苯-I, 3-二醇（4, 5IPMR) 标题化合物可使用与实施例和一般合成方案中所述类似的方法制备。1H NMR (400 MHz, DMSO-(I6) δ 8.83 (s,lH),8. 78 (s,lH),6. 05 (d, 1H),5. 94 (d, 1H),3. 04 (m, 1H), 2.09 (s，3H)，1.20 (s，3H)，1.18 (s，3H) 〇
[0142] 实施例7 4-丁基-5-甲基苯-I, 3-二醇（4, 5BMR) 标题化合物可使用与实施例和一般合成方案中所述类似的方法制备。LC-MS :180. 8 (!+Do1H NMR (400 MHz,DMSO-(I6) δ 8.87 (s,lH),8. 78 (s,lH),6. 07 (d, 1H),5. 98 (d, 1Η)，2·37 (t，2H)，2.07 (s，3H)，1.28 (m，4H)，0.85 (t，3H)。
[0143] 实施例8 4-苄基-5-甲基苯-I, 3-二醇（4, 5BnMR) 标题化合物可使用与实施例和一般合成方案中所述类似的方法制备。1H NMR (400 MHz，CDC13) J 7.27 (m，2H)，7.17 (m，3H)，6.30 (d，lH)，6.22 (d，lH)，4.73 (S，1H)，4.68 (s，lH)，3.97 (s，2H)，2.21 (s，3H)〇
[0144] 实施例9 4-环丙基-5-甲基苯-I, 3-二醇（4, 5CPrMR) 标题化合物可使用与实施例和一般合成方案中所述类似的方法制备。1H NMR (400 MHz, DMSO-(I6) δ 8.85 (s,lH),8. 66 (s,lH),6. 04 (d, 1H),5. 99 (d, 1H),2. 17 (s,3H), 1.35 (m，lH)，0.75 (m，2H)，0.45 (m，2H) 〇
[0145] 实施例10 4-环戊基甲基-5-甲基苯-I, 3-二醇（4, 5MCPMR) 标题化合物可使用与实施例和一般合成方案中所述类似的方法制备。LC-MS :207. 0 (!+Do1H NMR (400 MHz,DMSO-(I6) δ 8.85 (s,lH),8. 79 (s,lH),6. 08 (s,lH),5. 99 (s, 1Η)，2·39 (d，2H)，2.08 (s，3H)，1.99 (m，lH)，1.52 (m，6H)，1.18 (m，2H)。
[0146] 实施例11 4-环戊基-5-甲基苯-I, 3-二醇（4, 5CPMR) 标题化合物可使用与实施例和一般合成方案中所述类似的方法制备。LC-MS :193. I (M+1)。1H NMR (400 MHz，CDCl3) J 6. 23 (d，1H)，6. 13 (d，1H)，4. 63 (s，1H)，4. 58 (s， 1Η)，3·25 (m，lH)，2.27 (s，3H)，1.88 (m，6H)，1.67 (m，2H)。
[0147] 实施例12 4-乙基-5-甲基苯-I, 3-二醇（4, 5EMR) 标题化合物可使用与实施例和一般合成方案中所述类似的方法制备。LC-MS :152. 8 (!+Do1H NMR (400 MHz,DMSO-(I6) δ 8.87 (s,lH),8. 76 (s,lH),6. 08 (s,lH),5. 99 (s, 1Η)，2·38 (q，2H)，2.08 (s，3H)，0.93 (t，3H)。
[0148] 实施例13 4-仲丁基-5-甲基苯-I, 3-二醇（4, 5sBMR) 标题化合物可使用与实施例和一般合成方案中所述类似的方法制备。LC-MS :181. 15 (M+1)。1H NMR (400 MHz，CD3OD) J 6. 21 (s，1H)，6. 11 (s，1H)，4. 80 (m，2H)，2. 92 (m， 1H)，L80 (m，2H)，1.26 (d，3H)，0.82 (t，3H)。
[0149] 实施例14 4-(1-苯基乙基）-5-甲基苯-I, 3-二醇（4, 5PEMR) 标题化合物可使用与实施例和一般合成方案中所述类似的方法制备。LC-MS :229. 0 (M+1)。1H NMR (400 MHz，CDCl3) J 7. 32 (m，3H)，7. 25 (m，2H)，6. 29 (d，1H)，6. 13 (d， 1Η)，4·64 (s，lH)，4.50 (m，2H)，2.32 (s，3H)，1.63 (t，3H)。
