嵌合腺病毒载体的制作方法

文档序号：3560935阅读：1260来源：国知局

专利名称：嵌合腺病毒载体的制作方法
嵌合腺病毒栽体
相关申请的交叉引用
本申请要求下述美国临时专利申请的优先权于2006年2月28 曰提交的美国临时专利申请No. 60/778026，于2006年5月19曰提交的美国临时专利申请No. 60/801,645，于2006年5月22日提交的美国临时专利申请60/802,992,于2006年8月4曰提交的美国临时专利申请No. 60/821,492,于2006年9月22日提交的美国临时专利申请 60/846,658以及于2006年9月28日提交的美国临时专利申请No. 60/848,195),为了所有的目的，其公开内容整体通过引用并入本文。
关于在联邦政府资助的研究开发中产生的发明的权利的声明
不适用
背景技术：
疫苗是用于预防和/或治疗大量疾病和病症(例如，病毒感染、细菌感染和癌症)的重要手段。基于核酸的疫苗具有超过蛋白或减毒活疫
生免疫反应的疫苗快速开发。对于蛋白疫苗，当每次产生了新的疫苗时都需要开发有效且高效的蛋白纯化方法。对于活疫苗，需要确定减毒作用的方法没有完全阻止病原体的生长，也要证明其在人体内是完全安全的。蛋白纯化和减毒作用的方法学的开发是极其费时的过程。相反，大部分基于核酸的疫苗每次使用相同的生产工艺就能够被很快地生产出，仅仅在编码目的抗原的核酸中有快速变化。复制缺陷型腺
'厶
病毒是基于核酸的疫苗系统，其快速地、可预料地和廉价地以高效子被制备[Polo, J. M. and Dubensky, T. W.， Jr., iXscov 7^to_y, 7(13)， 719-727 (2002)]。然而，给予本领域已知的腺病毒载体后抗原特异性反应的效率是低的。因此，在本领域中需要能够高效地激发针对目的抗原的免疫反应的新腺病毒载体。本发明满足这些和其它需要。发明概述
本发明提供了包含编码异源多肽的核酸的嵌合腺病毒载体，以及激发对异源多肽的免疫反应的方法。
本发明的一个实施方案提供了包含表达盒的嵌合腺病毒表达载
体，所述表达盒包含(a)可操作地连接于编码toll样受体(TLR)-3激动剂的核酸的第一启动子；和(b)可操作地连接于编码异源多肽的核酸的第二启动子。在一些实施方案中，所述TLR-3激动剂是dsRNA。在一些实施方案中，所述编码TLR激动剂的核酸包含选自SEQ ID NOS: 3、 7、 8、 9、 10、 11和12的序列。在一些实施方案中，所述异源多肽选自HIV包膜多肽(例如，gp41、 gpl20或gpl60)和流感HA多肽。在一些实施方案中，所述第一和第二启动子是相同的。在一些实施方案中，第一和第二启动子是不同的。在一些实施方案中，所述启动子选自iS肌动蛋白启动子和CMV启动子。本发明还提供了包含表达载体的免疫原性组合物。
本发明的另一实施方案提供了通过给予哺乳动物个体(例如，诸如小鼠、大鼠或豚鼠的啮齿类动物，或诸如黑猩猩、猕猴或人的灵长类动物)免疫原性有效量的组合物，以激发对异源多肽的免疫反应的方法。在一些实施方案中，所述载体通过任何一种非胃肠外途径(例如，经口、经鼻或粘膜)给药。在一些实施方案中，所述异源多肽在选自树突细胞、微褶细胞和肠上皮细胞的细胞中表达。
本发明的另一实施方案提供了免疫原性组合物，其包括(a)包含可操作地连接于编码异源多肽的核酸的启动子的嵌合腺病毒表达载体；和(b)TLR-3激动剂(例如，dsRNA)。在一些实施方案中，所述TLR-3 激动剂由核酸编码。本发明还提供了通过以任何非胃肠外途径(例如，口腔、经鼻、粘膜)给予哺乳动物个体(例如，诸如小鼠、大鼠或豚鼠的啮齿类动物，或诸如黑猩猩、猕猴或人的灵长类动物)所述组合物，以激发免疫反应的方法。
本发明的另一实施方案提供了包括在SEQIDNOS: 1、 2、 6、 7、13、 14、 15、 16或17中提及的序列的分离的核酸。附图简述

图1显示了证实在口腔递送载体后诱导抗原特异性免疫反应时，本发明的嵌合腺病毒载体(即，DS1)与TLR-3激动剂联用比标准腺病毒载体(即，rAd5)更有效的数据。图1A显示了描述口腔递送腺病毒载体后第3周时，针对HIV包膜蛋白(即，gpl20)的抗体效价的数据。图 1B显示了描述在口腔递送腺病毒载体后第6周时，针对HIV包膜蛋白(即，gpl20)的抗体效价的数据。
图2显示了证实本发明的嵌合腺病毒载体(即，DSlb或DSlc)与 TLR-3激动剂联用比标准腺病毒载体(即，rAd5)更有效地诱导抗原特异性免疫反应的数据。图2A显示了描述在口腔给予载体后第3周时，抗GFPIgG效价的数据。图2B显示了描述在第0、 4和8周给予载体后第10周时，针对GFP的CD8+T细胞应答的数据。图2C显示了描述在口腔给予载体后第3周时，抗HA抗体效价的数据。
图3显示了证实当本发明的嵌合腺病毒载体经非胃肠外给药时，较好地用于激发免疫反应的数据。图3A显示了描述在肌内给予DS1 后第3周时，抗gpl20抗体效价的数据。图3B显示了描述在鼻内给予DSlc后第3周时，抗HA抗体效价的数据。
图4显示了证实表达的TLR-3配体激动剂能够诱导抗原呈递细胞的激活的数据。图4A显示了描述树突细胞被表达的dsRNA TLR-3激动剂lucl激活的数据。图4B显示了描述表达的dsRNATLR-3激动剂 lucl和ml激活树突细胞的数据。
图5是本发明的嵌合&泉病毒载体，即，包含编码表达ds RNA TLR-3 激动剂的核酸的嵌合腺病毒载体的示意图。
图6显示了证实本发明的嵌合腺病毒载体在口腔递送后，有效地诱导抗原特异性免疫反应的数据。图6显示了描述在口腔给予包含编码dsRNA TLR-3激动剂lucl的核酸序列的嵌合腺病毒后第3周时，抗gp 120抗体效^介的数据。
图7显示了证实TLR-7/8激动剂在诱导抗原特异性免疫反应方面有效性较差的数据。
图8显示了证实本发明的嵌合腺病毒载体在口腔递送后，有效地
诱导抗原特异性免疫反应的数据。图8A显示了描述在口腔给予包含编码dsRNA TLR-3激动剂lucl的核酸序列的嵌合腺病毒后第4周时，抗HA抗体效价的数据。图8B显示了描述在给予包含编码dsRNA TLR-3激动剂luc 1的核酸序列的嵌合腺病毒后第4周或7周时，抗 HA抗体效价的数据。图8C显示了描述在口腔或鼻内给予包含编码 dsRNA TLR-3激动剂luc 1的核酸序列的嵌合腺病毒后第3周时，抗 HA抗体效价的数据。
序列简述
SEQ IDNO:l显示嵌合腺病毒载体DS1的核芬酸序列。
SEQ ID NO:2显示嵌合腺病毒载体DS2的核苦酸序列。
SEQ ID NO:3显示编码TLR-3激动剂的核苦酸序列。
SEQ ID NO:4显示编码TLR-3激动剂的核苦酸序列。
SEQ ID NO:5显示编码TLR-3激动剂的核苷酸序列。
SEQ ID NO:6显示包含编码流感HA的核酸和编码TLR-3激动剂
(luc)的核酸的嵌合腺病毒载体的核苷酸序列，其中所述的流感HA和
TLR-3激动剂是相同方向。
SEQ ID NO:7显示包含编码流感HA的核酸和编码TLR-3激动剂
(luc)的核酸的嵌合腺病毒载体的核苷酸序列，其中所述的流感HA和
TLR-3激动剂是相反方向。
SEQ ID:8显示编码短发夹RNA TLR-3激动剂的核苦酸序列。所
述序列的互补部分以大写字母表示，连接序列以小写字母表示。
SEQ ID NO:9显示编码短发夹RNA TLR-3激动剂(gl)的核苷酸序
列。所述序列的互补部分以大写字母表示，连接序列以小写字母表示。 SEQ ID NO:IO显示编码短发夹RNA TLR-3激动剂(luc)的核苦酸
序列。所述序列的互补部分以大写字母表示，连接序列以小写字母表示。SEQ ID NO: 11显示编码短发夹RNA TLR-3 ;敫动剂(ml)的核苷酸序列。所述序列的互补部分以大写字母表示，连接序列以小写字母表示。
SEQ ID NO: 12显示编码短发夹RNA TLR-3激动剂的核苷酸序列。所述序列的互补部分以大写字母表示，连接序列以小写字母表示。
SEQ IDNO:B显示嵌合腺病毒载体DSlc的核苷酸序列。所述序列包含编码HA(PR8/34)的核苷酸。
SEQ ID NO:14显示嵌合腺病毒载体DS2|8-luc的核苷酸序列。所述载体包含在)8肌动蛋白启动子的调控下编码TLR-3激动剂luc的序列。所述载体还包含用于插入编码目的抗原的核酸序列的开放克隆位点。
SEQ ID NO:15显示嵌合腺病毒载体DS2C-luc的核苷酸序列。所述载体包含CMV启动子调控的编码TLR-3激动剂luc的序列。所述载体还包含用于插入编码目的抗原的核酸序列的开^L克隆位点。
SEQ IDNO:16显示穿梭(pshuttle)载体的核苷酸序列，所述的穿梭载体包含CMV启动子调控的编码TLR-3激动剂luc的核酸序列和在一个单独的CMV启动子的控制下编码HA(禽流感)的核酸序列
SEQ ID NO: 17显示嵌合腺病毒载体ND1.1 214的核苷酸序列。编码异种抗原的核酸以粗体表示，并且在侧面与5'末端Clal识别位点和 3'末端与Not 1识别位点连接。编码TLR-3激动剂的核酸序列以斜体表示，连接序列以粗体表示。
发明详述 I.前言
本发明提供了新颖的嵌合腺病毒载体，其能够以非胃肠外给药以激发针对目的抗原的免疫反应。本发明的嵌合腺病毒载体包含编码异源多肽的核酸和编码TLR-3激动剂的核酸。所述嵌合腺病毒载体激发特异针对异源多肽的强且有效的免疫反应，特别是当通过非胃肠外途径给予时(例如，经口、经鼻或粘膜)。
本发明是基于当与病毒载体联合用药时，dsRNA TLR-3激动剂的给药是有效佐剂这一令人惊喜的发现。事实上，考虑到dsRNA模拟的聚肌胞苷酸(poly I:C)主要被提议的用途是作为抗病毒剂[Nemes， " a/, 尸麼Soc 肠/脸A (1969) 132:776; Schafer,a/,淑亂(1970) 226:449; Fenje， ^A^w" (1970) 226:171.〗，将dsRNA用作病毒载体的佐剂是违反直觉的。
II.定义
本文使用的关于诸如核酸、蛋白或载体的术语"嵌合"或"重组"，表明所述的核酸、蛋白或载体已经通过引入异源核酸或蛋白，或改变天然核酸或蛋白被修饰。因此，例如，嵌合和重组载体包含在载体的天然(非嵌合或非重组)形式中没有发现的核酸序列。嵌合腺病毒表达载体是指包含编码异源多肽的核酸序列的腺病毒表达载体。
"表达载体"是重组或合成产生的核酸构建体，其具有一系列允许特定的核酸在宿主细胞中转录的特异的核酸元件。表达载体可以是质粒、病毒或核酸片段的一部分。通常，表达载体包含可操作地连接于启动子的欲被转录的核酸。
本文使用的术语"启动子"或"表达调控制序列"是指大量一系列指导核酸的直接转录核酸的核酸调控制序列。如本文所使用的，启动子包含在转录的起始位点附近的必需的核酸序列，例如，在聚合酶 II型启动子或，TATA元件的情况下。启动子还任选地包含能够被定位于来自距离于转录的起始位点的多达几千个碱基对的远端增强子或抑制子元件。启动子包括组成型和诱导型启动子。"组成型"启动子是在大部分环境和发育条件下都有活性的启动子。"诱导型，，启动子是在环境和发育调控下有活性的启动子。术语"可操作地连接"是指在核酸表达控制序列(例如，启动子或一系列大量转录因子结合位点) 和第二核酸序列之间的功能连接，其中所述表达控制序列指导与第二序列对应的核酸的转录。
本文使用的术语"TLR激动剂"或"Toll样受体激动剂"是指结合和刺激诸如TLR-2、 TLR-3、 TLR-6、 TLR-7或TLR-8的Toll样受体的化合物。MacKichan在L4P7W印oW. 9:1-5 (2005)中以及Abreu等人在J/m]Lt"o/, 174(8)， 4453-4460 (2005)中综述了 TLR激动剂。激动剂
在与其受体结合后诱导信号转导。
本文使用的术语"TLR-3激动剂"或"Toll样受体3激动剂"是指结合和刺激TLR-3的化合物。TLR-3激动剂已经被确定包含双链 RNA、来自病毒的dsRNA、一些包括聚肌苷-聚胞苷酸(聚肌胞苷酸)-聚腺苷-聚尿苦酸(聚腺尿苷酸)和聚肌苷酸聚胞苷酸在内的化学合成的双链RNA的类似物，以及针对导致IFN-/3产生的TLR-3的抗体(或 4元体的交联)[Matsumoto, M, & a/， S/ocAe附i &s Co附jLiw 24:1364 (2002)， de Bouteiller， W a/, J所o/ CAem 18:38133-45 (2005)]。 TLR-3激动剂还包括表达的dsRNA(例如，由包括SEQIDNOS: 3、 7、 8、 9、 10、 11或12中显示的序列的核酸编码的dsRNA)。
本文使用的术语"TLR-7/8激动剂"或"Toll样受体7/8激动剂" 是指结合和刺激TLR-7或TLR-8受体的化合物；这些受体识别多种相同的配体。一些诸如病毒单链RNA、咪喹莫特、洛索立宾、多尿苷酸或雷西莫特的TLR-7/8激动剂已经被确定。
当使用术语"异源"提及核酸的部分时表明所述核酸包含在自然界中没有发现彼此关系相同的两个或多个序列。例如，核酸通常被重组产生，使来自于无关基因的两个或多个序列排列成为新的功能核酸，例如，来自于一个来源的启动子和来自另一来源的编码区。类似地，异源蛋白表明所述蛋白包含在自然界中没有发现彼此关系相同的两个或多个序列(例如，融合蛋白)。
术语"核酸"和"多核苷酸，，在本文中互换使用，指单链或双链形式的脱氧核糖核酸或核糖核酸及其聚合物。所述术语包括包含已知的核苷酸类似物或修饰的骨架残基或连接的核酸，其是合成的、天然存在和非天然存在的。所述核酸与参考核酸具有相似的结合特性，且其以与参考核苷酸相似的方式代谢。这种类似物的实例包括，但不限于，磷硫酰、氨基磷酸酯、曱基膦酸酯、手性-曱基膦酸酯、2-0-甲基核糖核酸、肽核酸(PNAs)。
除非另外的说明，特殊的核酸序列还包括其保守'l"生修饰的变异体 (例如，简并密码子替换)和互补序列，以及明确指明的序列。特别是，简并密码子耳又代可以通过生成其中一个或多个所选(或全部)密码子的
第三位由混合碱基和/或脱氧次黄苷残基替换的序列来实现(Batzer W a/, Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991); Ohtsuka a a/, J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985); Rossolini W a/， Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994))。术语核酸可与基因、cDNA、 mRNA、寡核苷酸和多核苷酸互换使用。
抗原是指能够被T细胞受体和/或抗体识别的蛋白或多肽链的部分。通常，抗原是来源于细菌、病毒或真菌蛋白。
本发明的组合物的"免疫原性有效剂量或量"是激发或调节特异针对异源多肽的免疫反应的量。免疫反应包括体液免疫反应和细胞介导的免疫反应。在任何阶段，免疫原性组合物都能够用于在治疗或预防上治疗或预防疾病。
"体液免疫反应，，由血液的无细胞成分，即血浆或血清介导；将血清或血浆从一个个体转移到另一个体以转移免疫。
"细胞介导的免疫反应"由抗原特异性淋巴细胞介导；将抗原特异性淋巴细胞从一个体转移到另一个体以转移免疫。
嵌合腺病毒载体或包含嵌合腺病毒载体的组合物的"治疗剂量" 或"治疗有效量"或"有效量"是预防、减轻、减弱或降〗氐疾病和病症的症状严重性的载体或包含载体的组合物的量，所述疾病和病症与异源多肽的来源(例如，病毒、细菌、寄生虫或癌症)相关。
抗体是指特异性结合和识别抗原的由免疫球蛋白基因编码的多肽或其片^殳。识别的免疫球蛋白基因包括/c、 X、 o;、 7、 S、 e和M恒定区基因，以及众多的免疫球蛋白可变区基因。轻链被分类为K或入。重链被分类为7、 M、 a、 S或e，其分别j衣次定义IgG、 IgM、 IgA、 IgD 和IgE免疫球蛋白类别。
T细胞是指一类特殊的表达由一族基因编码的特异性受体(T细胞受体)的淋巴细胞。识别的T细胞受体基因包括o;、 /3、 S和7位点，并且所述T细胞受体通常(但是不是普遍地)识别MHC与短肽的组合。
获得性免疫反应是指抗原的T细胞和/或抗体识别。
本文使用的抗原呈递细胞(APCs)是指能够将免疫原性肽或其片段呈递到T细胞以激活或增强免疫反应的细^g包。APCs包括树突细^^、巨噬细胞、B细胞、单核细胞和可以被设计成为高效的APCs的其它
细胞。这种细胞可以，但不必需，被遗传修饰，以增加呈递抗原的能
力、改善T细胞应答的激活和/或维持、使本身具有抗肿瘤作用和/或与接受体在免疫学上相容(即，匹配的HLA单倍型)。APCs可以从包括骨髓、外周血、肿瘤和肿瘤旁组织在内的多种生物体液和器官中分离出，并且可以是自体的、同种异体的、同系的或异种的细胞。APCs 通常利用来自主要组织相容性(MHC)位点的受体将短多肽呈递到T细胞。
佐剂是非特异性免疫反应增强子。适合的佐剂包括，例如，霍乱毒素、单磷酰脂质A(MPL)、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、QuilA 和Al(OH)。佐剂也可以是那些通过诸如Toll样受体的次级信号分子引起APC激活和增强T细胞呈递的物质。Toll样受体的实例包括识别双链RNA、细菌鞭毛、LPS、 CpGDNA和细菌脂肽的受体(最近在[Abreu e^/,J/mmmo/, 174(8), 4453-4460 (2005)]中被综述)。
术语"多肽，，、"肽"和"蛋白"在本文中可互换使用，其指氨基酸残基的多聚体。所述术语适用于氨基酸多聚体，其中一个或多个氨基酸残基是对应天然存在的氨基酸的人工化学模拟物，还适用于天然存在的氨基酸多聚体和非天然存在的氨基酸多聚体。
术语"氨基酸"是指天然存在和合成氨基酸，以及氨基酸类似物和以与天然存在的氨基酸相似的方式发挥功能的氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及被后修饰的那些
氨基酸，例如，羟脯氨酸、y-羧基谷氨酸和o-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构的化合物，即具有被结合到氢、羧基、氨基的y碳和R基的化合物，例如高丝氨酸、
正亮氨酸、蛋氨酸亚石风、蛋氨酸曱基4克(methionine methyl sulfonium)。这种类似物具有修饰的R基(例如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但是保留与天然存在的氨基酸相同的化学结构。氨基酸模拟物是指具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构，但以与天然存在的氨基酸相似的
方式发挥功能的化学化合物。本文氨基酸可以由其7〉知的三个字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号来表示。同样，核苷酸也可以由其公认的单字母代码来表示。
"保守性修饰的变异体"适用于氨基酸和核酸序列。就特定的核酸序列而言，保守性修饰的变异体是指编码相同或基本相同的氨基酸序列的那些核酸，或者如果所述核酸不编码氨基酸序列，保守性修饰的变异体指基本上相同的序列。由于遗传密码的简并性，大量功能相同
的核酸编码任一指定的蛋白。例如，密码子GCA、 GCC、 GCG和GCU 都编码氨基酸丙氨酸。因此，在丙氨酸由密码子指定的每一位置，所述密码子能够被改变为所述对应密码子的任何一种，而不改变所编码的多肽。这种核酸变异体是"沉默变异体"，其是保守性修饰的变异体的一种。本文中编码多肽的每一核酸序列还描述了核酸的每一种可能的沉默变异体。技术人员会认识到核酸中的每一密码子(除了通常是曱硫氨酸的唯一密码子的AUG和通常是色氨酸的唯一密码子的TGG 之外)可以被修饰以获得功能上相同的分子。因此，编码多肽的核酸的每一种沉默变异体内含在每一个所描述的序列中。
对于氨基酸序列，技术人员会认识在编码的序列中改变、添加或删除单个氨基酸或小百分比的氨基酸的，对核酸、肽、多肽或蛋白序列的个别替代替换、缺失或添加是"保守性修饰的变异体，，，其中所述改变导致将氨基酸用化学上相似的氨基酸替换替代。提供功能上相似的氨基酸的保守替换替代表是本领域公知的。这种保守性修饰的变异体是除本发明的多态变异体、种间同系物(interspecies homologs)、等位基因以外的，并且不排除本发明的多态变异体、种间同系物、等位基因。
以下八组每一组都包含彼此保守替换替代的氨基酸
1) 丙氨酸(A),甘氨酸(G);
2) 天冬氨酸(D)，谷氨酸(E);
3) 天冬酰胺(N),谷氨酰胺(Q);
4) 精氨酸I,赖氨酸(K);
5) 异亮氨酸(I),亮氨酸(L)，蛋氨酸(M),缬氨酸(V);6) 苯丙氨酸(F),酪氨酸(Y)，色氨酸(W);
7) 丝氨酸(S)，苏氨酸(T);和
8) 半胱氨酸(C),蛋氨酸(M)
(参见，例如，Creighton, Proteins (1984))。
短语"选择性(或特异性)杂交"是指在严格杂交条件下，分子仅与存在于复杂混合物中(例如，全细胞的或文库DNA或RNA)特定的核苷酸序列结合、双重(duplexing)或杂交。
术语"严格杂交条件"是指在所述条件下，探针通常在核酸的复杂混合物中杂交到其耙序列，而不杂交到其它序列。严格条件是序列依赖的，并且在不同的环境下不同。较长序列特定地在较高温下杂交。在Tijssen, rec/m一&y5/oc力e附/Wry朋^/ Mo/ecw/a/-
M/c/e/c /Vo6&s， "Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid assays (杂交原理和核酸分析策略的概述)"(1993)中存在核酸杂交的广泛指导。通常，对于在确定的离子强度Ph下特定的序列，选择的严格条件比热熔点I低约
序列(由于靶序列过量存在，在Tm下，在平衡状态下时占据50%的探针被占据)的温度(在确定的离子强度、Ph和核酸浓度下)。严格条件是其中在Ph7.0至8.3下时，盐浓度J氐于约1.0 M钠离子，通常约0.01 M 至l.OM钠离子浓度(或其它盐)，并且对于短探针(例如，10至50核苷酸)，温度至少为约30。C以及对于长探针，温度至少为约60°C的那些条件。严格条件也可以用添加诸如曱酰胺的去稳定剂来实现。对于选择性或特异性杂交，阳性信号至少是背景的二倍，任选地十倍于背景杂交。示例的严才各杂交条件如下50%曱酰胺，5xSSC和l。/。SDS 于42。C孵育，或者，5xSSC, 1%SDS,于65。C孵育，并于65。C下，在0.2xSSC和0.iy。SDS中冲洗。
在严格条件下，如果核苷酸编码的多肽基本相同，那么没有互相杂交的所述核酸仍然基本相同。例如，这发生在当使用遗传密码允许的最大密码简并来产生核酸的副本时。在这种情况下，核酸通常在中
度严格杂交条件下杂交。示例的"中度严格杂交条件"包括在40%曱酰胺的缓冲盐、1MNaCl、 1% SDS中于37。C进行杂交，并于45°C 下在1XSSC中冲洗。阳性杂交至少是背景的二倍。普通技术人员会轻易地认识到可以利用可选择的杂交和冲洗条件来提供相似的严格条件。
"抗体"是指包含来自免疫球蛋白基因的框架区的多肽或其片段, 所述多肽或其片段特异性结合和识别抗原。识别的免疫球蛋白基因包括k、入、ce、 7、 S、 e和/z恒定区基因，以及众多的免疫球蛋白可变区基因。轻链分为k或X。重链分为7、 M、 a、 S或e,其分别依次确定 IgG、 IgM、 IgA、 IgD和IgE类免疫球蛋白。
示例的免疫球蛋白(抗体)结构单元包含一个四聚体。每一四聚体包含两对相同的多肽链，每对具有一条"轻"链(约25 kDa)和一条"重" 链(约50-70 kDa)。每条链的N端确定了约100至110或更多主要负责
抗原识别的氨基酸的可变区。术语可变轻链(V。和可变重链(VH)分别
是指这些轻链和重链。
当用于提及蛋白或肽时，短语"特异性(选择性)结合，，于抗体或 "特异性(或选择性)免疫反应"，是指确定所述蛋白在蛋白和其它生物制品的异质性群体中存在的结合反应。因此，在指定的免疫测定条件下，将指定抗体结合到特定的蛋白至少是二倍于背景，并且基本上不以显著量结合到样品中存在的其它蛋白上。在这种条件下，与抗体的特异结合可能需要基于其对特定蛋白特异性而被选择的抗体。例如，可以选择针对融合蛋白的多克隆抗体以仅获得与融合蛋白发生特异性免疫反应，而不与所述融合蛋白的个别组分发生特异性免疫反应的那些多克隆抗体。该选4奪可以通过扣除与个别抗原交叉反应的抗体来实现。多种免疫测定形式可以用于选择与特定蛋白特异性免疫反应的抗体。例如，固相ELISA免疫测定常规用于选择与蛋白发生特异性免疫反应的4元体(参见，例长口， Harlow & Lane，」w〃6od/^y,爿丄a6orator少 Affl聽a/ (1988), for a description of immunoassay formats and conditions that can be used to determine specific immunoreactivity (能句多用于测定特异的免疫反应性的免疫测定形式和条件的说明))。通常，特异性或选择性反应将至少为背景信号或干扰的二倍，更通常大于IO倍至100倍背景。
多核苷酸可以包括天然序列(即，编码个别多肽或dsRNA或其部分的内源序列)或可以包括这种序列的变异体。多核苷酸变异体可以包含一个或多个替换、添加、删除和/或插入，使得编码的多肽与包含天然抗原的多肽相比生物活性没有降低。多核苷酸变异体可以包含一个或多个替换、添加、删除和/或插入，使得编码的dsRNA的TLR-3激动活性与不包含替换、添加、删除和/或插入的dsRNA的TLR-3激动活性相比没有降低。优选地，变异体至少显示与编码天然多肽或其蛋白的多核苷酸序列，或与编码具有TLR-3激动活性的dsRNA的多核苷酸序列约50%、 55%、 60%、 65%、 70%、 75%、 80%、 85%、 90%、 91%、 92%、 93%、 94%、 95%、 96%、 97%、 98%、 99%的一致性。
在用于两种或更多核酸(例如，TLR-3激动剂dsRNA)或多肽序列时，术语"相同的，，或"同一性，，百分比，是指使用下述序列比较算法的一种或通过手工比对和视觉检测在比较窗或测量的指定区域上比较和比对序列的最大对应时，两种或更多序列或亚序列相同或者具有相同的特定百分比的氨基酸残基或核苷酸(即50%、 55%、 60%、 65%、 70%、 75%、 80%、 85%、 90%、 91%、 92%、 93%、 94%、 95%、 96%、 97%、 98%、 99%,或在特定区更相同)。这种序列被称为"基本相同"。该定义也指测试序列的补偿。任选地，同一性在长度至少约IO至约 100、约20至约75、约30至约50个氨基酸或核苷酸的区域上存在。
对于序列比较，通常将一个序列作为参考序列，将测试序列与其进行比较。当使用序列比较算法时，将测试和参考序列输入计算机，如果需要，指定亚序列坐标，并指定序列算法程序参数。可以使用缺省的程序参数，或指定可选择的参数。然后，基于程序参数，用序列比较算法计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。
本文使用的"比较窗，，包括参考数目约10至约500、约25至约 200、 50至约150的毗邻位置的任何一段，其中一序列与参考序列最佳对齐后，可以将所述序列与相同数目毗邻位置的参考数列进行比较。用于比较的序列对齐方法是本领域众所周知的。可以通过以下方法实施用于比專交的最佳对齐，例如，通过Smith & Waterman Jt/v.爿/ ; /.2:482 (1981)的局部同源算法、通过Needleman & Wunsch, Mo/.所o/. 48:443 (1970)的同源对齐算法、通过Pearson & Lipman,尸rac. 7, JcW. 5W. 6^4 85:2444 (1988)的检索相似性方法、通过这些算法的计算机化实施(Wisconsin遗传学软件包中的GAP、 BESTFIT、 FASTA和 TFASTA， Genetics Computer Group, 575 Science Dr" Madison, WI)，或通过手工对齐和牙见觉才企观'J(参见，例如，Cwre"f户rotoco/s/" Afo/ecw/ar 历o/ogy (^、子^參夢^遞^ #说-'" (Ausubel " a/., eds. 1995 supplement))。
实用算法的一个实例是PILEUP。 PILEUP使用渐进式双比对从一组相关序列中创造一个多序列比对，以显示关系和序列同一性百分比。 PILEUP还标绘了子目录结构或显示用于创建比对的聚类关系的树状图。PILEUP使用Feng & Doolittle， , Mo/. ￡vo/. 35:351-360 (1987)中简化的渐进式比对方法。采用的方法与Higgins & Sharp, 5:151-153 (1989)中描述的方法相似。该程序能够比对高达300个序列，各个序列的最大长度为5,000核苷酸或氨基酸。多重比对过程以两个最相似序列的双比对开始，产生双比对序列的簇。然后，该簇与下一个最相关的序列或比对序列簇进行比对。两簇序列通过两个独立序列的双比对的简单扩展来比对。最终比对由一系列渐进式双比对来实现。通过指定序列比较区域的特异性序列及其氨基酸或核苷酸坐标，以及指定程序参数来运行程序。使用PILEUP，将参考序列与其它测试序列进行比较以确定序列同一性关系的百分比，使用的参数如下缺省间隔4又重(gap weight) (3.00)，缺省间隔长度权重(gap length weight) (0.10)以及加权的端隙(weighted end gaps)。 PILEUP能够从诸如7.0版本(Devereaux " a/" tVwc. J"V^ to. 12:387-395 (1984))的GCG序列分析软件包获得。
适合测定序列同一性百分比和序列相似性的另一实例是分别在 Altschul /" M/c.爿c/A 25:3389-3402 (1977)和Altschul " "/.,丄 Mo/.215:403-410 (1990)中描述的BLAST和BLAST 2.0算法。通
过国家生物技术信息中心(ht:tp://'w\vw.nd:)i.n 1 m.nih,gov/)，实施BLAST 分析的软件是公开可用的。该算法涉及通过确定查询序列的短字长W首先确定高分序列对(HSPS),当与数据库序列中相同长度的字比对时，
其匹配或者满足一些阳性评价的阈值评分T。 T是指作为邻域字评分阈值(Altschul " a/., sw/ ra)。这些初始邻域字采集凄t作为初始^r索的种子以找到包含它们的更长的HSPs。沿着每个序列的两个方向扩展字采集数，直到累积比对评分能够被增加。对于核苷酸序列，使用参数 M(—对匹配残基的奖励评分；通常大于O)和N(不匹配残基的惩罚评分；通常小于O)计算累计评分。对于氨基酸序列，使用评分矩阵来计算累积评分。在每一方向上字采集数的扩展被停止，当由于质量X 累计比对评分从其最大取得值下降；由于一个或多个负评分残基比对的累积，累积评分变成零或以下；或达到任一序列的末端。BLAST算法参数W、 T和X决定算法的灵敏度和速度。BLASTN程序(对于核苷酸序歹"使用词长(W) 11，期望值(E) 10， M=5， N=-4，以及两条链的比较作为缺省。对于氨基酸序列，BLASTP程序使用字长3，期望值(E) 10,以及BLOSUM62评分矩阵(见Henikoff & Henikoff， /Voc. 淑/i^/. to.园89:10915 (1989))比对(B) 50,期望值(E) 10, M=5, N二4,以及两条《连的比较作为缺省。
BLAST算法还进行两个序列相似性的统计分析(参见，例如， Karlin & Altschul,尸rac.淑7. 园90:5873-5787 (1993))。由
BLAST算法提供的相似性的一个量度是最小汇总概率(P(N))，其提供了概率的指征，通过所述概率，两种核酸或氨基酸序列之间的匹配将偶然发生。例如，如果测试核酸序列与参考核酸序列相比，最小汇总概率小于约0.2，更优选小于约0.01,最优选小于约0.001，那么该核酸被认为与参考序列相似。
III.本发明的组合物
本发明提供了包含嵌合腺病毒载体的组合物。在一些实施方案中，本发明的嵌合腺病毒载体包含可操作地连接于编码异源多肽的核酸的第一启动子和可"t喿作地连接于编码TLR3激动剂的核酸的第二启动子。第一或第二启动子可以是相同的或不同的。在一些实施方案，第一和第二启动子独立i也选自^月几动蛋白启动子和CMV启动子。在一些实施方案中，嵌合腺病毒载体包含腺病毒基因组(减去El
