β淀粉样蛋白产生的杂环磺酰胺类抑制剂的制作方法

专利名称：β淀粉样蛋白产生的杂环磺酰胺类抑制剂的制作方法
本申请是申请日为2001.12.11，申请号为01820518.6，名为β淀粉样蛋白产生的杂环磺酰胺类抑制剂的分案申请。在本文中提及的所有文件都全部通过引用纳入本文。
背景技术：
本发明涉及β淀粉样蛋白产生的抑制剂，它可用于治疗阿尔茨海默病。
阿尔茨海默病(AD)是老年痴呆(失去记忆)最常见的形式。在大脑中发现的AD的主要病理损伤包括噬斑和血管病形式的β淀粉样蛋白的胞外沉积和聚集的超磷酸化τ蛋白的胞内神经原纤维缠结。最近的证据揭示大脑中升高的β淀粉样蛋白水平不仅在τ病理学之前发生，而且和认知下降有关。最近的研究已经显示，聚集的β淀粉样蛋白对细胞培养物中的神经元是有毒的，它进一步说明β淀粉样蛋白是导致AD的原因。
β淀粉样蛋白主要由39-42个氨基酸肽构成，并是由称为淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的大型前体蛋白通过β蛋白酶和γ分泌酶的依次作用产生的。尽管十分罕见，但早期发作的AD与导致总β淀粉样蛋白或其更有聚集倾向的含42个氨基酸的同种型生产过剩的APP的遗传突变有关。此外，患有唐氏综合征的患者拥有额外的含有编码APP的基因的染色体，因此具有升高的β淀粉样蛋白水平且在晚年不可避免的会患上AD。
可有效抑制β淀粉样蛋白的产生和治疗阿尔茨海默病(AD)的组合物仍无法满足需要。
发明概要本发明提供了已被发现可特异性抑制从APP产生β淀粉样蛋白并能通过血脑屏障的2-氨基-1-乙醇的杂环磺酰胺衍生物和相关同系物。这些化合物可有效治疗β淀粉样蛋白水平升高的症状(如AD、唐氏综合征)。对可能患有或已患有这些疾病的受试者全身施用这些化合物可降低β淀粉样蛋白水平，从而随后降低这些患者大脑中的毒性β淀粉样蛋白聚集物。
一方面，本发明提供了如这里定义的结构式(I)的化合物、药学上可接受的盐、水合物或其前体药物。在一个实施方案中，结构式(I)的化合物是噻吩磺酰胺。在另一个实施方案中，结构式(I)的化合物是呋喃磺酰胺。在特别合乎需要的化合物中有那些在杂环的5位上含有卤素的化合物(如5-卤代噻吩磺酰胺)和在伯醇的侧链上有β-分支的化合物。
另一方面，本发明提供了含有一种或几种结构式(I)的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
仍在另一方面，本发明提供了通过输递结构式(I)的化合物在受试者中抑制β淀粉样蛋白产生的方法。
仍在另一方面，本发明提供了通过以足以减轻AD症状或发展的量向受试者施用结构式(I)的化合物以在受试者中治疗阿尔茨海默病(AD)的方法。
通过阅读以下本发明的详细描述，本发明的这些方面和其它方面对于精通此领域的技术人员是显而易见的。
发明详述本发明包括结构式(I)的化合物，它们的药物制剂，以及在可能患有或患有AD或其它因大脑中升高的β淀粉样蛋白水平而导致的疾病的受试者中调节β淀粉样蛋白产生的应用。结构式(I)的化合物包括药学上可接受的盐和/或水合物或其前体药物，其中 R1和R2独立选自氢、烷基、取代的烷基、CF3、链烯基、取代的链烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、苯基、取代的苯基、和(CH2)n(1，3)而噁烷，其中n为2-5；R3选自氢、烷基、取代的烷基；R4选自氢、烷基、取代的烷基、烷基环烷基、取代的烷基环烷基、苯基(取代的)烷基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基OBn、取代的烷基OBn、烷基吡啶基、取代的烷基吡啶基、烷基呋喃基、取代的烷基呋喃基、CH(OH)苯基、CH(OH)取代的苯基、链烯基、取代的链烯基、环烷基、取代的环烷基、N-取代的-哌啶基、哌啶基、取代的哌啶基、四氢噻喃、取代的四氢噻喃、2-二氢化茚、取代的2-二氢化茚、苯基、取代的苯基、烷基NHR7和取代的烷基NHR7；条件是R3和R4不同时是氢；
R7是烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、苄基、取代的苄基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基SR8或取代的烷基SR8；R8是烷基、取代的烷基、苄基或取代的苄基；或者R3和R4可以连接形成环；R5选自氢、低级烷基、取代的低级烷基、链烯基、取代的链烯基、炔基、取代的炔基、CH2环烷基、取代的CH2环烷基、苄基、取代的苄基、和CH2CH2QR9；Q是O、NH或S；R9是低级烷基、取代的低级烷基、苯基或取代的苯基；R6选自氢、卤素和CF3；T选自 和 W、Y和Z独立选自C、CR10和N；R10选自氢和卤素，但至少W、Y和Z其中之一是C；X选自O、S、SO2和NR11；R11选自氢、低级烷基、取代的低级烷基、苄基、取代的苄基、苯基和取代的苯基；条件是如果此化合物含有一个或多个手性中心，至少手性中心之一必须为S-立体化学。
本发明不受杂环W-X-Y-Z-C与SO2基团连接点的限制。然而，在一个优选的实施方案中，该环通过碳原子结合到SO2基团上。然而，该环可以通过O、S或N杂原子结合。
本发明的化合物可以含有一个或多个不对称碳原子，且一些化合物可以含有一个或多个不对称(手性)中心并因此造成光学异构体和非对映体。虽然在结构式(I)中没有按照立体化学显示，当结构式(I)的化合物含有一个或多个手性中心时，至少一个手性中心为S-立体化学。最优选的是，结合有N、T、R3和R4的碳原子是S-立体化学。因此，本发明包括这种光学异构体和非对映体；以及外消旋的和拆分的、对映体纯的立体异构体；以及R和S立体异构体的其它混合物；以及药学上可接受的盐、水合物和其前体药物。
这里使用的术语“烷基”是指直链-和支链的含有1-10个碳原子，较好的是1-8个碳原子，最好1-6个碳原子的饱和的脂肪族碳氢基团；当用在这里时，术语“低级烷基”是指直链-和支链的含有1-6个碳原子的饱和的脂肪族碳氢基团；“链烯基”包括直链-和支链的至少有一个碳碳双键并含有2-8个碳原子，较好的是2-6个碳原子的烷基；“炔基”包括直链-和支链的至少有一个碳碳三键并含有2-8个碳原子，较好的是2-6个碳原子的烷基。
术语“取代的烷基”、“取代的链烯基”和“取代的炔基”是指含有1-3个选自卤素、CN、OH、NO2、氨基、芳基、杂环基、取代的芳基、取代的杂环、烃氧基(alkoxy)、取代的烃氧基、芳氧基、取代的烷氧基(烷基oxy)、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基、芳硫基的取代基的上述烷基、链烯基和炔基。这些取代基可以连接到烷基、链烯基或炔基的任何碳上，只要连接物能构成稳定的化学部分。
术语“芳基”用在这里是指碳环型的芳环系统，它可以是单环，或是稠合或连接在一起的多个芳香环，使得至少一部分稠合或连接的环形成了共轭的芳香系统。芳基包括但不限于苯基、萘基、联苯、蒽基、四氢萘基、菲基和二氢化茚。
术语“取代的芳基”是指含有1-4个选自卤素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、环烷基、链烯基、炔基、烃氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基和芳硫基的取代基的如上定义的芳基。
术语“取代的苄基”是指有1-5个包括卤素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、环烷基、链烯基、炔基、烃氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基和芳硫基的取代基在苯环上发生取代的苄基。
术语“杂环的”用在这里是指稳定的4-7元单环的或稳定的多环的杂环，它是饱和的、部分不饱和的或不饱和的，并由碳原子和1-4个选自N、O和S原子的杂原子构成。N和S原子可以被氧化。该杂环也包括任何上述杂环与芳环稠合的任何多重环。杂环可以在任何杂原子或碳原子结合，只要所得结构是化学稳定的。这种杂环包括，例如，四氢呋喃、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌啶基、氮杂基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噁唑基、异噁唑基、吗啉基、吲哚基、喹啉基、噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、硫代吗啉基、硫代吗啉亚砜、异喹啉基和四氢噻喃。
术语“取代的杂环”用在这里是指含有1-4个选自卤素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、链烯基、取代的链烯基、炔基、取代的炔基、烃氧基、取代的烃氧基、芳氧基、取代的芳氧基、烷氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、取代的烷基羰基、烷基羧基、取代的烷基羧基、烷基氨基、取代的烷基氨基、芳硫基或取代的芳硫基的取代基的如上定义的杂环。
术语“取代的环烷基”用在这里是指含有3个以上形成稳定环的碳原子并含有1-5个选自卤素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、取代的烷基、链烯基、取代的链烯基、炔基、烃氧基、芳氧基、取代的芳氧基、烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基、取代的烷基氨基、芳硫基、杂环、取代的杂环、氨基烷基和取代基的氨基烷基的取代基的以碳为基础的环。
当提到术语“取代的烷基环烷基”、“取代的烷基OBn”、“取代的烷基吡啶基”、“取代的烷基呋喃基”、“取代的烷基NHR7”、“取代的烷基OH”和“取代的烷基SR8”时，取代可以发生在烷基或相应的基础化合物上。
在定义R4基团时，N-取代的哌啶基可定义为取代的杂环基。特别合乎需要的取代基中有N-烷基、N-芳基、N-酰基和N-磺酰基哌啶基。特别适合的N-酰基-哌啶基是N-叔-丁氧基羰基(BOC)-哌啶。然而，精通此领域的技术人员可以容易的确定其它合适的取代基。
术语“烃氧基”用在这里是指OR基团，其中R是烷基或取代的烷基。术语“芳氧基”用在这里是指OR基团，其中R是芳基或取代的芳基。术语“烷基羰基”用在这里是指RCO基团，其中R是烷基或取代的烷基。术语“烷基羧基”用在这里是指COOR基团，其中R是烷基或取代的烷基。术语“氨基烷基”是指仲胺和叔胺，其中含有1-8个碳原子的烷基或取代的烷基可以相同或不同，且连接点在氮原子上。
术语“卤素”是指Cl、Br、F或I。
术语“环”结构，例如当R3和R4形成环结构时，除非对环结构的类型另有说明，包括单环结构、桥接的环结构和稠合的环结构。
本发明的化合物可以衍生自药物或药学上可接受的酸或碱的盐的形式使用。这些盐包括但不限于与有机和无机酸形成的下列盐，如乙酸、乳酸、柠檬酸、琥珀酸、延胡索酸、马来酸、丙二酸、苦杏仁酸、mallic、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、甲苯磺酸和类似的已知的可接受的酸及其混合物。其它的盐包括碱金属或碱土金属，如钠(如氢氧化钠)、钾(如氢氧化钾)、钙或镁。
这些盐以及本发明的其它化合物可以是酯、氨基甲酸酯的形式或其它常规的“前体药物”的形式，当以这种形式施用时，它可以在体内转化成活性部分。在这里优选的实施方案中，前体药物是酯类。参见，例如，B.Testa和J.Caldwell，“Prodrugs RevisitedThe″Ad Hoc″Approach as a Complement to LigandDesign”，Medicinal Research Reviews，16(3)233-241，编辑，John Wiley &Sons(1996)。
在一个特别优选的实施方案中，结构式(I)的化合物是噻吩磺酰胺，更好的是5-卤代噻吩磺酰胺，最好是在伯醇的侧链上有β-分支的5-卤代噻吩磺酰胺。因此，根据结构式(I)，本发明的化合物优选具有这样的结构，其中X是S，W是C(或CR10)，Y是C(或CR10)且Z是C(或CR10)，且磺酰胺连接到噻吩环的C2上。更好的是，X是S，W是C(或CR10)，Y是C(或CR10)，Z是C(或CR10)，且R6是卤素。最好的是，X是S，X是C，W是C，Y是C，Z是C，R6是卤素，且T是C(OH)R1R2，其中R1和R2是氢，R3是H，R4是S-立体化学构象的低级烷基，R5是H。在体外和体内初步筛选时，这些结构的化合物有未曾预料的良好的β淀粉样蛋白抑制活性，且在许多情况下，此活性优于含有其它杂环(如呋喃，其中X是O)的结构式(I)的化合物的活性。然而，其它此类结构式(I)的化合物对于这里所述的目的也是有效的。
例如，在另一个实施方案中，结构式(I)的化合物是呋喃磺酰胺，其中X是O、W是C、Y是C且Z是C。在一个特别优选的实施方案中，结构式(I)的呋喃磺酰胺的特点是在伯胺的侧链上含有β-分支。因此，根据结构式(I)，在这些化合物中T是C(OH)R1R2，其中R1和R2是是氢，R3是H，R4是S-立体化学构象的低级烷基，R5是H且R6是卤素。
仍在另一个实施方案中，结构式(I)的化合物的特征为结构式(I)的磺酰胺在伯胺基团的侧链上有β-分支。因此，根据结构式(I)，在这些化合物中T是C(OH)R1R2，其中R1和R2是是氢，R3是H，R4是S-立体化学构象的低级烷基，R5是H。
本发明的这些和其它化合物是根据下述流程制备的。