[0150] 实施例15 4-(2, 2, 2-三氟乙基）-5-甲基苯-I, 3-二醇（4, 5TFEMR) 标题化合物可使用与实施例和一般合成方案中所述类似的方法制备。1H NMR (400 MHz，CD30D) J 6.16 (s，2H)，3.43 (q，2H)，2.20 (s，3H)。
[0151] 实施例16 4-环己基-5-氟苯-I, 3-二醇（4, 5EFR) 标题化合物可使用与实施例和一般合成方案中所述类似的方法制备。1H NMR (DMS0-d6,400 MHz) δ :9.48 (s，lH)，9.33 (s，lH)，6.12 (dd，/=2.3，1.3Hz，lH)，5.96 (dd，/= 12,2·3 Hz，lH)，2.85 (qd，/= 7.4，L2 Hz，2H)，1.01 (t，/= 7.4 Hz，3H)。
[0152] 实施例17 2-苄基-1,5-二羟基-3-三氟甲基-苯（4,58町?1^) LC-MS :267 (M-I)c31HNMR (400 MHz，CDC13) J 7.14-7.28 (m，5H)，6· 81 (d，/= 2.0 Hz，lH)，6.52 (s，lH)，5.11 (s，lH)，4.98 (s，lH)，4. 11 (SjH)c319FNMR (360 MHz，CDCl3) J-59. 7 (s) 〇
[0153] 实施例18 蘑菇酪氨酸酶抑制试验 将10 μΜ化合物、300 μΜ L-酪氨酸和84单位/mL的蘑菇酪氨酸酶（Sigma T3824)合 并到pH= 6. 5的0. 05M磷酸氢二钾缓冲液中，并在室温下温育15 min。在490 nm下记录 吸光度。％酪氨酸酶抑制计算如下：(AbsDMS。- Absaiipd )/Abs_ X 100。对本文所述的各 种化合物，以及对照化合物4-乙基间苯二酚（4ER)、4_异丙基间苯二酚（4IPR)、4_己基间 苯二酚（4HR)、4-环己基间苯二酚（4CHR)、5-甲基间苯二酚（5MR)、曲酸（KA)和对苯二酚 (HQ)进行试验，其结构如下所示。结果示于表1中。
[0154] 表L蘑菇酪氨酸酶（％剩余酶活性）
CN 105142603 A 说明书 32/35 页
[0155] 实施例19
哺乳动物酪氨酸酶抑制试验 B16F1 细胞在 10% (：02和 37 °C 下在 Dulbecco 改良 Eagle 培养基（DMEM) 10% FBS，P/S 中生长至 90% 融汇。用 150 mM NaCl ;20 mM Tris-HCl，pH值=7. 4 ;和 1% Triton-XlOO 制备 细胞裂解物。试验在具有10 μΜ化合物的缓冲液（0.05 M磷酸二氢钾缓冲液，pH= 6. 5,600 uM L-酪氨酸，15 uM左旋多巴，0.325 mg/mL B16F1细胞裂解液）中进行。混合后，将反应 混合物在37°C下温育8 h并在490 nm下测定吸光度。％酪氨酸酶抑制计算如下：(AbsDMS。 Abscmpd )/AbsDMS〇 X IOO0
[0156] 实施例20 B16黑色素试验 B16F1细胞在10%〇)2和37 °C下生长于不含苯酚的DMEM 10%FBS，P/S中。胰蛋白酶消 化后，将细胞以每孔3, 000个细胞接种于96孔板中并使其附着过夜。I mM茶碱用于刺激黑 色素生成，并加入感兴趣的化合物。在1〇%〇)2和37 °C下生长72 h后，在405 nm下测定介 质吸光度并校正钙黄绿素-AM测定的细胞活力。％黑色素含量计算如下：(AbsDMS。/钙黄绿素DMS。- Absaiipd/钙黄绿素。"^)/ AbsDMS。/钙黄绿素 DMS(]X 100。对本文所述的各种化合物，以 及对照化合物4ER、4IPR、4HR、4CHR、5MR、曲酸和对苯二酚进行试验。结果示于表2中。
[0157] 表2· B16介质黑色素（％黑色素）