和E3基因)和编码激活IRF-3和TLR-3下游的其它信号分子的基因的核酸。嵌合载体能够被给予到表达Ad'sEl基因的细胞，使得细胞产生重组腺病毒(rAd)。该rAd能够被采集，并能够是在哺乳动物中将转基因组合物递送到另一细胞以激发对异源多肽的免疫反应的单轮感染。
A. 适合的腺病毒载体
在一些实施方案中，腺病毒载体是腺病毒5，包括，例如，El/E3 区域缺失的Ad5和E4区域缺失的Ad5。其它适合的腺病毒载体包括菌株2，经口测试菌4朱4和7，肠腺病毒40和41,以及足以递送抗原并激发针对转基因抗原的获得性免疫反应的其它菌株(例如Ad34) [Lubeck " a/" /Voc 7Vw/Jozd aSJ, 86(17), 6763-6767 (1989); Shen "《^>o/， 75(9)， 4297-4307 (2001); Bailey " "/., P7ra/ogy, 202(2), 695-706 (1994)]。在一些实施方案中，腺病毒载体是活的复制缺陷型腺病毒载体(例如删除El和E3的rAd5),活的并减弱的腺病毒载体(例如E1B55K缺失病毒)，或者具有野生型复制的活腺病毒载体。
列可以由病毒来源提供。例如，通常使用的启动子和增强子来源于，例如，/3肌动蛋白、腺病毒、猿猴病毒(simian virus) (SV40)和人巨细胞病毒(CMV)。例如，在以下启动子的指导下，允许蛋白表达的载体是适合的CMV启动子、SV40早期启动子、SV40晚期启动子、金属石克蛋白启动子、鼠乳腺肿瘤病毒启动子、Rous肉瘤病毒启动子、转导子(transducer)启动子或在哺乳动物细力包中对表达显示有效的其它启动子。还可以使用病毒基因组启动子、调控和/或信号序列，前提是这些调控序列与选择的宿主细胞相容。
B. 异源多肽
编码合适的异源多肽的核酸可以来源于抗原，例如，诸如，病毒抗原、细菌抗原、癌抗原、真菌抗原或寄生虫抗原。病毒抗原可以来源于，例如，在ShiverA^mm415 (6869):331 (2002)中提出的人免疫缺陷病毒(例如，gag (p55和p160)、 pol、 env (gpl20和gp41);在基因库登录号EF363127; EF363126; EF363125; EF363124; EF363123; EF363122; EF192592和EF192591中提出的HIV 基因组序列；在基因库登录号EF396891; EF396890; EF396889; EF396888; EF396887; EF396886; EF396885; EF396884; EF396883; EF396882; EF396881; EF396880; EF396879; EF396878; EF396877; EF396876; EF39687; EF396874; EF396873和EF396872中^是出的HIV gag序列；在基因库登录号EF396810; EF396809; EF396808; EF396807; EF396806; EF396805; EF396804; EF396803; EF396802; EF396801; EF396,; EF396799; EF396798; EF396797; EF396796; EF396795; EF396794; EF396793; EF396792和EF396791中提出的HIV pol序列；在基因库登录号9: EF367234; EF367233; EF367232; EF367231; EF367230; EF367229; EF367228; EF367227; EF367226; EF367225; EF367224和EF367223中提出的HIV env序列；人乳头瘤病毒(例如，诸如Donnelly等人在J Infect Dis. 173:314 (1996)中描述的衣壳蛋白Ll 和在基因库登录号EF362755; EF362754; NC—001694; NC—001693; NC一001691; NC—0016卯；NC—005134; NC—001458; NC 001457; NC—001354; NC—001352; NC—001526和X94164)中提出的序列)，爱泼其斤i旦-巴尔病毒(Epstein Barr virus)，单纯疱渗病毒(herpes simplex virus)，人疱渗病毒(human herpes virus),鼻病毒(rhinoviruses)，才可萨奇病毒(cocksackieviruses), 肠道病毒(enterovimses)，曱、乙、丙和戊型肝炎(例如，诸如Lubeck等人在尸A^S 86:6763 (1989)中描述的乙型肝炎表面抗原，以及基因库登录号AB236481; AB236471; AB206501; AB206489; AB206487; AB221788; AB221777; AB221773; AR933671;AR933670; AB236514; AB236513; AB236512; AB236511; AB236510; AB236509; AB236508; AB236507中提出的序列)；丙型肝炎NS5(参见，例如，基因库登录号X59609; DQ911563; S71627; S70787; S70786; S70341; S62220; S70790; S70789; S70788和 AB204642)),腮腺炎病毒(mumps vims)，风渗病毒(mbella vims),麻渗病毒(measles vims)，脊it灰质炎病毒(poliovims),天花病毒(smallpox virus), 狂犬病病毒(rabies virus)和水痘一带状疱渗病毒(Variella-zoster vims)。流感抗原包括，例如，血凝素(HA)、基质蛋白l(Ml)和核蛋白 (NP)(参见,例如，Donnelly, F固'"e 15:865 (1997)和基因库登录
号AB294219; AB294217; AB294215; AB294213; EF102944; EF102943; EF102942; EF102941; EF102940; EF102939; EF102938; EF102937; EF102936; EF102935; EF102934; EF102933; DQ643982; DQ464354; CYO19432; CYO19424; CY019416; CYO19408; CY019400; CYO19392; CY019384; CY019376; CY019368; CY019360; CY019352; EF124794; EF110519; EF110518; EF165066; EF165065; EF165064和EF165063中提出的流感HA序列；基因库登录号AB292791; CY019980; CY019972; CY019964; CY019956; CY019948; CY019940; CY019628; CY019652; CYO 19644; CYO 19932; CYO 19924; CYO 19916; CYO 19908; CYO 19900; CY019892; CY019884; CY019876; CY019868;CY019860中提出的流感 Ml序列；基因库登录号AB292790; CY019461; CY019974; CY019966; CY019958; CY019950; CY019942; CY019630; CY019654; CY019646; CY019934; CY019926; CY019918 CY019910; CY019902; CY019894; CYO 19886; CYO 19878; CY019870和CYO 19862中提出的流感NP序列。适合的病毒抗原还包括，例如，病毒非结构蛋白。本文使用的术语"病毒非结构蛋白"是指由不编码诸如那些产生衣壳或包绕病毒的蛋白的结构多肽的病毒核酸编码的蛋白。非结构蛋白包括促进病毒核酸复制和病毒基因表达的那些蛋白，例如，诸如，来自于委内瑞拉马脑炎(Venezuelan Equine encephalitis) (VEE)、 EEE或塞姆利基森林病毒 (Semliki Forest virus)的非结构蛋白1、 2、 3和4(分别是NS1、 NS2、 NS3和NS4) [Dubensky a a/., J Fz>o/， 70(1)， 508-519 (1996); Petrakova "a/" /Wra/2005 79(12): 7597-608;美国专利Nos. 5,185,440， 5，739，026, 6,566,093和5,814,482]。一些合适的曱病毒(alphavimses) 的典型实例包括Aura (ATCC VR-368),贝巴鲁病毒(Bebaru virus) (ATCC VR-600, ATCC VR-1240),犰狳(Cabassou)(基因库登录号 AF398387, ATCC VR-922),切昆贡亚病毒(Chikungunya virus) (ATCCVR-64， ATCC VR-1241),东方马脑脊髓炎病毒(Eastem equine encephalomyelitis virus)(基因库登录号AY705241, AY705240, ATCC VR-65, ATCC VR画1242)，福特摩尔氏根(Fort Morgan) (ATCC VR-924), 盖塔病毒(Getah virus) (ATCC VR-369, ATCC VR-1243),克泽拉格齐 (Kyzylagach) (ATCC VR-927),马亚罗(Mayaro) (ATCC VR-66),马亚罗病毒(Mayaro virus) (ATCC VR画1277)，米德尔伯格(Middleburg) (ATCC VR-370),穆坎布病毒(Mcambo virus) (ATCC VR-580, ATCC VR-1244),恩杜穆(Ndumu) (ATCC VR-371),皮春纳病毒(Pixuna virus) (ATCC VR-372, ATCC VR-1245),罗斯河病毒(Ross River virus) (ATCC VR-373, ATCC VR-1246),塞姆利基森林(Semliki Forest)(基因库登录号AJ251359, ATCC VR-67, ATCC VR-1247),辛德毕斯病毒(Sindbis vims)(基因库登录号J02363, ATCC VR-68, ATCC VR-1248),托纳特 (Tonate) (ATCC VR-925),特里尼蒂(Triniti) (ATCC VR-469),乌纳(Una) (ATCC VR-374),委内瑞拉马脑脊髓炎(Venezuelan叫uine encephalomyelitis) (ATCC VR-69)，委内瑞拉马脑脊髓炎病毒 (Venezuelan equine encephalomyelitis virus)(基因库登录号AY986475, AY973944, NC 001449， ATCC VR-923, ATCC VR-1250 ATCC VR-1249, ATCC VR-532),西方马脑脊髓炎(Western equine encephalomyelitis) (ATCC VR-70, ATCC VR-1251, ATCC VR-622, ATCC VR-1252),沃达罗河(Whataroa) (ATCC VR-926)和Y-62-33 (ATCC VR-375)。
细菌抗原可以来自于，例如，金黄色葡萄球菌(StopAy/ococcw 、表皮葡萄3求菌(/SV"/ Ay/ococci" e卢V/erw&)、幽门虫累才干菌 (//e//coZjacter; y/on')、牛4连5求菌0S^eptococcws Zwv/"、化脓性链J求菌 (5Vre/ /ococciw p_yogew&y)、月申炎《连；求菌(S/re/ /ococcws/ wew/wow/ae)、单核纟田月包增生李斯特菌(丄&^n力w0/wc3;toge"&y)、结核分斗支#干菌 (^fycoZjflc^n'ww ^6en:M/c^s7'力、麻风分牙支一干菌(A/yco6(2"en't/附/e/)rae)、白口提氺奉^R才干菌(Cory, e6acten^m (i〖/ / Aen'fle)、莱姆病虫累S走体(5or,'e〃a ZwrgJc r/^r/)、炭疽芽孢杆菌(Sfl"'〃MJ1朋/Z2尸ac/s)、蜡状芽孑包杆菌C5ac/〃ws cerews)、肉毒才菱菌(C7os^nW/wm 6c^w//wMm)、 7艮7,才炎菌(C7oWnW/i/附<izj^ c〃e)、"(另寒沙-门氏菌(iSa/mowe〃a (y/>/n')、霍活L^瓜菌(F/6n'o c/ /oerae)、 5危感卩耆血斥干菌(//ae附o/ /n7iw /"y wewzae)、百日pi;斥干菌(5orafe&〃" peWzmz、)、鼠疫菌(rer57.m'apeW力、淋病奈瑟球菌(脸^m'a goworr/ oeae)、对每毒虫累i走体(7Ve/ owewa/7a〃zV/MW)、支/^、体属(A(vco/ /asw ■yp.)、奈瑟；求菌raradwcer s (7Ve/5^en'a ra/iw/wce厂"、口耆肺军团菌 (丄egz'owe〃a j9wei/wo/ /H7fl!)、扭王渗i"另寒立克;欠体(7 z'cA:e"57V2 /少/ 力/)、沙、目艮衣 ^^体(C7 /a附yd/fl ^ac/ omfl"力牙口痢疾4干菌(57n.ge〃a c(ysewfen.fle)、霍^L孓瓜菌(險,'o c/zo/織)(例如，基因库登录号U25679; A09803; EF158842; X76391; AF390572中提出的霍乱毒素亚单位B; Wu等人在/"/ec"ow a"d/mm"m'0; ro/. 69(12):7695 (2001)中描述的和基因库登录号 NC—002505和AE004169)中提出的霍乱毒素共调菌毛(TCP);幽门螺杆菌(/^/^0^"^;^/0&)(基因库登录号AY848858; AF042737; AF042736; AF042735; AF042734; NC—000921中提出的VacA;基因库登录号AF043490; AF043489; AF043488; AF043487中提出的CagA; 基因库登录号AF284121; AF284120; AF284119; AF284118; AF284117; AF284116; AB045143; AB045142; AF227081; AF227080; AF227079; AF227078; AF227077; AF227076; AF227075; AF227074中提出的 NAP;基因库登录号NC—000921中提出的Hsp或过氧化氢酶；如基因库登录号AM417610; AM417609; AM417608; AM417607; AM417606; AM417605; AM417604; AM417603; AM417602; AM417601和 AM417600中提出的尿素酶；基因库登录号NC—000913; U00096; NC一002655; BA000007; AE014075中提出的大肠杆菌抗原；包括基因库登录号AB214865; AB214864; AB214863; AB214862中提出的大肠杆菌菌毛抗原；基因库登录号X83966; V00275;X83966; J01646; V00275; M35581; M17873; M17874; K01995; M61015; M17894; M17101; K00433中提出的大肠杆菌不耐热肠毒素。
寄生虫抗原可以来自于，例如，贾第虫属(G/ar&a /aw/z/&)、利氏曼原虫属(丄e&Awam'fl s/ .)、 4偉虫属(7y7/7awascwa sp.)、毛滴虫属 (7Wc/wwowas印.)、症原虫属(Plasmodium sp.)(例々口，恶性症原虫 (尸./ac/pan/m)表面蛋白抗原，例如，基因库登录号XM—001347551;X07802; AF193769; AF179423; AF154117和AF030628中提出的pfs25 序列，基因库登录号L25843中提出的pfs28序歹'J，如基因库登录号 EF15騰1; EF158079; EF158078; EF158076; EF158075和EF158085中提出的pfs45序列，基因库登录号AF356146; AF356145; AF356144; AF356143; AF356142; AF356141; AF356140; AF356139; AF356138; AF356137; AF356136; AF356135; AF356134; AF356133; AF356132; AF356131; AF356130; AF356129; AF356128; AF356127中提出的 pfs84、 pfs48/45序列，基因库登录号NC_000910; XM—001349564; AE001393; L22219; L08135和AF269242中#是出的pfs230序列，间日抗原(尸.v/va;c antigens)例如，基因库登录号DQ641509; DQ641508; DQ641507; AY639972; AY639971 ; AY639970; AY639969; AY639968; AY639967; AY639966和AY639965中提出的Pvs25序列；以及基因库登录号AB033364; AB033363; AB033362; AB033361; AB033360; AB033359; AB033358; AB033357; AB033356; B033355; AB033354; AB033353; AB033352; AB033351; AB033350; AB033349; AB033348; AB033347; AB033346和AB033345中提出的Pvs28序列)，血吸虫属 (iS"c/n、/as"o柳a 57 .)，纟吉氺亥分牙支4干菌(j^fyco6acten'ww ^^ercM/ow'力(i"列^口，基因库登录号AX253506; AX253504; AX253502和AX211309中提出的Ag85序列；MPT64, ESAT-6, CFP10, R8307, MTB-32 MTB-39, CSP， LSA陽l, LSA-3, EXP1, SSP-2, SALSA， STARP, GLURP， MSP-l, MSP-2, MSP-3, MSP-4, MSP-5, MSP-8， MSP-9， AMA-1 ， 1型整合膜蛋白， RESA，EBA-175，以及基因库登录号BX842572; BX842573; BX842574; BX842575; BX842576; BX842577; BX842578; BX842579; BX842580; BX842581; BX842582; BX842583; BX842584和NC—000962中提出的 DBA序列，基因库登录号AY299175; AY299174; AY299144; AF547886 和AF547885中提出的HSP65序列)。
癌抗原包括，例如，在诸如结肠癌、胃癌、胰腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、皮肤癌(例如，黑色素瘤)、白血病、淋巴瘤或骨髓瘤中表达的抗原，示例性癌抗原包括，例如，HPV Ll 、 HPV L2、 HPV El 、 HPV E2、胎盘碱性磷酸酶、AFP、 BRCA1 、 Her2/neu、 CA 15-3、CA 19-9、 CA-125、 CEA、 Hcg、尿激酶型纤溶酶原激活物(Upa)、纤溶酶原激活物抑制剂。
真菌抗原可以来自于，例如，足裤(n"ea pe^y)、体癣(Tinea corpoms)、股裤(77wea cn/n'》、曱裤(77/iea tmgw/謂)、卡氏枝孑包霉 (C7aJos/ on.wm can.ow/z.)、 3求孑包子菌((^ (:"7//0/^/&5 z'mm"^)、念J朱菌 (Caw&Az 烟曲霉(y^perg7'〃^/wm/g^iw)和卡氏月申孑包子虫
编码免疫原性多肽的核酸通常由重组DNA方法产生(参见，例如， Ausubel， d a/. ed. (2001) Ci/rrewZ /Votoco/sTl/o/ecw/ar 5/o/ogy)。例如，编码免疫原性多肽的DNA序列能够由cDNA片段和短寡核苷酸连接子或由一系列的寡核苷酸装配，或者使用适当的引物从cDNA扩增，以提供能够插入重组表达载体中(即，质粒载体或病毒载体)和在重组转录单位中被表达的合成基因。一旦产生编码免疫原性多肽的核酸，其可以被插入到适合体内或离体表达的重组表达载体。
重组表达载体包含编码免疫原性多肽的DNA序列，所述免疫原性多肽可操作地连接到来源于哺乳动物或病毒基因的适合的转录或翻译调控元件。这种调控元件包括转录启动子、调控转录的任选的操纵基因序列、编码适合的mRNA核糖体结合位点的序列以及调控转录和翻译终止的序列。此外，促进转化体的识别的复制起始区和选4奪标记可以被合并。用于重组表达载体的基因可以在多种病毒中被分开，使得基因产物在两种不同的载体上，并且所述载体用于共转导以提供全部反向基因产物。诸如插入的尺寸限制或结合的基因产物对病毒产生细胞系的毒性可能是分割基因产物的原因。
C. TLR激动剂
根据本发明的方法，TLR激动剂用于增强针对异源多肽的免疫反应。在一些实施方案中，^使用TLR-3激动剂。在其它实施方案中，4吏用TLR7/8激动剂。本文描述的TLR激动剂能够与编码目的抗原的表达载体同时递送，或与编码目的抗原的表达载体分开(即，时间上或空间上)递送。例如，表达载体可以通过非胃肠外途径给药(例如，经口、经鼻或粘膜)，而TLR激动剂通过胃肠外途径递送(例如，肌内、腹膜内或皮下)。
1. TLR-3激动剂
在本发明的优选实施方案中，TLR-3激动剂用于刺激目的抗原的免疫识别。TLR-3激动剂包括，例如，短发夹RNA、病毒来源的RNA、能够形成双链或短发夹RNA的RNA的短片段、以及短干扰 RNA(siRNA)。在本发明的一个实施方案中，所述TLR-3是病毒来源的dsRNA，例如诸如，来源于辛德毕斯病毒(Sindbis vims)的dsRNA 或dsRNA病毒中间体[Alexopoulou " a/, A^wre 413:732-8 (2001)]。在一些实施方案中，TLR-3激动剂是短发夹RNA。短发夹RNA通常包含由连接子序列连接的两个互补序列。特定的连接子序列不是本发明的关键方面。任何合适的连接子序列都能够使用，只要其不干扰两个互补序列形成dsRNA的结合。
在一些实施方案中，短发夹RNA包括SEQ IDNOS: 3、 4、 5、 8、 9、 10、 11或12中4是出的序列，与SEQIDNOS: 3、 4、 5、 8、 9、 10、 11或12中提出的序列基本上相同的序列，或SEQIDNOS: 3、 4、 5、 8、 9、 10、 11或12中提出的序列的变异体。在某些实施方案中，作为TLR-3激动剂的dsRNA不编码特定的多肽，^旦是当体外或体内接触应答细胞(例如，树突细胞、外周血单核细胞或巨噬细胞)时，产生促炎细胞因子(例如，IL-6、 IL-8、 TNF-a、 IFN-a、 IFN-)S)。在某些情况下，编码TLR-3激动剂(例如，表达的dsRNA)的核酸和包含编码异种抗原的核酸的嵌合腺病毒载体以相同制剂给药。在其它情况下，编码TLR-3激动剂的核酸和包含编码异源多肽的核酸的嵌合腺病毒载体以不同制剂给药。当编码TLR-3激动剂的核酸和包含编码异种抗原的核酸的腺病毒载体以不同制剂给药时，它们可以同时或连续给药。例如，可以首先给予编码TLR-3激动剂的核酸，其次是嵌合腺病毒载体 (例如，1、 2、 4、 8、 12、 16、 20或24小时，2、 4、 6、 8或10天以后)。可选4奪地，可以首先给予所述腺病毒载体，其次是编码TLR-3 激动剂的核酸(例如，1、 2、 4、 8、 12、 16、 20或24小时，2、 4、 6、 8或10天以后)。在一些实施方案中，编码TLR-3激动剂的核酸和编码异种抗原的核酸受相同启动子的调控。在其它实施方案中，编码
TLR-3激动剂的核酸和编码异种抗原的核酸受不同启动子的调控。
双链RNA的一些化学合成类似物是可以商购。这些双链RNA的化学合成类似物包括聚肌苷-聚胞苷酸(聚肌胞苷酸)、聚腺苷酸:聚尿苷酸(聚腺尿苷酸)和聚肌苷酸:聚胞苷酸。针对TLR-3的抗体也能够导致 IFN-/3或促炎细月包因子的产生[Matsumoto & a/， 5/oc力ew. 5/op/ ;^. C謹應w. 24:1364 (2002)， de Bouteiller " a/, J肠/. C/ 亂18:38133-45 (2005)]。可商购的任何序列的siRNA片^殳也可以通过诸如Invitrogen 的来源获得。
2. TLR 7/8激动剂
在一些实施方案中，TLR激动剂是TLR7/8激动剂。TLR 7/8酉己体通常是单链、病毒来源的RNA。由于受体在诸如内涵体的细胞内区
其需要到达正确的区室。一些已经显示了通过外源添加以触发TLR 7/8 信号级联的配体是多聚尿苷酸、雷西莫特和咪喹莫特[Westwood, et al, Vaccine 24:1736-1745(2006)]。
IV.药物组合物
包含本文描述的载体的药物组合物还可以包含其它化合物，所述其它化合物可以是有生物学活性的或无活性的。多肽可以，但是不是必须与例如在美国专利Nos. 4,372,945和4,474,757中描述的其它大分子偶联。药物组合物通常可以用于预防和治疗目的。药物组合物可以包括保护不受胃降解，使得给予的嵌合腺病毒载体可以达到预期的部位的方法。对于口腔环境，其中的一些可用的包括丙烯酸树脂和时钟 (TimeClock)释放系统，以及特异性针对腺病毒设计的其它方法[Lubeck & a/"尸roc A^zW Jcad 86(17), 6763-6767 (1989); Chourasia and
Jain, J/Vmrm尸/w厂m Sc/， 6(1)， 33-66 (2003)]。，用于口腔递送DNA和药物的微胶嚢的一些方法也已经被描述(参见，例如，美国专利公开号 2004043952)。在一些实施方案中，丙烯酸树脂系统将被用于递送嵌合腺病毒载体到小肠下端。然而，递送到小肠的其它部位的也应该起作用。
如上所述，本发明的嵌合腺病毒载体可以使用任何本领域的普通技术人员已知的递送系统递送。众多基因递送技术是本领域公知的，
例^t口, 由Rolland (1998) 7Tzera; . Z)n/g Carn'er Sj^tews
15:143-198和其中引用的参考文献描述的那些技术。
显而易见的是，免疫原性组合物可以包含编码异源多肽(例如，免疫原性多肽)的多核苦酸的药物可接受的盐。这种盐可以由药物可接受的无毒的碱来制备，包括有机碱(例如，伯、仲和叔胺的盐以及碱性氨基酸)和无机碱(例如，钠、钾、锂、铵、钙和镁盐)。盐的一些特殊实例包括磷酸盐緩冲盐水和注射用盐水。
在本发明的药物组合物中可以使用本领域的普通技术人员公知的任何适合的载体。适合的载体包括，例如，水，盐水，乙醇，脂肪，蜡，緩冲液，诸如甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、葡萄糖、蔗糖和碳酸镁的固体载体，或生物可降解的微球体(例如，聚乳酸盐聚鞋乙酸盐)。适合的生物可降解的微球体在例如美国专利Nos. 4,897,268; 5,075,109; 5,928,647; 5，811，128; 5,820,883中被公开。免疫原性多肽和/或载体病毒可以被包裹在生物可降解的微球体中或与微球体的表面结合。
这种组合物还可以包括緩沖液(例如，中性緩沖盐水或磷酸盐緩沖盐水)、碳水化合物(例如，葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖)，甘露醇、蛋白、多肽或诸如甘氨酸的氨基酸、抗氧化剂、抑菌剂、诸如EDTA 或谷胱甘肽的螯合剂、佐剂(例如，氲氧化铝)、致使受体血液形成等渗、低渗或弱高渗的溶液、悬浮剂、增稠剂和/或防腐剂。可选择地，本发明的组合物可以被形成为冷冻干产物。还可以使用公知的技术将化合物包裹在脂质体中。
在本发明的一些实施方案中，所述组合物还包含佐剂。适合的佐剂包括，例如，脂质和无脂化合物、霍乱毒素(CT)、 CTB亚基、CT 衍生的CTK63、大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)、 LT衍生的LTK63、 Al(OH)3和在诸如WO 04/020592， Anderson和Crowle， /打/e". /wm廳.31(1):413-418 (1981), Roterman d 《/ 尸— 。/ 户Aanw歸/， 44(3):213隱32 (1993), Arora and Crowle，《/. i e"CM/oewcfoAe/. 24(3):271-86 (1978),和Crowle and May, /"/e". ///mm". 38(3):932-7 (1982))中描述的多离子有机酸。适合的多离子有机酸包括，例如 6，6'-[3,3'-二曱基[U'-二苯基]-4,4'-二基]双(偶氮基)双[4-氨基-5-羟基 -1,3-萘-二磺酸](伊文思蓝)和3,3'-[1,1'二苯基]-4，4'-二基双(偶氮基)双[4-氨基_1_萘磺酸](刚果红)。本领域的技术人员可以理解的是，多离子有机酸与任何类型的给药结合起来可以用于任何基因免疫方法。
其它适合的佐剂包括局部免疫调节剂，例如，诸如咪唑并喹啉的家族成员，例如，咪，奎莫特和雷西莫特(参见，例如，Hengge " "/.， /w/e". 1(3):189-98 (2001)。本发明还能够使用表达的TLR-3激动剂(例如，dsRNA)和TLR-7激动剂(例如，ssRNA)。
另外的适合的佐剂可以商购，例如，另外的基于铝的佐剂(例如，铝胶、再水合胶、磷酸铝、Algammulin);基于油的佐剂(弗氏不完全佐剂和完全佐剂(Difco Laboratories, Detroit, Mich.)， Specol, RIBI， TiterMax, Montanide ISA50或Seppic MONTANIDE ISA 720);基于非离子嵌段共聚物的佐剂，细胞因子(例如，GM-CSF或Flat3配体)；Merck 佐剂65 (Merck和Company, Inc., Rahway， N. J.); AS-2 (SmithKline Beecham, Philadelphia, Pa.);钓、纟失或锌盐；酰4b酪氨酸的不〉容悬液；酰化糖；阳离子或阴离子衍生的多糖；聚磷腈；生物可降解的微球体；单石岸酰脂A和Quil A。诸如GM-CSF或白细胞介素-2、白细胞介素-7 或白细胞介素-12的细胞因子也是适合的佐剂。血蓝蛋白(例如，匙孔血蓝蛋白)和蠕虫血红蛋白也可以用于本发明。多糖佐剂例如，诸如，壳多糖、壳聚糖和脱乙酰壳多糖也适合作为佐剂。其它适合的佐剂包括胞壁酰二肽(MDP， N乙酰胞壁酰L丙氨酰D异谷氨酰胺)细菌肽聚糖及其衍生物(例如，苏氨酰-MDP和MTPPE)。 BCG和BCG细胞壁骨架(CWS)在本发明中也可以用作佐剂，包括或不包括海藻糖二霉菌酸酯。海藻糖二霉菌酸酯可以单独被使用(参见，例如，美国专利No. 4,579,945)。去毒内毒素单独作为佐剂或与其它佐剂结合使用(参见，例如，美国专利Nos. 4,866,034; 4,435,386; 4,505,899; 4,436,727;4,436,728; 4,505,900和4,520,019。皂苷QS21、 QS17、 QS7也可以用作佐剂(参见，例如，美国专利No. 5,057,540; EP 0362 279; WO 96/33739和WO 96/11711)。其它适合的佐剂包括Montanide ISA 720 (Seppic, France) 、 SAF (Chiron, Calif" United States)、 ISCOMS (CSL)、 MF-59 (Chiron)、 SBAS系列佐剂(例如，SBAS画2、 SBAS画4或SBAS-6 或其变异体，购于SmithKline Beecham, Rixensart, Belgium) 、 Detox (Corixa, Hamilton, Mont.)和RC-529 (Corixa, Hamilton, Mont.)。
超抗原也被考虑在本发明中作为佐剂使用。超抗原包括葡萄球菌
胞外蛋白，例如，来自于金黄色葡萄球菌cs.""mw力和表皮葡萄球菌cs.
