物的制备
[0086]本实施例提供式(I)所示苯丙素类化合物的一种制备方法，包括如下步骤：
[0087] SI.取大叶千斤拔50kg，以根部为原料，干燥，切成小块。8倍量80%的乙醇回流提 取2次，每次1.5小时，将提取液合并，浓缩至无醇味，得浸膏备用；
[0088] S2.将步骤Sl中浓缩后的浸膏溶于6L水中，采用DlOl大孔吸附树脂柱对其进行洗 脱，洗脱剂为乙醇与水的体积比为10:90,洗脱3个柱体积，收集洗脱液，命名为MM-I，备用；
[0089] S3.将步骤S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱层析进行洗脱，洗脱剂为甲醇-水 系统，其体积比为28:72，洗脱18个柱体积，按每3个柱体积收集一个流分的洗脱液，按顺序 收集6个流分，分别命名为:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16备用；
[0090] S4.将步骤S3中的收集到的流分MM-12用制备液相分离，制备液相色谱柱为:YMC， 20mm*25Omm，流速：I OmI /miη，流动相为甲醇-水-乙酸系统，甲醇：水：乙酸的体积比为10: 90:0.01，按出峰顺序收集洗脱液，共收集7个流分，分别命名为丽-121，丽-122，11-123，11-124，ΜΜ-125，ΜΜ-126，ΜΜ-127,备用；
[0091] S5 .将步骤S4中收集到的流分ΜΜ-125用制备液相纯化，制备液相色谱柱为:YMC， 20mm*250mm，流速:5ml /min，流动相为甲醇-水-乙酸系统，甲醇:水：乙酸的体积比为15:85: 〇. 01，收集洗脱液，重结晶后得到所述苯丙素类化合物。
[0092] 将实施例1至实施例5制备得到的化合物进行质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱 的检测，结果证明所得化合物为:3'，5二羟基-4葡萄糖基-苯基-3-羟基丙酸甲酯。其结 构式如式(I)所示：
[0093]
[0094] 其质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱的谱图数据如下：
[0095] HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z 399.1889,结合核磁特征，可得分子式为C15H2qO11,不 饱和度为6。
[0096] 4-^^(6001^,0)300):6.60((1,110,6.47((1,110,4.95(8,110,4.94(111,210,3.00-4.00(glc-H)，2.71(m，2H) 〇
[0097] 13C-NMR( 150MHz，CD3OD): 170 · 5 (C-I)，150 · 7 (C-Γ )，150 · 2 (C-4，），135 · 5 (C-3，， 5'），114.7(C-2'，6，），101.2(C-1"），61.5-77.8(C2"-C6"），61.l(C-2)，38.69(C-3)。
[0098] 实施例6苯丙素类化合物盐的制备
[0099] 苯丙素类化合物盐酸盐的制备：
[0100]搅拌下将该苯丙素类化合物甲醇溶液中滴加饱和盐酸至PH值2-3,搅拌下滴加乙 腈，抽滤，干燥得到白色粉末固体，即为苯丙素类化合物的盐酸盐。
[0101]苯丙素类化合物磺酸盐的制备：
[0102] 在含有该化合物、溶剂、磺酸、中性油和促进剂的反应体系中加入碱金属的氢氧化 物，加入溶剂、低级醇和助促进剂，通入二氧化碳，分离得到白色粉末固体，即为苯丙素类化 合物的磺酸盐。
[0103] 苯丙素类化合物钾盐或钠盐的制备：
[0104] 将溶于乙醇中的KOH或NaOH加入该苯丙素类化合物中，搅拌下加热回流反应，冷制 室温，搅拌下滴加乙腈，抽滤，干燥得白色固体，即为该苯丙素类化合物的钾盐或钠盐。
[0105] 苯丙素类化合物铵盐的制备：
[0106] 搅拌下将该苯丙素类化合物甲醇溶液中滴加饱和氨水至pH值9-11，搅拌下滴加乙 腈，抽滤，干燥得到白色固体，即为苯丙素类化合物的铵盐。
[0107] 上述化合物盐的谱图数据：
[0108] 苯丙素类化合物盐酸盐:ESMS显示m/z 412.67，核磁特征咕-匪1?(60010^，0)300) = 1H-匪R(600MHz,CD3OD) :6.63(d，lH)，6.49((1,1H)，5.05(s，lH)，4.98(m，2H)，3.00-4.00 (glc-H)，2.74(m，2H)〇
[0109] 苯丙素类化合物磺酸盐：ESIMS显示为m/z 504.28，核磁特征咕-丽1?(60010^， 00300):4-^^(60011^,0)300):6.55((1,110,6.36((1,110,4.90(8,110,4.91(111,210,3.00-4.00(glc-H)，2.51(m，2H)〇