合成可以用精通有机合成领域的技术人员熟知的各种方法制备本发明的化合物。精通此领域的技术人员可以用下述方法以及有机合成领域已知的合成方法或这些方法的变异制备本发明的化合物。(通常可以参见，Comprehensive Organicsynthesis，“Selectivity，Strategy & Efficiency in Modern OrganicChemistry”，I.Fleming编，Pergamon出版社，纽约(1991)；Comprehensive OrganicChemistry，“The Synthesis和Reactions of Organic Compounds”J.F.Stoddard编，Pergamon出版社，纽约(1979))。优选的方法包括但不限于下面列出的那些。
第一种制备方法包括，在三乙胺(TEA)等碱性物质存在时，在合适的溶解中使2-氨基醇II与合适的磺酰卤反应以提供结构式III的化合物。对于R2和R1是氢的化合物，用氯铬酸吡啶(PCC)或在Swern条件下氧化N-磺酰基伯醇以提供相应的醛IV，IV可以和Grignard试剂(RMgX，其中R是有机基，X是卤素)反应以提供仲醇V，V是非对映体的混合物可以用高效液相色谱(HPLC)分离(流程1)。
流程1 第二种制备方法包括，在三乙胺等碱性物质存在时，在合适的溶解中使α-氨基酸或酯IX与合适的磺酰卤反应以提供结构式X的化合物(流程2)。用LiAlH4、B2H6或氰尿酰氯/NaBH4等标准方法可将中间产物N-磺酸X(RX＝H)转化成相应的伯醇VIII(R1＝R2＝H)。也可以用LiAlH4等标准方法将中间产物N-磺酰酯X(RX＝烷基、Bn)还原为相应的伯醇VIII(R1＝R2＝H)。或者，可以用DiBAL将中间产物N-磺酰酯X(RX＝烷基、Bn)转化成醛IV。最后，将中间产物N-磺酰酯X(RX＝烷基、Bn)和2当量的Grignard试剂反应以提供R1＝R2的叔醇III。或者，对于R1不同于R2的叔醇III，可以制备相应的N-磺酸的Weinreb酰胺(见流程10)，然后和R1MgX和R2MgX反应。对于在α-氨基酸碳上有不对称中心的结构式X的化合物(RX＝H)，通过标准拆分过程，将用各种手性碱形成的盐再结晶可以得到纯的对映体。
流程2 在第二种制备伯醇的方法的一个变体中，α-氨基酸或酯(或其N-保护的衍生物)VI首先被转化成相应的伯2-胺醇VII(用前一段中列出的方法)，然后在去保护后(如果需要的话)使其与合适的磺酰卤反应(流程3)以提供结构式VIII的化合物。为制备衍生自在氨基酸侧链含有β分支的非天然α-氨基酸的化合物，在流程4中列出了基于Hruby的工作(Tet.Lett.385135-5138(1997))的制备方法。这一方法需要将α，β-不饱和酸XI制成Evans手性助剂的α，β-不饱和的酰胺XII，然后共轭加成有机铜酸盐，用NBS捕获所得烯醇化物阴离子XIII，用叠氮阴离子(由叠氮化四甲基胍(TMGA)提供)取代溴化物XIV以生产XV，然后还原成2-氨基醇，随后再磺酰化以提供目标化合物XVI。在流程1-4中，R5是H。
流程3 流程4 为制备N-烷基化的磺酰胺VIII(R5＝烷基等)，或者用碳酸钾等合适的碱性物质处理再用烷基化试剂R5X处理，或者采用Mitsunobu条件(R5OH/DEAD，TPP)，这样可以将磺酰胺酯XVII N-烷基化。用LiBH4还原N-烷基化的磺酰胺酯在伯醇VIII系列中提供了N-烷基化的磺酰胺(流程5)。通过上述化学方法可以将这些伯醇VIII转化成仲醇V或醛IV系列。或者，可以用Grignard试剂处理N-烷基化的磺酰胺酯或其相应的Weinreb酰胺以提供N-烷基化的叔醇III。
流程5 当上述醇中连接到磺酰胺的杂环是噻吩时，可以用MCPBA氧化噻吩化合物XVIII以得到相应的砜衍生物XIX(流程6)流程6 另一种制备衍生自非天然2-氨基醇的磺酰胺的方法使用Streckerα-氨基酸合成法的Bucherer改良法(流程7)。在这个方法中，将醛XX和氰化物阴离子和碳酸铵反应以提供乙内酰胺XXI，它水解成α氨基酸XXII。然后将这一化合物还原成XXIII并磺酰化以提供所需的结构式XXIV的化合物。
流程7 对于衍生自2-氨基醇的在侧链上含有N或O杂原子的磺酰胺，发明了从D-丝氨酸开始的途径(流程8)。在这个方法中，D-丝氨酸XXV首先被磺酰化成XXVI，随后转化成酮XXVII，XXVII被还原性胺化成结构式XXVIII的目标化合物。
流程8 对于衍生自R1＝H且R2＝CF3的仲醇系列(化合物XXIX)中2-氨基醇的磺酰胺，设计了从醛IV(按流程1制备)开始的合成方法，它列在流程9中。
流程9 如在流程1这一部分中提到的，制备衍生自仲醇系列V中2-氨基醇的磺酰胺会导致形成非对映体的混合物。在流程10中列出了另一种可制得纯非对映体的制备这些化合物的方法，以制造衍生自L-异亮氨酸的化合物。这种方法利用了Roux先前采用的化学方法(Tetrahedron 505345-5360(1994))，它包括在Weinreb酰胺XXX(衍生自所必需的α-氨基酸)中加入Grignard试剂，然后使酮XXXI发生立体定向反应以提供单一的非对映的N-保护的2-氨基醇XXXII。使此化合物去保护，然后和磺酰氯反应以提供纯的非对映的结构式XXXIII的磺酰胺仲醇。
流程10 当上述醇中连接到磺酰胺的杂环是噻吩时，可以将5-溴-噻吩衍生物XXXIV(如流程1获得)转化成5-三烷基锡-噻吩衍生物XXXV，用碘化钠和氯胺T处理XXXV可将其转化成5-碘-噻吩(XXXVII)，或用SelectfluorTM(Aldrich Chemical公司)处理XXXV使其变为5-氟-噻吩(XXXVII)，这样就可以得到相应的5-碘-和5-氟-噻吩衍生物(流程11)。
按照这里描述的方法可以制备衍生自环己环的4位被烷氧基和氨基取代的环己基甘氨醇的磺酰胺(流程12)。这种方法必需先氢化4-L-羟苯基甘氨酸XXXVIII，然后磺酸化，用乙硼烷还原羧酸并制得N，O-丙酮化合物XXXIX。然后用氢化钠和烷基或苄基溴化物等烷基化试剂O-烷基化4-羟基丙酮化合物XXXIX。然后用含水酸处理除去保护基团以提供结构式XXXX的4-醚衍生物。或者，4-羟基丙醇化合物XXXIX可被氧化成4-酮，它可被还原性胺化并被去保护以提供相应的结构式XXXXI的4-氨基类似物。
流程11 流程12 另一种制备衍生自α-氨基酸的手性纯N-磺酰2-氨基醇的方法列在流程13中。这一方法包括从XXXXII构建Evans噁唑烷酮手性助剂XXXXIII，然后将其转化成相应的烯醇化物并用三苯甲基叠氮化物将其亲电子胺化以提供关键的中间产物XXXXIV(J。Am。Chem。Soc。1096881-6883(1987))。然后将叠氮中间产物XXXXIV水解成α-叠氮基酸XXXXV并还原成手性纯的α-氨基酸XXXXVI，用上述方法(例如流程2)可将XXXXVI转化成相应的N-磺酰2-氨基醇。
流程13 最后，也可以用如流程14中列出的Streckerα-氨基酸合成的不对称变体制备手性纯的α-氨基酸XXXXVI-上述手性N-磺酰2-氨基醇的一种可能的合成前体(J.Org.Chem.541055-1062(1989))。
用流程15中所述的标准方面可由相应的醛IV衍生出肟XXXXXIV。
流程15 使用方法结构式(I)的化合物是β淀粉样蛋白产生的抑制剂。在使用蛋白酶特异性测定的初步研究中，结构式(I)的化合物的范例已对蛋白酶活性显示了特异的抑制效应。因此，本发明的化合物可有效治疗并预防许多症状，其中对β淀粉样蛋白水平的调节提供了治疗作用。此类症状包括，例如，淀粉样蛋白血管病、脑淀粉样蛋白血管病、全身性淀粉样变性、阿尔茨海默病(AD)、荷兰型淀粉样变性的遗传性脑出血(包括体肌炎)、唐氏综合症等。
此外，结构式(I)的化合物可用于制造制剂，这种制剂可有效诊断与β淀粉样蛋白水平异常有关的症状。例如，结构式(I)的化合物可用于产生对各种诊断测定有用的抗体。产生单克隆抗体、多克隆抗体、重组体以及合成抗体或其片段的方法是精通此领域的技术人员熟知的。(例如可参见E。Mark和Padlin，“Humanization of Monoclonal Antibodies”，第4章，The Handbook ofExperimental Pharmacology，第113卷，The Pharmacology of MonoclonalAntibodies，Springer-Verlag(1994年6月)；Kohler和Milstein以及许多人知道它的修饰；PCT专利申请第PCT/GB85/00392号；英国专利申请公布第GB2188638A号；Amit等，Science，233747-753(1986)；Queen等，Proc。Nat’l。Acad。Sci。USA，8610029-10033(1989)；国际专利公布第WO90/07861号；以及Riechmann等，Nature，332323-327(1988)；Huse等，Science，2461275-1281(1988))。或者，结构式(I)的化合物自身也可用于此类诊断测定。无论所选试剂(如抗体或结构式(I)的化合物)，例如包括放射免疫测定和酶联免疫吸附测定(ELISAs)在内的合适的诊断模式是精通此领域的技术人员熟知的，且未对本发明的实施方案造成限制。
用阻遏物释放测定(RRA)已经确定了本发明许多化合物的β淀粉样蛋白抑制活性。参见下面的表23。如果一种化合物在20μM时使萤光素酶的活性至少增加了1.5倍且是无毒的，则在RRA中认为它是活性的。
此外，检测β淀粉样蛋白产生抑制剂的胞内、无细胞和体内筛选法是此领域已知的。这种测定法中包括放射免疫测定和酶联免疫吸附测定(ELISA)。例如可参见P.D。Mehta等，Techniques in Diagnostic Pathology，第2卷，Bullock等编，学术出版社，波士顿，第99-112页(1991)，国际专利公布第WO 98/22493号，欧洲专利第0652009号，美国专利第5,703,129号和美国专利第5,593,846号。本发明没有限制对合适的体外或体内筛选法的选择。
药物制剂考虑到已经选择的特定的症状，可以通过任何所需的途径向受试者施用本发明的化合物。受试者可以是任何合适的哺乳动物，包括人类、家畜(如犬和猫)和牲畜，它们已经被识别为患有或可能患有一种或多种需要对β淀粉样蛋白水平进行调节的症状。因此，本发明的化合物可有效治疗和/或预防许多人类和兽类症状。当用在这里时，“预防”包括在确定为可能患有但还未确诊患有这种症状的受试者和/或还未出现其任何症状的患者中预防这种症状。
可以用合适的输递途径输递或施用这些化合物，如，口服、静脉内、皮下、肌肉内、舌下、颅骨内、硬膜外、气管内、直肠、阴道等。最好的是，这种化合物是通过口服或通过合适的非肠胃途径施用的。可以和药学上可接受的常规的药物载体一起制备该化合物。任选地，可以将一种或多种本发明的化合物和其它活性剂混合。
精通此领域的技术人员可以容易的选择出合适的药学上可接受的载体。例如，合适的固体载体其中包括一种或多种可作为润滑剂、增溶剂、悬浮剂、填充剂、助流剂、浓缩辅助物、粘合剂或片剂崩解剂或成胶囊材料的物质。在粉剂中，载体是细微分散的和细微分散的活性成分混合的固体。在片剂中，活性成分和具有必需的浓缩特性等合适特性的载体混合并被压制成所需的形状和尺寸。合适的固体载体包括，例如，淀粉、糖类(例如包括乳糖和蔗糖)、磷酸二钙、纤维素(例如包括微晶纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠)和高岭土。
在制备溶液剂、悬浮剂、乳剂、糖浆剂和酏剂时可以使用液体载体。本发明的活性成分可以溶解或悬浮在如水、有机溶剂、这两者的混合物或药学上可接受的油或脂等药学上可接受的载体中。液体载体可以含有其它合适的药物添加剂，如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、悬浮剂、增稠剂、浓度调节剂、稳定剂或渗透压调节剂。供口服和肠道外施用的液体载体的合适例子包括水(尤其是含有上述添加剂，如纤维素衍生物，较好的是羧甲基纤维素钠溶液的水)、醇类(包括一元醇和多元醇，如甘油)和它们的衍生物，以及油类(如分馏的椰子油、花生油、玉米油、花生油和芝麻油)。为肠道外施用，这种载体还可以是油脂，如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。在无菌液体中使用了无菌液体载体以供肠道外施用。
任选地，本发明的组合物中可以包括通常用于药物组合物制备的添加剂。这种成分包括，例如，甜味剂或其它芳香剂、染色剂、防腐剂和抗氧化剂(如维生素E、抗坏血酸、BHT和BHA)。
无菌溶液或悬浮液形式的液态药物组合物可用在，例如，肌肉内、腹膜内或皮下注射。也可以静脉内施用无菌溶液。口服施用可以是液体或固体组合物的形式。
优选的药物组合物为单位剂型，如片剂或胶囊剂。在这种形式中，此组合物被细分成含有合适量活性成分的单位剂量；此单位剂型可以是包装的组合物，如包装的粉末、小瓶、安瓿、预装填的注射器或含有液体的小袋。例如单位剂型可以是其胶囊或片剂，或者它可以是包装形式的适当量的任何此类组合物。
如此所述，本发明化合物的治疗或预防有效量是可减轻疾病(如AD)症状，或可防止症状发生或防止更加严重的症状发生的化合物的量。通常，本发明化合物的单独剂量(即单位量，如片剂)可以在约1μg/kg-约10g/kg的范围内，更好的是为10mg/kg-约5g/kg，最好是约1mg/kg-约200mg/kg。理想的是，这些量是以日为基础提供的。然而，可以由主治医师主观确定在治疗或预防特定认知缺陷或其它症状中所用的剂量。其中的变化包括特定的认知缺陷和患者的体积、年龄和响应模式。例如，基于本发明化合物的活性曲线和潜能，起始剂量约为每天10mg，然后逐步增加日剂量直至每天约200mg，这可以在人类中提供所需的剂量水平。
