测：在96孔板中加入50 y 1检测缓冲 液，再混入40 y 1待测样品，最后加入10 y 1 Ac-LEHD-pNA(Casp