印Werw/^s)的a、 j8、 7和AM 毒素、以及a、 (8、 7和A大肠杆菌夕卜毒素。常见的葡萄球菌肠毒素被称为葡萄J求菌肠毒素A (SEA)和葡萄球菌肠毒素B(SEB)，通过描述的E(SEE)的肠毒素(RottW"/.， 1992)。化脓性链球菌B (SEB)、产气荚膜梭菌肠毒素(Bowness " a/.， 1992)、来自于化脓性链球菌(S.pyogenes)的细胞质膜相关蛋白(CAP) (Sato W a/., 1994)和来自于金黄色葡萄球菌的中毒休克综合征毒素1 (TSST1) (Schwab ^ a/.， 1993)也是有用的超抗原。
在本文提供的药物组合物中，所述佐剂组合物能够被设计为诱导例如，主要是Thl或Th2型免疫反应。高水平的Thl型细胞因子(例如，IFN-7、 TNF-a、 IL-2和IL-12)趋向促进诱导针对给予的抗原的细胞介导的免疫反应。相反地，高水平的Th2型细胞因子(例如，IL-4、 IL-5、 IL-6和IL-10)趋向促进诱导体液免疫反应。在口腔递送本文提供的包含免疫原性多肽的组合物后，通常会激发包括Th 1 -和Th2-型应答的免疫反应。
本文描述的组合物可以作为持续释放制剂(即，在给药后起緩慢释放化合物作用的诸如胶嚢或海绵剂型)的部分来给药。这种制剂通常可以使用公知的技术制备(参见，例如，Coombes W fl/. (1996) 14:1429-1438)。持续释放制剂可以包含多肽、多核苷酸或分散在载体基质中和/或包含在用速率控制膜包围的嚢(reservoir)中的抗体。
在这种制剂中使用的载体是生物相容的，也可以是生物可降解的；优选地，所述剂型提供活性成分释放的较恒定水平。这种载体包括聚(丙交酯乙交酯共聚物)微粒，以及聚丙烯酸脂、胶乳、淀粉、纤维素和葡聚糖。其它延时释放载体包括超分子生物载体，其包括非流动性亲水核心(例如，交联多糖或寡糖)以及，任选地，包含两性化合物的
外部涂层(参见，例如，WO 94/20078; WO 94/23701和WO 96/06638)。包含在持续释放剂型中的活性化合物的量取决于植入部位，释放速率和预期持续时间，以及被治疗或预防状态的性质。
所述药物组合物可以存在于单剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿或管形瓶。这种容器优选全密封的容器以保持剂型的无菌性直至使用。通常，制剂可以以悬液、溶液或乳液贮存在油性或水性载体中。可选择地，药物组合物可以在冷冻干燥的条件下贮存，使用前只需要立即加入无菌流体载体。
V.本发明的治疗用途
本发明的一个方面涉及使用本文描述的免疫原性组合物激发个体或患有例如，诸如病毒感染、细菌感染、寄生虫感染、霉菌感染或癌症的患者的抗原特异性免疫反应。本文使用的"个体"或"患者"是指任何温血动物，例如，诸如啮齿类动物、猫科动物、犬科动物、优选人的灵长类动物。免疫原性组合物可以在疾病的任何阶段，即癌前期、癌或转移阶段，用于治疗或用于预防疾病。例如，本文描述的组合物可以用于治疗诸如HIV或肝炎的病毒性疾病，或用于预防或治疗癌症。在这种方法中，通常给予患者药物组合物。所述患者可以或不可以罹患疾病或病症(例如，病毒感染、细菌感染或癌)。因此，上述
染或癌)或用于治疗罹患疾病或病症的患者(例如，病毒感染、细菌感染或癌)。所述疾病或病症可以使用本领域通常可接受的标准进行诊断。例如，病毒感染可以通过测量来自于患者的样品中的病毒效价来诊断，细菌感染可以通过测定来自于患者的样品中的细菌来诊断，肺瘤可以通过测定恶性肺瘤的存在来"i貪断。药物组合物可以在手术切除原发肿瘤和/或诸如放射治疗或常*见化学治疗药物治疗之前或之后给予。免疫治疗通常是主动免疫治疗，其中治疗依赖于内源性宿主免疫系统针对诸如肿瘤或感染细菌或病毒的细胞的体内激活，并给予免疫反应调节剂(本文提供的包含编码免疫原性多肽的核酸的组合物)。
本文描述的预防或治疗性组合物的给药频率和剂量，将因个体不同而不同，并且使用标准:技术可以轻易地确立。通常在52周期间可以给予1至10次剂量。通常1个月的间隔给予3次剂量，更通常，每
2-3个月给予2-3次剂量。对于某些治疗，间隔可能大约为一年一次。
此后定期进行加强免疫。可选择的方案可以适合个体患者和特殊的疾病和病症。适合的剂量是当如上所述给药时，能够促进诸如抗肿瘤、抗病毒、抗细菌、免疫反应的化合物的量，并至少高于基础(即，未处
理的)水平的10-50%。这种应答可以通过测量患者的抗肿瘤抗体或通过疫苗依赖的溶细胞性T细胞的产生来监测，所述溶细胞性T细胞能够在体外杀死诸如患者的肿瘤细胞、患者的受病毒感染的细胞或患者的受细菌感染的细胞。将已接种的患者与未接种的患者比较，这种疫苗应该还能够激发导致改善的临床结果(例如，更频繁地缓解、完全或部分或更长时间的无病存活)的免疫反应。通常，病毒效价的量会为 1.0x104 pfu/动物至1.0x1015 pfu/动物。适合的剂量大小将随患者的体重而变化，但是通常会在约0.01 ml至约10ml变动，更通常，是约 0.025至约7.5 ml,最通常是约0.05至约5 ml。本领域的技术人员可以理解的是，根据特定的患者或被治疗的特定疾病或病症可以调整剂量大小。对于口腔给药，嵌合腺病毒载体能够被方便地制成药丸。
一般来说，适当的剂量和治疗方案以足以提供治疗和/或预防益处的量提供活性化合物。这种应答可以通过确立已接种的患者与未接种的患者相比较的改善的临床结果(例如，更频繁地緩解、完全或部分或更长时间的无病存活)来监测。这种免疫反应通常可以使用前面描述的标准增殖、细胞毒性或细胞因子分析来评价，其可以使用从治疗前和治疗后的患者中获得的样品来实施。
例如，在免疫原性多肽和体液中特异针对免疫原性多肽的抗体之间形成的免疫复合物的测定可以用于监测治疗的有效性，所述治疗涉及特定的免疫原性多肽，用于与所述免疫原性多肽相关的疾病或病症。在治疗开始之前和之后，可以通过前面描述的方法学分析从个体中取^ 出的体液样品的免疫复合物。筒单地说，将两样品中检测到的免疫复合物的数目进行比较。第二个样品(治疗开始后)相对于第一个样品(治疗前)中的免疫复合物数目的显著变化反映了成功的治疗。
A. 本发明的组合物的给药
根据本发明的方法，包含嵌合腺病毒载体的组合物通过非胃肠外途径(例如，经口、经鼻或经粘膜，例如阴道、肺、唾液腺、鼻腔、小肠、结肠、直肠、扁冲兆体或淋巴集结)给药。所述组合物可以单独或与前面描述的佐剂一起给药。在一些实施方案中，所述佐剂由核酸序列 (例如，编码IL-2、 GM-CSF、 IL-12或细菌l便毛蛋白的核酸)编码。在本发明的一些实施方案中，所述佐剂与所述组合物同时给药。在本发明的其它实施方案中，所述佐剂在所述组合物之后给药，例如，在给予组合物后6、 12、 18、 24、 36、 48、 60或72小时。
B. 4十对目的抗原的免疫反应的测定
针对异源多肽的免疫反应能够使用本领域已知的任何手段来测定，包括，例如，测定CD4+或CD8+T细胞的特异性激活或通过测定特异性结合到多肽的抗体的存在。
与粘膜、体液或细胞介导的免疫反应相关的CD4+或CD8+T纟田胞
的特异性激活可以由多种方式测定。测定特异性T细胞激活的方法包括，但是不限于测定T细胞的增殖、细胞因子(例如，淋巴因子)的产生或溶细胞活性的产生(即，针对免疫原性多肽特异性的细胞毒性T细胞的产生)。对于CD4+T细胞，用于测定特异性T细胞激活的优选方法是测定T细胞的增殖。对于CD8+T细胞，用于测定特异性T细胞激活的优选方法是使用"Cr释放法测定溶细胞活性的发生(参见，例如，Brossart and Be濯，飾M 90(4): 1594-1599 (1997) and Lenz W a/" ￡平MeA 192(8):1135-1142 (2000))。
T细胞增殖的检测可以通过多种已知的技术实现。例如，T细胞增殖能够通过测定DNA合成速率来检测。已经被刺激增殖的T细胞显示DNA合成速率的增加。测定DNA合成速率的典型方式是，例如，通过用氚标记胸腺嘧咬核苷，被掺入到新合成的DNA中的核苷酸前体脉沖标记T细胞的培养物。被掺入的氚标记胸腺嘧啶核苷的量能够使用液体闪烁分光光度计测定。检测T细胞增殖的其它方式包括测定白细胞介素2 (IL-2)的产生、Ca2+通量或诸如3-(4,5-二曱基p塞峻-2-基)-2,5-二苯基四氮唑的染料的摄取。可选择地，可以测定淋巴因子(例如，干扰素力的合成，或可以定量针对对免疫原性多肽应答的T细胞的相对数目。
包括粘膜抗体应答的抗体免疫反应(aka体液免疫反应或B细胞应答)能够使用本领域已知的免疫分析来测定[Tuckera/.， Mo/ T7^ra/^, 8， 392-399 (2003); Tucker"/， Facc/"e, 22， 2500-2504 (2004)]。适合的免疫分析包括David等人的双单克隆抗体夹心免疫测定技术(美国专利 No. 4,376,110);单克隆-多克隆抗体夹心分析法(Widea/" in Kirkham and Hunter, eds., Wad/o/mmwwoas^aj A/e/Aoc^, E. and S. Livingstone, Edinburgh (1970)); Gordon等人的"蛋白印迹，，法(美国专利No. 4,452,901);标记配体的免疫沉淀(Brown " a/. (1980), CAew. 255:4980-4983);例如由Raines " a/. (1982) 肠/. C/z亂 257:5154-5160描述的酶联免疫吸附测定(ELISA);包括使用荧光染料的免疫细胞化学技术(Brooks " a/. (1980) C"".五平/w附画/. 39:477); 以及活性的中和(Bowen-Pope(1984) /Voc. AAw/. jcad 81:2396-2400)。除了前面描述的免疫分析以外，也可以利用许多其它的免疫分析，包括在美国专利Nos. 3,817,827; 3,850,752; 3,901,654; 3,935,074; 3,984,533; 3,996,345; 4，034，074和4，098，876中描述的那些。
实施例
下面的实施例用于示例本发明，但并不是限制本发明。实施例1:嵌合腺病毒载体的构建(DSI)
为了证实TLR-3激动剂能够改善针对表达的目的抗原的获得性免疫反应，构建了包含编码多种不同目的抗原的核酸序列的多种不同嵌合腺病毒载体。在本实施例中，将编码gpl20 (NIH AIDS Reagent andReference Reagent Program)的核酸置于CMV启动子的调控下，所述启动子携带就在穿梭载体(pShuttle, Qbiogene)中的起始密码子上游的小内含子。来自于bGH的聚腺苷酸尾位于编码gpl20的核酸的下游。载体序列在SEQ ID NO: 1中被描述。实施与载体pAd (Qbiogene)的同源重组以制备能够产生包含编码gpl20的核酸的重组腺病毒(删除了 El/E3)的载体。通过将新pAd-CMV-gp120表达载体转染入293细胞产生DSI 。效价通过标准方法测定。
实施例2: DSI (载体加上TLR-3激动剂)诱导抗原特异性的免疫反应优于标准的rAd5。
为了测定添加TLR-3激动剂是否能够改善获得性免疫反应，通过口腔服管饲法在第0周和第3周给予动物lOxIO7 10xI07PFU的 rAd-CMV-gp120加上5 /ig/ml聚肌胞苷酸(DS1)，或单独的 rAd-CMV-gp120 (rAd5)。两种载体在CMV启动子的控制调控下都表达HIVgpl20，并都使用删除了 El/E3的重组5型腺病毒。如在Tucker, da/.，Mo/77z^8:39ZpO(H))中描述的，在初次给药后第3周和第6周通过抗gpl20 IgG ELISA后第3周和第6周测量血浆中针对gpl20的抗体效价。如图1所示，在初次始口腔给药后第3周和第6周时，在激发针对蛋白gpl20的抗体应答中，DS1的表现明显优于比rAd5好。特别是，在第6周时，给予DS1组的针对gpl20的平均抗体效价在给予DS1组中比给予rAd5的的组的效价好高100倍。也可以看出，显而易见的是，DS1组被第4周的再次给药加强，其中在第3周和至第 6周的之间抗体平均效价增加了 20倍以上，而rAd5组的平均抗体效价仅仅显示了出轻微的增加。该结果证实了在口腔给予包含编码目的抗原的核酸的嵌合腺病毒载体后，添加TLR-3激动剂能够大大提高 Ad5介导的针对目的抗原的Ad5介导的抗体应答。作为测定所述分析的阳性对照，在第3周时，来自皮下注射gpl20加上弗氏完全佐剂的动物的血清也在抗gpl20 ELISA中一皮测量测定。将未处理的动物和单独给予dsRNA类似物(dsRNA)的动物分别作为所述ELISA的阴性和背景对照用于ELISA。每一组包括6只动物。实施例3:第二嵌合腺病毒载体(DSIb)和第三嵌合腺病毒载体(DSlc) 的构建
使用标准的限制性内切酶酶切将编码绿色荧光蛋白(GFP)的核酸插入到pShuttle-CMV (Qbiogene)中。为了制备能够产生包含编码GFP 的核酸序列的重组Ad (删除E1 /E3)的载体，通过同源重组将质粒 pShuttleCMV-GFP与前面所述的载体pAd (Qbiogene)结合。编码来自于流感A/PR/8/34的血凝素(HA)的核酸被克隆，并置于pShuttle-CMV 载体(Qbiogene) (SEQ ID NO: 13)中。为了制备能够产生包括编码HA 的核酸序列的重组Ad (删除El/E3)的载体，通过同源重组将质粒 pShuttleCMV-HA (PR/8)与如前所述的载体pAd (Qbiogene)结合。通过将新pAd-CMV-GFP和pAd-CMV-HA表达构建体转染入293细胞制备重组的Ad。效<介通过标准方法测定。
实施例4: DSIb (Ad-CMV-GFP加上TLR-3激动剂)和DSlc (Ad-CMV-HA加上TLR-3激动剂)诱导抗原特异性的免疫反应优于标准的rAd5。
通过口腔管饲法在第0周给予动物10xl07PFU的Ad-CMV-GFP 加上5 |ig/ml聚肌胞苦酸(DSlb)或Ad-CMV-GFP (rAd5)。两种病毒都在CMV启动子的调控下表达GFP,并使用删除El/E3的重组5型腺病毒。通过抗GFP IgG ELISA，在开始给予病毒后第3周测量血浆中 GFP的抗体效价。如图2所示，在初始口腔给药后第3周，DSlb组在激发针对GFP蛋白的抗体应答中明显优于rAd5 。
通过脾细胞的四聚体染色测定针对GFP的CD8+T细胞应答。动物在第0、 4、 8周接种，并在第IO周采集脾。脾细胞用识别Balb/c 小鼠中GFP优势免疫表位的CD8-FITC和四聚体染色。结果显示DSlb 载体的口腔给药在诱导四聚体阳性CD8细胞中在统计学上优于单独给予rAd(图2b)。
通过口腔管饲法在第0周给予动物10x107 PFU的Ad-CMV-HA力口上5 )ig/ml聚肌胞苷酸(DSlc)或Ad-CMV-HA (rAd5)。两种病毒在CMV启动子的调控下都表达HA,并使用删除E1/E3的重组5型l^病毒。通过抗PR8/34 IgG ELISA,在起始给予病毒后第3周测量血浆中HA 的抗体效价。测定抗体应答的步骤与前面描述的相似，除了ELISA斧反涂有5 (ig/ml的A/PR8/34全裂解液(Advanced Biotechnology Incorporated, Gaithersburg， MD)。如图2C所示，在初始口腔给药后第 3周DSlc组在激发对流感的抗体应答中的表现明显优于rAd5 (约高 IOO倍)。这些研究结果还证实TLR-3激动剂与嵌合重组腺病毒载体联用可以普遍应用于多种不同的异种抗原，使抗体效价提高100倍。
实施例5:非胃肠外途径递送优于胃肠外途径
通过将1.0x107 pfu的pAd-CMV-gp120 (DS10 +/- 5 pg/ml聚肌胞苦酸)直接注射到动物的四头肌中来检测肌肉内递送。如前面所述测量针对GFP的血浆血清IgG效价。每组包括六只动物。如图3A所示，给药后第3周时，在给予TLR-3激动剂(i.m.rAd+PI)的组观察到针对 gpl20的明显抗体效价。(图3a)。
通过将20 pl的1.1xl06 pfu的DS1 c+A 5 pg/ml的聚肌胞香酸给予到小鼠的鼻腔来检测经鼻给药。在给予配制在无菌盐水中的病毒前，用异氟醚轻度麻醉小鼠。结果显示rAd-CMV-HA加上聚肌胞芬酸 (DSlc)与给予标准的rAd-CMV-HA的动物相比，抗体效^介轻度升高。结果被标绘为DSlc (N-6)和rAd (N-5)组的个体动物的结果。未处理的动物(N二4)用作阴性对照。
实施例6:表达的TLR3激动剂的构建。
DNA的45bp短片段通过排序DNA寡核苷酸来合成，当一起退火时，形成45 bp片段以设计为形成双链RNA的发夹
CGTTTC) (SEQ IDNO:10)。该短片段(称为lucl)被克隆到包含人/5肌动蛋白启动子和BGH聚腺苷酸尾的质粒pSK中。该质粒被称为 pSk-lucl。实施例7: pSK-luc 1在树突细胞培养物中的功能与聚肌胞苷酸相似，聚肌胞香酸和rAd的作用是累加的。
为了测定上述实施例6中表达的TLR-3激动剂是否能够与TLR-3 配体聚肌胞苷酸一样作为促炎细胞因子和树突细胞成熟的诱导剂发挥作用，在树突细胞培养物中检测表达的dsRNATLR-3激动剂。用flt-3 配体(200 ng/ml)、 5%血清在DMEM培养基中培养来自于Balb/c小鼠的股骨骨髓，以制备原代树突细胞培养物。原代骨髓培养物建立后第 5天，用pSk-lucl、 pSK-)82(形成200bp发夹的]8半乳糖苷酶长片段) 或pcDNA3(空表达载体)转染293细胞。第6天时，被转染的细胞用 UV照射处理(40 kJ/cm2处理20秒)，以引起细胞凋亡，并且将这些细胞添加到树突细胞。将聚肌胞香酸(l |ng/ml)、 rAd(l pfu/细胞)、rAd十聚肌胞苷酸、pSK-lucl转染的细胞，pSK-Z32转染的细胞或pcDNA3 转染的细胞添加到树突细胞，并培养过^复。如图4A所示，pSK-lucl 转染的细胞能够显著地提高树突细胞的激活，如通过小鼠IL-6ELISA 所测定的那样。该试验的结果还显示rAd与TLR3配体(聚肌胞苷酸) 结合在一起能够极大地提高树突细胞活性。
还检测了另外的配体。在SEQ ID NO: 11 (ml)中描述的TLR-3激动剂也形成了约与lucl大小相同的dsRNA发夹。这些配体通过重叠寡核苦酸并将其一起退火，随后克隆入受人/3肌动蛋白启动子的调控的pSK载体中而制备。如前面所述，将载体转染到293细胞中并添加到原代树突细胞。如图4B所示，这些另外配体能够与配体lucl相似地激活树突细胞(图4B)。
实施例8:第四嵌合腺病毒载体(DS2)和快速克隆载体(DS2/3-luc和 DS2C-luc)的构建。
编码gpl20 (来自于NIH AIDS Research and Reference Reagent Program)的核酸置于CMV启动子的调控下，所述启动子携带就在穿梭载体(pShuttleCMV, Qbiogene)中的起始密码子上游的小内含子。来自于bGH的聚腺苷酸尾位于编码gpl20的核酸的下游。将在人/3肌动蛋白启动子调控下的dsRNA TLR-3激动剂lucl和聚腺核酸(如上述实施例5中所描述的)插入gpl20 pShuttle载体中，使得编码gpl20的核酸和编码TLR- 3激动剂的核酸在两个分离启动子的控制下包含在单一载体中。编码目的抗原的核酸的表达和TLR-3激动剂的表达的方向如图 5所示例。
还构建了被称为DS2/5-luc (SEQ ID NO: 14)和DS2C-luc (SEQ ID NO: 15)的两个通用穿梭载体，使得编码任何目的抗原的核酸在CMV 启动子的调控下能够被插入，并且人/3肌动蛋白启动子或CMV启动子用于启动dsRNA TLR-3激动剂的表达。特别是，载体DS2C-luc具有编码目的抗原的核酸能够容易地被克隆进入的独特Kpn 1位点。这些载体的目的是使随后的载体构建更容易，因为编码任何目的抗原的核酸能够被插入到所述克隆位点以快速地制备能够激发针对目的抗原的抗体和T细胞应答的载体。如前面一样实施DS2与载体pAd (Qbiogene)的同源重组，以制备能够产生包含编码GFP的核酸和编码 dsRNA LR-3激动剂lucl的核酸的重组Ad (删除El/E3)的载体。重组 Ad通过将新pAd-)8肌动蛋白-lucl-CMV-gpl20表达载体转染到293细胞来产生。效^介通过标准方法测定。
实施例9: 口腔递送DS2后，抗原特异性免疫反应的诱导。
通过口腔管饲法在第0周给予动物10xl07PFU的 pAd-CMV-gp120加上TLR-3激动剂lucl(DS2)或pAd-CMV-gp120 (rAd5)。两种病毒在CMV启动子的调控下都表达gp120，并使用删除 El/E3的重组5型腺病毒。通过抗gpl20IgGELISA，在给予病毒后第 3周测量血浆中gpl20的抗体效价。ELISA实验方案已经在前面描述过(Tucker, ^ a/, Mo/ 77zerap少8:392 (2004))。结果证实DS2能够i秀导试验中使用的异种抗原gpl20的抗体效价约提高2 log。 DS2载体包含编码表达gpl20的核酸序列和表达dsRNA TLR-3激动剂的核酸序列。作为所述分析的阳性对照，在抗gpl20 ELISA中还测定了来自皮下注射了 IO微克gpl20蛋白加上弗氏完全佐剂的两只动物的血清。未处理的动物作为所述EL1SA的阴性对照。每组包括6只动物。结果如图6 所示。实施例10: 口腔递送DS3后，抗原特异性免疫反应的诱导。
通过口腔管詞法在第0周给予动物10xl07 PFU的pAd-CMV-流感 HA(来自于A/PR/8/34)加上TLR7/8配体聚尿苷酸(DS3)或 pAd-CMV-HA (rAd5)。两种病毒在CMV启动子的调控下都表达流感 HA，并使用删除El/E3的重组5型腺病毒。通过抗流感HA IgG ELISA，在给予病毒后第3周测量血浆中HA的抗体效价。每组包括6只动物。结果如图7所示。
实施例11:第五、第六和第七嵌合腺病毒载体的构建(DS2b、 DS2b-for 和ND1.1 214)。
流感HA (A/Indo/5/2005)基因由CelTek (Nashville, TN)合成，并置于具有CMV启动子的的载体pShuttleCMV (Qbiogene)中，所述启动子携带就在穿梭载体中的起始密码子上游的小内含子。将带有人/5肌动蛋白启动子和聚腺苷酸(在实施例5中描述)的lucl DNA置于抗原的载体下游，在图5所示的DS2b的方向上。Lucl序列是
CGTTTC) (SEQ ID NO: 10),并且完整的pShuttle载体在SEQ ID NO:
6中被描述。在穿梭载体中带有启动子的lucl的可选择的方向如SEQ IDNO:7中所描述的，并且指定为DS2b-for。我们也已经构建了另一 pShuttle载体(被称为DS2bC-HA) (SEQ ID NO: 16),其包括启动前面描述的TLR-3激动剂lucl和流感HA表达的两个独立CMV启动子。如前面一冲羊实施与载体pAd (Qbiogene)的同源重组，以产生能够在分离启动子的调控下产生包含编码HA和TLR-3激动剂lucl的核酸的重组Ad的载体。重组Ad通过将新pAd载体转染到293细胞来产生。效价通过标准方法测定。包含DS2C-luc的完整pAd载体被命名为 ND1.1 214,并于2007年2月22日保藏在ATCC专利保藏机构 (Manassus, VA)。所述嵌合腺病毒载体的核酸序列在SEQ ID NO: 17 中提出。编码异种抗原的核酸以粗体表示，并且侧面5'末端与CIaI 识别位点连接，3'末端与Not 1识别位点连接。编码TLR-3激动剂的核酸序列以斜体表示，连接子序列以粗体表示。编码任何目的抗原的
核酸序列和编码任何合适的表达的TLR-3激动剂的核酸序列都能够一皮
插入嵌合腺病毒载体中。
实施例12: 口腔递送DS2b后，抗原特异性免疫反应的诱导。
通过口腔管饲法在第0周给予动物10xl07PFU的pAd-CMV-HA 加上反向TLR-3激动剂lucl (DS2b)或加上正向TLR-3激动剂lucl (DS2b-for)，或者pAd-CMV-HA (rAd5)。这些病毒都在CMV启动子的调控下表达流感HA抗原，并使用删除E1/E3的重组5型腺病毒。通过抗HA IgG ELISA,在给予病毒后第3周测定血浆中HA的抗体效价。结果证实DS2b载体激发针对蛋白HA的抗体应答高于标准的rAd载体(rAd5)。DS2b载体包含表达HA的rAd5，还表达toll样受体3(TLR3) 激动剂，双链发夹RNA,这表明使用编码的dsRNA配体能够改善4十对目的抗原的获得性免疫反应。如图8A和图6所示，表达的dsRNA 能够改善针对多个不同异种抗原的获得性免疫反应。将未处理的动物作为所述ELISA的阴性对照。每组包括6只动物。
在口腔或肌肉给予每只动物1。0xl(^pfu病毒后第0周和第5周，测定相反方向的载体(DS2for)的抗体应答。在初始给药后第4周和第7 周测量对HA的抗体应答。如图8B所示，所述相反方向载体也能够诱导对异种抗原的显著的抗体应答。在第4周的时间点，DS1 b和DS1 bfor 载体诱导对HA的相似应答。显著地，DSlbfor载体证实了抗体应答的加强效果，并显示了多剂量能够用于增加对异种抗原的抗体应答。
另一实施例也证实了嵌合腺病毒载体方法的潜力。通过口腔 (1.0xl(^pfu)或经鼻(3xl()Gpfu)给予动物载体ND1.1 214，并在第3周测量针对异种抗原的抗体应答。如图8C所示，在口腔给药后，测量到了针对HA的显著抗体应答，远超出口腔给予单一rAd载体的通常值。
为了所有的目的，本说明书中引用的所有出版物、专利公开物、专利和Genback登录号申请都通过引用的方式以其整体并入本文，如同每一出版物、专利公开物或专利被特别单独地指明以引用的方式并入本文。SEG ID N〇
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1 (DS1)
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非正式序列表
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1981 agcaaagttt ttcaacggtt tgagaccgtc cgccgtaggc atgcttttga gcgtttgacc
2 041 aagcagttec aggcggtccc acagcteggt cacctgctct acggcatctc gatccagcat
2101 atctcctcgt ttcgcgggtt ggggeggett tcgctgtacg gcagtagteg gtgctcgtcc
2161 agaegggeca gggtcatgtc tttecaeggg cgcagggtcc tcgtcagegt agtctgggtc
22 21 aeggtgaagg ggtgcgctcc gggctgcgcg ctggccaggg tgegcttgag gctggtcctg
22 81 ctggtgetga agcgctgccg gtcttcgccc tgcgcgtegg ccaggtagca tttgaccatg<formula>formula see original document page 47</formula><formula>formula see original document page 48</formula>54 61 tgatgccgcc gtgttccggc gttctttttg tcaagaccga
5521 cctgtccggt gccctgaatg cggctatcgt ggctggccac
55 81 gacgggcgtt ccttgcgcag gaagcgggaa gggactggct
5 641 gctattgggc gaagtgccgg caccttgctc ctgccgagaa
57 01 agtatccatc atggctgatg cttgatccgg ctacctgccc
5761 attcgaccac caagcgaaac actcggatgg aagccggtct
5 821 tgtcgatcag gatgatctgg gcgccagccg aactgttcgc
58 81 caggctcaag gcgagcatgc gtgacccatg gcgatgcctg
5 941 cttgccgaat atcatggtgg ttcatcgact gtggccggct
60 01 gggtgtggcg gaccgctatc cgtgatattg ctgaagagct
6061 tggcggcgaa tgggctgacc atcgccgctc ccgattcgca
6121 gcgcatcgcc ttctatcgcc attttgttaa aatttttgtt
6181 aaatcagctc attttttaac catcccttat aaatcaaaag
62 41 aatagaccgc gatagggttg caagagtcca ctattaaaga
63 01 acgtggactc caacgtcaaa gggcgatggc ccactacgtg
63 61 aaccatcacc caaatcaagt taaagcteta aateggaace
64 21 ctaaagggag cccccgattt ggcgaacgtg gcgagaaagg
64 81 aagggaagaa agegaaagga aagtgtageg gtcacgctgc
6541 gcgtaaccac cacacccgcg ggcgcgtcca ttcgccattc
66 01 aggatcgaat taattcttaa
tgtcagegeaggggcgcccg
aactgeaagaegaggcageg
ctgtgctcgacgttgtcact
ggcaggatctcctgtcatct
caatgeggeggctgcatacg
ategcategagcgagcacgt
acgaagagcatcaggggctc
ccgacggcgaggatctcgtc
aaaatggccgcttttctgga
aggacatagcgttggctacc
gcttcctcgtgetttaeggt
ttcttgacgagttcttctga
caataggecgaaatcggcaa
agtgttgttccagtttggaa
gggcgaaaaacegtctatca
tttttgcggtcgaggtgccg
agagcttgac ggggaaagee gegggegcta gggcgctggc cgcttaatgc gccgctacag t
SEQ工D:2 (载体序歹'J DS2)
taacatcatc aataatatac cttattttgg attgaageca atatgataat gagggggtgg agtttgtgac gtggcgcggg gcgtgggaac ggggcgggtg aegtagtagt gtggcggaag tgtgatgttg caagtgtggc ggaacacatg taagegaegg atgtggcaaa agtgacgttt ttggtgtgcg ccggtgtaca caggaagtga caattttege gcggttttag gcggatgttg tagtaaattt gggcgtaacc gagtaagatt tggccatttt cgcgggaaaa ctgaataaga ggaagtgaaa tctgaataat tttgtgttac teatagegegacattgattattgactagttattaatagtaatcaattacggggtcattagttcatagc
:cccatagtaacgccaat
catctacgta1
gggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattgacgtca
ctgggcatgtggagacagagaagactcttgggtttctgataggcactgactctctctg cctattggtctattttcccacccttaggctgctggtctgagcctagGAGATCTCTCGA
CAGG
50999 cgtggttaag
421 ggtgggaaag aatatataag gtgggggtct tatgtagttt tgtatctgtt ttgcagcagc
481 cgccgccgcc atgagcacca actcgtttga tggaagcatt gtgagctcat
ACTGTGCCTT TGCCACTCCCAC ATTCTGGGGGGT ATGCGGTGGGCT
aagatctggg cgtggttaag
421 ggtgggaaag aatatataag gtgggggtct tatgtagttt tgtatctgtt ttgcagcagc4 81 cgccgccgcc atgagcacca gtgageteat atttgacaac
541 gcgcatgccc ccatgggccg ggctccagca ttgatggtcg
601 ccccgtcctg cccgcaaact accgtgtctg gaacgccgtt
661 ggagactgea gcctccgccg accgcccgcg ggattgtgac
721 tgactttget ttcctgagcc tcccgttcat ccgcccgcga
781 tgacaagttg aeggctcttt acccgggaac ttaatgtcgt
841 ttctcagcag ctgttggatc ctgaaggctt cctcccctcc
901 caatgeggtt taaaacataa tggatttgga tcaagcaagt
961 gtcttgctgt ctttatttag gcccgggacc ageggtcteg
1021 gtcgttgagg gtcctgtgta aggtgactct ggatgttcag
10 81 atacatgggc ataagecegt cactgeagag ettcatgetg
1141 cggggtggtg ttgtagatga tgggcgtggt gectaaaaat
12 01 gtctttcagt agcaagctga gtgtaagtgt ttacaaagcg
12 61 gttaagctgg gatgggtgca atcttggact gtatttttag
13 21 gttggctatg ttcccagcca ttgtgcagaa ccaccagcac
13 81 agtgtatccg gtgcacttgg
14 41 cttggagacg cccttgtgac tcgtccataa tgatggcaat
1501 gggcccacgg gcggcggcct teactaaegt catagttgtg
15 61 ttccaggatg agategtcat gggcggaggg tgccagactg
1621 eggtataatg gttccatccg tcacagattt gcatttccca
1681 cgctttgagt tcagatgggg gcgatgaaga aaacggtttc
1741 eggggtaggg gagatcaget ageagctgeg acttaccgca
18 01 gccggtgggc cegtaaatea tggtagttaa gagagctgea
18 61 getgeegtca tccctgagea atgtccctga ctegcatgtt
1921 ttccctgacc aaatccgcca gatagcagtt ettgeaagga
1981 agcaaagttt ttcaacggtt atgcttttga gcgtttgacc
actcgtttga tggaagcatt gggtgcgtca gaatgtgatg ctactacctt gacctacgag ccgcttcagc cgctgcagcc
cgcttgcaag tggcacaatt tgcgccagca
cagtgeaget ggattctttg ggtttctgcc agactctgtt
gggttttgcg cgegeggtag ttttttccag gacgtggtaa ctctggggtg gaggtagcac tecagtegta geaggagege
ttgccagggg tacgtgggga tatccctccg gaaatttgtc ctccaagatt gggegaagat aggecatttt gcccaggggc ggatcatgtc gggaagaaag
caggcccttg tatgagatgc gggattcatg atgtagctta ttccatgeat atttctggga tacaaagege gtagttaccc tacctgeggg caggttcctg
cacctattac egggtgeaac
ggggggecac ttcgttaagc
gaaggegetc gccgcccagc
tgagaccgtc cgccgtaggc2 041 aagcagttcc aggcggtccc acggcatctc gatccagcat
2101 atctcctcgt ttcgcgggtt gcagtagtcg gtgetegtec
2161 agaegggeca gggtcatgtc tegtcagegt agtctgggtc
22 21 aeggtgaagg ggtgcgctcc tgegcttgag gctggtcctg
22 81 ctggtgctga agcgctgccg ccaggtagca tttgaccatg
2 341 gtgtcatagt ccagcccctc gcagcttgcc cttggaggag
24 01 gcgccgcacg aggggcagtg gettgggege gagaaatacc
2 4 61 gattcegggg agtaggcatc cggtctcgcs ttccscgagc
2 521 caggtgagct ctggccgttc ccccatgctt tttgatgcgt
2 581 ttcttacctc tggtttccat tgacgaaaag gctgtccgtg
2 641 tccccgtata cagacttgag atagcttgtt geatgggegg
2 701 cgatataaaa tgcaaggtgc gcctcgcgca aaaaagaaag
2 761 cacategtag teatgetcat tccggaacca ccacagaaaa
2 821 agacaccatt tttctctcaa
2881C3333333C3 ttt333C3tt
gaaaaacaac ccttataagc
2 941 ataagaegga ctacggccat actggtcacc gtgattaaaa
3 0 01 agcaccaccg acagctcctc tgtaagactc ggtaaacaca
3 0 61 tcaggttgat teateggtea tagecegggg gaatacatac
3121 ccgcaggcgt agagacaaca ataacaaaat taataggaga
3181 gaaaaacaca taaacacctg aaaatagcac cctcccgctc
3 241 cagaacaaca tacagegett cagccttacc agtaaaaaag
3301 33a3cctatt 33333a3C3C caatcagtca cagtgtaaaa
3 3 61 aagggcca_a_g tgcagagcgaL tgacgtaacg gttaaagtcc
3421 acaaaaaaca cccagaaaac
34 81 cacaacttcc teaaategtc cgtaacttcc cattttaaga
3 541 己asctaca_3t tcccascacs aacctacgtc acccgccccg
acagcteggt
ggggeggett
tttccacggg
gggctgcgcg
gtcttcgccc
cgcggcgtgg
cagacttttg
cgcgccgcag
ggggtcaaaa
gagccggtgt
agggagtt
tgctcaaaaa
acatgtctgc agaagectgt gccggcgtga ggtcatgtcc gtgctaaaaa ttacagcccc
cacagcggca cactcgacac gtatattatag cgcacgcgaa acttccgttt
cacctgctct tcgctgtacg cgcagggtcc ctggccaggg tgegegtegg cccttggcgc agggegtaga gccccgcaga accaggtttc ccacgctcgg aacgaattca atcaggcaaa gcaggtaagc gggtttctgc cttacaacag
ggagtcataa gcgaccgaaa cataggaggt ctgcctaggc gectaacagt ggcaccagct
cctacgccca3 601 ttcccacgcc ccgcgccacg ttatcatatt ggcttcaatc
3 661 caaaataagg tatattattg tggatccata tgcggtgtga
3 721 aataccgcac agatgcgtaa cgctcttccg cttcctcgct
3 781 cactgactcg ctgcgctcgg gtatcagctc actcaaaggc
3 841 ggtaatacgg ttatccacag aagaacatgt gagcaaaagg
3 901 ccagcaaaag gccaggaacc gcgtttttcc ataggctccg
3 961 cccccctgac gagcatcaca aggtggcgaa acccgacagg
4 021 actataaaga taccaggcgt gtgcgctctc ctgttccgac
4 081 cctgccgctt accggatacc ggaagcgtgg cgctttctca
4141 tagctcacgc tgtaggtatc cgctccaagc tgggctgtgt
42 01 gcacgaaccc cccgttcagc ggtaactatc gtcttgagtc
42 61 caacccggta agacacgact actggtaaca ggattagcag
4321 agcgaggtat gtaggcggtg tggcctaact acggctacac
43 81 tagaaggaca gtatttggta gttaccttcg gaaaaagagt
4441 tggtagctct tgatccggca ggtggttttt ttgtttgcaa
4 5 01 gcagcagatt acgcgcagaa cctttgatct tttctacggg
4 561 gtctgacgct cagtggaacg ttggtcatga gattatcaaa
4 621 aaggatcttc acctagatcc tttaaatcaa tctaaagtat
4 6 81 atatgagtaa acttggtctg agtgaggcac ctatctcagc
4 741 gatctgtcta tttcgttcat gtcgtgtaga taactacgat
4 8 01 acgggagggc ttaccatctg ccgcgagacc cacgctcacc
4 8 61 ggctccagat ttatcagcaa gccgagcgca gaagtggtcc
4921 tgcaacttta tccgcctcca cgggaagcta gagtaagtag
4 981 ttcgccagtt aatagtttgc gcagecatga gattatcaaa
5 041 aaggatcttc acctagatcc ccgcagaaac ggtgctgacc
5101 ccggatgaat gtcagetact aacgeaageg caaagagaaa
tcacaaactc caccccctca
atgatgttaa ggagaaaata
ttaacatgea ccgcatcagg
tegttegget gcggcgagcg
aatcagggga aaaatcgacg
taacgcagga cgcgttgctg ctcaagtcag
ttccccctgg aagctccctc tgtccgcctt tctcccttcg tcagttcggt gtaggtcgtt ccgaccgctg cgccttatcc
tatcgccact ctacagagtt tctgcgctct
ggcsgcagcc cttgaagtgg getgaageca cgctggtagc
aaaaaggatc tcaagaagat aaaactcacg ttaagggatt ttttaaatta aaaatgaagt
acagttacca ccatagttgc
atgettaatc ctgactcccc
gccccagtgc tgcaatgata
taaaccagcc ageeggaagg
tccagtctat taattgttgc
gcaacgttgt tgecattget
ttttcacgta gaaagccagt
gggctatctg gacaagggaa5161 gcaggtagct tgcagtgggc tgggcggttt tatggacagc
52 21 aagcgaaccg gaattgccag gttgggaagc cc仁gcaaagt
52 81 aaactggatg gctttctcgc aggggatcaa gctctgatca
53 41 agagacagga tgaggatcgt ggattgcacg caggttctcc
54 01 ggccgcttgg gtggagaggc caacagacaa tcggctgctc
54 61 tgatgccgcc gtgttccggc gttctttttg tcaagaccga
5 521 cctgtccggt gccctgaatg cggctatcgt ggctggccac
55 81 gacgggcgtt ccttgcgcag gaagcgggaa gggactggct
5641 gctattgggc gaagtgccgg caccttgctc ctgccgagaa
57 01 agtatccatc atggctgatg cttgatccgg ctacctgccc
5761 attcgaccac caagcgaaac actcggatgg aagccggtct