或者，可能需要使用持续输递装置，以避免患者以日为基础的摄取药物的需要。“持续输递”被定义为延迟活性剂(即本发明的化合物)的释放，直到放置在输递环境中以后，然后药剂在随后的时间中持续释放。精通此领域的技术人员知道合适的持续输递装置。例如，合适的持续输递装置的例子包括水凝胶(例如参见例如参见美国专利第5,266,325号；4,959,217号；和5,292,515号)，渗透泵，如Alza(美国专利第4,295,987号和美国专利第5,273,752号)或Merck(欧洲专利第314,206号)等人描述的；疏水膜物质，如乙烯基异丁烯酸酯(EMA)和乙烯乙酸乙烯(EVA)；生物再吸收聚合物系统(例如参见Bioxid和Cellomeda的国际专利公布第WO 98/44964号；美国专利第5,756,127号美国专利第5,854,388号)；还描述了其它的生物再吸收灌输装置，例如包括聚酯、聚酐、或乳酸/乙醇酸共聚物(例如参见美国专利第5,817,343号(Alkermes Inc.))。为用在这种持续输递装置中，可以按这里的描述制备本发明的化合物。
实施例提供了以下实施例以阐明本发明的表化性合物的制造和活性，并阐明了它们在筛选测定中的性能。精通此领域的技术人员应该认识的是，尽管在以下实施例中列出了特定的试剂和条件，但这些试剂和条件不受本发明限制。
实施例13-溴-5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺 在(S)-+-异亮氨醇(23mg，0.2mmol)的THF溶液(3mL)中加入三乙胺(46μL，0.24mmol)和3-溴-5-氯噻吩-2-磺酰氯(59.2mg，0.2mmol)。将溶液搅拌8-16小时，然后浓缩。将残余物溶解在MeOH(1.5mL)中并通过半制备的RP-HPLC1纯化以得到实施例1(20.3mg)。
按照实施例1中列出的方法，用3-溴-5-氯噻吩-2-磺酰氯、5-溴噻吩-2-磺酰氯、3-溴-2-氯噻吩-5-磺酰氯、5-氯噻吩-2-磺酰氯、2，5-二氯噻吩-3-磺酰氯、2，3-二氯噻吩-5-磺酰氯和2-噻吩磺酰氯制造了以下化合物(实施例1-7，表1)。

表1(LCMS2数据分子例子和保留时间)
实施例85-氯-N-[(1S)-1-(羟甲基)-2-甲基丙基]噻吩-2-磺酰胺
在L-缬氨醇(25.8mg，0.25mmol)的THF溶液(3mL)中加入三乙胺(58μL，0.24mmol)和5-氯噻吩-2-磺酰氯(54mg，0.25mmol)。将溶液搅拌8-16小时，然后浓缩。将残余物溶解在MeOH(1.5mL)中并通过半制备的RP-HPLC1纯化以得到实施例8(19.5mg)。
按照实施例8中列出的方法，用5-噻吩-2-磺酰氯和5-溴噻吩磺酰氯和L-缬氨醇和D-缬氨醇制备以下化合物(实施例8-10，表2)。
表2(LCMS2数据分子离子和保留时间)
实施例114，5-二溴-N-[(1S)-1-(羟甲基)-2-甲基丙基]噻吩-2-磺酰胺
在(S)-(+)-2-氨基-3-甲基-1-丁醇(20.6mg，0.2mmol)的THF溶液(3mL)中加入三乙胺(46μL，0.24mmol)和4，5-二溴噻吩-2-磺酰氯(68mg，0.2mmol)。将溶液搅拌8-16小时，除去溶剂并通过RP-HPLC1纯化残余物以得到实施例11(49.6mg)。
表3(LCMS2数据分子离子和保留时间)
实施例125-氯-N-[(1S)-1-环己基-2-羟乙基]噻吩-2-磺酰胺
A.步骤1在L-环己基-甘氨酸(48.5mg，0.25mmol)的THF(2mL)中加入氢化铝锂(1M的THF溶液)(0.8mL，0.8mmol)，并在60℃将溶液加热4小时。在25℃将溶液搅拌8-16小时。加入水(45μL)、15％的氢氧化钠水溶液(45μL)和水(105μL)结束反应，每次加入时剧烈搅拌。然后过滤并浓缩混合物。
B.步骤2在步骤1的残留物的THF溶液(3mL)中加入三乙胺(69μL，0.50mmol)和5-氯噻吩-2-磺酰氯(54.3mg，0.25mmol)。将溶液搅拌8-16小时，除去溶剂并通过RP-HPLC1纯化残余物以得到实施例12(25.9mg)。
按照实施例12中列出的方法，用5-氯噻吩-2-磺酰氯和5-溴噻吩-2-磺酰氯以及L-环己基甘氨酸、β-甲基-DL-苯丙氨酸和L-别-异亮氨酸制备了以下化合物(实施例12-17，表4)。
表4(LCMS2数据分子离子和保留时间)
实施例185-溴-N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺1，1-二氧化物 A.步骤1在(S)-+-异亮氨醇(58.6mg，0.5mmol)的DCM(5mL)溶液中加入三乙胺(210μL，1.5mmol)和5-溴噻吩-2-磺酰氯(130.8mg，0.5mmol)。将溶液搅拌8-16小时，然后浓缩。
B.步骤2将步骤2的残余物(0.5mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)并加入间-氯过苯甲酸(2.5mmol)。将溶液搅拌8-16小时，除去溶剂并通过RP-HPLC纯化残余物以得到实施例18(4.3mg)。LCMS2数据分子离子和保留时间，375.9M+H)；3.37min。
实施例195-氯-N-[1-(羟甲基)-2，3-二甲基戊基]噻吩-2-磺酰胺 A.步骤1在氰化钠(735.15mg，15mmol)和碳酸铵(1.92g，20mmol)的EtOH/H2O溶液(1∶1，35mL)中加入2，3二甲基戊醛(570.95mg，5mmol)。将溶液在50℃加入20h，然后浓缩。
B.步骤2将步骤1的残余物(5mmol)溶解于35mL 3N的氢氧化钠溶液，并在95℃加热22h。继续搅拌8-16小时，然后除去溶剂。
C.步骤3在步骤2的残余物(2.5mmol)的THF(10mL)溶液中加入氢化铝锂(1M的THF溶液)(5mL，5mmol)，并将溶液在60℃加热4h。将溶液在25℃搅拌8-16h。加入水(285μL)、15％的氢氧化钠水溶液(285μL)和水(665μL)以结束反应，每次加入时剧烈搅拌。然后过滤并浓缩混合物。
D.步骤4在步骤3的残余物(0.5mmol)的THF(5mL)溶液中加入三乙胺(83.7μL，0.6mmol)和5-氯噻吩-2-磺酰氯(108.54mg，0.5mmol)。将溶液搅拌8-16小时，除去溶剂并通过RP-HPLC1纯化残余物以得到实施例19(46.1mg)。
按照实施例19中列出的方法，用2，3二甲基戊醛、2-甲基戊醛、2-乙基己醛、2，4，6-三甲基-3-环己烯-1-甲醛、1，2，3，6-四氢-苯甲醛、环戊基甲醛制造了以下化合物(实施例19-24，表5)。
表5(LCMS2数据分子离子和保留时间)
实施例255-溴-N-[(1S)-1-(羟甲基)-1，2-二甲基丙基]噻吩-2-磺酰胺
A.步骤1在(S)-α-甲基缬氨酸(131mg，1mmol)的THF溶液(5mL)中加入氢化铝锂(1M的THF溶液)(2mL，2mmol)，并将溶液在60℃加热4h。将溶液在25℃搅拌8-16h。加入水(114μL)、15％的氢氧化钠水溶液(114μL)和水(114μL)以结束反应，每次加入时剧烈搅拌。然后过滤并浓缩混合物。
B.步骤2在步骤1残余物(0.5mmol)的THF溶液(2mL)中加入三乙胺(83.7μL，0.6mmol)和5-溴噻吩-2-磺酰氯(130.8mg，0.5mmol)。将溶液搅拌8-16小时，除去溶剂并通过RP-HPLC1纯化残余物以得到实施例25(50.8mg)。
按照实施例25中列出的方法，用5-溴噻吩-2-磺酰氯和5-氯噻吩-2-磺酰氯制备了以下化合物(实施例25-26，表6)。
表6(LCMS2数据分子离子和保留时间)
实施例275-氯-N-[(1S，2R)-1-(羟甲基)-2，4-二甲基戊基]噻吩-2-磺酰胺
A.步骤1将4-甲基-2-戊烯酸(7.6mL，40mmol)的THF溶液(100mL)冷却至-78℃。用针筒按照顺序加入三乙胺(5.85mL，42mmol)和三甲基乙酰氯(新戊酰氯)(5.17mL，42mmol)。用冰浴替代干冰浴，并将反应物在0℃搅拌1h，然后将反应物冷却至-78℃。
在一个单独的烧瓶中将(R)-(+)-4-苄基-2-噁唑烷酮(7.0g，40mmol)溶解于THF(100mL)并冷却至-78℃，然后通过针筒加入n-丁基锂(1.6M，25mL)。将混合物搅拌20分钟，然后通过除去隔膜加入反应混合物并迅速由一个烧瓶倒进另一个烧瓶(注意由于混合物中悬浮的氯化三甲基铵，通过套管转移反应混合物会失败)。
将所得混合物在-78℃搅拌30min，然后在25℃加热1-2h，然后用饱和的NH4Cl水溶液(100mL)终止反应。在旋转蒸发器中除去挥发性物质并用水(200mL)和乙酸乙酯(2×200mL)稀释含水浆液。通过无水MgSO4干燥合并的有机相，过滤并浓缩。产物可以从溶液中结晶出来且为高纯度的。如果需要纯化，可以用20-30％的乙酸乙酯的己烷溶液通过快速层析纯化粗产品。
B.步骤2在冷却至-40℃的溴化铜(I)/二甲基硫化物复合物(246mg，1.2mmol)的THF/DMS(2∶1，15mL)溶液中加入甲基溴化镁(2.4mL，1M的THF溶液，2.4mmol)。将溶液搅拌10分钟并使其升温至-15℃。将混合物冷却至-40℃并加入步骤1产物(245mg，1mmol)的THF溶液(6mL)。将溶液在25℃搅拌8-16h。将溶液再冷却至-78℃并加入N-溴琥珀酰亚胺(356mg，2mmol)的THF溶液(2mL)。使溶液升至0℃并在0℃振荡3h。用1∶1的饱和的碳酸铵溶液和0.5N的硫酸氢钾(5mL)终止反应。倒出有机相并浓缩。
C.步骤3在溶解于乙腈(5mL)的步骤3的产物中加入四甲基胍叠氮化物(0.6mL，4mmol)。将溶液搅拌72-120h。将溶液浓缩至干，再溶解于CH2Cl2并加入1N的HCl(2mL)。分离各层并通过用CH2Cl2(5mL)洗涤的硅胶垫过滤有机层，并浓缩。
D.步骤4在0℃的步骤3产物(131mg，1mmol)的THF溶液中(5mL)加入氢化铝锂(1M的THF溶液)(2mL，2mmol)，并将溶液在25℃搅拌4h。加入水(114μL)、15％的氢氧化钠水溶液(114μL)和水(114μL)以结束反应，每次加入时剧烈搅拌。然后过滤并浓缩混合物。
E.步骤5在步骤4残余物(0.5mmol)的THF(2mL)溶液中加入三乙胺(83.7μL，0.6mmol)和5-氯噻吩-2-磺酰氯(108mg，0.5mmol)。将溶液搅拌8-16小时，除去溶剂并按照实施例1的描述纯化残余物以得到50.8mg产物。
R＝甲基、乙基、正丙基、异丙基、己基、苯基联苯基、3-吡啶基、2-呋喃基R’MgX＝甲基、乙基、异丁基、己基、苯基、4-MeOPh按照实施例27中列出的方法，用5-氯噻吩-2-磺酰氯和巴豆酸、2-戊烯酸、2-己烯酸、2-辛烯酸、肉桂酸、呋喃基丙烯酸、4-甲基-2-戊烯酸、以及4-苯基肉桂酸和甲基、乙基、异丁基、4-甲氧基苯基、己基和苯基溴化镁制备了以下化合物(实施例27-55，表7)。
表7(LCMS2数据分子离子和保留时间)
按照实施例27中列出的方法，用5-溴噻吩-2-磺酰氯和巴豆酸、2-戊烯酸、2-己烯酸、2-辛烯酸、肉桂酸、β-(3-吡啶基)-丙烯酸、呋喃基丙烯酸、4-甲基-2-戊烯酸以及4-苯基肉桂酸和甲基、乙基、异丁基、4-甲氧基苯基、己基和苯基溴化镁制备了以下化合物(实施例56-76，表8)。
表8(LCMS2数据分子离子和保留时间)
实施例77A5-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基-1-(羟甲基)辛基]噻吩-2-磺酰胺
按照实施例27(步骤1和2)中列出的方法，将2-戊烯酸和4R-4-苄基-2-噁唑烷酮偶联以制得R-3-(2’-戊烯基)-4-苄基-2-噁唑烷酮。加入的己基溴化镁随后被N-溴琥珀酰亚胺捕获。检查后，在使用5％的含在己烷中的乙醚的硅胶上进行快速层析，得到了大约2∶1的(1R-2R)-∶(1R-2S)-3-(2’-溴-3’乙基壬基)-4-苄基-2-噁唑烷酮的混合物。
用实施例27(步骤3-5)中的方法将各个异构体转变为相应的磺酰化的氨基醇。
表9(LCMS2数据分子离子和保留时间)
实施例795-氯-N-[(1S)-1-(羟甲基)-2-(甲基氨基)丁基]噻吩-2-磺酰胺
A.步骤1在0℃的D-丝氨酸(1.05g，10mmol)的H2O/THF(1∶1，100mL)溶液中加入氢氧化钠(2.17g，30mmol)和5-氯噻吩-2-磺酰氯(2.17g，10mmol)。将溶液搅拌2-3h，然后浓缩有机相，用1N的HCl酸化含水相并将其提取进乙酸乙酯并浓缩。
B.步骤2-78℃下，在溶解于的THF(25mL)的步骤1的残余物中加入乙基溴化镁(7.5mL，7.5mmol)。将混合物加热至25℃，然后搅拌48h。然后用1N HCl酸化，提取进乙酸乙酯并浓缩。
C.步骤3在溶解于DMF(500μL)的步骤2的残余物(0.1mmol)中加入CH2Cl2(1.5mL)、乙酸(12μL，0.2mmol)和甲基胺(2M的THF溶液)(100μL，0.2mmol)。将反应混合物搅拌5分钟并加入三乙酸基硼氢化钠(105.6mg，0.5mmol)。将溶液搅拌8-16h并通过RP-HPLC1纯化以得到实施例79(6.8mg)。
按照实施例79中列出的方法，用甲基、乙基或戊基溴化镁和甲胺(2M的THF溶液)、乙胺(2M的THF溶液)、乙醇胺、苄胺和环戊胺制造了以下化合物(实施例79-86，表10)。
表10(LCMS2数据分子离子和保留时间)
实施例875-氯-N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-N-(2-苯氧乙基)噻吩-2-磺酰胺
A.步骤1在L-异亮氨酸甲酯盐酸盐(1.82g，10mmol)和5-氯噻吩-2-磺酰氯(1.82g，10mmol)的溶液中加入三乙胺(4.18mL，30mmol)。在60℃将混合物搅拌过夜，然后过滤并浓缩。在使用10％的溶于己烷的乙酸乙酯的硅胶上通过快速层析纯化粗产品以得到2.53g 5-氯噻吩-2-磺酰异亮氨酸甲酯。
B.步骤2在溶于DMF(1mL)的5-氯噻吩-2-磺酰异亮氨酸甲酯溶液(103mg，0.25mmol)中加入β-溴苯乙醚(55mg，0.5mmol)和碳酸钾(103mg，0.75mmol)。将反应物在25℃振荡过夜，然后浓缩。