[0110] 苯丙素类化合物钾盐或钠盐：
[0111] 钾盐ESMS显示m/z 452.19,核磁特征1H-NMR(600MHz ,CD3OD) :6.70((1,1H) ,6.57 (d，lH)，4.94(s，lH)，4.91(m，2H)，3.00-4.00(glc-H)，2.70(m，2H)。
[0112] 钠盐ESMS显示m/z 420.19,核磁特征1H-NMR(600MHz ,CD3OD) :6.56((1,1H) ,6.46 (d，lH)，4.74(s，lH)，4.51(m，2H)，3.00-4.00(glc-H)，2.60(m，2H)〇
[0113] 苯丙素类化合物铵盐:ESMS显示m/z 406.57，核磁特征咕-匪1?(60010^，0)300): 1H-匪R(600MHz，CD 3OD) :6.63((1,1H)，6.33(d，lH),4.94(s，1H)，4.91(m，2H)，3.00-4.00 (glc-H)，2.77(m，2H)〇
[0114] 上述苯丙素类化合物盐的结构式如式(IV)~式(VI)所示。
[0117]其中，式αν)为制备得到的苯丙素类化合物盐酸盐，式（V)为制备得到的苯丙素 类化合物的其中一种磺酸盐，式（VI)为制备得到的苯丙素类化合物的其中一种钾盐，式 (νπ)为制备得到的苯丙素类化合物的其中一种钠盐，式(VI)为制备得到的苯丙素类化合物 的其中一种铵盐。
[0118] 实验例7应用试验
[0119] 本发明所述化合物以及盐对LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞氧化应激与炎症的影 响。（为了实验过程中记录方便，以下将本发明所述的苯丙素类化合物标号为:药物MM-125， 即本发明中所述的药物MM-125即是指本发明式（I)所示苯丙素类化合物或其药学上可接受 的盐。）
[0120] 1材料与方法
[0121] 1.1药品及仪器
[0122] 脂多糖（11卩〇卩〇1}^&(^]1&1^(16，1^：)3)，]\11'1'购自3181]1&公司；小鼠巨卩策细胞1^￥ 264.7 购自湘雅细胞库;PBS; DMEM高糖培养基、胎牛血清、青霉素与链霉素;全自动酶标仪;恒温 CO2培养箱。
[0123] 小鼠白介素 l-f3(IL-1-f3)ELISA检测试剂盒，批号：2014/06(96T);小鼠白介素6 (IL-6)ELISA检测试剂盒，批号：2014/06(96T);小鼠肿瘤坏死因子-a(TNF-a)ELISA检测试 剂盒，批号：2014/06(96T);小鼠一氧化氮(NO)ELISA检测试剂盒，批号：2014/10(96T);小鼠 羟基自由基(OH)ELISA检测试剂盒，批号:2014/10(96T)。
[0124] 1.2药物制备
[0125] 首先用少量DMSO溶解，然后用DMEM稀释至一定的浓度，使终浓度中DMSO含量少于 1%0 〇
[0126] 1.3细胞培养
[0127] 小鼠巨噬细胞Raw 264.7培养于含10%热灭活（56°(：，3〇1^11)的胎牛血清卬83)、 lOU/mL青霉素钠、100yg/mL链霉素的DMEM培养基中，37°C、5 % CO2恒温培养箱中孵育生长。
[0128] 1.4细胞活力测定
[0129] 细胞活力通过MTT法来测定。将细胞制成细胞悬液接种于96孔板(I X 104个/孔)孵 育24h，再同步化24h，然后将不同浓度的药物作用于细胞2h，然后再加入LPS(30yg/mL)刺激 24h，吸弃原培养基，每孔加入IOOyL的MTT(0.5mg/mL)继续孵育4h，吸弃培养基，每孔加入 150yL的DMSO，摇床振摇IOmin，在490nm处测定吸光度。
[0130] 1.5 NO含量测定
[0131] Raw 264.7细胞接种于96孔板24h，再同步化24h，然后将不同浓度的药物作用于细 胞2h，然后再加入LPS( 30yg/mL)刺激24h，最后收集上清液，并于1000 Orpm离心5min，分装上 清并置于-80°C保存备用。通过小鼠 NO试剂盒测定NO含量。
[0132] 1.6 炎症因子TNF-a，IL-10，IL_6测量
[0133] 样品取1.5制备好的样品用于后续炎症因子测定。细胞产生TNF-a，IL-lf3，IL_6的 量通过小鼠 TNF-a，IL-Ιβ，IL-6试剂盒来测定。
[0134] 1.7 OH含量测定
[0135] 样品取1.5制备好的样品用于OH因子测定。通过OH试剂盒测定含量。
[0136] 1.8统计分析
[0137] 采用SPSS17.0软件，实验数据以（x±s表示;所得数据通过用单因素方差分析，方 差齐性用LSD检验，方差不齐用Dunnett T3检验。
[0138] 2实验结