[0158] 实施例21 黑色素细胞-HaCaT共培养试验 暗着色的人新生儿表皮黑色素细胞（HEMn-DP，Invitrogen)在37 °C和5%C02下生长 于具有HMGS-2补充和P/S的培养基254中。HaCaT细胞在37 °(：、5%0)2下生长于DMEM， 10%FBS，P/S中。共培养在50%黑色素细胞培养基+50%角化细胞培养基（EpiLife，含EDGS， P/S)中进行。将细胞在24孔板中以每孔40K (HaCaT)和30K (HEMn-DP)铺在共培养培养基 中。在 37 °C 和 5%C02 下温育 24 h 后，将培养基换为 M153(MCDB153 Sigma M7403,含 NaHCO3pH 至 7.1、2 mM 酪氨酸、10 nM NDP-aMSH、3 ng/mL bFGF、2.8 ug/mL 氢化可的松、10 ug/mL 胰岛素、10 ug/mL转铁蛋白和P/S)，用化合物处理，并在37 °C和5%C02下温育72 h。用钙 黄绿素 -AM 测量细胞活力后（RFU Ex/Em=488/525nm)，在 65 °C 下用 IN NaOH + 10% DMSO 将细胞裂解lh。在405 nm和660 nm下测定澄清裂解液的吸光度。％黑色素计算如下： (飾8405_-厶匕8660_)/|丐黄绿素_)-飾8405_|：)-厶匕8660(：。 |11|：))/|丐黄绿素(：。|11|：)))/ (Abs405DMS。- Abs660DMS。)/钙黄绿素_ X 100。在10 μΜ的浓度下，在化合物4,5CHMR存 在下％细胞黑色素为42%。
[0159] 实施例22 Mattek 3D皮肤替代物 MelanoDerm(Mel-300-B)试验根据制造商的说明（MatTek公司）进行。每隔一天，将 测试物品施用于EPI-100-NMM-113培养基中，并局部应用阳性对照25uL的2%曲酸。14天 后，视觉核实组织活力和黑色素细胞形态，萃取组织黑色素并对标准曲线定量。％黑色素计 算如下：（黑色素 DMS。-黑色素。_)/黑色素 DMS。X 100。对本文所述的各种化合物，以及对 照化合物4ER、4IPR、4HR、4CHR、曲酸和对苯二酚进行试验。结果示于表3中。
[0160] 表3. MatTek试验（％黑色素） CN 105142603 A 说明书 34/35 页
[0161] 实施例23 黑眼圈的临床评价 在提供知情同意后，将其边缘下方具有轻度至中度黑眼圈的女性个体招募入研究。研 究根据所有适用的政府规章和制度政策进行。在应用测试产品前，专业分级员和个体都评 估其眼睛下方的黑眼圈的严重程度。将含有如本文所述的一种或多种化合物的组合物局部 施用于一只眼睛周围的皮肤区域，并将不含有本文所述的化合物的组合物施用于另一只眼 睛周围作为对照。治疗分配在调查对象中是随机的，并且个体和分级员都不知道治疗编码。 产品应用后一小时，分级员和个体分别评价眼睛下方的黑眼圈的外观。
[0162] 实施例24 浮肿的临床评价 在提供知情同意后，招募其眼睛下方具有浮肿的一组女性个体。研究根据所有适用的 政府规章和制度政策进行。将含有本文所述的化合物的组合物施用于一只眼睛下方，并将 不含有如本文所述的化合物的组合物施用于另一只眼睛下方作为对照。个体使用产品4 周，2周时返回进行另一次皮肤病学评价。产品使用2周和4周后，个体和皮肤科医生都评 估与基线观察相比眼睛浮肿的改善。
[0163] 实施例25 老化迹象的临床评价 在提供知情同意后，招募一组男性和女性个体。研究根据所有适用的政府规章和制度 政策进行。受过视觉和触觉评估训练的专业分级员通过半结构化级别分级评估每个个体的 脸部的不同老化迹象。每个个体的特征在于他或她的老化迹象的定量信息且两个专业分级 员在每个时间点评估每个参数。将含有本文所述化合物的组合物施用于脸部的一个部分， 并将不含如本文所述的化合物的组合物施用于脸部的另一部分作为对照。个体使用产品4 周，在2周和4周时返回由分级员进行评价。
[0164] 计算平均值和标准偏差，以及相对于施用前参数的变化（以百分比表示）。配对学 生t检验用于确定结果的显著性。
[0165] 尽管已参照其特定变化对本组合物和方法加以描述，但本领域技术人员应理解， 在不脱离本文所述的组合物和方法的真实精神和范围的情况下可作出各种变化且可取代 等价物。此外，可作出许多修改以使特定的情况、材料、物质组成、方法、方法步骤适应本文 所述的化合物和方法的目的、精神和范围。上文引用的所有专利和出版物通过引用并入本 文中。
【主权项】