C.步骤3将步骤2的残余物溶于5％的溶于THF(1mL)的甲醇并加入硼氢化锂(11mg，0.5mmol)。将反应物在25℃振荡2天，然后加入水(1mL)终止反应，并提取进乙酸乙酯(3.5mL)。将有机相蒸发并通过RP-HPLC1纯化得到实施例87(48mg)。
以下化合物(实施例87-88，表11)是用β-溴苯乙醚和3-氯苄基溴 并按照实施例87中列出的方法制造的。
表11(LCMS2数据分子离子和保留时间)
实施例895-氯-N-[(S)-2-羟基-1-苯基乙基]噻吩-2-磺酰胺
在溶于CH3CN(200μL)的(S)-(+)-2-苯基甘氨醇(6.8mg，0.05mmol)溶液中加入Et3N(105μL，1M溶于CH3CN)和5-氯噻吩-2-磺酰氯(10.9mg，0.05mmol)作为CH3CN溶液(200μL)。将小瓶盖上并在40℃下振荡8-12h。在真空下除去溶剂，并将残余物溶解于1.6mL DMSO(0.03M)。
按照实施例89中列出的方法，用5-氯噻吩-2-磺酰氯和5-溴噻吩-2-磺酰氯和(S)-(+)-2-苯基甘氨醇、L-亮氨醇、DL-2-氨基-1-己醇、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、2-氨基-2-乙基-1、3-丙二醇、环亮氨醇、(S)-环己基丙氨醇、L-苯基丙氨醇、L-甲硫氨醇、DL-2-氨基-1-戊醇、L-叔-亮氨醇、氯霉素、(S)-(+)-2-氨基-1-丁醇，(S)-苄基-L-半胱氨醇、苄基-L-苏氨醇、4-甲基苄基-H-半胱氨醇、苄基-H-酪氨醇和L-苏氨醇制造了以下化合物(实施例89-117，表12)
表12(LCMS数据分子离子和保留时间)
实施例1185-氯-N-[(S，S)-1-甲酰基2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺
A.步骤1在溶于CH3CN(100mL)的5-氯噻吩-2-磺酰氯(11g，50.7mmol)溶液和(S)-异亮氨醇(6.2g，53mmol)中加入Et3N(11mL，109mmol)。在50℃加入反应混合物并搅拌24h。除去溶剂并将油状物溶解于EtOAc(100mL)。用水(2×100mL)、盐水(1×100mL)洗涤溶液并通过Na2SO4上干燥。除去溶剂以得到13.85g(88％)所需的磺酰胺。
B.步骤2将分子筛(15g，4)在无水CH2Cl2(175mL)中搅拌10min。然后加入吡啶鎓氯铬酸盐(8.6g，39.9mmol)和硅胶(9g)的混合物，并再将混合物搅拌10min。在悬液中加入溶于CH2Cl2(15mL)的5-氯噻吩-2-磺酰异亮氨醇(4g，13.4mmol)，并将所得浆液搅拌2h。过滤反应混合物并除去溶剂。将残余物用于BiotageTM，用20％EtOAc/己烷洗脱以得到3.22g(81％)醛(LCMS＝294.21(M-H)，rt＝1.10min)。
实施例1195-氯-N-[(S，S)-1-(1-羟乙基2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺
在溶于THF(400μL)的实施例118的醛溶液(23.7mg，0.08mmol)中加入甲基溴化镁(400μL，1.0M，溶于THF，5eq)。盖上瓶子并在50℃振荡12h。用饱和的NH4Cl水溶液(1.5mL)和EtOAc(1mL)终止反应。将有机层转移到已称重的瓶中并用EtOAc(1mL)提取含水层。将合并的有机物浓缩(Savant，中热)并将得到的非对映体的混合物溶于DMSO以使最终浓度为30mM。
按照实施例119中列出的方法，用5-氯噻吩-2-磺酰异亮氨醇(实施例118)和5-溴噻吩-2-磺酰异亮氨醇(按实施例118制备)甲基溴化镁、环戊基溴化镁、己基溴化镁、戊基溴化镁、丁基溴化镁、异丙基溴化镁、邻-甲苯基溴化镁、叔-丁基溴化镁、异丁基溴化镁、乙烯基溴化镁、烯丙基溴化镁、乙基溴化镁、4-氟苯基溴化镁、4-氯苯基溴化镁、2-甲基-1-丙烯基溴化镁、异丙烯基溴化镁、4-甲氧基溴化镁、1-甲基-1-丙烯基溴化镁、2-[2-(1，3-二噁烷基)]乙基溴化镁、3-丁烯基溴化镁、1-丙炔基溴化镁、4-硫代苯甲醚溴化镁和4-N，N-二甲基苯胺溴化镁制备了以下化合物(实施例119-154，表13)。
表13(LCMS数据分子离子和保留时间)
表13(续表)
实施例1555-氯-N-{(S，S)-1-[(S)-环己-2-烯-1-基(羟基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺酰胺
在两个含有悬浮于THF(3mL)的镁屑(60mg，2.5mmol)的微量瓶中加入2-溴环己烯(288μL，2.5mmol)，然后加入5-氯噻吩-2-磺酰异亮氨醇(1mL 1M的THF溶液，1mmol，实施例118)。盖上瓶子并在50℃振荡18h。将瓶子冷却并加入饱和NH4Cl水溶液(1mL)。将瓶子涡旋振荡并将有机层转移到已称重的瓶中并用EtOAc(1mL)提取含水层。在真空下浓缩合并的有机物并用以下条件对残余物进行半制备RP-HPLC。
半制备RP-HPLC条件。
柱子Spring Axial加压柱；Kromasil C18粒径10μm；50×150mm溶剂A水(0.1％TFA)溶剂B乙腈溶剂梯度24分钟内15-95％，整个循环35min流速60ml/min基于UV(或ELSD)吸收收集产物峰。
按照实施例155中列出的方法用2-溴环己烯、巴豆基溴、1-溴-2-戊烯、3-溴-2-甲基丙烯和肉桂基溴制备了以下化合物(实施例155-161，表14)。
表14(LCMS数据分子离子和保留时间)
实施例162
5-氯-N-[(S，S)-1-(1-羟基-1-甲基乙基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺 A.步骤1在溶于CH3CN(20mL)的5-氯噻吩-2-磺酰氯(1.09g，5mmol)溶液中加入(L)-异亮氨酸甲酯盐酸盐(908.5mg，5mmol)作为CH3CN(10mL)和Et3N(1mL，7.2mmol)的溶液。将反应混合物在50℃加热并振荡3天。除去溶剂并将油相溶于EtOAc(10mL)。用水(5mL)、饱和的NH4OH(5mL)和盐水(5mL)洗涤溶液并在MgSO4上干燥。除去溶剂以得到1.44g(88％)所需的磺酰胺。
B.步骤2在溶于THF(500μL)的步骤1的酯溶液(40.7mg，0.125mmol)中加入甲基溴化镁(333μL，3.0M溶于THF，8eq)。盖上瓶子并在50℃振荡12h。用饱和的NH4Cl水溶液(1.5mL)和EtOAc(1mL)终止反应。将有机层转移到已称重的瓶中并用EtOAc(1mL)提取含水层。将合并的有机物浓缩(Savant，中热)并将得到的非对映体的混合物溶于DMSO以使最终浓度为30mM。
按照实施例162中列出的方法用5-氯噻吩-2-磺酰异亮氨酸甲酯和5-溴噻吩-2-磺酰异亮氨酸甲酯(来自步骤2)和甲基溴化镁、，戊基溴化镁、苯基溴化镁、烯丙基溴化镁、乙基溴化镁、4-氯苯基溴化镁、异丙烯基溴化镁、4-甲氧基溴化镁、1-甲基-1-丙烯基溴化镁、3-丁烯基溴化镁、1-丙炔基溴化镁、1-萘基溴化镁制备了以下化合物(实施例162-176，表15)。
表15(LCMS数据分子离子和保留时间)
实施例1775-氯-N-[1-(羟甲基)环己基]噻吩-2-磺酰胺
A.步骤10℃下。在1-氨基-1-环己烷羧酸(5g，35mmol)和THF(100mL)的悬液中加入硼烷二甲基硫化物(50mL，2M溶于THF)。用冷浴终止反应并在25℃将反应物搅拌过夜。加入NaOH(3M，100mL)并将混合物搅拌4h。用K2CO3使反应混合物饱和并用Et2O(2×100mL)提取。用盐水(100mL)洗涤合并的有机物并在MgSO4上干燥以得到4.35g(96％)所需的氨基醇。
B.步骤2按实施例89将氨基醇磺酰化。
按照实施例177中列出的方法，用1-氨基-1-环己烷羧酸、2-氨基-2-降莰烷羧酸、D，L-1-氨基二氢化茚-1-羧酸和2-氨基二氢化茚-2-羧酸盐酸盐的氨基醇和5-氯噻吩-2-磺酰氯和5-溴噻吩-2-磺酰氯制备了以下化合物(实施例177-183，表16)。
表16(LCMS数据分子离子和保留时间)
用实施例119中列出的方法，用5-氯噻吩-2-磺酰异亮氨醇和5-溴噻吩-2-磺酰异亮氨醇与甲基溴化镁、正丙基氯化镁和烯丙基溴化镁制备了用以下化合物(实施例184-195，表17)。按照实施例155中列出的条件通过半制备RP-HPLC分离所得非对映体的混合物。
表17(LCMS Data3分子离子和保留时间)
按以下方法制备纯的合成的实施例189的非对映体。
A.步骤1在-78℃的BOC-保护的异亮氨酸(13.17g，48mmol)的Weinreb酰胺溶液(参见F。Roux等，Tetrahedron，1994，50(18)，5345-5360)中加入烯丙基溴化镁(90mL，1M，溶于THF)。用冷浴终止反应并将反应物在25℃下搅拌过夜。加入冷的HCl水溶液(150mL，1M)终止反应。搅拌30min后，分离各层并用乙酸乙酯(3×75mL)提取含水层。在MgSO4上干燥合并的有机物，除去溶剂以得到8.41g(69％)所需的酮。
B.步骤2在溶于MeOH(200mL)的步骤1的酮溶液中加入固体NaBH4(1.5g，39.6mmol)。将反应物在25℃搅拌5h，随后在真空下除去溶剂。将残余物溶解于乙酸乙酯(100mL)并用水洗涤(2×50mL)。将粗制品用于BiotageTM，用5-15％EtOAc/己烷洗脱以得到4.12g(49％)所需的醇。
C.步骤3将步骤2的醇溶液(4.12g，16mmol)、CH2Cl2(75mL)和TFA(15mL)在25℃搅拌15min。用NaOH溶液(15mL，1M)终止反应，然后用NaOH颗粒碱化至pH12。用CH2Cl2(2×50mL)提取所得溶液，并用水(25mL)、盐水(25mL)洗涤合并的有机物，在MgSO4上干燥以得到2.44g(97％)所需的氨基醇，无需进一步纯化即可将其用于步骤4。
D.步骤4按实施例89将此氨基醇磺酰化。用下述方法获得纯的合成的实施例193的非对映体在溶于纯EtOH(50mL)的BOC-氨基高烯丙基醇溶液(1.1g，4.27mmol，见实施例188的步骤1-2)中加入Pd/C(110mg)。将烧瓶至于氢气下(气球)并在25℃搅拌。完全反应后(2h)，通过Celite垫子过滤混合物并除去溶剂以得到1.16g(定量)丙基类似物。BOC基团被除去，同时按照实施例189中列出的方法将胺磺酰化。
实施例1965-氯-N-[(S，S)-2-甲基-1-(2，2，2-三氟-1-羟乙基)丁基]噻吩-2-磺酰胺 在0℃的溶于THF(5mL)的5-氯噻吩-2-磺酰异亮氨醇(770mg，2.6mmol，参见实施例118，步骤1和2)溶液中加入TMS-CF3(5mL，0.5M溶于THF)。用TBAF(250μL，1M in THF)处理所得混合物。除去冷浴并在25℃将反应物搅拌过夜。用HCl(25mL，2M)终止反应并用乙酸乙酯(3×15mL)提取所得溶液。用水(25mL)和盐水(25mL)洗涤合并的有机提取物，然后在MgSO4上干燥。对残余物进行RP-HPLC(见实施例155以了解过程)以得到74mg所需产品(m/z＝364.0(M-H)，rt＝1.23min)。
分别按照实施例177(步骤1&2)、118(步骤2)和119中列出的方法，用1-氨基-1-环己烷羧酸和5-氯噻吩-2-磺酰氯与烯丙基溴化镁和2-甲基烯丙基氯化镁合成了以下化合物(实施例197-198，表18)。
表18(LCMS数据分子离子和保留时间)
实施例199A5-氯-N-[(S)-2-羟基-1-(4-羟基环己基)乙基]噻吩-2-磺酰胺
A.步骤1在溶于NaOH(20mL，3M)的4-羟基-L-苯基甘氨酸(10g，60mmole)溶液中加入水(380mL)和拉尼镍(30g)。在氢高压反应器中于60-80℃、约3atm下，将反应混合物氢化36h。通过Celite过滤反应混合物并将体积减至约80-100mL，并加入二噁烷(100mL)。将所得混合物冷却至0℃并用Et3N(10mL)和5-氯噻吩-2-磺酰氯(16g，72mmoles)处理。使反应物升至25℃并搅拌过夜。除去二噁烷和Et3N并用1N的HCl水溶液稀释保留的水溶液。收集所得沉淀，用水和乙醚洗涤以得到白色固体状的所需产物(12g，50％，两个步骤)(ELSD测得100％纯，m/z＝352(M-1))。
B.步骤20℃下，在溶于无水THF的(S)-N-(5-Cl-噻吩-2-磺酰)-4-羟基环己基甘氨酸(12g，33.99mmol，步骤1)悬液中逐滴加入硼烷-THF(110mL，1M，溶于THF，110moles)。将所得混合物在25℃下搅拌一周。用0℃的HCl(75mL，1M)终止反应并在25℃搅拌1h。除去THF并收集沉淀，用水(含有少量乙醚)洗涤，并干燥以得到白色固体状的所需产品(9g，78％)(ELSD测得100％纯，m/z＝338.5(M-1)，HPLC保留时间3＝0.64min)。
实施例1995-氯-N-[(S)-2-羟基-1-(4-甲氧基环己基)乙基]噻吩-2-磺酰胺 A.步骤1将溶于无水苯(120mL)实施例199A的5-氯-N-[(S)-2-羟基-1-(4-羟基环己基)乙基]噻吩-2-磺酰胺(6.4g，18.83mmol)、2，2-二甲氧基丙烷(7mL，5.65mmol)和TsOH·H2O(72mg，0.38mmol)的混合物回流。1小时后，苯在大气压下缓慢蒸馏，最终体积为10mL。加入新鲜的苯(100mL)和2，2-二甲氧基丙烷(5mL)并重复上述操作。将残余物分散在乙醚和饱和NaHCO3之间。用乙醚(3×100mL)提取含水层，合并提取物并在MgSO4上干燥。以1∶5EtOAc/CH2Cl2的作为洗脱液，通过柱层析纯化粗产品以得到N，O-丙酮化合物(5.77g，81％)(100％，m/z＝380(M+1))。