5 821 tgtcgatcag gatgatctgg gcgccagccg aactgttcgc
58 81 caggctcaag gcgagcatgc gtgacccatg gcgatgcctg
5 941 cttgccgaat atcatggtgg ttcatcgact gtggccggct
6 0 01 gggtgtggcg gaccgctatc cgtgatattg ctgaagagct
6 0 61 tggcggcgaa tgggctgacc atcgccgctc ccgattcgca
6121 gcgcatcgcc ttctatcgcc attttgttaa aatttttgtt
6181 aaatcagctc attttttaac catcccttat aaatcaaaag
62 41 aatagaccgc gatagggttg caagagtcca ctattaaaga
63 01 acgtggactc caacgtcaaa gggcgatggc ccac仁acgtg
63 61 aaccatcacc caaatcaagt taaagctcta aatcggaacc
64 21 ctaaagggag cccccgattt ggcgaacgtg gcgagaaagg
64 81 aagggaagaa agcgaaagga aagtgtagcg gtcacgctgc
6 541 gcgtaaccac cacacccgcg ggcgcgtcca ttcgccattc
66 01 aggatcgaat taattcttaa
ttacatggcg ctggggcgcc cgccaaggat ttcgcatgat
atagctagac ctctggtaag ctgatggcgc tgaacaagat
tattcggcta tgactgggca
tgtcagcgca ggggcgcccg
aactgcaaga ctgtgctcga ggcaggatct caatgcggcg atcgcatcga acgaagagca ccgacggcga aaaatggccg aggacatagc gettcctcgt ttcttgacga caataggecg agtgttgttc gggcgaaaaa tttttgcggt agagcttgac
egaggcageg cgttgtcact cctgtcatct gctgcatacg gcgagcacgt tcaggggctc ggatctcgtc cttttctgga gttggctacc getttacggt gttcttctga aaatcggcaa cagtttggaa ccgtctatca cgaggtgccg ggggaaagee
gegggegcta gggcgctggc
cgcttaatgc gccgctacag
SEG工D No:3Seq id no:4
GGCGAATT C GATATCAAGC TTATCGATAC CGTCGACCTC GAGGGGGGGC CCG
SEQ NO:
TCGATGATATCTA
GCCAGTGTGATGGATATCTGCAGAATTCGCCCTT
GAATTCCTGCAGCCCGGGGGATCCACTAGTT
GCCGCCACCGCGGTGGAGCTA Tcgaattcaagcttgtcgactc gaagatcgtaca caggaagtgacaattttcgcgcggttttaggcggatgttg
tagtaaatttgggcgtaaccgagtaagatttggccattttcgcgggaaaactgaataaGCTGCAGGAATTC
GCCGCCACCGCGGTGGAGCTA
SEQ ID:6
taacatcatc
gsgggggtgg
acgtagtagt
taagcgacgg
caggaagtga
gggcgtaacc
agtttgtgac gtggcggsag atgtggcaaa caattttcgc gagtaagatt tctgaataat
cttattttgg gtggcgcggg tgtgatgttg agtgacgttt gcggttttag tggccatttt tttgtgttac
attgaagcca gcgtgggaac caagtgtggc ttggtgtgcg gcggatgttg cgcgggaaaa tcatagcgcg
atatgataat
ggggcgggtg
ggaacacatg ccggtgtaca
tagtaaattt ctgaataaga
ccaacattaccgccatgttg
acattgattat
二aaatggcccgcctggctgaccgc 二atgttcccatagtaacgccaat agggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggca
gggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattgacgtca atgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgggactttccaaaatgtcgtaacaactc
:ccacgctgttttgacctcc atagaagacaccgggaccgatccagcctgactctagCctAGCTCtgaagttggtggtg aggccctgggcaggttggtatcaaggttacaagacaggtttaaggagaccaatagaaa ctgggcatgtggagacagagaagactcttgggtttctgataggcactgactctctctg cctattggtctattttcccacccttaggctgctggtctgagcctagGAGATCTCTCGA GGTCGACGGTATcgatgcca ccATGGAGAA AATCGTCCTG TTGCTCGCTA TTGTGTCTCT
51 AGTGAAGAGC GATCAAATTT GTATCGGCTA CCATGCCAAT AACTCAACAG 101 AGCAGGTCGA TACTATCATG GAGAAAAACG TAACAGTTAC TCATGCCCAA 151 GACATCTTGG AAAAGACCCA CAACGGCAAA CTTTGCGACC TGGATGGAGT
2 01 GAAGCCCCTG ATCCTCCGGG ACTGTTCAGT CGCTGGTTGG CTGCTCGGGA 251 ACCCTATGTG TGATGAGTTT ATCAACGTGC CTGAATGGTC TTACATTGTG
3 01 GAGAAGGCTA ACCCTACCAA TGACCTCTGC TATCCTGGGT CATTTAACGA 351 TTACGAGGAA CTGAAACACC TGTTGTCTAG AATTAACCAC TTTGAAAAGA
57401TACAGATTAT
451GTTAGCTCAG
501GGTCTGGTTA
551ATAACAATAC
601CCGAACGACG
651CATCAGTATT
701CAACACGGAG
751ACAATCTTAA
801CATCGCCCCT
851TTATGAAGTC
901CCAATGGGAG
951GACCATTGGG
1001CAACCGGTCT
1051GGCCTGTTTG
1101GGTCGATGGT
1151ATGCAGCAGA
1201AAGGTTAATA
1251GAGGGAGTTT
1301TGGAAGACGG
1351CTCATGGAGA
1401CCTTTACGAC
1451GGAATGGATG
1501AGTATACGCA
1551GCTCAAACGC
1601ATCAAATCCT
1651ATCATGATGG
1701GTGCCGTATT
ACCCAAGTCT CGTGTCCCTA ATCAAAAAGA CAATCAGGAG CCGCTGAACA GGCACGAGTA CAAAGTAAAT AACCCAACGA GAATACGCCT CGAATTAGAG CCATTAATAG GAGTGCCCAA AAGAAATAGC GCGCGATTGC TGGTACGGAT TAAGGAGAGC GTATTATAGA AACAATCTGG CTTCCTTGAC ACGAGAGGAC AAGGTGAGAC CTTCGAGTTT ACGGGACCTA GAAGAGATAA GTCCATCTAT CTGGTCTGTC TGTATATGAg
AGTTGGAGTG TCTGGGCTCT ACAGTACCTA GACCTGCTCG GACTAGGCTG CTCTGAACCA GGGCAATCTG TGCGATAAAT ATAAGATCGT TATGGCAATT CTCAATGCCC AGTACGTGAA CCGCAGAGAG CGGATTCATC ACCACCATAG ACTCAGAAAG TAAAATGAAC AACGCCGGAT GTGTGGACTT CCTGGATTTC TTCAGCTCCG TACCACAAAT CAATTACCCT GCGGGGTGAA TCCACCGTCG CCTATGGATG c
ATCACGAAGC CCATCCTTCT CCCAACCATC TGTTGTGGGG TATCAGAACC GCGATTAGTG GCAGGATGGA TTCGAGTCCA GAAAAAGGGG GCAACACGAA TTCCATAATA GTCCAACCGC AATCGCGGAG GAGGGAGGCT CAACGAACAG CTATTGACGG ACGCAATTCG CGAAAATCTG ATAATGCAGA CACGATAGCA AGACAACGCC GTGACAATGA CAGTATAGCG ATTGGAATCA CCTCTTCGCT TGTTCCAATG
CTCCTCAGGC TTAGAAATGT AAAAAGTCTT TATCCATCAC CCACTACATA CCAAAGATTG GTTTTTCTGG ATGGCAATTT GACTCTGCAA GTGCCAGACA TTCATCCATT CTGGTCCTCG GAAGAAACGT GGCAGGGTAT GGGTCCGGCT AGTTACAAAC AGGCCGTTGG AATAAGAAAA GCTGCTTGTA ACGTGAAGAA AAGGAGCTGG GTGCATGGAA AAGAGGCTCG ATCGGAACAT GGCCCTCGCT GAAGCCTTCA
TGCCTT
TGCCACTCCCAC
ATTCTGGGGGGT
ATGCGGTGGGCT
CTATGGCTTCTGAGGCGGAAAGAACCAA
CGTCGACGATATCTAAGGGCGAATTCGATATCA
AGCTAGCT Tgtcgactcg aagatctggg cgtggttaag
421 ggtgggaaag aatatataag gtgggggtct tatgtagttt
tgtatctgtt ttgcagcagc
481 cgccgccgcc atgagcacca actcgtttga tggaagcatt
gtgagctcat atttgacaac541 gcgcatgccc ccatgggccg ggctccagca ttgatggtcg
601 ccccgtcctg cccgcaaact accgtgtctg gaacgccgtt
661 ggagactgca gcctccgccg accgcccgcg ggattgtgac
721 tgactttgct ttcctgagcc tcccgttcat ccgcccgcga
781 tgacaagttg acggctcttt acccgggaac ttaatgtcgt
841 ttctcagcag ctgttggatc ctgaaggctt cctcccctcc
901 caatgcggtt taaaacataa tggatttgga tcaagcaagt
961 gtcttgctgt ctttatttag gcccgggacc agcggtctcg
1021 gtcgttgagg gtcctgtgta aggtgactct ggatgttcag
10 81 atacatgggc ataagcccgt cactgcagag cttcatgctg
1141 cggggtggtg ttgtagatga tgggcgtggt gcctaaaaat
12 01 gtctttcagt agcaagctga gtgtaagtgt ttacaaagcg
12 61 gttaagctgg gatgggtgca atcttggact gtatttttag
13 21 gttggctatg ttcccagcca ttgtgcagaa ccaccagcac
13 81 agtgtatccg gtgcacttgg gaaggaaatg cgtggaagaa
14 41 cttggagacg cccttgtgac tcgtccataa tgatggcaat
15 01 gggcccacgg gcggcggcct tcactaacgt catagttgtg
15 61 ttccaggatg agatcgtcat
gggcggaggg tgccagactg
1621 cggtataatg gttccatccg tcacagattt gcatttccca
16 81 cgctttgagt tcagatgggg gcgatgaaga aaacggtttc
1741 cggggtaggg gagatcaget ageagctgeg acttaccgca
18 01 gccggtgggc ccgtaaatca tggtagttaa gagagctgea
18 61 gctgccgtca tccctgagca atgtccctga ctegcatgtt
1921 ttccctgacc aaatccgcca gatagcagtt cttgcaagga
1981 agcaaagttt tteaaeggtt atgettttga gcgtttgacc
2 041 aagcagttcc aggeggtccc aeggcatctc gatccagcat
gggtgcgtca
Ct3Ct3CCtt
ccgcttcagc cgcttgcaag tggcacaatt tgcgccagca
gggttttgcg
ttttttccag ctctggggtg tecagtegta ttgccagggg tacgtgggga tatccctccg gaaatttgtc ctccaagatt gggegaagat aggecatttt gcccaggggc ggatcatgtc gggaagaaag cscctatt3C ggggggecac gaaggegetc tgagaccgtc acagcteggt
gaatgtgatg gacctacgag cgctgcagcc cagtgeaget ggattctttg ggtttctgcc agactctgtt cgegeggtag gacgtggtaa gaggtagcac geaggagege caggcccttg tatgagatgc gggattcatg atgtagctta ttecatgeat atttctggga tacaaagege gtagttaccc tacctgeggg caggttcctg egggtgeaac ttcgttaagc gccgcccagc cgccgtaggc cacctgctct2101 atctcctcgt ttcgcgggtt gcagtagtcg gtgctcgtcc
2161 agacgggcca gggtcatgtc tcgtcagcgt agtctgggtc
22 21 acggtgaagg ggtgcgctcc tgcgcttgag gctggtcctg
22 81 ctggtgctga agcgctgccg ccaggtagca tttgaccatg
2341 gtgtcatagt ccagcccctc gcagcttgcc cttggaggag
24 01 gcgccgcacg aggggcagtg gcttgggcgc gagaaatacc
24 61 gattccgggg agtaggcatc cggtctcgca ttccacgagc
2 521 caggtgagct ctggccgttc ccccatgctt tttgatgcgt
2581 ttcttacctc tggtttccat tgacgaaaag gctgtccgtg
2 641 tccccgtata cagacttgag atagcttgtt gcatgggcgg
2 701 cgatataaaa tgcaaggtgc gcctcgcgca aaaaagaaag
2 761 cacatcgtag tcatgctcat tccggaacca ccacagaaaa
2 821 agacaccatt tttctctcaa
2 881 C3333333C3 ttt333C3tt gaaaaacaac ccttataagc
2 941 ataagacgga ctacggccat actggtcacc gtgattaaaa
3 0 01 agcaccaccg acagctcctc tgtaagactc ggtaaacaca
3 0 61 tcaggttgat teateggtea tagecegggg gaatacatac
3121 ccgcaggcgt agagacaaca ataacaaaat taataggaga
3181 gaaaaacaca taaacacctg aaaatagcac cctcccgctc
3241 cagaacaaca tacagegett cagecttacc agtaaaaaag
3 3 01 assscctatt ssassssesc caatcagtca cagtgtaaaa
33 61 aagggccaag tgeagagega tgacgtaacg gttaaagtcc
3421 acaaaaaaca cccagaaaac
34 81 cacaacttcc teaaategtc cgtaacttcc cattttaaga
3 541 aaactacaat tcccascaca aacctacgtc acccgccccg
3 601 ttcccacgcc ccgcgccacg ttatcatatt ggcttcaatc
ggggeggett tcgctgtacg tttccacggg cgcagggtcc gggctgcgcg ctggccaggg
gtcttcgccc cgcggcgtgg cagacttttg cgcgccgcag
ggggtcaaaa
gagccggtgt agggagttta tgctcaaaaa
tgcgcgtcgg cccttggcgc sgggegtaga gccccgcaga accaggtttc ccacgctcgg aacgaattca atcaggcaaa gcaggtaagc
acatgtctgc gggtttctgc
agaagectgt cttacaacag
gccggcgtga ggtcatgtcc
ccgtaaaaaa ggagtcataa
gtgctaaaaa gcgaccgaaa
ttacagcccc
cataggaggt ctgcctaggc
cacagcggca gectaacagt
cactcgacac ggcaccagct
gtatatatag cgcacgcgaa
cctacgccca
acttccgttt tcccacgtta
tacaagttac tccgccctaa
tcacaasctc ca_ccccctca3 661 caaaataagg tatattattg tggatccata tgcggtgtga
3 721 aataccgcac agatgcgtaa cgctcttccg cttcctcgct
3 7 81 cactgactcg ctgcgctcgg gtatcagctc actcaaaggc
3 841 ggtaatacgg ttatccacag aagaacatgt gagcaaaagg
3 901 ccagcaaaag gccaggaacc gcgtttttcc ataggctccg
3 961 cccccctgac gagcatcaca aggtggcgaa acccgacagg
4 021 actataaaga taccaggcgt gtgcgctctc ctgttccgac
4 081 cctgccgctt accggatacc ggaagcgtgg cgctttctca
4141 tagctcacgc tgtaggtatc cgctccaagc tgggctgtgt
42 01 gcacgaaccc cccgttcagc ggtaactatc gtcttgagtc
42 61 caacccggta agacacgact actggtaaca ggattagcag
43 21 agcgaggtat gtaggcggtg tggcctaact acggctacac
43 81 tagaaggaca gtatttggta gttacctteg gaaaaagagt
44 41 tggtagctct tgatceggea ggtggttttt ttgtttgcaa
4 5 01 gcagcagatt aegegcagaa cctttgatct tttetaeggg
4 561 gtctgacget cagtggaacg ttggtcatga gattatcaaa
4 621 aaggatcttc acctagatcc tttaaatcaa tctaaagtat
4 6 81 atatgagtaa acttggtctg agtgaggcac ctatctcagc
4 741 gatctgtcta tttcgttcat gtcgtgtaga taactacgat
4 8 01 aegggaggge ttaccatctg ccgcgagacc cacgetcacc
48 61 ggctccagat ttatcagcaa gccgagcgca gaagtggtcc
4 921 tgcaacttta tccgcctcca egggaagcta gagtaagtag
4 981 ttcgccagtt aatagtttgc geagecatga gattatcaaa
5 041 aaggatcttc acctagatcc ccgcagaaac ggtgctgacc
5101 ccggatgaat gtcagetact aacgeaageg caaagagaaa
5161 gcaggtagct tgcagtgggc tgggcggttt tatggacagc
atgatgttaa
tegttegget aatcagggga gtaaaaaggc aaaatcgacg ttccccctgg tgtccgcctt tcagttcggt ccgaccgctg tatcgccact ctacagagtt
ttaacatgea ccgcatcagg gcggcgagcg taacgcagga cgcgttgctg ctcaagtcag aagctccctc tctcccttcg gtaggtcgtt cgccttatcc ggcagcagcc cttgaagtgg
tctgcgctct getgaageca aacaaaccac cgctggtage
aaaactcacg
ttaagggatt aaaatgaagt
acagttacca atgettaate
ccatagttgc gccccagtgc
ctgactcccc tgcaatgata
taaaccagcc ageeggaagg
tccagtctat taattgttgc
gcaacgttgt tgccattgct
ttttcacgta gaaagccagt
gggctatctg gacaagggaa
ttacatggcg atagctagac52 21 aagcgaaccg gaattgccag gttgggaagc cctgcaaagt
52 81 aaactggatg gctttctcgc aggggatcaa gctctgatca
53 41 agagacagga tgaggatcgt ggattgcacg caggttctcc
54 01 ggccgcttgg gtggagaggc caacagacaa tcggctgctc
54 61 tgatgccgcc gtgttccggc gttctttttg tcaagaccga
5 521 cctgtccggt gccctgaatg cggctatcgt ggctggccac
55 81 gacgggcgtt ccttgcgcag gaagcgggaa gggactggct
5 641 gctattgggc gaagtgccgg caccttgctc ctgccgagaa
57 01 agtatccatc atggctgatg cttgatccgg ctacctgccc
57 61 attcgaccac caagcgaaac actcggatgg aagccggtct
5821 tgtcgatcag gatgatctgg gcgccagccg aactgttcgc
58 81 caggctcaag gcgagcatgc gtgacccatg gcgatgcctg
5 941 cttgccgaat atcatggtgg ttcatcgact gtggccggct
60 01 gggtgtggcg gaccgctatc cgtgatattg ctgaagagct
60 61 tggcggcgaa tgggctgacc atcgccgctc ccgattcgca
6121 gcgcatcgcc ttctatcgcc attttgttaa aatttttgtt
6181 aaatcagctc attttttaac catcccttat aaatcaaaag
62 41 aatagaccgc gatagggttg caagagtcca ctattaaaga
63 01 acgtggactc caacgtcaaa gggcgatggc ccactacgtg
63 61 aaccatcacc caaatcaagt taaagctcta aatcggaacc
64 21 ctaaagggag cccccgattt ggcgaacgtg gcgagaaagg
64 81 aagggaagaa agcgaaagga aagtgtagcg gtcacgctgc
6541 gcgtaaccac cacacccgcg ggcgcgtcca ttcgccattc
6 6 01 aggatcgaat taattcttsa
ctggggcgcc cgccaaggat ttcgcatgat tattcggcta tgtcagcgca aactgcaaga ctgtgctcga ggcaggatct caatgcggcg atcgcatcga acgaagagca ccgacggcga aaaatggccg aggacatagc gcttcctcgt ttcttgacga caataggccg agtgttgttc
tttttgcggt agagcttgac gcgggcgcta cgcttaatgc
t
ctctggtaag ctgatggcgc tgaacaagat tgactgggca
ggggcgcccg
cgaggcagcg cgttgtcact cctgtcatct gctgcatacg gcgagcacgt tcaggggctc ggatctcgtc cttttctgga gttggctacc gctttacggt gttcttctga aaatcggcaa cagtttggaa ccgtctatca cgaggtgccg ggggaaagcc gggcgctggc gccgctacag
SEQ工D:7
taacatcatc aataatatac cttattttgg attgaagcca atatgataat gagggggtgg agtttgtgac gtggcgcggg gcgtgggaac ggggcgggtg<formula>formula see original document page 63</formula>13 51 CTCATGGAGA
14 01 CCTTTACGAC
14 51 GGAATGGATG
15 01 AGTATACGCA 1551 GCTCAAACGC
16 01 ATCAAATCCT 1651 ATCATGATGG
17 01 GTGCCGTATT
ACGAGAGGAC AAGGTGAGAC CTTCGAGTTT ACGGGACCTA GAAGAGATAA GTCCATCTAT CTGGTCTGTC TGTATATGAg
CCTGGATTTC TTCAGCTCCG TACCACAAAT CAATTACCCT GCGGGGTGAA TCCACCGTCG CCTATGGATG c
CACGATAGCA AGACAACGCC GTGACAATGA CAGTATAGCG ATTGGAATCA CCTCTTCGCT TGTTCCAATG
ACGTGAAGAA AAGGAGCTGG GTGCATGGAA AAGAGGCTCG ATCGGAACAT GGCCCTCGCT GAAGCCTTCA
TGCCTT
TGCCACTCCCAC
ATTCTGGGGGGT
ATGCGGTGGGCT
CTATGGCTTCTGAGGCGGAAAGAACCAA
GGCGCGGGGCCAATCAGCGTGCGCCGTTCCGAAAGTTGCCTTTTATGGCTCGAGCGGC
TGATATCTAAAGGGCGAATTCCTGCAGgaaacgatatgggctgaatacggatccgtat tcagcccatat
TGGTTTTTTGTGTGGCGGCCGCCACCGCGGTGG
agctTgtcgactcg aagatctggg cgtggttaag
421 ggtgggaaag aatatataag tgtatctgtt ttgcagcagc
481 cgccgccgcc atgagcacca gtgagctcat atttgacaac
541 gcgcatgccc ccatgggccg ggctccagca ttgatggtcg
601 ccccgtcctg cccgcaaact accgtgtctg gaacgccgtt
661 ggagactgca gcctccgccg accgcccgcg ggattgtgac
721 tgactttgct ttcctgagcc tcccgttcat ccgcccgcga
781 tgacaagttg acggctcttt acccgggaac ttaatgtcgt
841 ttctcagcag ctgttggatc ctgaaggctt cctcccctcc
901 caatgcggtt taaaacataa tggatttgga tcaagcaagt
961 gtcttgctgt ctttatttag gcccgggacc agcggtctcg
1021 gtcgttgagg gtcctgtgta aggtgactct ggatgttcag
1081 atacatgggc ataagcccgt cactgcagag cttcatgctg
gtgggggtcttatgtagttt
actcgtttgatggaagcatt
gggtgcgtcagaatgtgatg
Ct3Ct6LCCt tgacctacgag
ccgcttcagccgctgcagcc
cgcttgcaagcagtgcagct
tggcacaattggattctttg
tgcgccagcaggtttctgcc
agactctgtt
gggttttgcgcgcgcggtag
ttttttccaggacgtggtaa
ctctggggtggaggtagcac
641141 cggggtggtg ttgtagatga tgggcgtggt gcctaaaaat
12 01 gtctttcagt agcaagctga gtgtaagtgt ttacaaagcg
12 61 gttaagctgg gatgggtgca atcttggact gtatttttag
13 21 gttggctatg ttcccagcca ttgtgcagaa ccaccagcac
13 81 agtgtatccg gtgcacttgg gaaggaaatg cgtggaagaa
14 41 cttggagacg cccttgtgac tcgtccataa tgatggcaat
15 01 gggcccacgg gcggcggcct tcactaacgt catagttgtg
1561 ttccaggatg agatcgtcat gggcggaggg tgccagactg
1621 cggtataatg gttccatccg tcacagattt gcatttccca
16 81 cgctttgagt tcagatgggg gcgatgaaga aaacggtttc
1741 cggggtaggg gagatcaget ageagctgeg acttaccgea
18 01 gccggtgggc ccgtaaatca tggtagttaa gagagctgea
18 61 gctgccgtca tccctgagca atgtccctga ctcgcatgtt
1921 ttccctgacc aaatccgcca gatagcagtt ettgeaagga
1981 agcaaagttt ttcaacggtt atgettttga gcgtttgacc
2 041 aagcagttcc aggcggtccc acggcatctc gatccagcat
2101 atctcctcgt ttcgcgggtt gcagtagteg gtgctcgtcc
2161 agaegggeca gggtcatgtc tegtcagegt agtctgggtc
2221 aeggtgaagg ggtgcgctcc tgegettgag gctggtcctg
22 81 ctggtgctga agcgctgccg ccaggtagca tttgaccatg
2 341 gtgtcatagt ccagcccctc gcagcttgee cttggaggag
24 01 gcgccgcacg aggggcagtg gettgggege gagaaatacc
24 61 gattcegggg agtaggcatc eggtetcgea ttccacgagc
2 521 caggtgagct ctggccgttc ccccatgctt tttgatgcgt
2581 ttcttacctc tggtttccat tgacgaaaag gctgtccgtg
2 641 tccccgtata cagacttgag atagcttgtt geatgggegg
tecagtegta ttgccagggg tacgtgggga tatccctccg
gcaggagcgc caggcccttg tatgagatgc gggattcatg
gaaatttgtc atgtagctta
ctccaagatt gggegaagat aggecatttt gcccaggggc ggatcatgtc gggaagaaag cacctatt3C
ttccatgeat atttctggga tacaaagege gtagttaccc tacctgeggg caggttcctg egggtgeaac
ggggggecac ttegttaage
gaaggegetc tgagaccgtc acagcteggt ggggeggett tttecaeggg gggctgcgcg gtcttcgccc cgcggcgtgg cagacttttg cgcgccgcag ggggtcaaaa
gccgcccagc cgccgtaggc cacctgctct tcgctgtacg cgcagggtcc ctggccaggg tgegegtegg cccttggcgc
gccccgcaga accaggtttc
gagccggtgt ccacgctegg
agggagttta aacgaattca，2 701 cgatataaaa tgcaaggtgc gcctcgcgca aaaaagaaag
2 7 61 cacatcgtag teatgetcat tccggaacca ccacagaaaa
2 821 agacaccatt tttctctcaa
2 881 c3333333ttt333C3tt gaaaaacaac ccttataagc
2 941 ataagaegga ctacggccat actggtcacc gtgattaaaa
3 001 agcaccaccg acagctcctc tgtaagactc ggtaaacaca
3 0 61 tcaggttgat teateggtea tagecegggg gaatacatac
3121 ccgcaggcgt agagacaaca ataacaaaat taataggaga
3181 gaaaaacaca taaacacctg aaaatagcac cctcccgctc
3241 cagaacaaca tacagegett cagccttacc agtaaaaaag
33 01 3333cctstt W33333C己c caatcagtca cagtgtaaaa
3 3 61 aagggccaag tgeagagega tgacgtaacg gttaaagtcc
34 21 acaaaaaaca cccagaaaac
34 81 cacaacttcc teaaategtc cgtaacttcc cattttaaga
3 541 assctacsat tcccascac3 aacctacgtc acccgccccg
3 6 01 ttcccacgcc ccgcgccacg ttatcatatt ggcttcaatc
3 661 caaaataagg tatattattg tggatccata tgcggtgtga
3 721 aataccgcac agatgegtaa cgctcttccg cttcctcgct
3 781 cactgactcg ctgcgctcgg gtatcagctc actcaaaggc
3 841 ggtaataegg ttatccacag aagaacatgt gagcaaaagg
3 9 01 ccagcaaaag gccaggaacc gcgtttttcc ataggctccg
3 961 cccccctgac gagcatcaca aggtggcgaa acccgacagg
4 021 actataaaga taccaggegt gtgcgctctc ctgttccgac
4 0 81 cctgccgctt aceggatacc ggaagcgtgg cgctttctca
4141 tagctcacgc tgtaggtatc cgetccaagc tgggctgtgt
42 01 gcacgaaccc cccgttcagc ggtaactatc gtcttgagtc
tgctcaaaaa gcagataaag acatgtctgc
gcaggtaagc
gggtttctgc
agaagectgt cttacaacag gccggcgtga ccgtaaaaaa ggtcatgtcc ggagtcataa gtgctaaaaa gcgaccgaaa ttacagcccc cataggaggt
cacagcggca
ctgcctaggc gectaacagt
cactcgacac ggcaccagct
gtatatatag gactaaaaaa
cgcacgcgaa acttccgttt tacaagttac
cctacgccca tcccacgtta tccgccctaa
tcacaaactc caccccctca atgatgttaa ttaacatgea ggagaaaata cegcatcagg tegttegget gcggcgagcg aatcagggga taacgcagga gtaaaaaggc cgcgttgctg aaaatcgacg ctcaagtcag ttccccctgg aagctccctc tgtccgcctt tctcccttcg tcagtteggt gtaggtcgtt ccgaccgctg cgccttatcc42 61 caacccggta agacacgact actggtaaca ggattagcag
43 21 agcgaggtat gtaggcggtg tggcctaact acggctacac
43 81 tagaaggaca gtatttggta gttaccttcg gaaaaagagt
44 41 tggtagctct tgatccggca ggtggttttt ttgtttgcaa
4 501 gcagcagatt acgcgcagaa cctttgatct tttctacggg
4561 gtctgacgct cagtggaacg ttggtcatga gattatcaaa
4 621 aaggatcttc acctagatcc tttaaatcaa tctaaagtat
4 681 atatgagtaa acttggtctg agtgaggcac ctatctcage
4 741 gatctgtcta tttcgttcat gtcgtgtaga taactacgat
48 01 aegggaggge ttaccatctg ccgcgagacc cacgctcacc
48 61 ggctccagat ttatcagcaa gccgagcgca gaagtggtcc
4 921 tgcaacttta tccgcctcca egggaagcta gagtaagtag
4 981 ttcgccagtt aatagtttgc geagecatga gattatcaaa
5 041 aaggatcttc acctagatcc ccgcagaaac ggtgctgacc
5101 ccggatgaat gtcagetact aacgeaageg caaagagaaa
5161 gcaggtagct tgcagtgggc tgggcggttt tatggacagc
52 21 aagcgaaccg gaattgccag gttgggaagc ectgeaaagt
52 81 aaactggatg gctttctcgc aggggatcaa gctctgatca
53 41 agagacagga tgaggatcgt ggattgcacg caggttctcc
54 01 ggccgcttgg gtggagaggc caacagacaa teggctgetc
54 61 tgatgccgcc gtgttccggc gttctttttg tcaagaccga
5521 cctgtccggt gecctgaatg eggctategt ggctggccac
55 81 gaegggegtt ccttgcgcag gaagcgggaa gggactggct
5 641 gctattgggc gaagtgccgg caccttgctc ctgccgagaa
57 01 agtatccatc atggctgatg cttgatcegg ctacctgccc
5761 attcgaccac caagegaaac acteggatgg aagccggtct
tatcgccactggcagcagcc
ctacagagttcttgaagtgg
tctgcgctctgetgaageca
cgctggtagc
aaaaaggatctcaagaagat
aaaactcacgttaagggatt
aaaatgaagt
acagttaccaatgettaate
ccatagttgcctgactcccc
gccccagtgctgcaatgata
taaaccagccageeggaagg
tccagtctattaattgttgc
gcaacgttgttgecattget
ttttcaegta
gggctatctg
ttacatggcgatsgctagac
ctggggcgccctctggtaag
cgecaaggatctgatggcgc
ttcgcatgattgaacaagat
tatteggctatgactgggca
tgtcagegeaggggcgcccg
aactgeaagaegaggcageg
ctgtgctcgacgttgtcact
ggcaggatctcctgtcatct
caatgeggeggctgcatacg
ategcategagcgagcacgt5 821 tgtcgatcag gatgatctgg gcgccagccg aactgttcgc
58 81 caggctcaag gcgagcatgc gtgacccatg gcgatgcctg
5 941 cttgccgaat atcatggtgg ttcatcgact gtggccggct
6001 gggtgtggcg gaccgctatc cgtgatattg ctgaagagct
60 61 tggcggcgaa tgggctgacc atcgccgctc ccgattcgca
6121 gcgcatcgcc ttctatcgcc attttgttaa aatttttgtt
6181 aaatcagctc attttttaac catcccttat aaatcaaaag
62 41 aatagaccgc gatagggttg caagagtcca ctattaaaga
63 01 acgtggactc caacgtcaaa gggcgatggc ccactacgtg
63 61 aaccatcacc caaatcaagt taaagctcta aatcggaacc
64 21 ctaaagggag cccccgattt ggcgaacgtg gcgagaaagg
64 81 aagggaagaa agcgaaagga aagtgtagcg gtcacgctgc
6541 gcgtaaccac cacacccgcg ggcgcgtcca ttcgccattc
66 01 aggatcgaat taattcttaa
acgaagagca ccgacggcga aaaatggccg
gcttcctcgt ttcttgacga caataggccg agtgttgttc
tttttgcggt agagcttgac gcgggcgcta cgcttaatgc t
tcaggggctc ggatctcgtc cttttctgga gttggctacc gctttacggt gttcttctga aaatcggcaa cagtttggaa ccgtctatca cgaggtgccg ggggaaagcc gggcgctggc gccgctacag
SEQ ID:8
SE(2工D: SEG工D:
SE(2 ID SEG工D