1. 一种美容或皮肤病学组合物，其包含一种或多种式I的间苯二酚： 其中R1和R2独立地为烷基、烯基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、-F或-Cl，其中每个烷基、 烯基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选被-〇H、-OR3、-NR3R4、-C(O)OR3、-C(O)NR3R4或卤 素取代；且 R3和R4独立地为氣、烷基、烯基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、芳基烧 基、杂芳基烷基、芳基或杂芳基； 或其药学上可接受的盐。2. 权利要求1的组合物，其包含式I化合物，其中 R1为烷基、全卤代烷基、-F或-Cl;且 R2为烷基或环烷基。3. 权利要求1的组合物，其包含式I化合物，其中R1为烷基。4. 权利要求1-3中任一项的组合物，其包含式I化合物，其中R1为甲基。5. 权利要求1-3中任一项的组合物，其包含式I化合物，其中R1为三氟甲基。6. 权利要求1或2的组合物，其包含式I化合物，其中R1为氟。7. 权利要求1或2的组合物，其包含式I化合物，其中R1为氯。8. 权利要求1-7中任一项的组合物，其包含式I化合物，其中R2为烷基。9. 权利要求1-8中任一项的组合物，其包含式I化合物，其中R2为乙基。10. 权利要求1-8中任一项的组合物，其包含式I化合物，其中R2为己基。11. 权利要求1-7中任一项的组合物，其包含式I化合物，其中R2为环烷基。12. 权利要求1-7或11中任一项的组合物，其包含式I化合物，其中R2为环己基。13. 权利要求1的组合物，其包含式I化合物，其中化合物为或其药学上可接受的盐。14. 一种美容或皮肤病学组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-13中任一项的组合 物和药学上、皮肤病学上或美容学上可接受的载体。15. -种调节或预防皮肤病症的方法，其中皮肤病症的特征在于氧化应激或退化过程， 该方法包括给予呈现所述皮肤病症的个体有效量的权利要求1-13中任一项的组合物。16. -种减少或治疗皮肤老化迹象或减少皮肤老化迹象的外观的方法，包括给予呈现 所述皮肤病症的个体有效量的权利要求1-13中任一项的组合物。17. -种调节或预防与皮肤的视觉不连续性相关的皮肤病症的方法，包括给予呈现所 述皮肤病症的个体有效量的权利要求1-13中任一项的组合物。18. 权利要求17的方法，其中视觉不连续性与老化、年龄相关的损伤或由外在因素导 致的损伤有关。19. 权利要求17的方法，其中皮肤的视觉不连续性与色素沉着障碍相关。20. 权利要求19的方法，其中色素沉着障碍选自色素沉着不均匀、老年斑、白癜风和黑 皮病。21. -种预防、增亮或减少皮肤的视觉不连续性外观的方法，包括给予呈现所述皮肤病 症的个体有效量的权利要求1-13中任一项的组合物。22. -种调节或预防皮肤病症而同时减少或治疗皮肤老化迹象的方法，其中所述皮肤 病症与皮肤的视觉不连续性相关，包括给予呈现所述皮肤病症的个体有效量的权利要求 1-13中任一项的组合物。23. 权利要求22的方法，其中皮肤的视觉不连续性选自色素沉着不均匀、老年斑、白癜 风和黑皮病。24. 权利要求22的方法，其中皮肤的视觉不连续性是有害的紫外线辐射、污染或其他 环境损害、压力或疲劳的结果。25. -种预防、增亮或减少皮肤的视觉不连续性的外观，而同时减少或治疗皮肤老化迹 象的方法，包括给予呈现所述皮肤病症的个体有效量的权利要求1-13中任一项的组合物。26. 权利要求25的方法，其中皮肤的视觉不连续性选自色素沉着不均匀、老年斑、白癜 风和黑皮病。27. 权利要求26的方法，其中皮肤的视觉不连续性是有害的紫外线辐射、污染或其他 环境损害、压力或疲劳的结果。28. 包含权利要求1-13中任一项的皮肤护理组合物的组合物在制造用于治疗皮肤病 学病症的哺乳动物个体，以预防、减少或治疗皮肤老化或皮肤色素沉着迹象，或减少皮肤老 化或皮肤色素沉着外观的美容或皮肤病学组合物中的用途。
【专利摘要】本文提供的是用于治疗、调节或预防以氧化应激或退化过程为特征的皮肤病症的方法和包含间苯二酚衍生物的组合物。还公开了预防、增亮或减少由皮肤色素沉着、皮肤老化或其他障碍导致的皮肤的视觉不连续性外观的方法。
【IPC分类】A61Q19/02, A61P17/00, A61Q19/00, A61K8/34
【公开号】CN105142603
【申请号】CN201480012989
【发明人】A.W.欣曼, D.戴维斯, V.凯费茨
【申请人】荷兰联合利华有限公司
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2014年3月6日
【公告号】CA2902506A1, US20140256830, WO2014138471A2, WO2014138471A3