B.步骤2在0℃的溶于THF(7mL)和DMF(2mL)的(S)-2-(5-Cl-噻吩-2-氨磺酰)-2-(4-羟基环己基)-N，O-丙酮化合物(379mg，1mmol)溶液中加入NaH(80mg，2mmol)。将所得反应物在0℃搅拌10min，然后加入碘甲烷(311μL，5mmol)。使反应物回复25℃并搅拌18h。除去溶剂并加入乙酸(80％，15mL)。将混合物在25℃下搅拌一周。在真空中除去乙酸后，用MeOH/CH2Cl2(3∶10)洗脱，对残余物进行柱层析以得到303mg(86％)所需产品。
按照实施例199中列出的方法，用(S)-2-(5-Cl-噻吩氨磺酰)-2-(4-羟基环己基)-N，O-丙酮化合物(来自实施例199，步骤1)和碘甲烷、1-溴丙烷、烯丙基溴、苄基溴、2-吡啶甲基氯盐酸盐和3-吡啶甲基氯盐酸盐制备了以下化合物(实施例199-202B，表19)。
表19(LCMS Data3分子离子和保留时间)
实施例203N-[1-乙酰基-4-(羟甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺。
A.N-[1-Boc-4-(羧酸)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-磺酰胺在25℃下将三乙胺(2.28mL，1.66g，16.45mmol)加入溶于乙腈∶水(1∶1)(40mL)的1-Boc-4-氨基哌啶-4-羧酸(2.68g，10.973mmole)浆液中。在添加结束时浆液由淡黄色变为绿色溶液。将浆液微热(5分钟)以得到溶液。将混合物冷却至0℃，逐滴加入溶于乙腈(8mL)的5-氯噻吩-2-磺酰氯(2.62g，12.07mmol)(5min)。在25℃加热此溶液过夜。19小时后，取出一份。TLC(9∶1CH2Cl2∶CH3OH)说明反应进行了约90％。加入水(50mL)、CH2Cl2(50mL)和冰冷的1N HCl(10mL)终止反应。用水和饱和的NaCl洗涤有机层。在MgSO4上干燥，过滤，并浓缩成黄色油状物(2.1g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液开始是溶于CH2Cl2的5％MeOH、最后是溶于CH2Cl2的10％MeOH)纯化粗产物，以得到白色无定形固体状的N-[1-Boc-4-(羧酸)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺(1.2g，25.7％)。质谱(-ESI)423(M-H)-。
B.N-[1-Boc-4-(羟甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺在0℃下，在30分钟内将1N硼烷-THF(1.019g，12.14mL，11.86mmol)逐滴加入溶于无水四氢呋喃(15mL)的N-[1-Boc-4-(羧酸)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺(1.2g，2.82mmol)溶液。在25℃加热此溶液过夜，然后加入30mL溶于甲醇的10％的乙酸溶液终止反应。蒸发溶剂后，将粗产物溶于乙酸乙酯并用1M HCl、水和10％NaHCO3洗涤。在MgSO4上干燥，过滤，并浓缩以得到粗制的黄色油状物(1.1g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液开始用1∶3的EtOAc-己烷，最后是1∶1的EtOAc-己烷)纯化粗产物，以得到无色油状的N-[1-Boc-4-(羟甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺(0.79g，68.2％)。质谱(-ESI)409(M-H)-。
C.N-[4-(羟甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺盐酸盐在搅拌的溶于EtOAc(4mL)的N-[1-Boc-4-(羟甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺5(0.7g，1.7mmol)溶液中加入4N HCl(5mL)。在25℃搅拌此溶液。30分钟后形成了絮状溶液。2h后形成了沉淀。TLC(1∶1EtOAc-己烷)说明完全反应进行。将溶剂减少至约2-3mL，用乙醚(6mL)稀释并通过过滤漏斗过滤。用乙醚(3×5mL)洗涤沉淀以得到无定形白色固体状的N-[4-(羟甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺(0.48g，90.7％)。质谱(+ESI)311(M+H)+。
D.N-[1-乙酰基-4-(羟甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺在0℃冰冷的溶于CH2Cl2(5mL)和三乙胺(0.44mL，3.18mmol)的N-[4-(羟甲基)哌啶-4-基]-5-氯-噻吩-2-磺酰胺(0.19g，0.61mmol)溶液中逐滴加入溶于CH2Cl2(1mL)的乙酰氯(0.15g，1.894mmol)。在25℃加热此溶液过夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1EtOAc-己烷)说明完全反应进行。用CH2Cl2(10mL)稀释并用1N HCl(50mL)、饱和的NaHCO3水溶液(50mL)和NaCl(50mL)洗涤有机层。过滤，并浓缩以得到粗制的黄色油状物(175mg)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液开始用1∶4的EtOAc-己烷，最后是1∶1的EtOAc-己烷)纯化粗产物，以得到黄色油状的N-[1-乙酰基-4-(羟甲基)-哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺酰胺(62mg，28.9％)。
质谱(+ESI)353(M+H)+。分析计算值C12H17ClN2O4S2.1.62 H2OC，37.29；H，5.70；N，7.26。实测值C，37.62；H，5.36；N，7.31。
实施例2045-氯-N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺酰胺。
A.2-氯呋喃25℃下，在10分钟内将1.6M nBuLi(15.37g，150mL，0.24mol)逐滴加入溶于无水乙醚(200mL)的呋喃溶液(13.6g，0.20mol)。逐滴加入完成后将反应混合物冷却至-70℃。在此温度下，在10分钟内加入六氯乙烷溶液(49.8g，0.21mol)并使温度不要超过-55℃。使反应混合物在-70℃保持3h。然后将其加热至25℃，用冰水水解并用乙醚(100mL)提取水相两次。合并的乙醚相用NaHCO3溶液(50mL)和水(50mL)分别洗涤一次并在MgSO4上干燥。通过分级柱蒸馏去乙醚并在78-79℃收集产物以得到无色油状的2-氯呋喃(20.0g，97.6％)。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.34(d，1H)；6.38(d，1H)；6.21(d，1H)。
B.5-氯呋喃-2-磺酰氯25℃下，在5分钟内在氯磺酸(56.8g，32.4mL，0.487mol)中一次性加入五氯化磷(40.53g，0.1947mol)并将所得溶液在25℃搅拌10min。然后，一次性加入2-氯呋喃(20.0g，0.1947mol)，将所得黑色悬液加热至55℃并保持1h，其间会有泡沫产生并破裂。然后将反应混合物倒入冰中并用CH2Cl2(250mL)提取所得悬液。通过硅藻土垫过滤有机物，用盐水(70mL)洗涤并用MgSO4干燥。在真空下除去溶剂以得到黑色油状的5-氯呋喃-2-磺酰氯(14.1g，36.02％)。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.05(d，1H)；6.35(d，1H)。
C.5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺酰胺。
在0℃的溶于CH2Cl2(15mL)和三乙胺(2.69mL，19.38mmol)的L-异亮氨醇(1.5g，12.92mmol)溶液中逐滴加入溶于CH2Cl2(10mL)的5-氯呋喃-2-磺酰氯(3.376g，16.79mmol)。将溶液在25℃温热过夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1 EtOAc-己烷)说明完全反应。用CH2Cl2(100mL)稀释并用1N HCl(2×50mL)、饱和的NaCl水溶液(50mL)洗涤有机层。并在MgSO4上干燥有机层，过滤，并浓缩以得到粗制的黑色油状物(2.69g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液开始用1∶4的EtOAc-己烷，最后是1∶1的EtOAc-己烷)纯化粗产物，以得到无定形的白色固态5-氯-N-[(1S，2S-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺酰胺(0.98g，26.92％)。质谱(-ESI)280(M-H)-。分析计算值C10H16ClN2O4SC，42.63；H，5.72；N，4.97。实测值C，42.34；H，5.65；N，4.77。
实施例205N-[(1S)-2-丁基-1-(羟甲基)己基]-5-氯-2-噻吩磺酰胺。

A.(4R)-4-苄基-3-[(E)-2-庚烯酰]-1，3-噁唑烷-2-酮在-78℃溶于THF(80mL)的2-庚烯酸(6g，46.81mmole)溶液中逐滴加入三乙胺(6.85g，49.15mmol)和三甲基乙酰氯(6.05mL，49.15mmol)。将浆液在-78℃下搅拌5min，然后换成0℃的冷却系统。在此温度下搅拌1h。在单独的烧瓶中将R-(+)-4-苄基-2-噁唑烷酮(8.295g，46.81mmol)溶液冷却至-78℃并在10min内逐滴加入nBuLi(1.6M，46.8mmol)。在室温下将无色溶液搅拌45min，并通过套管将其转移到-78℃的酯溶液中。将黄色浆液在25℃温热过夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1EtOAc-己烷)说明完全反应。冷却至0℃并通过加H2O(20mL)终止反应。用乙酸乙酯(200mL)稀释并分离有机层。在MgSO4上干燥有机层，过滤，并浓缩以得到粗制的黄色油状物(13.69g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液1∶4的EtOAc-己烷)纯化粗产物以得到无色油状的(4R)-4-苄基-3-[(E)-2-庚烯酰]-1，3-噁唑烷-2-酮(12.1g，92.80％)。质谱(-ESI)288(M-H)-。
B.(4R)-4-苄基-3-[(2R)-2-溴-3-丁基庚烯酰]-1，3-噁唑烷-2-酮将以THF(60mL)和二甲基硫化物(30mL)作为共溶剂的溴化铜(I)二甲基硫化物复合物(5.132g，24.967mmol)冷却至-40℃，在10分钟内逐滴加入正-丁基氯化镁(25mL，49.93mmol)并搅拌20min同时加热至-15℃。将黑色浆液冷却至-40℃并在10分钟内逐滴加入-40℃的溶于THF(20mL)的(4R)-4-苄基-3-[(E)-2-庚烯酰]-1，3-噁唑烷-2-酮溶液(6g，20.80mmol)。使反应物在25℃温热过夜(20h)。在冷的-78℃的上述黑色浆液中一次性加入N-溴琥珀酰亚胺(7.407g，41.61mmol)。使其回复至0℃并继续搅拌3h。用1∶1的饱和的碳酸铵溶液和0.5N硫酸氢钾终止反应。黑色浆液变为蓝绿色。形成沉淀(淡蓝色)。将其过滤。用乙酸乙酯(150mL)稀释母液，在MgSO4上干燥，过滤，浓缩以得到粗制的半固体状态的(4R)-4-苄基-3-[(2R)-2-溴-3-丁基庚烯酰]-1，3-噁唑烷-2-酮。质谱(-ESI)423(M-H)-。
C.(4R)-3-[(2S)-2-叠氮基-3-丁基庚烯酰]-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮将四甲基胍叠氮化物(TMGA)(5.398g，37.70mmol)逐滴(5min)加入25℃的溶于乙腈(50mL)的(4R)-4-苄基-3-[(2R)-2-溴-3-丁基庚烯酰]-1，3-噁唑烷-2-酮(4.0g，9.42mmol)溶液。将反应物搅拌4点。取出一份，TLC(1∶4EtOAc-己烷)说明完全反应。在真空下除去溶剂。将所得黑色半固体溶于CH2Cl2(200mL)并用1N HCl(30mL)终止反应。在MgSO4上干燥有机相，过滤，并在真空下浓缩以得到粗制的黄色油状(4R)-3-[(2S)-2-叠氮基-3-丁基庚烯酰]-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮(3.61g，99.1％)。质谱(-ESI)385(M-H)-。
D.(2S)-2-氨基-3-丁基-1-庚醇0℃下与20分钟内在溶于THF(60mL)的LAH(1.219g，32.13mmol)浆液中逐滴加入(4R)-3-[(2S)-2-叠氮基-3-丁基庚烯酰]-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮(3.6g，9.37mmol)。将反应物在36℃加入18h。将反应浆液(棕色)冷却至0℃，用H2O(15mL)终止反应，并用1N NaOH(30mL)和H2O(15mL)洗涤。持续搅拌2h以得到白色浆液。过滤此浆液并再在MgSO4上干燥母液，过滤，并在真空下浓缩以得到粗制的黄色油状(2S)-2-氨基-3-丁基-1-庚醇(1.93g，73.75％)。质谱(+ESI)188(M+H)+。
E.N-[(1S)-2-丁基-1-(羟甲基)己基]-5-氯-2-噻吩磺酰胺.