11 CCTAATAATTAT CAAAATGTggatccACATTTTGATAATTATTAGG
12 CCTAATAATTAT CAAAATGTaattACATTTTGATAATTATTAGG
SEQ工D: 13 (DSlc)
1 taacatcatc aataatatac cttattttgg attgaagcca atatgataat gsgggggtgg
61 agtttgtgac gtggcgcggg gcgtgggaac ggggcgggtg acgtagtagt gtggcggaag
121 tgtgatgttg caagtgtggc ggaacacatg taagcgacgg stgtggcaaa agtgacgttt
181 ttggtgtgcg ccggtgtaca caggaagtga caattttcgc gcggttttag gcggatgttg
241 tagtaaattt gggcgtaacc gagtaagatt tggccatttt cgcgggaaaa ctgaataaga
3 01 ggaagtgaaa tctgaataat tttgtgttac tcatagcgcg<formula>formula see original document page 69</formula>aacattccgt ccattcaatc cagaggtcta tttggagcca
1081 ttgccggttt tattgaaggg ggatggactg gaatgataga tggatggtac ggttatcatc 1141 atcagaatga aatgccatta 12 01 acgggattac ttcacagctg
12 61 tgggtaaaga aaagttgatg 1321 atggatttct gaaaatgaaa
13 81 ggactctgga aaaagccaat
14 41 taaagaataa aagtgtgaca 1501 atgaatgcat tcagaagagt 1561 caaagttgaa atctatcaga 1621 ttctggcgat ctgggggcaa 1681 tcagtttctg tgagattaga
1741 atttcagaga tatgaggaaa aacacccttg tttctact
acagggatcaggctatgcagcggatcaaaa
aactctgttagaacattcaa
ttagaaaaaaggatggaaaattt333t33a
ggacatttggacatataatgcagaattgttagttctactg
tttccatgactcaaatgtgaagaatctgtatgagaaagta
tgccaaagaaatcggaaatggatgttttgagttctaccac
ggaaagtgtaagaaatgggacttatgattatcccaaatat
cagggaaaaggtagatggagtgaaattggastcaatgggg
ctactcaactgtcgccagttcactggtgcttttggtctcc
gatgtgttctaatggatctttgcagtgcagaatatgcatc
GGATGG GCGGCCGCtcgagcct aagcttctag ataagatatc cgatccaccg gatctagata actgatcata
1021 atcagecata ccacatttgt 333aLCctccc 3C3cctcccc
10 81 ctgaacctga aacataaaat acttgtttat tgcagcttat
1141 aatggttaca aataaagcaa ataaagcatt tttttcactg
12 01 cattctagtt gtggtttgtc aacgeggate tgggcgtggt
12 61 taagggtggg aaagaatata gttttgtatc tgttttgcag
13 21 cagccgccgc cgccatgage cattgtgage tcatatttga
13 81 caacgcgcat gcccccatgg gatgggctcc agcattgatg
14 41 gtcgcccegt cctgcccgca egagacegtg tctggaacgc
15 01 cgttggagac tgcagcctcc agccaccgcc cgegggattg
15 61 tgactgactt tgctttcctg agcttcccgt tcatccgccc
1621 gcgatgacaa gttgaegget tttgaccegg gaacttaatg
agaggtttta ettgetttaa
gaatgeaatt gttgttgtta
tagcatcaca aatttcacaa
caaactcatc aatgtatctt
taaggtgggg gtcttatgta
accaactcgt ttgatggaag
gccggggtgc gtcagaatgt
aactctacta ccttgaccta
gccgccgctt cagccgctgc
agcccgcttg caagcagtgc
cttttggcac aattggattc
701681 tcgtttctca gcagc仁gttg tgccctgaag gcttcctccc
1741 ctcccaatgc ggtttaaaac tgtttggatt tggatcaagc
1801 aagtgtcttg ctgtctttat gtaggcccgg gaccagcggt
1861 ctcggtcgtt gagggtcctg gtaaaggtga ctctggatgt
1921 tcagatacat gggcataagc gcaccactgc agagcttcat
1981 gctgcggggt ggtgttgtag gcgctgggcg tggtgcctaa
2 041 aaatgtcttt cagtagcaag cttggtgtaa gtgtttacaa
2101 agcggttaag ctgggatggg atgcatcttg gactgtattt
2161 ttaggttggc tatgttccca catgttgtgc agaaccaeca
22 21 gcacagtgta tccggtgcac cttagaagga aatgcgtgga
22 81 agaacttgga gacgcccttg gcattegtec ataatgatgg
2341 caatgggccc aegggeggeg gggatcacta aegtcatagt
24 01 tgtgttccag gatgagateg gegegggegg agggtgccag
24 61 actgeggtat aatggttcca accctcacag atttgeattt
2 521 cccacgcttt gagttcagat eggggegatg aagaaaaegg
2 581 tttccggggt aggggagatc cctgagcagc tgegacttac
2 641 cgcagccggt gggcccgtaa caactggtag ttaagagagc
2 701 tgcagctgcc gtcatccctg aagcatgtcc ctgactcgca
2 7 61 tgttttccct gaccaaatcc cagegatage agttcttgca
2 821 aggaagcaaa gtttttcaac aggcatgett ttgagcgttt
2 8 81 gaccaagcag ttccaggegg ctetaeggea tctcgatcca
2 941 gcatatctcc tcgtttcgcg tacggcagta gtcggtgctc
3 0 01 gtccagaegg gecagggtea gtcctcgtca gcgtagtctg
3 0 61 ggtcaeggtg aaggggtgcg agggtgeget tgaggctggt
3121 cctgctggtg ctgaageget teggecaggt agcatttgac
3181 catggtgtca tagtccagcc gcgcgcagct tgecettgga
gatctgcgcc
ttaggggttt tgtatttttt ccgtctctgg atgatccagt ctgattgeca tgcatacgtg gccatatccc ttgggaaatt tgacctccaa gectgggega teataggeca tccggcccag
agctgggaag atcacaccta sgcagggggg geca^gasgge ggtttgagac tcccacagct ggttggggcg tgtctttcca ctccgggctg
cctccgcggc
agcaggtttc aaccagactc tgcgcgcgcg ecaggaegtg ggtggaggta cgtagcagga ggggcaggee gggatatgag teeggggatt tgtcatgtag gattttccat agatatttct
gggcgtagtt tgtctacctg aaagcaggtt ttaccgggtg ccacttcgtt gctcgccgcc cgtccgccgt cggtcacctg getttegctg egggegcagg cgcgctggcc gccctgcgcg gtggcccttg3241 ggaggcgccg cacgaggggc tagagcttgg gcgcgagaaa
3 3 01 taccgattcc ggggagtagg cagacggtct cgcattccac
33 61 gagccaggtg agctctggcc tttcccccat gctttttgat
34 21 gcgtttctta cctctggttt tcggtgacga aaaggctgtc
34 81 cgtgtccccg tatacagact ttcaatagct tgttgcatgg
3 541 gcggcgatat aaaatgcaag caaagcctcg cgcaaaaaag
3 6 01 aaagcacatc gtagtcatgc aagctccgga acipaccacag
3 661 aaaaagacac catttttctc ctgcataaac acaaaataaa
3 721 ataacaaaaa aacatttaaa acaggaaaaa caacccttat
3 781 aagcataaga cggactacgg aaaaactggt caccgtgatt
3 841 aaaaagcacc accgacagct ataatgtaag actcggtaaa
3 901 cacatcaggt tgattcatcg gaaatagccc gggggaatac
3 961 atacccgcag gcgtagagac aggtataaca aaattaatag
4 021 gagagaaaaa cacataaaca aggcaaaata gcaccctccc
4 0 81 gctccagaac aacatacagc cagtcagcct taccagtaaa
4141 aaagaaaacc tattaaaaaa agctcaatca gtcacagtgt
42 01 aaaaaagggc caagtgcaga aaaatgacgt aacggttaaa
42 61 gtccacaaaa aacacccaga cccagaaacg aaagccaaaa
43 21 aacccacsac ttcctcsaait gttacgtaac ttcccatttt
43 81 aagaaaacta caattcccaa ctaaaaccta cgtcacccgc
4441 cccgttccca cgccccgcgc ctcattatca tattggcttc
4 5 01 aatccaaaat aaggtatatt tgcatggatc catatgcggt
4561 gtgaaatacc gcacagatgc caggcgctct tccgcttcct
4 621 cgctcactga ctcgctgcgc agcggtatca gctcactcaa
4 6 81 aggcggtaat acggttatcc aggaaagaac atgtgagcaa
4 741 aaggccagca aaaggccagg gctggcgttt ttccataggc
agtgcagact catccgcgcc gttcggggtc ccatgagccg tgsgagggag gtgctgctca tcatgcagat tcaaacatgt cattagaagc ccatgccggc cctcggtcat gtcagtgcta aacattacag cctgaaaaac gcttcacagc acaccactcg gcgagtatat aaaccgcacg cgtcacttcc cacatacaag cacgtcacaa attgatgatg gtaaggagaa tcggtcgttc acagaatcag aaccgtaaaa
tttgagggcg gcsggccccg aaaaaccagg gtgtccacgc tttaaacgaa
aaaggcaggt ctgcgggttt ctgtcttaca gtgaccgtaa gtccggagtc aaaagcgacc cccccatagg cctcctgcct ggcagcctaa acacggcacc ataggactaa cgaacctacg gttttcccac ttactccgcc
3CtCC3CCCC
aataccgcat ggctgcggcg gggataacgc aggccgcgtt48 01 tccgcccccc tgacgagcat tcagaggtgg cgaaacccga
4 861 caggactata aagataccag cctcgtgcgc tctcctgttc
4 921 cgaccctgcc gcttaccgga ttcgggaagc gtggcgcttt
4 9 81 ctcatagctc acgctgtagg cgttcgctcc aagctgggct
5 041 gtgtgcacga accccccgtt atccggtaac tatcgtcttg
5101 agtccaaccc ggtaagacac agccactggt aacaggatta
5161 gcagagcgag gtatgtaggc gtggtggcct aactacggct
52 21 acactagaag gacagtattt gccagttacc ttcggaaaaa
52 81 gagttggtag ctcttgatcc tagcggtggt ttttttgttt
5341 gcaagcagca gattacgcgc agatcctttg atcttttcta
54 01 cggggtctga_ cgctcaigtgg gattttggtc atgagattat
54 61 caaaaaggat cttcacctag
5521 gtatatatga gtaaacttgg aatcagtgag gcacctatct
55 81 cagcgatctg tctatttcgt ccccgtcgtg tagataacta
5 641 cgatacggga gggcttacca gataccgcga gacccacgct
5 701 caccggctcc agatttatca aagggccgag cgcagaagtg
5761 gtcctgcaac tttatccgcc ttgccgggaa gctagagtaa
5821 gtagttcgcc agttaatagt tgctgcagcc atgagattat
5881 caaaaaggat cttcacctag cagtccgcag aaacggtgct
5 941 gaccccggat gaatgtcagc ggaaaacgca agcgcaaaga
6 0 01 gaaagcaggt agcttgcagt agactgggcg gttttatgga
6 0 61 cagcaagcga accggaattg taaggttggg aagccctgca
6121 aagtaaactg gatggctttc gcgcagggga tcaagctctg
6181 atcaagagac aggatgagga agatggattg cacgcaggtt
62 41 ctccggccgc ttgggtggag ggcacaacag acaatcggct
63 01 gctctgatgc cgccgtgttc cccggttctt tttgtcaaga
gcgtttcccc tacctgtccg tatctcagtt cagcccgacc gacttatcgc ggtgctacag ggtatctgcg ggcaaacaaa agaaaaaaag aacgaaaact atccttttaa tctgacagtt tcatccatag tctggcccca gcaataaacc tccatccagt t tgcgcaa_cg atccttttca tactgggcta gggcttacat ccagctgggg tcgccgccaa tcgtttcgca aggctatteg eggctgtcag
gacgctcaag ctggaagctc cctttctccc cggtgtaggt gctgcgcctt cactggcagc agttcttgaa ctctgctgaa ccaccgctgg gatctcaaga caegttaagg attaaaaatg accaatgett ttgectgact gtgctgcaat agccagccgg ctattaattg ttgttgccat egtagaaage tctggacaag ggegataget cgccctctgg ggatctgatg tgattgaaca getatgactg cgcaggggcg63 61 ccgacctgtc cggtgccctg agcgcggcta tcgtggctgg
64 21 ccacgacggg cgttccttgc cactgaagcg ggaagggact
64 81 ggctgctatt gggcgaagtg atctcacctt gctcctgccg
6541 agaaagtatc catcatggct tacgcttgat ccggctacct
66 01 gcccattcga ccaccaagcg acgtactcgg atggaagccg
6661 gtcttgtcga tcaggatgat gctcgcgcca gccgaactgt
6721 tcgccaggct caaggcgagc cgtcgtgacc catggcgatg
6781 cctgcttgcc gaatatcatg tggattcatc gactgtggcc
6841 ggctgggtgt ggcggaccgc tacccgtgat attgctgaag
6 9 01 agcttggcgg cgaatgggct cggtatcgcc gctcccgatt
6 961 cgcagcgcat cgccttctat ctgaattttg ttaaaatttt
7 021 tgttaaatca gctcattttt gcaacatccc ttataaatca
7081 aaagaataga ccgcgatagg ggaacaagag tccactatta
7141 aagaacgtgg actccaacgt atcagggcga tggcccacta
72 01 cgtgaaccat cacccaaatc gccgtaaagc tctaaatcgg
72 61 aaccctaaag ggagcccccg agccggcgaa cgtggcgaga
73 21 aaggaaggga agaaagcgaa tggcaagtgt agcggtcacg
73 81 ctgcgcgtaa ccaccacacc acagggcgcg tccattcgcc
7441 attcaggatc gaattaattc
aatgaactgcaagacgaggc
gcagctgtgctcgacgttgt
ccggggcaggatctcctgtc
gatgcaatgcggcggctgca
tcgagcgagc
ctggacgaagagcatcaggg
atgcccgacggcgaggatct
gtggaaaatggccgcttttc
tatcaggacatagcgttggc
gaccgcttcctcgtgcttta
cgccttcttgacgagttctt
taaccaataggccgaaatcg
gttgagtgttgttccagttt
caaagggcgaaaaaccgtct
aagttttttgcggtcgaggt
atttagagcttgacggggaa
aggagcgggcgctagggcgc
cgcgcgcttaatgcgccgct
SEQ工D:14 DS2/3-luc
gagggggtgg acgtagtagt taagcgacgg caggaagtga gggcgtaacc
agtttgtgac gtggcggaag atgtggcaaa caattttcgc gagtaagatt tctgaataat
cttattttgg gtggcgcggg
tgtgatgttg agtgacgttt gcggttttag tggccatttt tttgtgttac
attgaagcca gcgtgggaac
caagtgtggc ttggtgtgcg gcggatgttg cgcgggaaaa tcatagcgcg
atatgataat ggggcgggtg
ggaacacatg ccggtgtaca
tagtaaattt ctgaataaga
catgtccaacattaccgccatgttg caattacggggtcattagtteatagegtac
:caatgacggtaaat 二a
gggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattgacgtca
:ctatataagcaga
gctcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctcc
aggccctgggcaggttggtatcaaggttacaagacaggtttaaggagaccaatagaaa ctgggcatgtggagacagagaagactcttgggtttctgataggcactgactctctctg cctattggtctattttcccacccttaggctgctggtctgagcctagGAGATCTCTCGA
TAGAGCrCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTT
TGCCACTCCCAC
ATTCTGGGGGGT
ATGCGGTGGGCT
aagatctggg
cgtggttaag
421 ggtgggaaag aatatataag tgtatctgtt ttgcagcagc
4 81 cgccgccgcc atgagcacca gtgagctcat atttgacaac
541 gcgcatgccc ccatgggccg ggctccagca ttgatggtcg
601 ccccgtcctg cccgcaaact accgtgtctg gaacgccgtt
6 61 ggagactgca gcctccgccg accgcccgcg ggattgtgac
721 tgactttgct ttcctgagcc tcccgttcat ccgcccgcga
7 81 tgacaagttg acggctcttt acccgggaac ttaatgtcgt
841 ttctcagcag ctgttggatc ctgaaggctt cctcccctcc
901 caatgcggtt taaaacataa tggatttgga tcaagcaagt
961 gtcttgctgt ctttatttag gcccgggacc agcggtctcg
gtgggggtct tatgtagttt actcgtttga tggaagcatt gggtgcgtca gaatgtgatg ctactacctt gacctacgag ccgcttcagc cgctgcagcc cgcttgcaag cagtgcagct tggcacaatt ggattctttg tgcgccagca ggt11ctgcc ataaaaaacc agactctgtt gggttttgcg cgcgcggtag
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Q<formula>formula see original document page 76</formula>2581 ttcttacctc tggtttccat tgacgaaaag gctgtccgtg
2 641 tccccgtata cagacttgag atagcttgtt gcatgggcgg
2 701 cgatataaaa tgcaaggtgc gcctcgcgca aaaaagaaag
2 761 cacatcgtag teatgetcat tccggaacca ccacagaaaa
2 821 agacaccatt tttctctcaa
2 8 81 casaaaiaacs ttt333C3tt gaaaaacaac ccttataagc
2 941 ataagaegga ctacggccat actggtcacc gtgattaaaa
3 001 agcaccaccg acagctcctc tgtaagactc ggtaaacaca
3 0 61 tcaggttgat teateggtea tagecegggg gaatacatac
3121 ccgcaggcgt agagacaaca ataacaaaat taataggaga
3181 gaaaaacaca taaacacctg aaaatagcac cctcccgctc
32 41 cagaacaaca tacagegett cagccttacc agtaaaaaag
3 3 01 3333cct3tt 3333sa3C3C caatcagtca cagtgtaaaa
3 3 61 aagggccaag tgeagagega tgacgtaacg gttaaagtcc
3421 acaaaaaaca cccagaaaac
34 81 cacaacttcc teaaategtc cgtaacttcc cattttaaga
3 541 3asct3C33t tcccasc3C3 aacctacgtc acccgccccg
3 6 01 ttcccacgcc ccgcgccacg ttatcatatt ggcttcaatc
3 661 caaaataagg tatattattg tggatccata tgcggtgtga
3 721 aataccgcac agatgegtaa cgctcttccg cttcctcgct
3 781 cactgactcg ctgcgctcgg gtatcagctc actcaaaggc
3 841 ggtaataegg ttatccacag aagaacatgt gagcaaaagg
3 9 01 ccagcaaaag gccaggaacc gcgtttttcc ataggctccg
3 9 61 cccccctgac gagcatcaca aggtggcgaa acccgacagg
4 021 actataaaga taccaggegt gtgcgctctc ctgttccgac
4 0 81 cctgecgett accggatacc ggaagcgtgg cgctttctca
gagccggtgt agggagttta tgetcaaaaa
acatgtctgc agaagectgt gccggcgtga ggtcatgtcc
ccacgctcgg aacgaattca atcaggcaaa gcaggtaagc gggtttctgc cttacaacag ccgtaaaaaa ggagtcataa
gtgctaaaaa gcgaccgaaa ttacagcccc cataggaggt
cacagcggca cactcgacac gtatatatag cgcacgcgaa acttccgttt tacaagttac tcscaaactc atgatgttaa
tegttegget
ctgcctaggc gcctaacagt ggcaccagct gactaaaaaa cctacgccca tcccacgtta tccgccctaa csccccctca ttaacatgea ccgcatcagg gcggcgagcg
aatcagggga taacgcagga gtaaaaaggc cgcgttgctg aaaatcgacg ctcaagtcag ttccccctgg aagctccctc tgtccgcctt tctcccttcg
774141 tagctcacgc tgtaggtatc cgctccaagc tgggctgtgt
42 01 gcacgaaccc cccgttcagc ggtaactatc gtcttgagtc
42 61 caacccggta agacacgact actggtaaca ggattagcag
4321 agcgaggtat gtaggcggtg tggcctaact acggctacac
43 81 tagaaggaca gtatttggta gttaccttcg gaaaaagagt
4441 tggtagctct tgatccggca ggtggttttt ttgtttgcaa
4501 gcagcagatt acgcgcagaa cctttgatct tttctacggg
4561 gtctgacgct cagtggaacg ttggtcatga gattatcaaa
4 621 aaggatcttc acctagatcc tttaaatcaa tctaaagtat
4 681 atatgagtaa acttggtctg agtgaggcac ctatctcagc
4 741 gatctgtcta tttcgttcat gtcgtgtaga taactacgat
48 01 acgggagggc ttaccatctg ccgcgagacc cacgctcacc
4 8 61 ggctccagat ttatcagcaa gccgagcgca gaagtggtcc
4 921 tgcaacttta tccgcctcca cgggaagcta gagtaagtag
4 981 ttcgccagtt aatagtttgc gcagccatga gattatcaaa
5041 aaggatcttc acctagatcc ccgcagaaac ggtgctgacc
5101 ccggatgaat gtcagetact aacgeaageg caaagagaaa
5161 gcaggtagct tgcagtgggc tgggcggttt tatggacagc
52 21 aagcgaaccg gaattgccag gttgggaagc ectgeaaagt
52 81 aaactggatg getttctcgc aggggatcaa gctctgatca
53 41 agagacagga tgaggatcgt ggattgcacg caggttctcc
54 01 ggccgcttgg gtggagaggc caacagacaa tcggctgctc
54 61 tgatgccgcc gtgttccggc gttctttttg tcaagaccga
5521 cctgtccggt gecctgaatg eggetategt ggctggccac
55 81 gaegggegtt ccttgcgcag gaagcgggaa gggactggct
5 641 getattgggc gaagtgccgg caccttgctc ctgccgagaa
tcagttcggtgtaggtcgtt
ccgaccgctgcgccttatcc
tatcgccactggcagcagcc
ctacagagttcttgaagtgg
tctgcgctctgctgaagcca
cgctggtagc
aaaaaggatctcaagaagat
aaaactcacgttaagggatt
ttttaaatta
acagttaccaatgcttaatc
ccatagttgcctgactcccc
gccccagtgctgcaatgata
taaaccagccageeggaagg
tccagtctattaattgttgc
gcaacgttgttgecattget
ttttcacgtagaaagccagt
gggctatctg
ttacatggcgatagctagac
ctggggcgccctctggtaag
cgecaaggatctgatggcgc
ttegcatgattgaacaagat
tatteggctatgactgggca
tgtcagegeaggggcgcccg
aactgeaagacgsggcagcg
ctgtgctcgacgttgtcact
ggesggstetcctgtcatct57 01 agtatccatc atggctgatg cttgatccgg ctacctgccc
57 61 attcgaccac caagcgaaac actcggatgg aagccggtct
5 821 tgtcgatcag gatgatctgg gcgccagccg aactgttcgc
5881 caggctcaag gcgagcatgc gtgacccatg gcgatgcctg
5 941 cttgccgaat atcatggtgg ttcatcgact gtggccggct
60 01 gggtgtggcg gaccgctatc cgtgatattg ctgaagagct
60 61 tggcggcgaa tgggctgacc atcgccgctc ccgattcgca
6121 gcgcatcgcc ttctatcgcc attttgttaa aatttttgtt
6181 aaatcagctc attttttaac catcccttat aaatcaaaag
62 41 aatagaccgc gatagggttg caagagtcca ctattaaaga
63 01 acgtggactc caacgtcaaa gggcgatggc ccactacgtg
63 61 aaccatcacc caaatcaagt taaagctcta aatcggaacc
64 21 ctaaagggag cccccgattt ggcgaacgtg gcgagaaagg
64 81 aagggaagaa agcgaaagga aagtgtagcg gtcacgctgc
6 541 gcgtaaccac cacacccgcg ggcgcgtcca ttcgccattc
66 01 aggatcgaat taattcttaa
caatgcggcg atcgcatcga
ccgacggcga aaaatggccg aggacatagc gcttcctcgt ttcttgacga caataggccg 的tgttgttc
tttttgcggt agagcttgac gcgggcgcta cgcttaatgc t
gctgcatacg gcgagcacgt tcaggggctc ggatctcgtc cttttctgga gttggctacc gctttacggt gttcttctga aaatcggcaa cagtttggaa ccgtctatca cgaggtgccg ggggaaagcc gggcgctggc gccgctacag
SEQ ID: 15 atatgataat ggggcgggtg ggaacacatg ccggtgtaca tagtaaattt ctgaataaga
gagggggtgg acgtagtagt taagcgacgg caggaagtga gggcgtaacc ggaagtgaaa
agtttgtgac gtggcggaag atgtggcaaa caattttcgc gagtaagatt tctgaataat
cttattttgg gtggcgcggg
tgtgatgttg agtgacgttt gcggttttag tggccatttt tttgtgttac
attgaagcca gcgtgggaac
caagtgtggc ttggtgtgcg gcggatgttg cgcgggaaaa tcatagcgcg
:cccatagtaacgccaat agggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggca
ggcccgcctggcattatgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagta
gggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattgacgtca atgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgggactttccaaaatgtcgtaacaactc
79atagaagacaccgggaccgatccagcctgactctagCctAGCTCtgaagttggtggtg
ctgggcatgtggagacagagaagactcttgggtttctgataggcactgactctctctg cctattggtctattttcccacccttaggctgctggtctgagcctagGAGATCTCTCGA
TAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTT
TGCCACTCCCAC
ATTCTGGGGGGT
ATGCGGTGGGCT
CTATGGCTTCTGAGGCGGAAAGAACCA
AAGCTTAGGCTCGAGCGGCC
GCGGATCTGACGGTTCACTAAACCAGCTCTGCT
TAAGCTT
gtcgactcg aagatctggg cgtggttaag<formula>formula see original document page 81</formula>1981 agcaaagttt ttcaacggtt atgcttttga gcgtttgacc
2 041 aagcagttcc aggcggtccc acggcatctc gatccagcat
2101 atctcctcgt ttcgcgggtt gcagtagtcg gtgetegtec
2161 agaegggeca gggtcatgtc tegtcagegt agtctgggtc
2221 aeggtgaagg ggtgcgctcc tgegcttgag gctggtcctg
22 81 ctgg仁gctga agcgctgccg ccaggtagca tttgaccatg
2 341 gtgtcatagt ccagcccctc gcagcttgee cttggaggag
24 01 gcgccgcacg aggggcagtg gcttgggcgc gagaaatacc
24 61 gattcegggg agtaggcatc eggtetcgea ttccacgagc
2 521 caggtgagct ctggccgttc ccccatgctt tttgatgcgt
2581 ttcttacctc tggtttccat tgacgaaaag gctgtccgtg
2 641 tccccgtata cagacttgag atagcttgtt geatgggegg
2 7 01 cgatataaaa tgcaaggtgc gcctcgcgca aaaaagaaag
2 761 cacategtag teatgetcat tccggaacca ccacagaaaa
2 821 agacaccatt tttctctcaa
2881 caLaasasscs ttts己acatt gaaaaacaac ccttataagc
2 941 ataagaegga ctacggccat actggtcacc gtgattaaaa
3 0 01 agcaccaccg acagctcctc tgtaagactc ggtaaacaca
3 0 61 tcaggttgat teateggtea tagecegggg gaatacatac
3121 ccgcaggcgt agagacaaca ataacaaaat taataggaga
3181 gaaaaacaca taaacacctg aaaatagcac cctcccgctc
3241 cagaacaaca tacagegett cagecttacc agtaaaaaag
33 01 33a3cct3tt aaaaaaacsc caatcagtca cagtgtaaaa
3 3 61 aagggccaag tgeagagega tgacgtaacg gttaaagtcc
3421 acaaaaaaca cccagaaaac
34 81 cacaacttcc teaaategtc cgtaacttcc cattttaaga
tgagaccgtccgccgtaggc
acagcteggtcacctgctct
ggggeggetttcgctgtacg
tttccacgggcgcagggtcc
gggctgcgcgctggccaggg
gtcttcgccctgcgcgtcgg
cgcggcgtggcccttggcgc
cagacttttgagggegtaga
cgcgccgcaggccccgcaga
ggggtcaaaaaccaggtttc
gagccggtgtccacgctcgg
agggagtttaaacgaattca
tgctcaaaaaatcaggcaaa
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3 6 01 ttcccacgcc ccgcgccacg ttatcatatt ggcttcaatc
3 661 caaaataagg tatattattg tggatccata tgcggtgtga
3 721 aataccgcac agatgegtaa cgctcttccg cttcctcgct
3 781 cactgactcg ctgcgctcgg gtatcagctc actcaaaggc
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3 901 ccagcaaaag gccaggaacc gcgtttttcc ataggctccg
3 961 cccccctgac gagcatcaca aggtggcgaa acccgacagg
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43 21 agegaggtat gtaggcggtg tggectaact acggctacac
43 81 tagaaggaca gtatttggta gttacctteg gaaaaagagt
44 41 tggtagctct tgatceggea ggtggttttt ttgtttgcaa
4 5 01 gcagcagatt aegegcagaa cctttgatct tttctacggg
4561 gtctgacget cagtggaacg ttggtcatga gattatcaaa
4 621 aaggatcttc acctagatcc tttaaatcaa tctaaagtat
4 681 atatgagtaa acttggtctg agtgaggcac ctatctcage
4741 gatctgtcta tttcgttcat gtcgtgtaga taactacgat
4 8 01 aegggaggge ttaccatctg ccgcgagacc cacgctcacc
4 8 61 ggctccagat ttatcagcaa gccgagcgca gaagtggtcc
4 921 tgcaacttta tccgcctcca egggaageta gagtaagtag
4 981 ttegecagtt aatagtttgc geagecatga gattatcaaa
5 041 aaggatcttc acctagatcc ccgcagaaac ggtgctgacc
tacaagttac tcacaaactc
tccgccctaa
C3CCCCCtC3
atgatgttaa ttaacatgea ggagaaaata ccgcatcagg tegttegget gcggcgagcg aatcagggga taacgcagga gtaaaaaggc cgcgttgctg
aaaatcgacg ttccccctgg tgtccgcctt tcagttcggt ccgaccgctg
ctcaagtcag aagctccctc tctcccttcg gtaggtcgtt cgccttatcc
tatcgccact ggcagcagcc ctacagagtt cttgaagtgg tctgegetct getgaageca aacaaaccac cgctggtage aaaaaggatc tcaagaagat
aaaactcacg ttttaaat
ttaagggatt
acagttacca atgettaate
ccatagttgc ctgactcccc
gccccagtgc tgcaatgata
taaaccagcc ageeggaagg
tccagtctat taattgttgc
gcaacgttgt tgecattget
ttttcacgta gaaagccagt5101 ccggatgaat gtcagetact aacgeaageg caaagagaaa
5161 gcaggtagct tgcagtgggc tgggcggttt tatggacagc
52 21 aagcgaaccg gaattgccag gttgggaagc ectgeaaagt
52 81 aaactggatg gctttctcgc aggggatcaa gctctgatca
53 41 agagacagga tgaggatcgt ggattgcacg caggttctcc
54 01 ggccgcttgg gtggagaggc caacagacaa tcggctgctc
54 61 tgatgccgcc gtgttccggc gttctt11tg tcaagaccga