将溶于CH2Cl2(20mL)的5-氯噻吩-2-磺酰氯(2.42g，11.55mmol)溶液逐滴(5min)加入0℃的(4R)-3-[(2S)-2-叠氮基-3-丁基庚烯酰]-4-苄基-1，3-噁唑烷-酮(1.9g，10.14mmol)和三乙胺(2.11mL，15.21mmol)溶液。使溶液在25℃下温热过夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1EtOAc-己烷)说明完全反应。用CH2Cl2(100mL)稀释并用1N HCl(2×50mL)和饱和的NaCl水溶液(50mL)洗涤有机层。在MgSO4上干燥有机层，过滤，并浓缩以得到粗制的油状物(2.98g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液开始用1∶3的EtOAc-己烷，最后是1∶2的EtOAc-己烷)纯化粗产物，以得到无定形白色固体状的N-[(1S)-2-丁基-1-(羟甲基)己基]-5-氯-2-噻吩磺酰胺(0.630g，16.9％)。质谱(-ESI)366(M-H)-。分析计算值C15H25NClO3S2C，48.96；H，7.12；N，3.81。实测值C，49.08，H，6.83，N，3.82。
实施例206N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺酰胺。
A.2-呋喃磺酰氯0℃下于5min内将五氯化磷(15.29g，73.44mmol)一次性(小心，泡沫)加入氯磺酸(21.39g，183.6mmol)并将所得溶液在0℃下搅拌10min。然后，一次性加入呋喃(5.0g，73.44mmol)，将所得黑色悬液在0℃下搅拌15min，其间会有泡沫法并破裂。然后将反应混合物倒进冰中并用CH2Cl2(150mL)提取所得悬液。通过硅藻土垫过滤有机提取物，用盐水洗涤并在MgSO4上干燥。在真空下除去溶剂以提供黑色油状的2-呋喃磺酰氯(1.01g，7.9％)。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.4(d，1H)；6.38(d，1H)；6.35(d，1H)。
B.N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺酰胺将溶于CH2Cl2(5mL)的2-呋喃磺酰氯(1.01g，8.69mmol)逐滴加入0℃的溶于CH2Cl2(20mL)和三乙胺(2.42mL，17.38mmol)的L-异亮氨醇(0.909g，7.83mmol)溶液。使溶液在25℃下温热过夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1EtOAc-己烷)说明完全反应。用CH2Cl2(100mL)稀释并用1N HCl(2×50mL)和饱和的NaCl水溶液(50mL)洗涤有机层。在MgSO4上干燥有机层，过滤，并浓缩以得到粗制的黑色油状物(0.65g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液开始用1∶3的EtOAc-己烷，最后是1∶2的EtOAc-己烷)纯化粗产物，以得到无定形白色固体状的N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺酰胺(0.155g，72.12％)。质谱(-ESI)246(M-H)-。分析计算值C10H17ClNO4SC，48.57；H，6.93；N，5.66。实测值C，48.72；H，6.78；N，5.39。
实施例207N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-5-碘-2-噻吩磺酰胺 A.5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-2-噻吩磺酰胺。
将溶于CH2Cl2(10mL)的5-溴噻吩-2-磺酰氯(5.0g，19.11mmol)逐滴加入0℃的溶于CH2Cl2(15mL)和三乙胺(3.77mL，27.24mmol)的L-异亮氨醇(2.108g，18.16mmol)溶液。使溶液在25℃下温热过夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1EtOAc-己烷)说明完全反应。将其稀释在二氯甲烷(100mL)中并用1N HCl(2×50mL)和饱和的NaCl水溶液(50mL)洗涤有机层。在MgSO4上干燥有机层，过滤，并浓缩以得到粗制的黄色油状物(5.2g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液开始用1∶4的EtOAc-己烷，最后是1∶1的EtOAc-己烷)纯化粗产物，以得到无定形白色固体状的5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-2-噻吩磺酰胺(4.3g，70.49％)。质谱(-ESI)246(M-H)-。
B.N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-5-(三丁基甲锡烷基)-2-噻吩磺酰胺将双(三丁基锡)(9.28mL，18.52mmol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.7133g，0.617mmol)加入溶于1，4-二噁烷(42mL)的5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-2-噻吩磺酰胺溶液(4.2g，12.34mmol)。将此棕色溶液加热回流过夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1EtOAc-己烷)说明完全反应。然后过滤浆液并在真空下除去溶剂以得到粗制的黄色油状物(2.1g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液1∶2的EtOAc-己烷)纯化粗产物，以得到黄色油状的N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-5-(三丁基甲锡烷基)-2-噻吩磺酰胺(0.88g，12.9％)。质谱(-ESI)551(M-H)-。
C.N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-5-碘-2-噻吩磺酰胺在溶于甲醇(4mL)的N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-5-(三丁基甲锡烷基)-2-噻吩磺酰胺(0.35g，0.633mmol)溶液中连续加入醋酸钠(0.104g，1.27mmol)、碘化钠(0.190g，1.27mmol，溶于H2O)和三水合氯胺T(0.36g，1.27mmol，溶于甲醇(0.5mL))。加入氯胺T后微黄的溶液经红色变为橙色。将反应物在25℃下搅拌2h，然后通过加入1M亚硫酸氢钠(10mL)终止反应。加入H2O(10mL)后，用乙醚(3×50mL)洗涤水层。在MgSO4上干燥有机层，过滤，浓缩以得到微黄的油状物(0.210g)。通过HPLC纯化粗制的产物(流速1.0mL/min；洗脱液，6％溶于CH2Cl2的MTBE)以得到白色无定形固体状的N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-5-碘-2-噻吩磺酰胺(0.125g，51.02％)。质谱(-ESI)388(M-H)-。分析计算值C11H17NIO4S2 0.07EtOAcC，31.58；H，4.21；N，3.64。实测值C，31.22；H，4.22；N，3.54。
实施例2085-氟-N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-2-噻吩磺酰胺
A.N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-5-(三甲基甲锡烷基)-2-噻吩磺酰胺将六甲基二锡(5.055g，15.43mmol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.7133g，0.617mmol)加到溶于1，4-二噁烷(70mL)的5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-2-噻吩磺酰胺溶液(在实施例199，步骤A中制备)(3.5g，10.27mmol)中。将此棕色溶液加热回流过夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1EtOAc-己烷)说明完全反应然后过滤浆液并在真空下除去溶剂以得到粗制的黄色油状物(2.1g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液1∶2的EtOAc-己烷)纯化粗产物，以得到黄色油状的N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-5-(三甲基甲锡烷基)-2-噻吩磺酰胺(3.1g，70.8％)。质谱(-ESI)425(M-H)-。分析计算值C11H17NIO4S2C，36.64；H，5.91；N，3.29。实测值C，36.64；H，5.81；N，3.21。
B.5-氟-N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-2-噻吩磺酰胺在氮气中于25℃下搅拌溶于无水乙腈(20mL)的N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]-5-(三甲基甲锡烷基)-2-噻吩磺酰胺溶液(1.0g，2.34mmol)。一次性加入Selectfluor(0.850g，2.40mL)并在25℃下将溶液搅拌19h。3h后开始形成白色沉淀。取出一份，TLC(1∶1EtOAc-己烷)说明未反应完全。主要是存在起始物质。将反应物在80℃加热6h。取出一份，TLC(1∶1EtOAc-己烷)说明完全反应。然后过滤浆液并在真空下除去溶剂以得到粗制的黄色油状物(0.6g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液1∶2的EtOAc-己烷)纯化粗产物，以得到无定形白色固体状的5-氟-N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基-丁基]-2-噻吩磺酰胺(0.102g，15.49％)。质谱(-ESI)280(M-H)-。分析计算值C10H16NFO4S2C，42.69；H，5.73；N，4.98。实测值C，42.47；H，5.74；N，4.87。
实施例2094-[1-(5-氯-噻吩-2-磺酰氨基)-2-羟基-乙基]-哌啶-1-羧酸叔-丁酯 A.4-((1S)-1-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-2-羟乙基)哌啶-1-羧酸叔-丁酯在溶于DME(40mL)的氰尿酰氯溶液(1.44g，7.80mmol)中加入25℃的N-甲基吗啉(0.79g，7.80mmol)。有白色沉淀形成，在此混合物中加入溶于DME(20mL)的4-[羧基-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-甲基]-哌啶-1-羧酸叔-丁酯(3.75g，7.80mmol)溶液。5h后，过滤混合物并在冰浴中将液态滤液冷却至0℃，并通过吸量管加入预先溶解于H2O(15mL)的NaBH4(0.44g，11.63mmol)。再在0℃下将反应混合物搅拌20min。加入乙醚(100mL)然后用1N的HCl溶液酸化。然后分离有机相并用10％的Na2CO3溶液和盐水洗涤，然后在MgSO4上干燥。以乙酸乙酯-己烷，1-1作为洗脱液，快速层析过滤和蒸发制成的粗制玻璃状物质。这样得到了所需的固体产物(1.03g，28％)。MS(+ESI)367.1([M+H]+)；282.2；189.1。
B.4-[(1S)-1-氨基-2-羟乙基]-1-哌啶羧酸叔-丁酯在4-((1S)-1-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-2-羟乙基)哌啶-1-羧酸叔-丁酯(0.95g，2.03mmol)中一次性全部加入20％溶于二甲基甲酰胺的哌啶(20mL)。在25℃下将反应物搅拌过夜。蒸发去二甲基甲酰胺并对粗制的残余物进行快速层析，以95-5-0.1％的二氯甲烷-甲醇-氢氧化铵作为洗脱液。如此制得了在放置后结晶的油状物(0.392g，80％)。MS(+ESI)245.2([M+H]+)；189.2；150.2。
C.4-[1-(5-氯-噻吩-2-磺酰氨基)-2-羟基-乙基]-哌啶-1-羧酸叔-丁酯在搅拌的冷却至0℃的4-[(1S)-1-氨基-2-羟乙基]-1-哌啶羧酸叔-丁酯(0.107g，0.44mmol)、三乙胺(0.046g，0.46mmol)和二氯甲烷(5mL)的混合物中逐滴或通过吸量管加入溶于2mL二氯甲烷的5-氯噻吩-2-磺酰氯(0.095g，0.44mmol)溶液。15min后，移去冰浴使反应物达到25℃并搅拌过夜。将反应物倒入饱和的碳酸氢钠溶液(25mL)和额外的二氯甲烷(15mL)以终止反应。分离有机相，然后用1N的HCl溶液、H2O、盐水洗涤并在MgSO4上干燥。过滤有机相并蒸发以制出粗制的油状物，以乙酸乙酯-己烷，1-1作为洗脱液，对此油状物进行快速层析。这样制得了固态的标题化合物(0.109g，58％)。MS(+APCI)442.18([M+NH4]+)；386.08；357.01；325.07；307.01；285.06。分析计算值C16H25ClN2O5S2C，45.22；H，5.93；N，6.59；实测值C，45.31；H，5.87；N，6.44。
实施例210N-[(1S，2S)-1-(羟甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺 在溶于CH2Cl2(5mL)和(S)-异亮氨醇(642mg，5.48mmol)的2-噻吩磺酰氯溶液(1g，5.48mmol)中加入Hunig’s碱(1.05mL，6.02mmol)。在25℃将反应混合物搅拌24h。除去溶剂并将油状物溶于EtOAc(100mL)。用水(2×100mL)、盐水(1×100mL)洗涤此溶液并在Na2SO4上干燥。用实施例195中列出的条件，通过半制备RP-HPLC分离所需的磺酰胺(m/z＝264.0(M+H)，rt＝0.79min)。
实施例2115-氯-N-[(S)-2-羟基-1-(4-苄基氨基环己基)乙基]噻吩-2-磺酰胺 A.步骤1将溶于CH2Cl2(50mL)(S)-2-(5-Cl-噻吩氨磺酰基)-2-(4-羟基环己基)-N，O-丙酮化合物(4.8g，12.7mmol，见实施例199步骤1-3)的溶液加入溶于CH2Cl2(30mL)的PCC(5.46g，25.3mmol)、硅胶(5.46g)和醋酸钠(1g，12.2mmol)的浆液中。将所得反应混合物在25℃搅拌过夜。用Et2O稀释此混合物并过滤。用二乙醚(3×50mL)洗涤固体并在MgSO4上干燥合并的有机提取物。在真空下除去溶剂，以1∶1EtOAc/己烷作为洗脱液，通过柱层析纯化残余物以得到白色固体状的酮(4g，84％)(100％纯)。
B.步骤2在溶于1，2-二氯乙烷(6mL)的(S)-2-(5-Cl-噻吩氨磺酰基)-2-(4-环己酮)-N，O-丙酮化合物(340mg，0.9mmol)溶液中加入苄胺(118μL，1.08mmol)、三乙酸基硼氢化钠(286mg，1.35mmol)和乙酸(52μL，0.9mmol)。将反应物在25℃搅拌过夜并加入NaHCO3水溶液终止反应，用乙醚提取并蒸发。在所得残余物中缓慢加入乙酸(10mL of 80％)，并将反应物在40℃加入9天。除去乙酸并通过柱层析(MeOH/CH2Cl2/0.5-1％NH4OH)纯化残余物以得到所需化合物(254mg，66％)，它是非对映体的混合物。
按照实施例211中列出的流程，用(S)-2-(5-Cl-噻吩氨磺酰)-2-(4-环己酮)-N，O-丙酮化合物(来自实施例211，步骤1)和苄胺、甲胺、乙胺、丙胺、烯丙胺、3-(氨基甲基)吡啶、吗啉、4-(氨基甲基)吡啶、2-(氨基甲基)吡啶和甘氨酸乙酯制备了以下化合物(实施例211-220，表20)。
表20(LCMS Data3分子离子和保留时间)
实施例221A方法15-氯-N-[(S)-2-乙基-1-甲酰基丁基]噻吩-2-磺酰胺
A.5-(1-乙基-丙基)-咪唑烷-2，4-二酮将氰化钠(12.0g，244.8mmol)和2-乙基丁醛(10.0mL，81.3mmol)加入溶于H2O(300mL)的碳酸铵(25.4g，325.3mmol)。加入乙醇(300mL)并有盐沉淀出来。将反应混合物加热至90℃。1h后，混合物变得均匀，并在90℃搅拌18h。冷却至25℃后，在真空下除去约500mL溶剂。加入浓缩的HCl以将混合物酸化至ph1-2，并有沉淀形成。过滤并使沉淀从EtOAc中结晶出来以得到白色固体状的5-(1-乙基-丙基)-咪唑烷-2，4-二酮(12.9g，93％)。
质谱(-ESI)169(M-H)-。
B.N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基降缬氨酸将5-(1-乙基-丙基)-咪唑烷-2，4-二酮(12.3g，72.3mmol)溶于150mL NaOH的水溶液(11.6g，289.2mmol)。在密闭容器中通过微波炉将溶液加热1h。(微波条件15min@100％功率，150℃，50psi，然后5min 0％功率，然后15min@100％功率，150℃，50psi，然后重复。)在真空中从反应混合物中除去水和氢氧化铵，将得到的粗制的氨基酸和NaOH的混合物用于下一步骤而无需进一步纯化。
将粗制的氨基酸和NaOH的混合物溶于300mL水。在冰浴中将混合物冷却至0℃。将5-氯噻吩-2-磺酰氯(17.3g，79.5mmol)溶于100mL THF并在0.5h内将其逐滴加入反应混合物。1h后，将反应混合物逐渐加热到25℃并搅拌16h，在真空下除去THF，然后用1N HCl将混合物酸化至pH1。大约15min后乳白色的溶液中开始有沉淀出现。1h后，将混合物在冰箱中冷却1h，然后过滤。用1N HCl洗涤沉淀物以得到白色固体状的 N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰]-3-乙基正缬氨酸(18.5g，78％)。质谱(-ESI)325(M-H)-。
C.N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基-L-降缬氨酸将(+)-(1S，2R)-半水合麻黄碱(16.7g，95.6mmol)加入溶于185mL EtOH的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基降缬氨酸悬液(31.2g，95.6mmol)。稍许加热混合物以溶解固体并有沉淀形成。在5℃冷却18h后，过滤所得悬液，并用冷的EtOH和EtOAc洗涤沉淀以得到产率为27％的非对映盐。该盐从沸腾的EtOAc(420mL)中再结晶出来，然后过滤。然后将所得白色固体溶解于300mL EtOAc和300mL1N HCl。将各个层分离并用1N HCl(2×200mL)洗涤有机提取物，用无水(Na2SO4)干燥，并浓缩以得到白色固体状的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰]-3-乙基-L-降缬氨酸(5.6g，18％)。手性HPLC[chiralpak AD(25×0.46cm)，8∶2己烷(0.1％TFA)异丙醇，在9.6min用L-异构体洗脱，在13.1min用D-异构体洗脱]证明手性纯度为96％。D25＝+44.5°(c＝1％SOLUTION，MeOH)。质谱(-ESI)325(M-H)-。分析计算值C11H16ClNO4S2C，40.55；H，4.95；N，4.30。实测值C，40.30；H，4.78；N，4.16。
D.5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(羟甲基)丁基]-2-噻吩磺酰胺在溶于0℃THF(150mL)的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基-L-降缬氨酸(5.6g，17.2mmol)中逐滴或通过加料漏斗加入溶于THF(69mL，69mmol)的1M硼烷四氢呋喃复合物溶液。15min后，将反应混合物加热至25℃并搅拌18h。然后缓慢加入90mL 10％的溶于MeOH的AcOH终止反应。在真空下除去挥发性物质。然后将残余物溶于EtOAc(300mL)并用饱和的NaHCO3水溶液(3×200mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并浓缩成白色沉淀(5.1g，产率96％，手性纯度96％)。用庚烷/EtOAc(4∶1)再结晶沉淀以得到光学纯白色针状的5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(羟甲基)丁基]-2-噻吩磺酰胺(4.4g，81％yield)。[α]D25＝+4.5°(c＝1％溶液，DMSO)。质谱(-ESI)310(M-H)-。分析计算值C11H18ClNO3S2C，42.37；H，5.82；N，4.49。实测值C，42.37；H，5.79；N，4.38。
E.5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-甲酰基丁基]噻吩-2-磺酰胺将重铬酸吡啶(2.4g，6.4mmol)加入5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(羟甲基)丁基]-2-噻吩磺酰胺(0.5g，1.6mmol)的CH2Cl2溶液(20mL)。18h后，通过硅藻土垫过滤反应混合物。浓缩滤液并通过硅胶柱层析(洗脱液1∶4EtOAc-己烷)纯化所得残余物以得到白色固体状的5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-甲酰基丁基]噻吩-2-磺酰胺(303mg，61％)。D25＝+136.76°(c＝1％SOLUTION，CHCl3)。质谱(-ESI)308(M-H)-。分析计算值C11H16ClNO3S2C，42.64；H，5.21；N，4.52。实测值C，42.57；H，5.24；N，4.52。
实施例221B方法25-氯-N-[(S)-2-乙基-1-甲酰基丁基]噻吩-2-磺酰胺A.(S)-3-乙基-2-{[(S)-1-苯基乙基]氨基}戊腈在溶于80mL 1∶1MeOH/H2O的(S)-(-)-α-甲基苄胺盐酸盐(1.2g，7.6mmol)中加入氰化钾(0.5g，7.6mmol)和2-甲基丁醛(0.94mL，7.6mmol)。在30min后形成沉淀。20h后，过滤悬液并用H2O洗涤以得到白色粉末状的(S)-3-乙基-2-{[(S)-1-苯基乙基]氨基}戊腈(1.29g，74％)。质谱(+ESI)310(M+H)+。分析计算值Cl5H22N2C，78.21；H，9.63；N，12.16。实测值C，77.90；H，9.75；N，12.32。
B.3-乙基-N2-[(S)-1-苯基乙基]-L-降正缬氨酰胺(norvalinamide)在25mL 0℃的硫酸中分几次加入(S)-3-乙基-2-{[(S)-1-苯基乙基]氨基}戊腈(2.7g，11.6mmol)。将混合物加热至25℃。2天后，将反应混合物倒进约100g碎冰中。加入浓NH4OH中和酸。用EtOAc(3×100mL)提取此混合物，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到3-乙基-N2-[(S)-1-苯基乙基]-L-降缬氨酰胺(2.6g，90％)，它被用于下一步骤而无需纯化。质谱(+ESI)249(M+H)+。分析计算值C15H24N2OC，72.54；H，9.74；N，11.28。实测值C，72.24；H，10.04；N，11.01。
C.3-乙基-L-降缬氨酰胺在Parr装置中与3atm的H2下将3-乙基-N2-[(S)-1-苯基乙基]-L-降缬氨酰胺(2.6g，10.5mmol)和5％Pd/C(800mg)的混合物振荡24h。通过硅藻土塞过滤混合物并在真空下除去溶剂以得到白色固体状的3-乙基-L-降缬氨酰胺(1.4g，93％)，它被用于下一步骤而无需进一步纯化。质谱(+ESI)145(M+H)+.
D.N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基-L-降缬氨酸将3-乙基-L-降缬氨酰胺(1.2g，4.8mmol)溶于浓HCl(10mL)并在100℃加热16h。将反应混合物浓缩成含有氨基酸盐酸盐和等量NH4Cl的白色固体，它被用于下一步骤而无需进一步纯化。
将氨基酸盐酸盐和等量的NH4Cl(0.28g，1.19mmol)溶于6mL H2O，然后加入(0.24g，6.00mmol)。将溶液冷却至0℃，然后逐滴加入溶于6mL THF的5-氯噻吩-2-磺酰氯(0.29g，1.32mmol)。将混合物加热至25℃。19h后，在真空下除去THF。用10mL H2O稀释剩余的溶液并用EtOAc(2×10mL)洗涤。用1N HCl酸化此溶液并有沉淀形成。将其过滤以得到白色固体状的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基-L-降缬氨酸(0.17g，44％)。手性HPLC说明只有S对映体存在。
然后按照实施例221A，由N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基-L-降缬氨酸制备了5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(羟甲基)丁基]-2-噻吩磺酰胺和5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-甲酰基丁基]噻吩-2-磺酰胺。
实施例221C5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(羟甲基)丁基]-2-噻吩磺酰胺在装有氮气输入管、机械搅拌器和具塞加料漏斗的3L 3-颈烧瓶中放入硼氢化锂(145mL，2M的THF溶液，0.29mol)。将溶液置于氮气下并冷却至0℃。在30分钟内逐滴加入氯三甲基硅烷(73.8mL，0.58mol)。移去冰浴并将所得浆液在室温下搅拌30min。将反应混合物冷却至0℃，然后在15min内分批加入按流程13制备的2-(S)-氨基-3-乙基-戊酸(21.1g，0.145mol)。随冰浴融化使反应混合物缓慢升至室温。室温下3天后，将反应混合物冷却至0℃并在80min内小心加入甲醇(217mL)。在室温下将溶液再搅拌40min，然后在60℃的水浴中减压浓缩。用20％的氢氧化钠(37.5mL)使所得浆液成为碱性。加入水(37.5mL)，并用二氯甲烷(300mL)提取整个水层，并干燥(Na2SO4)。减压浓缩得到了油状的2(S)-氨基-3-乙基戊醇(17.3g，91％)，它被立即使用或在冰箱中保存过夜Opt.Rot.[α]D25＝-3.7°(1％溶液，DMSO)；1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ4.38(s谱带，1H)，3.35(dd和谱带s在δ3.32处重叠，J＝4.5，10.3Hz，3H)，3.14(dd，J＝7.9，10.2Hz，1H)，2.63(m，1H)，1.45-1.05(m，5H)，0.82和0.81(两个重叠的三峰，J＝7.4Hz，6H)；MS(+ESI)[M+H]+，132(60％)。
将2(S)-氨基-3-乙基戊醇(34.1g，0.26mol)和二氯甲烷(700mL)的混合物置于氩气下，并冷却至0℃。加入三乙胺(36.2mL，0.26mol)，然后逐滴加入溶于二氯甲烷(400mL)的5-氯噻吩-2-磺酰氯(56.4g，0.26mol)。随冰浴融化使反应混合物缓慢回复室温。室温下3天后，将反应混合物分成两部分，每份0.6L。用乙酸乙酯(1L)稀释每一份，用饱和的一水磷酸钾(200mL)洗涤三次，用盐水(200mL)洗涤一次，并干燥(Na2SO4)。减压浓缩以得到白色固体(74.5g，92％)。将若干次处理的产物(87.98g)合并并从热的庚烷∶乙酸乙酯(4∶1，775mL)中再结晶以得到晶体状的标题化合物(74.9g，85％)mp 115-117.6℃；Opt.Rot.[α]D25＝+10.81°(1％溶液，MeOH)；1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ7.71(d，J＝8.1Hz，1H)，7.44(d，J＝4.1Hz，1H)，7.22(d，J＝4.1Hz，1H)，4.56(t，J＝5.2Hz，OH)，3.31-3.15(m，3H)，1.40-1.15(m，4H)，1.07(m，1H)，0.79和0.76(两个重叠的三峰，J＝7.3Hz，6H)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ141.75，133.73，130.95，127.60，60.41，56.89，41.57，21.31，20.80，11.79，11.51；MS(-ESI)[M-H]-，1氯同位素模式，310(100％)，312(30％)；Anal.Calc.C11H18ClNO3S2C，42.37，H，5.82，N，4.49。实测值C，42.34，H，5.65，N，4.43。手性HPLC(Chiralpak AD，25×0.46cm，洗脱液含0.1％TFA的8∶2己烷/异丙醇，流速0.5mL/min，在254nm处进行UV检测，S和R异构体的保留时间分别为10.95min和11.95min)说明S/R比例为100.0∶0.0。
实施例2225-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(1-羟乙基)丁基]噻吩-2-磺酰胺 将溶于甲苯/THF(75∶25)的甲基溴化镁(1.4M，7.0mL，9.7mmol)溶液加入0℃的5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-甲酰基丁基]噻吩-2-磺酰胺(实施例221，1.0g，3.2mmol)的THF溶液(30mL)。将混合物加热至25℃，并在2h后小心地用饱和的氯化铵水溶液(25mL)终止反应。用EtOAc(3×25mL)提取混合物。在Na2SO4上干燥有机提取物，过滤并浓缩以得到无色油状物。通过柱层析(Biotage)(洗脱液1∶4EtOAc-己烷)纯化产物以得到白色固体状的5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(1-羟乙基)丁基]噻吩-2-磺酰胺(876mg，83％)。该产物是比例为3∶7的非对映混合物。熔点95-98℃.分析计算值C12H20ClNO3S2C，44.23；H，6.19；N，4.30。实测值C，44.25；H，6.35；N，4.29。质谱(-ESI)324(M-H)-。
实施例2235-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(1-羟基-1-甲基乙基)丁基]噻吩-2-磺酰胺 A.N[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基-L-降缬氨酸甲酯将三甲基甲硅烷基重氮甲烷(3.1mL，6.1mmol)加入溶于THF(20mL)和MeOH(5mL)的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基-L-降缬氨酸(1.0g，3.1mmol)溶液。2h后浓缩混合物以得到白色固体状的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基-L-降缬氨酸甲酯(1.0g，99％)。质谱(-ESI)338.00(M-H)-。
B.5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(1-羟基-1-甲基乙基)丁基]噻吩-2-磺酰胺将溶于甲苯/THF(75∶25)的甲基溴化镁(1.4M，9.5mL，13.2mmol)溶液加入0℃的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基-L-降缬氨酸甲酯(0.90g，2.65mmol)的THF(26mL)溶液。使溶液升温至25℃，然后加热至55℃并搅拌18h。然后冷却至0℃并缓慢加入饱和的NH4Cl水溶液终止反应。加入EtOAc(75mL)并分离各相。用Na2SO4干燥有机相，过滤并浓缩以得到黄色油状物。通过柱层析(Biotage)(洗脱液1∶4EtOAc-己烷)纯化产物以得到无色油状的5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(1-羟基-1-甲基乙基)丁基]噻吩-2-磺酰胺(0.72g，80％)。质谱(-ESI)338(M-H)-。分析计算值C13H22ClNO3S2C，45.94；H，6.52；N，4.12。实测值C，46.10；H，6.63；N，4.04。
实施例2245-氯-N-(2-羟基-1-四氢-H-噻喃-4-基乙基)噻吩-2-磺酰胺 A.(5-氯-噻吩-2-磺酰氨基)-(四氢-噻喃-4-基)-乙酸将氢氧化钠(0.20g，5.04mmol)加入25℃溶于MeOH∶水(2∶1)的N-Fmoc-氨基-(4-四氢噻喃基)乙酸(0.50g，1.26mmol)的混合物。将反应混合物搅拌20h。TLC(1∶9MeOH/CHCl3)说明完全反应。用水稀释混合物并用EtOAc洗涤。将水层浓缩以得到残留有NaOH的白色固体。将此白色固体溶于H2O∶THF(1∶2，15mL)并冷却至0℃。将5-氯噻吩-2-磺酰氯(0.683g，3.15mmol)溶于THF(2mL)并将其逐滴加入混合物中，然后在25℃温热过夜。加入1N HCl水溶液以将混合物酸化至pH1。加入EtOAc并分离各层。用1N HCl和H2O洗涤有机提取物，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到红黑色固体状的(5-氯-噻吩-2-磺酰氨基)-(四氢-噻喃-4-基)-乙酸(0.14，31％)，无需纯化即可将其用于下一步骤。质谱(+ESI)357(M+H)+B.5-氯-N-(2-羟基-1-四氢-H-噻喃-4-基乙基)噻吩-2-磺酰胺将(5-氯-噻吩-2-磺酰氨基)-(四氢-噻喃-4-基)-乙酸(0.14g，0.40mmol)溶于THF(2mL)并冷却至0℃。逐滴加入溶于THF的硼烷四氢呋喃复合物(1M，3.2mL，3.2mmol)溶液并使此混合物在25℃温热过夜。在真空下除去挥发性溶剂，用EtOAc稀释所得橙色油状物并用H2O、1N HCl和饱和的NaHCO3水溶液洗涤。在Na2SO4上干燥有机提取物，过滤并浓缩。通过柱层析(Biotage)(洗脱液1∶1 EtOAc∶己烷)纯化所得残余物以得到白色固体状的5-氯-N-(2-羟基-1-四氢-H-噻喃-4-基乙基)噻吩-2-磺酰胺(40mg，30％)。mp 108-110℃。质谱(-ESI)340(M-H)-。分析计算值C11H16ClNO3S3C，38.64；H，4.72；N，4.10。实测值C，38.80；H，4.69；N，3.88。
实施例2255-氯-N-[(S)-2-羟基-1-哌啶-4-基乙基]噻吩-2-磺酰胺 在溶于0℃二氯甲烷(2mL)的4-[1-(5-氯-噻吩-2-磺酰氨基)-2-羟基-乙基]-哌啶-1-羧酸叔-丁酯(0.204g，0.48mmol(见实施例209))溶液中加入三氟乙酸(0.5mL)。将反应加热至25℃并搅拌过夜。然后浓缩此混合物，加入二氯甲烷并蒸发6次以得到粗制固体。通过HPLC(C-18柱(21×75mm)，洗脱系统60-100％乙腈-水+0.1％TFA，20min梯度)纯化得到了油状产物(0.0166g，11％)。MS(ESI)m/z325([M+H]+)。
实施例226N-[(S)-2-乙基-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺 A.N-[(1S)-2-乙基-1-(羟甲基)丁基]-5-(三甲基甲锡烷基)噻吩-2-磺酰胺.