5521 cctgtccggt gccctgaatg eggctategt ggctggccac
55 81 gaegggegtt ccttgcgcag gaagcgggaa gggactggct
5 641 gctattgggc gaagtgccgg caccttgctc ctgccgagaa
57 01 agtatccatc atggctgatg ettgatcegg ctacctgccc
5761 attcgaccac caagegaaac acteggatgg aagceggtet
5 821 tgtcgatcag gatgatctgg gcgccagccg aactgttege
58 81 caggctcaag gcgagcatgc gtgacccatg gcgatgcctg
5 941 ettgecgaat atcatggtgg ttcatcgact gtggccggct
60 01 gggtgtggcg gaccgctatc cgtgatattg ctgaagagct
6061 tggcggcgaa tgggctgacc atcgccgctc ccgattcgca
6121 gcgcatcgcc ttctatcgcc attttgttaa aatttttgtt
6181 aaatcagctc attttttaac catcccttat aaatcaaaag
62 41 aatagacege gatagggttg caagagtcca ctattaaaga
63 01 acgtggactc caaegtcaaa gggcgatggc ccactacgtg
63 61 aaccatcacc caaatcaagt taaagctcta aateggaace
64 21 ctaaagggag cccccgattt ggcgaacgtg gcgagaaagg
64 81 aagggaagaa agegaaagga aagtgtageg gtcacgctgc
6 541 gcgtaaccac cacacccgcg ggcgcgtcca ttcgccattc
66 01 aggatcgaat taattcttaa
gggctatctg gacaagggaa ttacatggcg atagctagac
ctggggcgcc cgecaaggat ttcgcatgat tatteggcta
ctctggtaag ctgatggcgc tgaacaagat tgactgggca
tgtcagegea ggggcgcccg
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acgaagagca tcaggggctc
ccgacggcga aaaatggccg aggacatagc gcttectegt ttcttgacga caataggecg agtgttgttc gggcgaaaaa tttttgcggt
ggatctcgtc cttttctgga gttggctacc getttaeggt gttcttctga aaatcggcaa cagtttggaa ccgtctatca cgaggtgccg
agagcttgac ggggaaagee gegggegcta gggcgctggc cgcttaatgc gccgctacag tSEQ ID: 16穿梭载体HA, CMV-luc
t33C3tC3tC
gagggggtgg acgtagtagt taagcgacgg caggaagtga gggcgtaacc ggaagtgaaa
33t33t3t3C
agtttgtgac gtggcggaag atgtggcaaa caattttcgc gagtaagatt tctgaataat
cttattttgg gtggcgcggg tgtgatgttg agtgacgttt gcggttttag tggccatttt tttgtgttac
attgaagcca gcgtgggaac caagtgtggc ttggtgtgcg gcggatgttg cgcgggaaaa tcatagcgcg
atatgataat ggggcgggtg
ggaacacatg ccggtgtaca
tagtaaattt ctgaataaga
:acgttgt
atccatatcataatatgtacatttatattggctcatgtccaacattaccgccatgttg
ccatatatggagttccgcgttacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgc agggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggca ggcccgcctggcattatgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagta
gggcgtggatagc亏 at
cgccccattgacgcaaatgggcggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcaga atagaagacaccgggaccgatccagcctgactctagCctAGCTCtgaagttggtggtg
ctgggcatgtggagacagagaagactcttgggtttctgataggcactgactctctctg cctattggtctattttcccacccttaggctgctggtctgagcctagGAGATCTCTCGA GGTCGACGGTATcgatgcca ccATGGAGAA AATCGTCCTG TTGCTCGCTA TTGTGTCTCT 51 101 151 201 251 301 351 401 451 501 551 601 651 701 751 801 851 901 951 1001 1051 1101
AGTGAAGAGC AGCAGGTCGA GACATCTTGG GAAGCCCCTG ACCCTATGTG GAGAAGGCTA TTACGAGGAA TACAGATTAT GTTAGCTCAG GGTCTGGTTA ATAACAATAC CCGAACGACG CATCAGTATT CAACACGGAG ACAATCTTAA CATCGCCCCT TTATGAAGTC CCAATGGGAG GACCATTGGG CAACCGGTCT GGCCTGTTTG GGTCGATGGT
GATCAAATTT TACTATCATG AAAAGACCCA ATCCTCCGGG TGATGAGTTT ACCCTACCAA CTGAAACACC ACCCAAGTCT CGTGTCCCTA ATCAAAAAGA CAATCAGGAG CCGCTGAACA GGCACGAGTA CAAAGTAAAT AACCCAACGA GAATACGCCT CGAATTAGAG CCATTAATAG GAGTGCCCAA AAGAAATAGC GCGCGATTGC TGGTACGGAT
GTATCGGCTA GAGAAAAACG CAACGGCAAA ACTGTTCAGT ATCAACGTGC TGACCTCTGC TGTTGTCTAG AGTTGGAGTG TCTGGGCTCT ACAGTACCTA GACCTGCTCG GACTAGGCTG CTCTGAACCA GGGCAATCTG TGCGATAAAT ATAAGATCGT TATGGCAATT CTCAATGCCC AGTACGTGAA CCGCAGAGAG CGGATTCATC ACCACCATAG
CCATGCCAAT TAACAGTTAC CTTTGCGACC CGCTGGTTGG CTGAATGGTC TATCCTGGGT AATTAACCAC ATCACGAAGC CCATCCTTCT CCCAACCATC TGTTGTGGGG TATCAGAACC GCGATTAGTG GCAGGATGGA TTCGAGTCCA GAAAAAGGGG GCAACACGAA TTCCATAATA GTCCAACCGC AATCGCGGAG GAGGGAGGCT CAACGAACAG
AACTCAACAG TCATGCCCAA TGGATGGAGT CTGCTCGGGA TTACATTGTG CATTTAACGA TTTGAAAAGA CTCCTCAGGC TTAGAAATGT AAAAAGTCTT TATCCATCAC CCACTACATA CCAAAGATTG GTTTTTCTGG ATGGCAATTT GACTCTGCAA GTGCCAGACA TTCATCCATT CTGGTCCTCG GAAGAAACGT GGCAGGGTAT GGGTCCGGCT
851151 ATGCAGCAGA 12 01 AAGGTTAATA
12 51 GAGGGAGTTT
13 01 TGGAAGACGG
13 51 CTCATGGAGA
14 01 CCTTTACGAC 14 51 GGAATGGATG 1501 AGTATACGCA 1551 GCTCAAACGC 1601 ATCAAATCCT 1651 ATCATGATGG 17 01 GTGCCGTATT
TAAGGAGAGC GTATTATAGA AACAATCTGG CTTCCTTGAC ACGAGAGGAC AAGGTGAGAC CTTCGAGTTT ACGGGACCTA GAAGAGATAA GTCCATCTAT CTGGTCTGTC TGTATATGAg
ACTCAGAAAG TAAAATGAAC AACGCCGGAT GTGTGGACTT CCTGGATTTC TTCAGCTCCG TACCACAAAT CAATTACCCT GCGGGGTGAA TCCACCGTCG CCTATGGATG c
CTATTGACGG ACGCAATTCG CGAAAATCTG ATAATGCAGA CACGATAGCA AGACAACGCC GTGACAATGA CAGTATAGCG ATTGGAATCA CCTCTTCGCT TGTTCCAATG
AGTTACAAAC AGGCCGTTGG AATAAGAAAA GCTGCTTGTA ACGTGAAGAA AAGGAGCTGG GTGCATGGAA AAGAGGCTCG ATCGGAACAT GGCCCTCGCT GAAGCCTTCA
TGCCTT
TGCCACTCCCAC
ATTCTGGGGGGT
ATGCGGTGGGCT
CTATGGCTTCTGAGGCGGAAAGAACCAAAGCTtaacatcatc aataatatac cttattttgg attgaagcca atatgataat gagggggtgg
61 agtttgtgac gtggcgcggg acgtagtagt gtggcggaag
121 tgtgatgttg caagtgtggc atgtggcaaa agtgacgttt
181 ttggtgtgcg ccggtgtaca gcggttttag gcggatgttg
241 tagtaaattt gggcgtaacc cgcgggaaaa ctgaataaga
301 ggaagtgaaa tctgaataat taatactgta atagtaatca
361 attacggggt cattagttca gcgttacata acttacggta
421 aatggcccgc ctggctgacc tgacgtcaat aatgacgtat
481 gttcccatag taacgccaat aatgggtgga gtatttacgg
541 taaactgccc acttggcagt caagtacgcc ccctattgac
601 gtcaatgacg gtaaatggcc acatgacctt atgggacttt
661 cctacttggc agtacatcta ccatggtgat gcggttttgg
721 cagtacatca atgggcgtgg gatttccaag tctccacccc
781 attgacgtca atgggagttt gggactttcc aaaatgtcgt
841 aacaactccg ccccattgac tacggtggga ggtctatata
901 agcagagctg gtttagtgaa
gcgtgggaac ggggcgggtg
ggaacacatg taagcgacgg
caggaagtga caattttcgc
gagtaagatt tggccatttt
tttgtgttac tcatagcgcg
tagcccatat atggagttcc
gcccaacgac ccccgcccat
agggactttc cattgacgtc
acatcaagtg tatcatatgc
cgcctggcat tatgcccagt
cgtattagtc atcgctatta
atagcggttt gactcacggg
gttttggcac caaaatcaac
gcaaatgggc ggtaggcgtg
ccgtcagatc
cgctagAGATCTGGgaaacgatatgggctgaatacggatccgtattcagcccatateg<formula>formula see original document page 87</formula>15 01 gggcccacgg gcggcggcct tcactaacgt catagttgtg
1561 ttccaggatg agatcgtcat
gggcggaggg tgccagactg
1621 cggtataatg gttccatccg tcacagattt gcatttccca
1681 cgctttgagt tcagatgggg gcgatgaaga aaacggtttc
1741 cggggtaggg gagatcaget ageagctgeg acttaccgca
18 01 gccggtgggc cegtaaatea tggtagttaa gagagctgea
1861 gctgccgtca tccctgagca atgtccctga ctcgcatgtt
1921 ttccctgacc aaatccgcca gatagcagtt ettgeaagga
1981 agcaaagttt ttcaacggtt atgcttttga gcgtttgacc
2 041 aagcagttcc aggcggtccc acggcatctc gatccagcat
2101 atctcctcgt ttcgcgggtt gcagtagteg gtgctcgtcc
2161 agaegggeca gggtcatgtc tegtcagegt agtctgggtc
2221 aeggtgaagg ggtgcgctcc tgegcttgag gctggtcctg
22 81 ctggtgctga agcgctgccg ccaggtagca tttgaccatg
2341 gtgtcatagt ccagcccctc gcagcttgcc cttggaggag
24 01 gcgccgcacg aggggcagtg gettgggege gagaaatacc
24 61 gattcegggg agtaggcatc eggtetcgea ttccacgagc
2 521 caggtgagct ctggccgttc ccccatgctt tttgatgcgt
2 581 ttcttacctc tggtttccat tgacgaaaag gctgtccgtg
2 641 tccccgtata cagacttgag atagcttgtt geatgggegg
2 7 01 cgatataaaa tgcaaggtgc gectcgegea aaaaagaaag
2 761 cacatcgtag teatgetcat tccggaacca ccacagaaaa
2 821 agacaccatt tttctctcaa
2 881 C3asa^a3ca tttssscstt gaaaaacaac ccttataagc
2 941 ataagaegga ctacggccat actggtcacc gtgattaaaa
3 0 01 agcaccaccg acagctcctc tgtaagactc ggtaaacaca
gggegaagat aggecatttt gcccaggggc ggatcatgtc gggaagaaag
ggggggecac
gaaggegetc tgagaccgtc acagcteggt ggggeggett tttccacggg gggctgcgcg gtcttcgccc cgcggcgtgg cagacttttg cgcgccgcag ggggtcaaaa gagccggtgt agggagttta tgctcaaaaa gcagataaag acatgtctgc agaagectgt gccggcgtga ggtcatgtcc
atttctggga tacaaagege gtagttaccc tacctgeggg caggttcctg egggtgeaac ttcgttaagc gccgcccagc cgccgtaggc cacctgctct tegctgtacg cgcagggtcc ctggccaggg tgegegtegg cccttggcgc agggegtaga gccccgcaga accaggtttc ccacgctegg aacgaattea atcaggcaaa gcaggtaagc gggtttctgc cttacaacag ccgtaaaaaa ggagtcataa3 061 tcaggttgat teateggtea tagecegggg gaatacatac
3121 ccgcaggcgt agagacaaca ataacaaaat taataggaga
3181 gaaaaacaca taaacacctg aaaatagcac cctcccgctc
3241 cagaacaaca tacagegett cagcettacc agtaaaaaag
3 3 01 aaaacctatt aaaaaaacac caatcagtca cagtgtaaaa
3 3 61 aagggccaag tgeagagega tgacgtaacg gttaaagtcc
34 21 acaaaaaaca cccagaaaac
34 81 cacaacttcc teaaategtc cgtaacttcc cattttaaga
3 541 aaactacaat tcccaacaca aacctacgtc acccgccccg
3 6 01 ttcccacgcc ccgcgccacg ttatcatatt ggcttcaatc
3 661 caaaataagg tatattattg tggatccata tgcggtgtga
3 721 aataccgcac agatgegtaa cgctcttccg cttcctcgct
3 781 cactgactcg ctgcgctcgg gtatcagctc actcaaaggc
3 841 ggtaatacgg ttatccacag aagaacatgt gagcaaaagg
3 9 01 ccagcaaaag gccaggaacc gcgtttttcc ataggctccg
3 961 cccccctgac gagcatcaca aggtggcgaa acccgacagg
4 021 actataaaga taccaggegt gtgegctetc ctgttccgac
4 0 81 cctgccgctt accggatacc ggaagcgtgg cgetttctca
4141 tagctcacgc tgtaggtatc cgctccaagc tgggctgtgt
42 01 gcacgaaccc cccgttcagc ggtaactatc gtcttgagtc
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43 21 agegaggtat gtaggcggtg tggectaact acggctacac
4 3 81 tagaaggaca gtatttggta gttaccttcg gaaaaagagt
44 41 tggtagctct tgatceggea ggtggttttt ttgtttgcaa
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4 5 61 gtctgacget cagtggaacg ttggtcatga gattatcaaa
gtgctaaaaa ttacagcccc
gcgaccgaaa cataggaggt
aaaaaccctc ctgcctaggc
cacagcggca cactcgacac gtatatatag cgcacgcgaa acttccgttt tacaagttac
tC3C333CtC
atgatgttaa ggagaaaata tegttegget aatcagggga gtaaaaaggc
gectaacagt ggcaccagct
cctacgccca tcccacgtta tccgccctaa
C3CCCCCtC3
ttaacatgea ccgcatcagg gcggcgagcg taacgcagga cgcgttgctg
aaaatcgacg ctcaagtcag ttccccctgg aagctccctc tgtccgcctt tctcccttcg tcagttcggt gtaggtcgtt ccgaccgctg cgecttatcc tatcgccact ggcagcagcc ctacagagtt cttgaagtgg tctgcgctct gctgaagcca aacaaaccac cgctggtagc aaaaaggatc tcaagaagat aaaactcacg ttaagggatt4 621 aaggatcttc acctagatcc tttaaatcaa tctaaagtat
4681 atatgagtaa acttggtctg agtgaggcac ctatctcagc
4 741 gatctgtcta tttcgttcat gtcgtgtaga taactacgat
4 8 01 acgggagggc ttaccatctg ccgcgagacc cacgctcacc
4 861 ggctccagat ttatcagcaa gccgagcgca gaagtggtcc
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4 981 ttcgccagtt aatagtttgc gcagccatga gattatcaaa
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52 81 aaactggatg gctttctcgc aggggatcaa getctgatca
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55 81 gaegggegtt ccttgcgcag gaagcgggaa gggactggct
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5701 agtatccatc atggctgatg ettgatcegg ctacctgccc
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aaaatgaagt
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tccagtctattaattgttgc
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gggctatctg
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ttegcatgattgaacaagat
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caataggccg agtgttgttc gggcgaaaaa tttttgcggt agagcttgac gcgggcgcta cgcttaatgc
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ctcgcttccggcggcategg
gacgaccatcagggacagct
actggaccgctgategtcac
gcatggattgtaggcgccgc
tggagccgggccacctcgac
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14 41 ctcgcgcgtt tcggtgatga tgcagctccc ggagacggtc
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2 821 ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg
2 8 81 caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt
2941 cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctgc agccatga
aaggatcttc acctagatcc ttttcacgta gaaagccagt ccgcagaaac ggtgctgacc
ccggatgaat gtcagetact gggctatctg gacaagggaa aacgeaageg caaagagaaa
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gaagcgggaa caccttgetc cttgatccgg actcggatgg gcgccagccg gtgacccatg ttcatcgact<formula>formula see original document page 94</formula>CCGAACGACG CCGCTGAACA GACTAGGCTG TATCAGAACC CCACTACATA CATCAGTATT GGCACGAGTA CTCTGAACCA GCGATTAGTG CCAAAGATTG CAACACGGAG CAAAGTAAAT GGGCAATCTG GCAGGATGGA GTTTTTCTGG ACAATCTTAA AACCCAACGA TGCGATAAAT TTCGAGTCCA ATGGCAATTT CATCGCCCCT GAATACGCCT ATAAGATCGT GAAAAAGGGG GACTCTGCAA TTATGAAGTC CGAATTAGAG TATGGCAATT GCAACACGAA GTGCCAGACA CCAATGGGAG CCATTAATAG CTCAATGCCC TTCCATAATA TTCATCCATT GACCATTGGG GAGTGCCCAA AGTACGTGAA GTCCAACCGC CTGGTCCTCG CAACCGGTCT AAGAAATAGC CCGCAGAGAG AATCGCGGAG GAAGAAACGT GGCCTGTTTG GCGCGATTGC CGGATTCATC GAGGGAGGCT GGCAGGGTAT GGTCGATGGT TGGTACGGAT ACCACCATAG CAACGAACAG GGGTCCGGCT ATGCAGCAGA TAAGGAGAGC ACTCAGAAAG CTATTGACGG AGTTACAAAC AAGGTTAATA GTATTATAGA TAAAATGAAC ACGCAATTCG AGGCCGTTGG GAGGGAGTTT AACAATCTGG AACGCCGGAT CGAAAATCTG AATAAGAAAA TGGAAGACGG CTTCCTTGAC GTGTGGACTT ATAATGCAGA GCTGCTTGTA CTCATGGAGA ACGAGAGGAC CCTGGATTTC CACGATAGCA ACGTGAAGAA 14 01 CCTTTACGAC AAGGTGAGAC TTCAGCTCCG AGACAACGCC AAGGAGCTGGGGAATGGATG CTTCGAGTTT TACCACAAAT GTGACAATGA GTGCATGGAAAGTATACGCA ACGGGACCTA CAATTACCCT CAGTATAGCG AAGAGGCTCGGCTCAAACGC GAAGAGATAA GCGGGGTGAA ATTGGAATCA ATCGGAACATATCAAATCCT GTCCATCTAT TCCACCGTCG CCTCTTCGCT GGCCCTCGCT
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agtttgtgac gtggcgcggg gcgtgggaac ggggcgggtg acgtagtagt gtggcggaag
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taatactgta gcgttacata tgacgtcaat aatgggtgga caagtacgcc
95gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt atgggacttt
cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat gcggttttgg
cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg gatttccaag tctccacccc
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agcagagctg gtttagtgaa cegtcagate cgctagAGATCrG( gaaacgatatgggctgaatacggatccgtattcagcccatatcg tttcTCT AGA AAT AAA ATA TCT TTA TTT TCA TTA CAT CTG TGT GTT GGT TTT TTG TGT GGC
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ateagecata ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa aaaacctccc
3C3CCtCCCC
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aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt tttttcactg
cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt aacgcggatc tgggcgtggt
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cagccgccgc cgccatgagc accaactcgt ttgatggaag cattgtg AGCTTgtcgactcg aagatctggg cgtggttaag
ggtgggaaag aatatataag gtgggggtct tatgtagttt tgtatctgtt ttgeagcage
cgccgccgcc atgagcacca actcgtttga tggaagcatt gtgagctcat atttgacaac
gcgcatgccc ccatgggccg gggtgcgtca gaatgtgatg ggctccagca ttgatggtcg
ccccgtcctg cccgcaaact ctactacctt gacctacgag accgtgtctg gaacgccgtt
ggagactgea gcctccgccg ccgcttcagc cgctgcagcc accgcccgcg ggattgtgac
tgactttgct ttcctgagcc cgcttgcaag cagtgcagct tcccgttcat ccgcccgcga
tgacaagttg aeggctcttt tggcacaatt ggattctttg acccgggaac ttaatgtcgt
ttctcagcag ctgttggatc tgcgccagca ggtttctgcc ctgaaggctt cctcccctcc
caatgeggtt taaaacataa ataaaaaacc agactctgtt tggatttgga tcaagcaagt
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gtcgttgagg gtcctgtgta ttttttccag gacgtggtaa aggtgactct ggatgttcag
atacatgggc ataagecegt ctctggggtg gaggtagcac cactgeagag ettcatgetgcggggtggtg ttgtagatga tccagtcgta gcaggagcgc tgggcgtggt gcctaaaaat
gtctttcagt agcaagctga ttgccagggg caggcccttg gtgtaagtgt ttacaaagcg
gttaagctgg gatgggtgca tacgtgggga tatgagatgc atcttggact gtatttttag
gttggctatg ttcccagcca tatccctccg gggattcatg ttgtgcagaa cc3ccsgc3c
agtgtatccg gtgcacttgg gaaatttgtc atgtagctta gaaggaaatg cgtggaagaa
cttggagacg cccttgtgac ctccaagatt ttccatgcat tcgtccataa tgatggcaat
gggcccacgg gcggcggcct gggcgaagat atttctggga tcactaacgt catagttgtg
ttccaggatg agatcgtcat aggccatttt tacaaagcgc gggcggaggg tgccagactg
cggtataatg gttccatccg gcccaggggc gtagttaccc tcacagattt gcatttccca
cgctttgagt tcagatgggg ggatcatgtc tacctgcggg gcgatgaaga aaacggtttc
cggggtaggg gagatcaget gggaagaaag caggttcctg ageagctgeg acttaccgca
gccggtgggc cegtaaatea cacctattac egggtgeaac tggtagttaa gagagct
g cagctgccgt catccctgag caggggggee
acttcgttaa gcatgtccct gaetegcatg ttttccctga ccaaatccgc cagaaggege
tcgccgccca gcgatagcag ttcttgcaag gaagcaaagt ttttcaaegg tttgagaccg
tccgccgtag gcatgctttt gagcgtttga ccaagcagtt ecaggeggtc ccacagcteg
gtcacctgct ctaeggcatc tcgatccagc atatctcctc gtttcgcggg ttggggcggc
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ggcgcagggt cctcgtcagc gtagtctggg tcacggtgaa ggggtgcgct ccgggctgcg
cgctggccag ggtgcgcttg aggctggtcc tgctggtgct gaagcgctgc eggtcttege
cctgcgcgtc ggecaggtag catttgacca tggtgtcata gtccagcccc tccgcggcgt
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tgagggcgta gagcttgggc gcgagaaata ccgattccgg ggagtaggca tccgcgccgc
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gtccacgctc ggtgacgaaa aggctgtccg tgtccccgta tacagacttg agaggectgtcctcgagcgg tgttccgcgg tcctcctcgt gagacaaagg
ctcgcgtcca ggccagcacg aaggaggcta ttgtccacta
gggggtccac tcgctccagg gtgtgaagac tcaaggaagg
tgattggttt gtaggtgtag gccacgtgac ctataaaagg
gggtgggggc gcgttcgtcc tcactctctt gccagctgtt
ggggtgagta ctccctctga aaagcgggca tcagtttcca
63 01 aaaacgagga ggatttgata ttcacctggc gcctttgagg gtggccgcat
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66 61 cgcccttgcg cgagcagaat cgtctcgtcc ggggggtctg
6721 cgtccacggt aaagaccccg gtagtctatc ttgcatcctt
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6961 tggcgcgcac gtaatcgtat gaggtcggga ccgaggttgc
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74 41 tgagcgcaaa ggtgtccctg gtatttgaag tcagtgtcgt
atagaaactc ggaccactct
agtgggaggg gtagcggtcg
acatgtcgcc ctcttcggca
cgggtgttcc tgaagggggg
ccgcatcgct gtctgcgagg
tgacttctgc gctaagattg
ccgcggtgat
atctttttgt tgtcaagctt
gcgatggagc gcagggtttg
agctgcacgt attcgcgcgc
ggcaccaggt gcacgcgcca
acctctccgc gtaggcgctc
ggcggtaggg ggtctagctg
ggcagcaggc gcgcgtcgaa
catgcgcggg cggcaagcgc
tgggtgagcg cggaggcgta
attccaagat atgtagggta
agttcgtgcg agggagcgag
cggaagacta tctgcctgaa
acgttgaagc tggcgtctgt
cgcagcttgt tgaccagctc
tccttgatga tgtcatactt
aactcttcgc ggtctttcca
gagcctagca tgtagaactg
agcgcgtatg cctgcgcggc
accatgactt tgaggtactg<formula>formula see original document page 99</formula>9061 ctcctggaga tctccgcgtc gcgaggtcgt tggaaatgcg
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cggctcgctccacggtggcg
cgttgaggcctccctcgttc
cgcgcatgaccacctgcgcg
geaggegctgaaagaggtag
taacccagcgtcgcaacgtg
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cctcctccag
caggggcctcttcttcttct
ctggcggcggtgggggaggg
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tetcgegggggcgcagttgg
ggctgccatgeggcagggat
ctccgccgccgagggacctg
aggegtctaaccagtcacag
ggcggtcggggttgtttctg
tgagacggcggatggtcgac
ggeggteggecatgccccag
geatgagectttctaccggc
ctatcgctgcggcggcggcg
tgsccccgaagcccctcatc
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ggtatgegeecgtgttgatg
ggtgacccggctgegagage
cgtagtcgttgcaagtcege
ggcggtagsggggccagcgt
ggegatgatateegtagatg
10010 621 gccggcggcg gtggtggagg cggttccaga tgttgcgcag
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11101 ggccggactg eggegaaegg caagaccccg ettgeaaatt
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11341 gtgattacga acccccgcgg ggacttggag gagggegagg
114 01 gcctggcgcg getaggageg aagggtgcag ctgaagcgtg
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11521 ccgaggagat gegggatega getgeggcat ggcctgaatc
11581 gcgagcggtt getgegegag gcgaaccggg attagtcccg
11641 cgcgcgcaca cgtggcggcc cgagcagacg gtgaaccagg
11701 agattaactt tcaaaaaagc gcttgtggcg cgegaggagg
11761 tggctatagg actgatgeat gctggagcaa aacccaaata
11821 gcaagccgct catggcgcag cagcagggac aacgaggcat
118 81 tcagggatgc getgetaaac ctggctgetc gatttgataa
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cgcgcggaaa tegggacget agcctgtaag
gtcgcggacg ctggccggtc cgggcactct
gaegaceggg gttcgagccc gcgtgtcgaa cccaggtgtg
ccaggcgcgg ttaggctgga
cggctgctgc
aagggttgag tcgcgggacc
gggtttgcct cccctttttt cageggcaag tcaggagggg cgccgggccc ccctctcctg ccgcggcaga
ccccgtcatg gcttttccca agcaagagca cgacatccgc ggcactacct agcggtaccc acctgtttcg
aagttccacg cagggegega gaggactttg agcccgacgc gccgacctgg taacegcata
ctgtgggact
aegtgegtae ttgtaagcgc
ctgttcctta tagtgeagea
atagtagagc ccgagggccg
gtgeaggage gcagcttgag
agectgggea agttttaege
gaggtaaaga tcgaggggtt
gacctgggcg tttatcgcaa12181 tgagcgtgag ccggcggcgc gatgcacagc ctgcaaaggg
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103153 01 gaggacatga acgatcatgc ccacacgggc tgaggagaag
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15421 aagcctcaga agaaaccggt acagcaagaa acgcagttac
15481 aacctaataa gcaatgacag gctggtacct tgcatacaac
15 541 tacggcgacc ctcagaccgg tttgcactcc tgacgtaacc
15601 tgcggctcgg agcaggtcta tgcaagaccc cgtgaccttc
15661 cgctccacgc gccagatcag ccgagctgtt gcccgtgcac
15 721 tccaagagct tctacaacga tcatccgcca gtttacctct
15781 ctgacccacg tgttcaatcg tggcgcgccc gccagccccc
15 841 accatcaeca ccgtcagtga ateaegggae gctaccgctg
15 901 cgcaacagca teggaggagt acgccagacg ccgcacctgc
15961 ccctacgttt acaaggccct tcctatcgag ccgcactttt
16 021 tgagcaagca tgtccatcct caggctgggg cctgcgcttc
160 81 ccaagcaaga tgtttggcgg aacacccagt gcgcgtgcgc