在氮气下将5-溴-N-[(1S)-2-乙基-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺(0.71g，2.0mmol)、六甲基二锡(0.983g，3.0mmol)、四(三苯基膦)合钯(0.115g，0.10mmol)和1，4-二噁烷(15mL)溶液回流16h。冷却至25℃后，加入二氯甲烷(10mL)，过滤混合物并蒸发以制得粗制的油状物(0.49g)，无需纯化即可将其用于下一步骤，步骤B。MS(-ESI)439.20([M-H]-)。
B.N-[(S)-2-乙基-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺在搅拌的无水乙腈(6mL)和N-[(1S)-2-乙基-1-(羟甲基)丁基]-5-(三甲基甲锡烷基)噻吩-2-磺酰胺(0.24g，0.56mmol)的混合物中一次性加入所有的Selectfluor(Aldrich)(0.204g，0.57mmol)。在氮气下将混合物加热至75℃，搅拌16h，冷却至25℃并过滤。蒸发去溶剂以制得粗制的油状物，将其加到乙酸乙酯中并再次过滤以除去不溶性固体。以己烷-乙酸乙酯(2-1)作为洗脱液，通过快速层析纯化蒸发去残留溶剂而制得的油状物，由此制得的产物主要是标题化合物(0.051g，33％)。MS(-ESI)276.20([M-H]-)。
实施例227N-[(S)-2-乙基-1-(羟甲基)丁基]-5-氟噻吩-2-磺酰胺 此化合物是用实施例226(步骤A和B)中发现的方法作为副产物合成的，并是由同样的快速层析柱作为固体分离的(0.024g，15％)。MS(-ESI)294.20([M-H]-)。
实施例2285-氯-N-[(1S)-1-(2，3-二氢-1H-茚-2-基)-2-羟乙基]噻吩-2-磺酰胺 A.9H-芴-9-基甲基-(1S)-1-(2，3-二氢-1H-茚-2-基)-2-羟乙基氨基甲酸酯基0℃下，在30min内将1N硼烷-THF(24.18mL)逐滴加入(2S-2，3-二氢-1H-茚-2-基[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基)乙酸(2.0g，4.84mmol)的无水四氢呋喃溶液(20mL)。使反应物在25温热过夜，然后加入10.0mL 10％乙酸的甲醇溶液终止反应。蒸发去溶剂后，将粗制产物溶于乙酸乙酯并用1N HCl、水和10％NaHCO3洗涤。在MgSO4上干燥有机层，过滤并浓缩以得到粗制的黄色油状物(1.8g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液1∶2的EtOAc-己烷)纯化粗产物。这样制得了无定形固体状的标题化合物(1.05g，54.4％)。质谱(-ESI)398(M-H)-.(+ESI)400(M+H)+。
B.(2S)-2-氨基-2-(2，3-二氢-1H-茚-2-基)乙醇将20％的哌啶DMF溶液(15mL)加入9H-芴-9-基甲基-(1S)-1-(2，3-二氢-1H-茚-2-基)-2-羟乙基氨基甲酸酯(1.05g，2.63mmol)的DMF溶液(5mL)。将反应混合物在25℃搅拌19h。蒸发去溶剂后，将粗制产物溶于乙酸乙酯(50mL)并在MgSO4上干燥，过滤并浓缩以得到粗制的黄色油状物(1.05g)。质谱(+ESI)179(M+H)+。
C.5-氯-N-[(1S)-1-(2，3-二氢-1H-茚-2-基)-2-羟乙基]噻吩-2-磺酰胺将5-氯噻吩-2-磺酰氯(0.856g，3.94mmol)的CH2Cl2溶液(5mL)逐滴加入0℃溶于CH2Cl2(5mL)和三乙胺(3.8mL，5.26mmol)的(2S)-2-氨基-2-(2，3-二氢-1H-茚-2-基)乙醇(0.46g，2.63mmol)溶液。将溶液在25℃温热过夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1EtOAc-己烷)说明完全反应。用CH2Cl2(50mL)稀释并用1NHCl(2×50mL)和饱和的NaCl水溶液(50mL)洗涤有机层。在MgSO4上干燥有机层，过滤并浓缩以得到粗制油状物(0.89g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液1∶4的EtOAc-己烷)纯化粗产物以制得无定形白色固体状的5-氯-N-[(1S)-1-(2，3-二氢-1H-茚-2-基)-2-羟基乙基]噻吩-2-磺酰胺(0.361g，38.4％)。质谱(-ESI)356(M-H)-。分析计算值C15H10ClNO3S2C50.34H4.51 N3.91实测值C50.28 H4.36 N3.77。
实施例2295-氯-N-{(1S，2S)-1-[(Z)-(肟基)甲基]-2-甲基丁基噻吩-2-磺酰胺 将溶于甲醇(10mL)的5-氯-N-[(1S，2S)-1-甲酰-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺(实施例118，1.0g，3.4mmol)、盐酸羟胺(0.464g，6.78mmol)和醋酸钠(0.556g，6.78mmol)溶液回流搅拌19h。蒸发去溶剂后，用K2CO3水溶液(20mL)稀释残余物，然后用CH2Cl2(2×40mL)提取。用盐水洗涤合并的反应提取物，在MgSO4上干燥，过滤并浓缩以得到粗制油状物(0.89g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液1∶4的EtOAc-己烷)纯化粗产物。这样制得了无定形白色固体状的标题化合物(Z-异构体)(32mg，3.1％)。质谱(-ESI)309(M-H)-。分析计算值C10H15ClN2O3S2·0.10 C4H8O2C39.08 H4.98 N8.76实测值C38.72 H4.67N8.43。
实施例2305-氯-N-{(S，S)-1-[(E)-(肟基)甲基]-2-甲基丁基噻吩-2-磺酰胺 将溶于甲醇(10mL)的5-氯-N-[(1R，2S)-1-甲酰-2-甲基丁基]噻吩-2-磺酰胺(实施例118，1.0g，3.4mmol)、盐酸羟胺(0.464g，6.78mmol)和醋酸钠(0.556g，6.78mmol)溶液回流搅拌19h。蒸发去溶剂后，用K2CO3水溶液(20mL)稀释残余物，然后用CH2Cl2(2×40mL)提取。用盐水洗涤合并的反应提取物，在MgSO4上干燥，过滤并浓缩以得到粗制油状物(0.89g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液1∶4的EtOAc-己烷)纯化粗产物。这样制得了无定形白色固体状的标题化合物(E-异构体)(300mg，28.3％)。质谱(-ESI)309(M-H)-。分析计算值C10H15ClN2O3S2·0.40C4H8O2C40.26H5.30N8.09实测值C39.78H5.23N7.77A.二乙基-3-乙基-5-氧代吡咯烷-2，2-二羧酸酯在150mg溶于150mL纯乙醇的钠中加入乙酰氨基丙二酸二乙酯(5.3g，25mmol)和乙基-(2E)-戊-2-烯酯(3.5g，27.3mmol)。然后将反应混合物回流20h。然后加入2mL冰醋酸，在压力下通过水流抽气管和加热浴的帮助除去挥发性挥发性物质。通过冷却使残余物固化。将残余物溶于50mL甲苯并在其中加入20mL石油醚。当混合物冷却时有产物沉淀。收集晶体并用水洗涤，在真空下进一步干燥以得到白色固体(5.6g，79.77％)。质谱(+ESI)258(M+H)+。
B.3-乙基谷氨酸将5.6g二乙基-3-乙基-5-氧代吡咯烷-2，2-二羧酸酯(21.76，84.67mmol)在80mL 49％的发烟HBr中回流4h。然后，将内含物放在真空下并除去挥发性成分。将胶状残余物溶于25mL蒸馏水并像上面那样除去水。将此过程重复一次。将残余物溶于20mL水并用浓缩的氨(2mL)溶液将溶液的pH调至3。此时可通过冰浴冷却或用含100mL纯乙醇的水溶液稀释以得到乙基谷氨酸沉淀。水-乙醇混合物沉淀在48h内完成。要小心地慢慢加入乙醇以避免不需要的产物沉淀。通过水-乙醇(1∶1)混合物结晶纯化此混合物。这样制得的标题化合物为无定形白色固体(3.5g，99％)。质谱(+ESI)176(M+H)+。
C.3-乙基-2-甲基戊-1，5-二醇0℃下，在20分子内在溶于THF(60mL)的LAH(2.06g，54.29mmol)浆液中逐滴加入3-乙基谷氨酸(3.5g，21.71mmol)。将反应物在36℃加热18h。将反应浆液(灰色)冷却至0℃并用H2O(3mL)终止反应，然后用1N NaOH(9mL)和H2O(3mL)洗涤。然后在25℃下搅拌6h以得到白色浆液。将此浆液过滤并在MgSO4上进一步干燥母液，过滤并在真空下浓缩以得到粗制的黄色油状3-乙基-2-甲基戊-1，5-二醇(2.85g，89.17％)。质谱(+ESI)170(M+Na)+。
D.5-氯-N-[2-乙基-4-羟基-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺将溶于CH2Cl2(5mL)的5-氯噻吩-2-磺酰氯(6.4g，24.48mmol)逐滴加入0℃溶于CH2Cl2(30mL)和三乙胺(5.66mL，40.81mmol)的3-乙基-2-甲基戊-1，5-二醇(2.85g，19.34mmol)溶液。将此溶液在25℃下温热过夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1EtOAc-己烷)说明完全反应。用CH2Cl2(50mL)稀释并用1N HCl(2×50mL)和饱和的NaCl水溶液(50mL)洗涤有机层。在MgSO4上干燥有机层，过滤并浓缩以得到粗制油状物(4.9g)。通过柱层析(230-400目硅胶，洗脱液1∶4的EtOAc-己烷)纯化粗产物以制得无定形白色固体状的5-氯-N-[2-乙基-4-羟基-1-(羟甲基)丁基]噻吩-2-磺酰胺(0.450g，7.3％)。质谱(-ESI)326(M-H)-。
1.半制备RP-HPLC条件Gilson半制备HPLC系统和Unipoint软件。
ColumnPhenomenex C18 Luna 21.6mm×60mm，5μ溶剂A水(0.02％TFA缓冲液)溶剂B乙腈(0.02％TFA buffer)溶剂梯度时间010％B；2.5min10％B；14min90％B.
流速22.5mL/min基于UV吸收收集产物峰并浓缩。
2.分析型LCMS条件Hewlett Packard 1100 MSD和ChemStation软件柱YMC ODS-AM 2.0mm×50mm 5μ柱，23℃；3μL注射；溶剂A水(0.02％TFA缓冲液)溶剂B乙腈(0.02％TFA缓冲液)梯度时间095％ A；0.3min95％ A；4.7min10％ A；4.9min95％ A。
流速1.5mL/min；检测254nm DAD；APl-ES扫描模式Positive 150-700；Fragmentor 70mV.
3.分析型LCMS条件ZMD(Waters)或Platform(Micromass)或LCZ(Micromass)柱Zorbax SB-C8溶剂乙腈+H2O含0.1％TFA或0.1％FA梯度梯度2.5min 15％乙腈-95％乙腈流速3ml\min检测ELSD检测(SEDEX 55)UV 253检测(Schimadzu)实施例233-阻抑物释放测定(RRA)根据公布的技术[Shuey，D.J.，Sheiffele，P.，Jones，D.，Cockett，M.I.，和Quinet，E.M.(1999)，“Repressor releasea useful tool for monitoringamyloid precursor protein(APP)proteolysis in mammalian cells”，Society forNeuroscience Abstracts，第25卷，神经科学协会第29界年会，迈阿密滩，佛罗里达州，1999年10月23-28日]检测了按实施例1-220的描述制得的化合物。简单地说，这种测定是如下进行的。
A.细胞培养在37℃和5％CO2下将CHO-K1细胞培养在完全DMEM培养基(DMEM-含有10％胎牛血清、1％非必需氨基酸和1％青霉素-链霉素的高葡萄糖)中。转染前24小时将2百万个细胞涂布到10-cm培养皿上。
按照Gibco BRL的建议用他们的Lipofectamine Plus系统完成瞬时转染。首先，在460μL的Opti-Mem转染培养基中加热6μg pRSVO-luc和6μg APP-lacI组成型DNA，并和30μL Plus试剂共培养15分钟。在温育DNA-脂类时，将CHO-K1细胞洗涤一次并将其置于没有青霉素-链霉素的DMEM培养基中。然后将DNA-脂类制剂放在这些细胞上并在37℃温育过夜。
将每个孔(总体积100μL)中一百万和一百五十万个转染的细胞放在置于澄清DMEM完全培养基(无酚红的DMEM)中的无菌且不透明的Packard 96-孔培养板中，并在37℃和5％CO2下温育3-5小时。
B.化合物稀释用两种不同的方法稀释化合物；一种方法用于净提供的化合物(小瓶中的称重粉末)，另一种方法用于溶液中的化合物(20mM，在96孔板中的DMSO中)。这两种方法都新鲜制备了用作洗脱液的25mM Hepes和25mM Hepes/1％DMSO。Hepes/DMSO在所有实验平板中都被用作洗脱对照。
下表描述了化合物稀释的步骤(请注意，最后一步仅适用于组织培养平板中的细胞/培养基化合物)表21
由于一些化合物以20mM的浓度存在于96孔板中，以下代表了它们的稀释方法(注意，这些化合物的平均分子量被用来计算这些稀释液，而且和上面一样，最后一步仅适用于组织培养平板中的细胞/培养基化合物)表22
一旦化合物被稀释，它们就可用来在组织培养平板(上面制备)中复制细胞。将细胞和化合物在37℃和5％CO2下在温育36-48小时。
C.分析测量进行萤光素酶测定(LucLite试剂，Packard)并在Packard TopCount装置上读数。将96孔板中的培养基除去并换成每孔100μL PBS(含有Mg2+和Ca2+)。在各个孔中加入等量的(100μL)的LucLite溶解/底物缓冲液，密封平板并在室温下在黑暗中于旋转振荡器上混合15-30分钟。然后在TopCount装置上进行萤光素酶阅读。测量结果是以相对光度单位(RLU)表示的，并如下所述在MS Excel中进行计算和分析。
D.数据分析下表提供了与这里列举的化合物相对应的测量结果。如果一种化合物在20μM时使萤光素酶的活性至少增加1.5倍且无毒(以信号损失(增加≤0.75倍)确定)，则认为它在RRA中是活跃的。增加的倍数是萤光素酶活性(以相对光度单位测量)和稀释对照的比值。所有被试验的化合物都是无毒的。
表23
在此并入此说明书中提到的所有出版物以供参考。由于已经根据特别优选的实施方案描述了本发明，应该感谢的是，在不背离本发明精神的情况下可对其做出修改。这种修改应在附加权利要求的范围内。
权利要求
1.一种溶解手性纯的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基降缬氨酸以用于制造手性纯的α-氨基酸的方法，该方法包括步骤(a)在乙醇中形成摩尔比为1∶1的(+)-麻黄碱半水合物和N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基降缬氨酸的混合物；(b)加热至至少80℃以溶解所述固体；(c)冷却混合物以使其形成沉淀；(d)用乙醇和乙酸乙酯洗涤沉淀以得到非对映的盐；(e)重结晶该非对映的盐；(f)提取重结晶的非对映的盐以提供有机提取物；(g)洗涤该有机提取物；和(h)干燥并任选浓缩该有机提取物以提供手性纯的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺酰基]-3-乙基降缬氨酸。
2.一种制造手性纯的α-氨基酸的方法，该方法包括步骤(a)使醛和氰化钾与α-甲基苄胺或其盐酸盐反应并过滤以得到产物(a)；(b)使硫酸和产物(a)反应；(c)中和反应(b)中的酸；(d)从中和的酸中提取产物(b)；(e)将产物(b)混合物在盐酸中以得到手性纯的α-氨基酸的盐；和(f)中和手性纯的α-氨基酸的盐以得到手性纯的氨基酸。
全文摘要
结构式(I)的化合物，其中和药学上可接受的盐、水合物和/或其前体药物一起提供了R
文档编号C07D233/66GK1800176SQ20051000359
公开日2006年7月12日 申请日期2001年12月11日 优先权日2000年12月13日
发明者A·F·克雷夫特, D·C·科尔, K·R·沃勒, J·R·斯托克, G·迪亚马尼提蒂斯, D·M·库布雷克, K·M·库特雷尔, W·J·莫尔, D·S·卡斯贝尔, L·雷斯尼克 申请人:惠氏, 亚魁里公司