16141 gggcactacc gcgcgccctg gcactgggcg caccaccgtc
16201 gatgacgeca tegacgeggt acacgcccac gccgccacca
16261 gtgtccacag tggacgegge gagcccggcg etatgetaaa
163 21 atgaagagac ggcggaggcg gccgacccgg cactgccgcc
163 81 caacgcgcgg cggcggccct ccggccgacg ggcggccatg
16441 cgggccgctc gaaggctggc cccccaggtc caggegaega
165 01 gcggccgccg cageagecgc agggtegcag gggcaacgtg
16561 tattgggtgc gcgactcggt tgcgcacccg ccccccgcgc
16 621 aactagattg caagaaaaaa gtatgtatcc ageggeggeg
16 6 81 gcgcgcaacg aagctatgtc agatgctcca ggtcatcgcg
16 741 ceggagatet atggcccccc acaagccccg aaagctaaag
16 8 01 egggtcaaaa agaaaaagaa acgacgaggt ggaactgctg
cattcgcggc ggecgaaget gatcaaaccc caccttcacc aatccgctca
caactttccg ccaggccgtc ctttcccgag aaacgttcct ecagegagtg gggcatagtc tatatcgccc ggccaagaag gggcgcgcac ggtggaggag cattcagacc cgtagcacgt gcttaaccgc cgegggtatt ggccattagt tageggectg ctacttagac caagegcaaa gaagaaggaa agatgatgat
gacacctttg gccgcccccg ctgacagagg cagtaccgca tggaccctgc ccagacatga gtggtgggcg
t3CtCCC33C
aaccagattt gctctcacag accattactg tcgccgcgcg
cgctccgacc aaacgcggcc gcgcgcaact gtggtgcgcg cgccaccgcc gcacgtcgca gtcactgtgc gctatgactc cgcgtgcccg tcgtactgtt
gagcaggatt gstgaacttg168 61 cacgctaccg cgcccaggcg gacgcgtaaa acgtgttttg
16 921 cgacccggca ccaccgtagt ccacccgcac ctacaagcgc
16 981 gtgtatgatg aggtgtacgg aggccaacga gcgcctcggg
17 041 gagtttgcct acggaaagcg tgccgctgga cgagggcaac
17101 ccaacaccta gcctaaagcc tgcccgcgct tgcaccgtcc
17161 gaagaaaagc gcggcctaaa cacccaccgt gcagctgatg
17221 gtacccaagc gccagcgact tgaccgtgga acctgggctg
172 81 gagcccgagg tccgcgtgcg cgggactggg cgtgcagacc
17341 gtggacgttc agatacccac ccaccgccac agagggcatg
17401 gagacacaaa cgtccccggt ccgcggtgca ggcggtcgct
17461 gcggccgcgt ccaagacctc cgtggatgtt tcgcgtttea
17 521 gccccccggc gcccgcgcgg ccagcgcgct actgcccgaa
17581 tatgccctac atccttccat gtggctacac ctaccgcccc
17 641 agaagacgag caactacccg cccgccgccg ccgtcgccgt
17 701 cgccagcccg tgctggcccc etcgegaagg aggcaggacc
17 761 ctggtgctgc caacagcgcg aaaagccggt ctttgtggtt
17 821 ettgeagata tggccctcac tgeegggatt ccgaggaaga
17881 atgcaccgta ggaggggest gcggcatgcg tcgtgcgcac
17 941 caccggcggc ggcgcgcgtc gtatcctgcc cctccttatt
18 0 01 ccactgatcg ccgcggcgat catccgtggc ettgeaggeg
18 061 cagagacact gattaaaaac aaaataaaaa gtctggactc
18121 tcacgctcgc ttggtcctgt gacatcaact ttgegtctet
18181 ggccccgcga caeggetcgc caagatateg gcaccagcaa
18 241 t^tgageggt ggcgccttca ggcattaaaa attteggttc
18 3 01 caccgttaag aactatggca acaggecaga tgctgaggga
18 3 61 taagttgaaa gagcaaaatt ggcctggcct ctggcattag
aegggtacag ctttacgccc cgacgaggac gcataaggac cgtaacactg gegegagtet ggaagatgtc gccaatcaag taccagtagc tgcctcagcg tacggaggtg ttcgaggaag tgcgcctacc acgccgaacc gattteegtg ctsccscccc ctgccgcctc ggccggccac gcaccgtcgc tggcgccgtg aagttgcatg aactattttg gecegttcat gctggggctc geaaggeetg
tggaaaggtc ggtgagcgct ctgettgage atgctggcgt cagcaggtgc ggtgacttgg ttggaaaaaa caggtggcgc accagtattg gtggcggatg caaacggacc tacggcgccg cccggctatc accactggaa cgcagggtgg agcatcgttt cgtttcccgg ggectgaegg atgcgcggcg cccggaattg
tagaatggaa gggaaactgg gctgtggagc gaacagcagc ggtggtagat18421 cggggtggtg gacctggcca attaacagta agcttgatcc
184 81 ccgccctccc gtagaggagc gtgtctccag aggggcgtgg
18 541 cgaaaagcgt ccgcgccccg acgcaaatag acgagcctcc
18601 ctcgtacgag gaggcactaa cgtcccatcg cgcccatggc
18 661 taccggagtg ctgggccagc ctgcctcccc ccgccgacac
18 721 ccagcagaaa cctgtgctgc gtaacccgtc ctagccgcgc
18 781 gtccctgcgc cgcgccgcca cccgtagcca gtggcaactg
18 841 gcaaagcaca ctgaacagca tccctgaagc gccgacgatg
18 901 cttctgaata gctaacgtgt gtccatgtcg ccgccagagg
18 961 agetgetgag ccgccgcgcg ccccttcgat gatgeegcag
19021 tggtcttaca tgcacatctc acctgagccc cgggctggtg
190 81 cagtttgccc gcgccaccga acaagtttag aaaccccacg
19141 gtggcgccta cgcacgacgt gtttgacget gcggttcatc
19201 cctgtggacc gtgaggatac ggttcaccct agctgtgggt
19261 gataacegtg tgctggacat tccgcggcgt gctggacagg
19321 ggccctactt ttaageccta ccctggctcc caagggtgee
19381 ccaaatcctt gcgaatggga aaataaacct agaagaagag
19441 gacgatgaca acgaagacga agcaaaaaac tcacgtattt
19501 gggcaggege cttattctgg gtattcaaat aggtgtcgaa
19561 ggtcaaacac etaaatatge aacctcaaat aggagaatct
19 621 cagtggtacg aaactgaaat tccttaaaaa gactacccca
19681 atgaaaccat gttacggttc aaaatggagg gcaaggcatt
19 741 cttgtaaagc aacaaaatgg aaatgcaatt tttctcaact
19801 actgaggega ccgcaggcaa aagtggtatt gtacagtgaa
19861 gatgtagata tagaaacccc tgcccactat taaggaaggt
19 921 aactcacgag aactaatggg ggcctaatta cattgetttt
accaggcagt ctccaccggc acagggaaga ageaaggect acacacccgt caggcccgac gcggtccgcg tcgtgggtct cgtatgtgtg cccgctttcc gggecaggae gaegtactte gaccacagac tgegtacteg ggcttccacg ctctggcact tgaagctget agtagacgag
cgataaaaca taatcatgea atatgcaaaa aaagctagaa tggtgataac agacactcat
gcaaaataag cgtggagaca aactctggtg gcccaccscc aacgetggae cgccgttgtt ategttgegg
tcatgtattgc aagatggcta gecteggagt agectgaata cggtcccagc tacaaggege tactttgaca gcctacaacg actgetcttg caagctgagc
tttcaacctg gctgggagag cccacaaatg agtcaagtgg ttgactccta stttcttscs atgcccaaca19 981 agggacaatt ttattggtct gtaatatggg tgttctggcg
2 0 041 ggccaagcat cgcagttgaa acagaaacac agagctttca
2 0101 taccagcttt tgcttgattc acttttctat gtggaatcag
2 0161 gctgttgaca gctatgatcc atcatggaac tgaagatgaa
2 0221 cttccaaatt actgctttcc cagagactct taccaaggta
2 0281 aaacctaLaLata caggtcagga ctacagaatt ttcagataaa
2 0 341 aatgaaataa gagttggaaa atctaaatgc caacctgtgg
2 0401 agaaatttcc tgtactccaa acaagctaaa gtacagtcct
2 0461 tccaacgtaa aaatttctga acatgaacaa gcgagtggtg
2 0 521 gctcccgggt tagtggactg gctggtccct tgactatatg
2 0581 gacaacgtca acccatttaa tgcgctaccg ctcaatgttg
2 0 641 ctgggcaatg gtcgctatgt ctcagaagtt ctttgccatt
2 0701 aaaaacctcc ttctcctgcc ggaacttcag gaaggatgtt
2 0 761 aacatggttc tgcagagctc ttgacggagc cagcattaag
20821 tttgatagca tttgccttta cccacaacac cgcctccacg
2 0 8 81 cttgaggcca tgcttagaaa ttaacgacta tctctccgcc
2 0 941 gccaacatgc tctaccctat tgcccatatc catcccctcc
21001 cgcaactggg cggctttccg ttaagactaa ggaaacccca
21061 tcactgggct cgggctacga gctctatacc ctacctagat
21121 ggaacctttt acctcaacca ttacctttga ctcttctgtc
21181 agctggcctg gcaatgaccg ttgaaattaa gcgctcagtt
212 41 gacggggagg gttacaacgt aagactggtt cctggtacaa
213 01 atgctagcta actacaacat tcccagagag ctacaaggac
213 61 cgcatgtact ccttctttag gtcsggtggt ggatgatact
214 21 aaatacaagg actaccaaca acaacaactc tggatttgtt
214 81 ggctaccttg cccccaccat ctgctaactt cccctatccg
aatgtattacaacagcacgg
tgctgttgtagatttgcaag
catttggtgatagaaccaggt
agatgttaga
actgggaggtgtgattaata
aaatggatgg
taattttgccatggaaatca
catagcgctgtatttgcccg
t6taLCCcaa^cacctacgact
cttggagcac
ccaccsccgcaatgctggcc
gcccttccacatccaggtgc
gggctcatacacctacgagt
cctaggaaatgacctaaggg
cgccaccttcttccccatgg
cg3C3ccaL3cgaccagtcct
gctaccaacg
cggctgggccttc己cgcgcc
cccttattacacctactctg
cacctttaagaaggtggcca
cctgcttacccccaeicgagt
tgcccagtgtaacatgacca
tggctaccagggcttctata
aaacttccagcccatgagcc
ggtgggcatc
gcgcgasggscaggcctacc21541 cttataggca agaccgcagt agtttctttg cgatcgcacc
21601 ctttggcgca tcccattctc gcgcactcac agacctgggc
21661 caaaaccttc tctacgccaa tgacttttga ggtggatccc
21721 atggacgagc ccacccttct ttgacgtggt ccgtgtgcac
21781 cggccgcacc gcggcgtcat cgcccttctc ggccggcaac
21841 gccacaacat aaagaagcaa cgccatgggc tccagtgagc
21901 aggaactgaa agccattgtc atattttttg ggcacctatg
21961 acaagcgctt tccaggcttt ctgcgccata gtcaatacgg
22 021 ccggtcgcga gactgggggc ctggaacccg cactcaaaaa
22 081 catgctacct ctttgagccc actcaagcag gtttaccagt
2 2141 ttgagtacga gtcactcctg ttcccccgac cgctgtataa
222 01 cgctggaaaa gtccacccaa ggccgcctgt ggactattct
222 61 gctgcatgtt tctccacgcc tcccatggat cacaacccca
22 321 ccatgaacct tattaccggg cagtccccag gtacagccca
22381 ccctgcgtcg caaccaggaa gcgccacteg ccctacttcc
22 441 gcagccacag tgegcagatt tcacttgaaa aacatgtaaa
22501 aataatgtac tagagacact ttatttgtac actctegggt
2 2 561 gattatttac ccccaccctt atcaaagggg ttctgccgcg
2 2 621 categctatg cgccactggc gtgtttagtg ctccacttaa
22 681 actcaggcac aaccatccgc actccacagg ctgcgcacca
2 2 741 tcaccaacgc gtttagcagg gtcgcagttg gggcctccgc
2 2 8 01 cctgcgcgcg egagttgega gaacactatc agegcegggt
22 861 ggtgcacgct ggccagcacg cgcgtccagg tcctccgcgt
2 2 921 tgetcaggge gaacggagtc caaaaagggc gcgtgcccag
22 981 gctttgagtt gcactcgcac accgtgcccg gtctgggcgt
2 3 0 41 taggatacag cgcctgcata agccacctga gcctttgcgc
tgacagcatt cagtaacttt ctccgcccac ttatgttttg
atgtccatgg gcgctagaca tttgaagtct
egaaacegtg tacctgcgca gcaacatcaa caacagctgc
aaagatcttg gtttctccac gtacactgga tttggctttt cgccgtagcg agegtacagg
gttgtgggcc acaagctcgc tggectttgc ctgaccagcg ccattgcttc ggcccaactc
tttgecaact ggccccaaac
gtacccaact cagctctaca aggagegeca ttcaataaag gccgtctgcg agggacacgt ggcagctegg tcgggcgccg tacacagggt ctcttgtegg
ccatgctcaa gcttcctgga cttctttttg geaaatgett ccgtttaaaa tgcgatactg tgaagttttc atatcttgaa tgcagcactg agatcagatc
aactttggta gctgccttcc cgtagtggca tcaaaaggtg aaagecttga tetgettaaa<formula>formula see original document page 109</formula><formula>formula see original document page 110</formula>2 6221 gccaagagtt tctgctacga ggacccccag tccggcgagg
2 6281 agctcaaccc aatccccccg gcagccgcgg gcccttgctt
2 6341 cccaggatgg cacccaaaaa cacccacgga cgaggaggaa
2 6401 tactgggaca gtcaggcaga aggaggacat gatggaagac
2 6461 tgggagagcc tagacgagga tgtcagacga aacaccgtca
2 6 521 ccctcggtcg cattcccctc caaccggttc cagcatggct
26581 acaacctccg ctcctcaggc gccgacccaa ccgtagatgg
2 6 641 gacaccactg gaaccagggc cgccgttagc ccaagagcaa
2 6 701 caacagcgcc aaggctaccg acgccatagt tgcttgcttg
26761 caagactgtg ggggcaacat ttctctacca tcacggcgtg
26821 gccttccccc gtaacatcct acagcccata ctgcaccggc
2 6881 ggcagcggca gcggcagcaa caaaggcgac cggatsgcaa
2 6 941 gactctgaca aagcccaaga gcaggaggag gagcgctgcg
2 7 0 01 tctggcgccc aacgaacccg aacaggattt ttcccactct
2 7 061 gtatgctata tttcaacaga ctgaaaataa aaaacaggtc
2 7121 tctgcgatcc ctcacccgca gaagatcagc ttcggcgcac
2 7181 gctggaagac gcggaggctc ctgactctta aggactagtt
2 7 241 tcgcgccctt tctcaaattt ctccagcggc cacacccggc
2 7301 gccagcacct gtcgtcagcg cccacgccct acatgtggag
2 7361 ttaccagcca caaatgggac gactactcaa cccgaataaa
2 7421 ctacatgagc gcgggacccc ggaatccgcg cccaccgaaa
2 7481 ccgaattctc ttggaacagg cgtaataacc ttaatccccg
2 7 541 tagttggccc gctgccctgg cccaccactg tggtacttcc
2 7601 cagagacgcc caggccgaag gcgcagcttg cgggcggctt
2 7 661 tcgtcacagg gtgcggtcgc ctgacaatca gagggcgagg
2 7 721 tattcagetc aacgacgagt ctccgtcegg aegggacatt
ccgccgcagc gaagctgcag ggaggttttg agcttccgag gccggcgccc gccgccggca eggtaagtec ctcatggcgc ctccttcgcc gcattactac cagcagcggc aatccacagc tatcgacccg geaggggeca gctgcctgta tcttcagtaa aagcgcgaaa ccattatgag ttgcggctgg acatgatatc eggctattac tgtaccagga ttcagatgac ccgggcaggg eggtgagetc
gggtttactt cctatcagca ctgccgccgc gacgaggagg gtcgaagagg
ctgcccgttc aagcagccgc
cgccgctttc cgtcatctct cacacagaag ggeggcagea cgagcttaga agaacaagag tcacaaaagc atactgegeg actacgtcat caaggaaatt agctgcccaa ccgggtcaac
C3CC3C3CCt
aagtcccgct taactcaggg tataactcac etcgettggt
1112 7781 tcagatcggc ggcgccggcc caggcaatcc taactctgca
2 7 841 gacctcgtcc tctgagccgc ctgcaattta ttgaggagtt
2 7 901 tgtgccatcg gtctacttta ggccactatc cggatcaatt
2 7961 tattcctaac tttgacgcgg tacgactgaa tgttaagtgg
2 8 021 agaggcagag caactgcgcc cgccgccaca agtgctttgc
2 8 081 ccgcgactcc ggtgagtttt gatcatateg agggcccggc
2 8141 gcacggcgtc cggcttaccg agectgatte gggagtttac
2 8201 ccagcgcccc ctgctagttg gttctcactg tgatttgcaa
2 8261 ctgtcctaac cttggattac actagagtac ceggggatet
2 8321 tattcccttt asctaataaa ttacttaaaa tcagttagca
2 8381 aatttctgtc cagtttattc ctcccagctc tggtattgea
2 8441 gcttcctcct ggctgeaaac aatgtcagtt tcctcctgtt
2 8501 cctgtccatc cgcacccact gaagegegea agacegtctg
2 8561 aagatacctt caaccccgtg cggtcctcca actgtgcctt
2 8 621 ttcttactcc tccctttgta gagtccccct ggggtactct
28681 ctttgcgcct atccgaacct gcttgcgctc aaaatgggca
2 8 741 aeggectetc tctggacgag aaatgtaacc actgtgagcc
28801 cacctctcaa aaaaaccaag atctgcaccc ctcacagtta
2 8861 cctcagaagc cctaactgtg ggtcgeggge aacacactca
28921 ccatgcaatc acaggccccg acttagcatt gccacccaag
2 8 981 gacccctcac agtgtcagaa atcaggcccc ctcaccacca
2 9 041 ccgatagcag tacccttact aactactgcc actggtagct
2 9101 tgggcattga cttgaaagag aaaactagga ctaaagtacg
2 9161 gggctccttt gcatgtaaca cgtagcaact ggtccaggtg
2 9221 tgactattaa taatacttcc agccttgggt tttgattcac
2 9281 aaggcaatat gcaacttaat tgattctcaa aacagacgcc
gtccttcatt gctctggagg sccccttctc taaaggactc tgaaacacct gctactttga cccagggags agegggacag atcaagatcc
agcagcacct tttctccaca atcttcatgt tatccatatg tcccccaatg ctagttacct gccggcaacc tcaaacat33 gctgccgccg ctaaccgtgc ggaaagctag atcactgcct cccatttata gacgacctaa ttgcaaacta gtagcaggag
cacgcctcgt cattggaact gggacctccc
ggtccactgt attgcccgag gcttgcccgt gggaccctgt tctagttata aaagcatcac ccttgccctc atctaaatgg tgttgcagat acaeggaaac ggtttcaaga ccaatggcat ttacctcccs acctggaaat cacctctaat acgactccaa ccctgcaaac caccccctct cacaaaatgg acactttgac aagttactgg gactaaggat29341 ttatacttga tgttagttat actaaatcta agactaggac
2 9401 agggccctct ttttataaac taactacaac aaaggccttt
2 9461 acttgtttac agcttcaaac taacctaagc actgccaagg
2 9 521 ggttgatgtt tgacgctaca agatgggctt gaatttggtt
2 9581 cacctaatgc accaaacaca tggccatggc ctagaatttg
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2 9701 ccattacagt aggaaacaaa gtggaccaca ccagctccat
2 9761 ctcctaactg tagactaaat cactttggtc ttaacaaaat
2 9821 gtggcagtca aatacttgct taaaggcagt ttggctccaa
2 9881 tatctggaac agttcaaagt tgacgaaaat ggagtgctac
2 9 941 taaacaattc cttcctggac aaatggagat cttactgaag
3 0 001 gcacagccta tacaaacgct atcagettat ccaaaatctc
3 0 061 aeggtaaaac tgccaaaagt ettaaaegga gacaaaacta
30121 aacctgtaac actaaccatt aacaggagac acaactccaa
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30301 tgtttcaacg tgtttatttt gtcatttttc attcagtagt
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3 0421 ctagtattca acctgccacc acacagtcct ttctccccgg
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3 0 541 aeggtttect gtcgagccaa taaactcccc gggcagctca
3 0 601 cttaagttca tgtcgctgtc gctgtccaac ttgcggttgc
3 0 661 ttaacgggcg gcgaaggaga tagagtcata ategtgeate
3 0 721 aggatagggc ggtggtgctg gctgccgccg ccgctccgtc
3 0 781 ctgcaggaat acaacatggc ttcgcaccgc ccgcagcata
3 0 841 aggegecttg tcctccgggc cacttaaaLtc agca_cagta_a_
ccgtttgatg tcagcccaca
acttggatat
aattccaaaa agcttgaggt gccatagcca ttaatgcagg
33tCCCCtC3 333C33333t
cctaaactag gaactggcct aataatgata agctaacttt gcagagaaag atgetaaact acagtttcag ttttggctgt gctcatctta ttataagatt ccagaatatt ggaactttag gttggattta tgcctaacct aacattgtca gtcaagttta
acactaaacg tcatgggact ttttcataca tcaattgeag cttatacaga
gtacacagga ggtctggcca ttgeccaaga saasttteas tcaccgtacc
tccctcccaa cacacagagt
atcatgggta acgctcatca cagctgetga agtccacgcc
acagacatat gtgatattaa gccacaggct tacatggggg
cagcagcgcg cgaataaact agtggtctcc tcagegatga acagcagcgc accctgatctgcaaggcgct gtatccaaag
3 0 961 ctcatggcgg ggaccacaga acaagcgcag gtagattaag
31021 tggcgacccc tcataaacac cttttggcat gttgtaattc
31081 accacctccc ggtaccatat cgccatccac caccatccta
31141 aaccagctgg ccaaaacctg gggaaccggg actggaacaa
312 01 tgacagtgga gagcccagga tgctcgtcat gatatcaatg
312 61 ttggcacaac acaggcacac ttacaagctc ctcccgcgtt
31321 agaaccatat cccagggaac taaatcccac actgcaggga
313 81 agacctcgca cgtaactcac tacattcggg cagcagcgga
31441 tgatcctcca gtatggtagc gaggtagacg atccctactg
31501 tacggagtgc gccgagacaa gtgtcatgcc aaatggaacg
31561 ccggacgtag tcatatttcc gcgtgacaaa cagatctgcg
31621 tctccggtct cgccgcttag tagtatatcc actctctcaa
31681 agcatccagg cgccccctgg ccttcatgcg ccgctgccct
31741 gataacatcc accaccgcag cctacacatt cgttctgcga
31801 gtcacacacg ggaggagcgg tttttttttt tattccaaaa
31861 gattatccaa aacctcaaaa gcgctcccct ccggtggcgt
31921 ggtcaaactc tacagccaaa aagatgttgc acaatggctt
31981 ccaaaaggca aacggccctc gctaaaccct tcagggtgaa
3 2 041 tctcctctat aaacattccs ataattctca tctcgccacc
32101 ttctcaatat atctctaagc ggccattgta aaaatctgct
3 2161 ccagagcgcc ctccaccttc gattgcaaaa attcaggttc
32 221 ctcacagacc tgtataagat aaaataccgc gatcccgtag
32281 gtcccttcgc agggccagct gcacggacca gcgcggccac
32341 ttccccgcca ggaaccttga atgacacgca tactcggagc
32401 tatgctaacc agcgtagccc gggcggcgat ataaaatgca
attgttcaaa atcccacagt
acccacgtgg gctggacata
ccatcatacc aacattacct
aaacctctga ttaaacatgg cccgccggct atacactgca ctcgtaacca tggatcatca gtgcatacac ttcctcagga
33CCC3ttCC
gttgtgcatt gcgggtttct ccgagatcgt
atcgctctgt cttcgggttc
tgaiatcagcg gtcaaagtgt gtctcaaaag gttggtcgta ccaggtgcgg gtagtagttg tatgtaaact
gaagagctgg aagaaccatg tgaagatcta ttaagtgaac gaacagataa tggcatttgt acgtccaagt ggacgtaaag gcaccttcaa ccatgcccaa aaatcccgaa tattaagtcc agcctcaagc agcgaatcat tcaaaagcgg aacattaaca gaacataatc gtgcaggtct caaaagaacc cacactgatt cgatgtaagc tttgttgcat
1143 2461 aggtgctgct caaaaaatca agaaagcaca tcgtagtcat
3 2 521 gctcatgcag ataaaggcag agaaaaagac accatttttc
32 581 tctcaaacat gtctgcgggt
3 2 641 aacattagaa gcctgtctta ataagcataa gacggactac
32 701 ggccatgccg gcgtgaccgt ttaaaaagca ccaccgacag
32 761 ctcctcggtc atgtccggag aacacatcag gttgattcat
3 2 821 cggtcagtgc taaaaagcga acatacccgc aggcgtagag
32 8 81 acaacattac agcccccata
32 941 cacctgaaaa accctcctgc ccgctccaga acaacataca
33 001 gcgcttcaca gcggcagcct
33 0 61 aaacaccact cgacacggca gtaaaaaagg gccaagtgca
3 3121 gagcgagtat atataggact asgtccaLCW sata^cscccs
33181 gaaaaccgca cgcgaaccta
33241 atcgtcactt ccgttttccc ttaagaaaac tacaattccc
33301 aacacataca agttactccg gccccgttcc cacgccccgc
3 3 3 61 gccacgtcac aaactccacc tcaatccaaa ataaggtata
3 3421 ttattgatga tnmmnttaa
ggcaaagcctcgcgcaaaaa
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caacaggaaa33Ca3CCCtt
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cgcccagaaacgaaagccaa
acgttacgtaacttcccatt
tacgtcaccc
ccctcattatcatattggct
t
SEQ ID N〇17 (ND1.1 214)
1 taaggatccn nncctgtcct cgaccgatgc ccttgagagc cttcaaccca gtcagctcct
61 tccggtgggc gcggggcatg actatcgtcg ccgcacttat gactgtcttc tttatcatgc
121 aactcgtagg acaggtgccg gcagcgctct gggtcatttt cggcgaggac cgctttcgct
181 ggagcgcgac gatgatcggc ctgtcgcttg cggtattegg aatcttgcac gccctcgctc
241 aagccttcgt cactggtccc gccaccaaac gttteggega gaagcaggee attatcgecg
3 01 geatggegge cgacgcgctg ggctacgtct tgctggcgtt cgcgacgcga ggctggatgg
361 ccttccccat tatgattctt ctcgcttccg geggcategg gatgcccgcg ttgeaggeca
421 tgctgtccag gcaggtagat gacgaccatc agggacagct tcaaggateg ctcgeggetc<formula>formula see original document page 116</formula><formula>formula see original document page 117</formula>gctattgggc gaagtgccgg ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc ctgccgagaa
agtatccatc atggctgatg caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg ctacctgccc
attcgaccac caagcgaaac atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg aagccggtct
tgtcgatcag gatgatctgg acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg aactgttcgc
caggctcaag gcgagcatgc ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg gcgatgcctg
cttgccgaat atcatggtgg aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact gtggccggct
gggtgtggcg gaccgctatc aggacatagc gttggctacc cgtgatattg ctgaagagct
tggcggcgaa ccgattcgca
gcgcatcgcc aatttttgtt
aaatcagctc aaatcaaaag
aatagaccgc ctattaaaga
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gcgtaaccac ttcgccattc
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tgggctgacc ttctatcgcc attttttasc gatagggttg caacgtcaaa
cccccgattt
cacacccgcg
gcttcctcgt ttcttgacga caataggccg agtgttgttc gggcgaaaaa tttttgcggt agagcttgac gcgggcgcta cgcttaatgc
gctttacggt gttcttctga aaatcggcaa cagtttggaa ccgtctatca cgaggtgccg ggggaaagcc
gccgctacag
atcgccgctc attttgttaa catcccttat caagagtcca gggcgatggc taaagctcta ggcgaacgtg aagtgtagcg ggcgcgtcca
atccatatcataatatgtacatttatattggctcatgtccaacattaccgccatgttg
ccatatatggagttccgcgttacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgc ccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatgttcccatagtaacgccaat
二aaactgcccacttggca
catctacgtattagtcat gggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattgacgtca3t
gctcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctcc atagaagacaccgggaccgatccagcctgactctagCctAGCTCtgaagttggtggtg aggccctgggcaggttggtatcaaggttacaagacaggtttaaggagaccaatagaaa ctgggcatgtggagacagagaagactcttgggtttctgataggcactgactctctctg
GGTCGACGGTATcgatgcca ccATGGAGAA AATCGTCCTG TTGCTCGCTA TTGTGTCTCTAGTGAAGAGC GATCAAATTT GTATCGGCTA CCATGCCAAT AACTCAACAGAGCAGGTCGA TACTATCATG GAGAAAAACG TAACAGTTAC
TCATGCCCAA TGGATGGAGT CTGCTCGGGA TTACATTGTG CATTTAACGA TTTGAAAAGA CTCCTCAGGC TTAGAAATGT AAAAAGTCTT TATCCATCAC CCACTACATA CCAAAGATTG GTTTTTCTGG ATGGCAATTT GACTCTGCAA GTGCCAGACA TTCATCCATT CTGGTCCTCG GAAGAAACGT GGCAGGGTAT GGGTCCGGCT AGTTACAAAC AGGCCGTTGG AATAAGAAAA GCTGCTTGTA ACGTGAAGAA
GACATCTTGG GAAGCCCCTG ACCCTATGTG GAGAAGGCTA TTACGAGGAA TACAGATTAT GTTAGCTCAG GGTCTGGTTA ATAACAATAC CCGAACGACG CATCAGTATT CAACACGGAG ACAATCTTAA CATCGCCCCT TTATGAAGTC CCAATGGGAG GACCATTGGG CAACCGGTCT GGCCTGTTTG GGTCGATGGT ATGCAGCAGA AAGGTTAATA GAGGGAGTTT TGGAAGACGG CTCATGGAGA CCTTTACGAC
AAAAGACCCA ATCCTCCGGG TGATGAGTTT ACCCTACCAA CTGAAACACC ACCCAAGTCT CGTGTCCCTA ATCAAAAAGA CAATCAGGAG CCGCTGAACA GGCACGAGTA CAAAGTAAAT AACCCAACGA GAATACGCCT CGAATTAGAG CCATTAATAG GAGTGCCCAA AAGAAATAGC GCGCGATTGC TGGTACGGAT TAAGGAGAGC GTATTATAGA AACAATCTGG CTTCCTTGAC ACGAGAGGAC
CAACGGCAAA ACTGTTCAGT ATCAACGTGC TGACCTCTGC TGTTGTCTAG AGTTGGAGTG TCTGGGCTCT ACAGTACCTA GACCTGCTCG GACTAGGCTG CTCTGAACCA GGGCAATCTG TGCGATAAAT ATAAGATCGT TATGGCAATT CTCAATGCCC AGTACGTGAA CCGCAGAGAG CGGATTCATC ACCACCATAG ACTCAGAAAG TAAAATGAAC AACGCCGGAT GTGTGGACTT CCTGGATTTC TTCAGCTCCG
CTTTGCGACC CGCTGGTTGG CTGAATGGTC TATCCTGGGT AATTAACCAC ATCACGAAGC CCATCCTTCT CCCAACCATC TGTTGTGGGG TATCAGAACC GCGATTAGTG GCAGGATGGA TTCGAGTCCA GAAAAAGGGG GCAACACGAA TTCCATAATA GTCCAACCGC AATCGCGGAG GAGGGAGGCT CAACGAACAG CTATTGACGG ACGCAATTCG CGAAAATCTG ATAATGCAGA CACGATAGCA AGACAACGCC
AAGGTGAGAC
AAGGAGCTGGGGAATGGATG CTTCGAGTTT TACCACAAAT GTGACAATGA GTGCATGGAAAGTATACGCA ACGGGACCTA CAATTACCCT CAGTATAGCG AAGAGGCTCGGCTCAAACGC GAAGAGATAA GCGGGGTGAA ATTGGAATCA ATCGGAACATATCAAATCCT GTCCATCTAT TCCACCGTCG CCTCTTCGCT GGCCCTCGCT
ATCATGATGG CTGGTCTGTC CCTATGGATG TGTTCCAATG GAAGCCTTCAGTGCCGTATT TGTATATGAg c
TGCCTT
TGCCACTCCCAC
ATTCTGGGGGGT
ATGCGGTGGGCT
119CTATGGCTTCTGAGGCGGAAAGAACCAAAGCTtaacatcatc aataatatac cttattttgg attgaagcca atatgataat gagggggtgg
agtttgtgac gtggcgcggg gcgtgggaac ggggcgggtg acgtagtagt gtggcggaag
tgtgatgttg caagtgtggc ggaacacatg taagcgacgg atgtggcaaa agtgacgttt
ttggtgtgcg ccggtgtaca caggaagtga caattttcgc gcggttttag gcggatgttg
tagtaaattt gggcgtaacc gagtaagatt tggccatttt cgcgggaaaa ctgaataaga
ggaagtgaaa tctgaataat tttgtgttac tcatagcgcg taatactgta
attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata acttacggta
aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat aatgacgtat
gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga gtatttacgg
taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc ccctattgac
gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt atgggacttt
cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat gcggttttgg
cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg gatttccaag tctccacccc
attgacgtca atgggagttt gttttggcac caaaatcaac gggactttcc aeLetatgtcgt
aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata
agcagagctg gtttagtgaa cegtcagate
tttcTCT AGA AAT AAA ATA TCT TTA TTT TCA TTA CAT CTG TGT GTT GGT TTT TTG TGT GGC
GG CCGCtcgragcct AAGCTTctag ataagatatc cgatccaccg gatctagata actgatcata
atcagecata ccacatttgt agaggtttta ettgetttaa aaaacctccc
3C3CCtCCCC
ctgaacctga aacataaaat gaatgcaatt gttgttgtta acttgtttat tgeagettat
aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt tttttcactg
cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt aacgeggate tgggcgtggt
taagggtggg aaagaatata taaggtgggg gtcttatgta gttttgtatc tgttttgcag
cagccgccgc cgccatgagc accaactcgt ttgatggaag cattgtg AGCTTgtcgactcg aagatctggg cgtggttaag
ggtgggaaag aatatataag gtgggggtct tatgtagttt tgtatctgtt ttgeagcage
cgccgccgcc atgagcacca actcgtttga tggaagcatt gtgageteat atttgacaacgcgcatgccc ccatgggccg gggtgcgtca gaatgtgatg ggctccagca ttgatggtcg
ccccgtcctg cccgcaaact ctactacctt gacctacgag accgtgtctg gaacgccgtt
ggagactgca gcctccgccg ccgcttcagc cgctgcagcc accgcccgcg ggattgtgac
tgactttgct ttcctgagcc cgcttgcaag cagtgcagct tcccgttcat ccgcccgcga
tgacaagttg acggctcttt tggcacaatt ggattctttg acccgggaac ttaatgtcgt
ttctcagcag ctgttggatc tgcgccagca ggtttctgcc ctgaaggctt cctcccctcc
caatgcggtt taaaacataa ataaaaaacc agactctgtt tggatttgga tcaagcaagt
gtcttgctgt ctttatttag gggttttgcg cgcgcggtag gcccgggacc agcggtctcg
gtcgttgagg gtcctgtgta ttttttccag gacgtggtaa aggtgactct ggatgttcag
atacatgggc ataagcccgt ctctggggtg gaggtagcac cactgcagag cttcatgctg
cggggtggtg ttgtagatga tccagtcgta gcaggagcgc tgggcgtggt gcctaaaaat
gtctttcagt agcaagctga ttgccagggg caggcccttg gtgtaagtgt ttacaaagcg
gttaagctgg gatgggtgca tacgtgggga tatgagatgc atcttggact gtatttttag
gttggctatg ttcccagcca tatccctccg gggattcatg ttgtgcagaa cc3cc3gcsc
agtgtatccg gtgcacttgg gaaatttgtc atgtagctta gaaggaaatg cgtggaagaa
cttggagacg cccttgtgac ctccaagatt ttccatgcat tcgtccataa tgatggcaat
gggcccacgg gcggcggcct gggcgaagat atttctggga tcactaacgt catagttgtg
ttccaggatg agatcgtcat aggccatttt tacaaagcgc gggcggaggg tgccagactg
cggtataatg gttccatccg gcccaggggc gtagttaccc tcacagattt gcatttccca
cgctttgagt tcagatgggg ggatcatgtc tacctgcggg gcgatgaaga aaacggtttc
cggggtaggg gagatcagct gggasgaaag caggttcctg agcagctgcg acttaccgca
gccggtgggc ccgtaaatca cacctattac cgggtgcaac tggtagttaa gagagct
g cagctgccgt catccctgag caggggggcc
acttcgttaa gcatgtccct gactcgcatg ttttccctga ccaaatccgc csga_a_ggcgc
tcgccgccca gcgatagcag ttcttgcaag gaagcaaagt ttttcaacgg tttgagaccg
tccgccgtag gcatgctttt gagcgtttga ccaagcagtt ccaggcggtc ccacagcteggtcacctgct ctacggcatc tcgatccagc atatctcctc ttggggcggc
tttcgctgta cggcagtagt cggtgctcgt ccagacgggc tctttccacg
ggcgcagggt cctcgtcagc gtagtctggg tcacggtgaa ccgggctgcg
cgctggccag ggtgcgcttg aggctggtcc tgctggtgct cggtcttcgc
cctgcgcgtc ggccaggtag catttgacca tggtgtcata tccgcggcgt
ggcccttggc gcgcagcttg cccttggagg aggcgccgca tgcagacttt
tgagggcgta tccgcgccgc
aggccccgca tcggggtcaa
aaaccaggtt atgagccggt
gtccacgctc agaggcctgt
cctcgagcgg gagacaaagg
ctcgcgtcca ttgtccacta
gggggtccac tcaaggaagg
tgattggttt ctataaaagg
gggtgggggc gccagctgtt
ggggtgagta
gagcttgggc gacggtctcg tcccccatgc ggtgacgaaa tgttccgcgg ggccagcacg tcgctccagg gtsggtgtag gcgttcgtcc ctccctctga
tcagtttcca
63 01 aaaacgagga ggatttgata gcctttgagg gtggccgcat
63 61 ccatctggtc agaaaagaca ggtggcaaac gacccgtaga
64 21 gggcgttgga cagcaacttg gtttttgtcg cgatcggcgc
64 81 gctccttggc cgcgatgttt aacgcaccgc cattcggga_a
6541 agacggtggt gcgctcgtcg accgcggttg tgcagggtga
66 01 caaggtcaac gctggtggct gttggtccag cagaggcggc
66 61 cgcccttgcg cgagcagaat cgtctcgtcc ggggggtctg
6 721 cgtccacggt aaagaccccg gtagtctatc ttgcatcctt
(57 81 gcaagtctag cgcctgctgc gcgctcgtat gggttgagtg
6841 ggggacccca_ tggcatgggg catgccgcaa atgtcgtaaa
cattccacga tttttgatgc aggctgtccg tcctcctcgt aaggaggcta gtgtgaagac gccacgtgac tcactctctt aaagcgggca
ttcacctggc atctttttgt gcgatggagc agctgcacgt ggcaccaggt acctctccgc ggcggtaggg ggcagcaggc catgcgcggg tgggtgagcg
ccgattccgg gccaggtgag gtttcttacc tgtccccgta atagaaactc agtgggaggg acatgtcgcc cgggtgttcc ccgcatcgct tgacttctgc
ccgcggtgat tgtcaagctt gcagggtttg attcgcgcgc gcacgcgcca gtaggcgctc ggtctagctg gcgcgtcgaa cggcaagcgc cggsggcgta
gtttcgcggg cagggtcatg
ggggtgcgct
gaagcgctgc gtccagcccc cgaggggcag ggagtaggca ctctggccgt tctggtttcc tacagacttg ggaccactct gtagcggtcg ctcttcggca tgaagggggg gtctgcgagg gctaagattg6901 cgtagagggg ctctctgagt gcatcttcca ccgcggatgc
6 961 tggcgcgcac gtaatcgtat gaggtcggga ccgaggttgc
7 021 tacgggcggg ctgctctgct gatggcatgt gagttggatg
7081 atatggttgg acgctggaag gagacctacc gcgtcacgca
7141 cgaaggaggc gtaggagtcg ggcggtgacc tgcacgtcta
72 01 gggcgcagta gtccagggtt atcctgtccc ttttttttcc
72 61 acagctcgcg gttgaggaca gtactcttgg atcggaaacc
73 21 cgtcggcctc cgaacggtaa gttgacggcc tggtaggcgc
73 81 agcatccctt ttctacgggt cttccggagc gaggtgtggg
74 41 tgagcgcaaa ggtgtccctg gtatttgaag tcagtgtcgt
7501 cgcatccgcc ctgctcccag tttggaacgc ggatttggca
75 61 gggcgaaggt gacatcgttg aggcataaag ttgcgtgtga
7 621 tgcggaaggg tcccggcacc ctgggcggcg agcacgatct
7681 cgtcaaagcc gttgatgttg caagaagcgc gggatgccct
7 741 tgatggaagg caatttttta ttcaggggag ctgagcccgt
78 01 gctctgaaag ggcccagtct gacgaatgag ctccacaggt
7861 cacgggccat tagcatttgc aaactggcga cctatggcca
7921 ttttttctgg ggtgatgcag ttcccagcgg tcccatccaa
7981 ggttcgcggc taggtctcgc atctccgccg aacttcatga
8 041 ccagcatgaa gggcacgagc ccaagtatag gtctctacat
8101 cgtaggtgac aaagagacgc gatcgggaag aactggatct
8161 cccgccaeca attggaggag gtagaagtcc ctgcgacggg
82 21 ccgaacactc gtgctggctt ctggcagegg tgeaeggget
8281 gtacatcctg cacgaggttg gaagcagagt gggaatttga
8 341 gcccctcgcc tggcgggttt ggctgettgt ccttgaccgt
84 01 ctggctgctc gaggggagtt gccgcgcgag cccaaagtcc
attccaagatatgtagggta
agttcgtgcgagggagegag
eggaagactatetgectgaa
aegttgaagetggcgtctgt
cgcagcttgttgaccagctc
tccttgatgatgtcatactt
aactcttcgcggtctttcca
gagcctagcatgtagaactg
agegegtatgcctgcgcggc
accatgactttgaggtactg
ccgtgcgctt
aagagtatctttcccgcgcg
teggaaeggttgttaattac
tggcccacaatgtaaagttc
agttectegtaggtgagctc
gcaagatgagggttggaagc
aggtggtcgcgaaaggtcct
tagaaggt a,agcgggtcttg
geggcagteactagaggctc
tgettcccaaaggcccccat
teggtgegaggatgegagee
tggctattgatgtggtgaaa
gtgcgcagta
acctgacgaccgcgcacaag
ggctggtggtcttct3Cttc
acggtggatcggaccaccac84 61 agatgtccgc gcgcggcggt gcgcagatgg gagctgtcca
8 521 tggtctggag ctcccgcggc ctgcaggt仁t acctcgcata
8581 gacgggtcag ggcgcgggct ttccaggggc tggttggtgg
8 641 cggcgtcgat ggcttgcaag gactacggta ccgcgcggcg
8701 ggcggtgggc cgcgggggtg aagcggtgsc gcgggcgagc
8 7 61 ccccggaggt agggggggct ggcaggggca cgtcggcgcc
8 821 gcgcgcgggc aggagctggt gcgaacgcga cgacgcggcg
88 81 gttgatctcc tgaatctggc ggcccggtgs gcttgagcct
8 941 gaaagagagt tcgacagaat gcggcctggc gcaaaatctc
90 01 ctgcacgtct cctgagttgt atgaactgct cgatctcttc
90 61 ctcctggaga tctccgcgtc gcgaggtcgt tggaaatgcg
9121 ggccatgage tgegagaagg cagacgcggc tgtagaccac
9181 gcccccttcg gcatcgcggg agattgagct ccacgtgccg
9241 ggcgaagacg gcgtagtttc ttgagggtgg tggcggtgtg
93 01 ttctgccacg aagaagtaca gattcgttga tatcccccaa
93 61 ggectcaagg cgctccatgg aagttgaaaa actgggagtt
94 21 gcgcgccgac aeggttaact agcteggega cagtgtcgcg
94 81 cacctcgcgc tcaaaggcta tcaatctcct cttccataag
95 41 ggcctcccct tcttcttctt gggacaegge ggcgacgacg
96 01 gcgcaccggg aggeggtcga ccgcggcgac ggcgcatggt
96 61 ctcggtgacg gcgcggccgt aagacgccgc ccgtcatgtc
9721 ccggttatgg gttggcgggg aeggegctaa egatgeatct
9781 caacaattgt tgtgtaggta agegagtccg categacegg
9 841 ateggaaaac ctctcgagaa tcgcaaggta ggctgagcac
9 901 cgtggcgggc ggcageggge gcggaggtgc tgctgatgat
9 961 gtaattaaag taggeggtct agaagcacca tgtccttggg
eggagcttgatgacaacatc
gtcaggtcaggegggsgetc
agatccaggtgatacctaat
aggccgcatccccgcggcgc
tccttggatgatgcatctaa
ccggacccgcegggagaggg
gctgcgcgcgtaggttgctg
gcctctgcgtgaagacgacg
caattteggtgtcgttgacg
cttgataggcgatctcggcc
cggctcgctccacggtggcg
cgttgaggcctccctcgttc
cgcgcatgaccacctgcgcg
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taacccagcgtegcaaegtg
ectegtagaagtccacggcg
cctcctccagaagacggatg
caggggectcttcttcttct
ctggcggcggtgggggaggg
caaagcgctcgatcatctcc
tetcgegggggcgcagttgg
ggctgccatgeggcagggat
ctccgccgccgagggacctg
aggegtctaaccagtcacag
ggcggtcggggttgtttctg
tgagacggcggatggtcgac10 021 tccggcctgc tgaatgcgca gcttcgtttt gacatcggcg
10 081 caggtctttg tagtagtctt acttcttctt ctccttcctc
10141 ttgtcctgca tctcttgcat gagtttggcc gtaggtggcg
102 01 ccctcttcct cccatgcgtg ggctgaagca gggctaggtc
10261 ggcgacaacg cgctcggcta gtgagggtag actggaagtc
10321 atccatgtcc acaaagcggt gtgtaagtgc agttggccat
103 81 aacggaccag ttaacggtct tcggtgtacc tgagacgcga
10441 gtaagccctc gagtcaaata accaggtact ggtatcccac
10501 caaaaagtgc ggcggcggct agggtggccg gggctccggg
10 561 ggcgagatct tccaacataa tacctggaca tccaggtgat
10 621 gccggcggcg gtggtggagg cggttccaga tgttgcgcag
10 681 cggcaaaaag tgctccatgg aggcgcgcgc aatcgttgac
10 741 gctctaccgt gcaaaaggag tccgtggtct ggtggataaa
108 01 ttcgcaaggg tatcatggcg cgtatccggc cgtccgccgt
10861 gatecatgcg gttaccgccc egaegtcaga caaeggggga
10 921 gtgctccttt tggcttcctt gctagctttt ttggccactg
10 981 gccgcgcgca gegtaagegg attaagtggc tcgctccctg
11041 tagceggagg gttattttcc cccggttcga gtctcggacc
11101 ggccggactg eggegaaegg caagaccccg ettgeaaatt
11161 ccteeggaaa cagggacgag gatgeatccg gtgetgegge
112 21 agatgcgccc ccctcctcag geggcagaca tgcagggcac
112 81 cctcccctcc tcctaccgcg ggttgacgcg gcagcagatg
11341 gtgattacga acccccgcgg ggacttggag gagggegagg
114 01 gcctggcgcg getaggageg aagggtgcag ctga_atgcgtg
114 61 atacgcgtga ggcgtaegtg cgaccgcgag ggagaggagc
11521 ccgaggagat gegggatega getgeggcat ggcctgaatc
ggeggtegge catgccccag geatgagect ttctaccggc ctatcgctgc ggcggcggcg tgaccccgaa gcccctcatc atatggcctg ctgcacctgc ggtatgegee cgtgttgatg
ggtgacccgg cgtagtcgtt ggeggtagag ggegatgata cgcgcggaaa tegggacget
ctgegagage gcaagtccgc gggccagcgt teegtagatg gtcgcggacg ctggccggtc
agcctgtaag cgggcactct
gacgaccggg gcgtgtcgaa ccaggcgcgg ttaggctgga aagggttgag
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gttcgagccc cccaggtgtg cggctgctgc aagegaaage tcgcgggacc ccccgtcatg gettttccca
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aagttecaeg cagggegega11581 gcgagcggtt gctgcgcgag gcgaaccggg attagtcccg
11641 cgcgcgcaca cgtggcggcc cgagcagacg gtgaaccagg
11701 agattaactt tcaaaaaagc gcttgtggcg cgcgaggagg
11761 tggctatagg actgatgcat
11821 gcaagccgct catggcgcag cagcagggac aacgaggcat
11881 tcagggatgc gctgctaaac ctggctgctc gatttgataa
11941 acatcctgca gagcatagtg cctggctgac aaggtggccg
12 001 ccatcaacta ttccatgctt ccgcaagata taccataccc
12 061 cttacgttcc catagacaag ctacatgcgc atggcgctga
12121 aggtgcttac cttgagcgac cgagcgcatc cacaaggccg
12181 tgagcgtgag ccggcggcgc gatgcacagc ctgcaaaggg
12 241 ccctggctgg cacgggcagc ctactttgac gcgggcgctg
12301 acctgcgctg ggccccaagc tggggccgga cctgggctgg
12 3 61 cggtggcacc cgcgcgcgct ggaatatgac gaggacgatg
12421 agtacgagcc agaggacggc tctgatcaga tgatgcaaga
124 81 cgcaacggac ccggcggtgc ccgtccggcc ttaactccac
12 541 ggacgactgg cgccaggtca actgcgcgca atcctgacgc
12 601 gttccggcag cagccgcagg ctggaagcgg tggtcccggc
12 661 gcgcgcaaac cccacgcacg aacgcgctgg ccgaaaacag
12 721 ggccatccgg cccgacgagg ctgcttcagc gcgtggctcg
12 781 ttacaacagc ggcaacgtgc gtgggggatg tgcgcgaggc
12 841 cgtggcgcag cgtgagcgcg ggctccatgg ttgcactaaa
12 901 cgccttcctg agtacacagc caggaggact acaccaactt
12 961 tgtgagcgca ctgcggctaa agtgaggtgt accagtctgg
13 021 gccagactat tttttccaga accgtaaacc tgagccaggc
13 081 tttcaaaaac ttgcaggggc acaggcgacc gcgcgaccgt
gaggactttg gccgacctgg
ttt^3C33CC
agcccgacgc taaccgcata acgtgcgtac
ctgtgggact ttgtaagcgc
ctgttcctta tagtgcagca
atagtagagc gtgcaggagc agcctgggca
gacctgggcg gagetcagcg ggegatagag
ccgagggccg gcagcttgag agttttacgc tcgaggggtt tttatcgcaa accgcgagct aggecgagtc
cgacgcgccc tggaggcagc ggcaaegteg gcggcgtgga gagtactaag cggtgatgtt
gggeggeget tggacegcat ccaaccggct
geagagecag catgtcgctg ctccgcaatt
agaaggtget ggcgatcgta ccggcctggt ctacgacgcg agaccaacct ggaccggctg cgcagcagca gggcaacctg ccgccaacgt gecgegggga tggtgactga gacaccgcaa ccagtagaca aggectgeag tgtggggggt gegggetccc
126<formula>formula see original document page 127</formula>14701 ccaaatgtga acgagttcat cgcgggtgat ggtgtcgcgc
14 761 ttgcctacta aggacaatca gggtggagtt cacgctgccc
14 821 gagggcaact actccgagac acaacgcgat cgtggagcac
14 881 tacttgaaag tgggcagaca acatcggggt aaagtttgac
14 941 acccgcaact tcagactggg ttgtcatgcc tggggtatat
15 0 01 acaaacgaag ccttccatcc gatgcggggt ggacttcacc
15061 cacagccgcc tgagcaactt aacccttcca ggagggcttt
15121 aggatcacct acgatgatct cactgttgga tgtggacgcc
15181 taccaggcga gcttgaaaga gtggcgcagg cggcagcaac
15241 agcagtggca gcggcgcgga ccgcggcaat gcagccggtg
153 01 gaggacatga acgatcatgc ccscacgggc tgaggagaag
15361 cgcgctgagg ccgaagcagc ctgcgcaacc cgaggtcgag
15421 aagcctcaga agaaaccggt acagcaagaa acgcagttac
154 81 aacctaataa gcaatgacag gctggtacct tgcatacaac
15 541 tacggcgacc ctcagaccgg tttgcactcc tgacgtaacc
156 01 tgcggctcgg agcaggtcta tgcaagaccc cgtgaccttc
156 61 cgctccacgc gccagatcag ccgagctgtt gcccgtgcac
15721 tccaagagct tctacaacga teatccgcca gtttacctct
15781 ctgacccacg tgttcaatcg tggcgcgccc gccagccccc
15841 accatcacca ccgtcagtga atcaegggae gctaccgctg
15 901 cgcaacagca teggaggagt acgccagacg ccgcacctgc
15 961 ccctacgttt acaaggccct tcctatcgag ccgcactttt
16 021 tgagcaagca tgtccatcct caggctgggg cctgcgcttc
16 081 ccaagcaaga tgtttggcgg aacacccagt gcgcgtgcgc
16141 gggcactacc gcgcgccctg gcactgggcg caccaccgtc
16201 gatgacgeca tegacgeggt acscgcccac gccgccscca
gtttaccaat aagtttaagg ggtggagctg aaatacgagt catgaccata gaccttatga gaacggggtt ctggaaagcg gtttgacccc gtcactggtc agacatcatt ttgctgccag gttgggcatc cgcaagcggc ggagggtggt aacattcccg tgacaccgaa cagggegggg
agagaactcc cattegegge
aacgeggcag gacacctttg
ggecgaaget gccgcccccg
gatcaaaccc ctgacagagg
caccttcacc cagtaccgca
aatccgctca ctggtcgttg caactttccg ccaggccgtc ctttcccgag
tggaccctgc ccagacatga gtggtgggcg t3ctcccasc aaccagattt
aaacgttcct gctctcacag
ecagegagtg accattactg
gggcatagtc tcgccgcgcg
tatatcgccc agcaataaca
ggccaagaag cgctccgacc
gggcgcgcac aaacgcggcc
ggtggaggag gcgcgcaact16261 gtgtccacag tggacgcggc gagcccggcg ctatgctaaa
16321 atgaagagac ggcggaggcg gccgacccgg cactgccgcc
163 81 caacgcgcgg cggcggccct ccggccgacg ggcggccatg
16441 cgggccgctc gaaggctggc cccccaggtc caggcgacga
16501 gcggccgccg cagcagccgc agggtcgcag gggcsacgtg
16561 tattgggtgc gcgactcggt tgcgcacccg ccccccgcgc
16 621 aactagattg caagaaaaaa gtatgtatcc agcggcggcg
16 681 gcgcgcaacg aagctatgtc agatgctcca ggtcatcgcg
16 741 ccggagatct atggcccccc acaagccccg aaagctaaag
168 01 cgggtcaaaa agaaaaagaa acgacgaggt ggaactgctg
16861 cacgctaccg cgcccaggcg gacgcgtaaa acgtgttttg
16 921 cgacccggca ccaccgtagt ccacccgcac ctacaagcgc
16 981 gtgtatgatg aggtgtacgg aggccaacga gcgcctcggg
17 041 gagtttgcct acggaaagcg tgccgctgga cgagggcaac
17101 ccaacaccta gcctaaagcc tgcccgcgct tgcaccgtcc
17161 gaagaaaagc gcggcctaaa cacccaccgt gcagctgatg
17221 gtacccaagc gccagcgact tgaccgtgga acctgggctg
17281 gagcccgagg tccgcgtgcg cgggactggg cgtgcagacc
17341 gtggacgttc agatacccac ccaccgccac agagggcatg
17401 gagacacaaa cgtccccggt ccgcggtgca ggcggtcgct
17461 gcggccgcgt ccaagacctc cgtggatgtt tcgcgtttca
17 521 gccccccggc gcccgcgcgg ccagcgcgct actgcccgaa
17581 tatgccctac atccttccat gtggctacac ctaccgcccc
17 641 agaagacgag caactacccg cccgccgccg ccgtcgccgt
17 7 01 cgccagcccg tgctggcccc ctcgcgaagg aggcaggacc
17 761 ctggtgctgc caacagcgcg aaaagccggt ctttgtggtt
cattcagacc gtggtgcgcg
cgtagcacgt gcttaaccgc cgcgggtatt
cgccaccgcc gcacgtcgca gtcactgtgc
ggccattagt gctatgactc
tagcggcctg ctacttagac caagcgcaaa gaagaaggaa agatgatgat acgggtacag ctttacgccc cgacgaggac
cgtaacactg gcgcgagtct ggaagatgtc gccaatcaag taccagtagc tgcctcagcg tacggaggtg ttcgaggaag tgcgcctacc acgccgaacc gatttccgtg
cgcgtgcccg tcgtactgtt atcaaagaag gagcaggatt gatgaacttg tggaaaggtc ggtgagcgct ctgcttgagc atgctggcgt cagcaggtgc ggtgacttgg
caggtggcgc accagtattg gtggcggatg caaacggacc tacggcgccg cccggctatc accactggaa cgcagggtgg
ctaccacccc agcatcgttt17 821 cttgcagata tggccctcac tgccgggatt ccgaggaaga
17881 atgcaccgta ggaggggcat gcggcatgcg tcgtgcgcac
17 941 caccggcggc ggcgcgcgtc gtatcctgcc cctccttatt
18 001 ccactgatcg ccgcggcgat catccgtggc cttgcaggcg
18 061 cagagacact gattaaaaac aaaataaaaa gtctggactc
18121 tcacgctcgc ttggtcctgt gacatcaact ttgcgtctct
18181 ggccccgcga cacggctcgc caagatatcg gcaccagcaa
18241 tatgagcggt ggcgccttca ggcattaaaa atttcggttc
183 01 caccgttaag aactatggca acaggccaga tgctgaggga
183 61 taagttgaaa gagcaaaatt ggcctggcct ctggcattag
18421 cggggtggtg gacctggcca attaacagta agcttgatcc
18481 ccgccctccc gtagaggagc gtgtctccag aggggcgtgg
18 541 cgaaaagcgt ccgcgccccg acgcaaatag acgagcctcc
18 601 ctcgtacgag gaggcactaa cgtcccatcg cgcccatggc
18 661 taccggagtg ctgggccagc ctgcctcccc ccgccgacac
18 721 ccagcagaaa cctgtgctgc gtaacccgtc ctagccgcgc
18781 gtccctgcgc cgcgccgcca cccgtagcca gtggcaactg
18 841 gcaaagcaca ctgaacagca tccctgaagc gccgacgatg
18 901 cttctgaata gctaacgtgt gtccatgtcg ccgccagagg
18 961 agetgetgag ccgccgcgcg ccccttcgat gatgeegcag
19 021 tggtcttaca tgcacatctc acctgagccc cgggctggtg
19 0 81 cagtttgccc gcgccaccga acaagtttag aaaccccacg
19141 gtggcgccta cgcacgacgt gtttgacget gcggttcatc
19201 cctgtggacc gtgaggatac ggttcaccct agctgtgggt
19261 gataacegtg tgctggacat tccgcggcgt gctggacagg
19321 ggccctactt ttaageccta ccctggctcc caagggtgee
ctgccgcctc cgtttcccgg
ggccggccac ggectgaegg
gcaccgtcgc atgcgcggcg
tggcgccgtg aagttgcatg aactattttg gecegtteat gctggggctc geaaggectg
cccggaattg tggaaaaatc
gggaaactgg gctgtggagc gaacagcagc ggtggtagat
accaggcagt gcaaaataag ctccaccggc cgtggagaca acagggaaga aactctggtg ageaaggect gcccaccacc acacacccgt aacgetggae caggcccgac cgccgttgtt gcggtccgcg atcgttgcgg
tcgtgggtct cgtatgtgtg cccgctttcc gggecaggae gaegtactte gaccacagac
tcatgtatgc aagatggcta gecteggagt agectgaata cggtcccagc
tgegtacteg tacaaggege
ggcttccacg tactttgaca
ctctggcact gcctacaacg<formula>formula see original document page 131</formula><formula>formula see original document page 132</formula>22 501 aataatgtac tagagacact ttatttgtac actctcgggt
22 561 gattatttac ccccaccctt atcaaagggg ttctgccgcg
2 2 621 catcgctatg cgccactggc gtgtttagtg ctccacttaa
22 681 actcaggcac aaccatccgc actccacagg ctgcgcacca
2 2 741 tcaccaacgc gtttagcagg gtcgcagttg gggcctccgc
22801 cctgcgcgcg cgagttgcga gaacactatc agcgccgggt
22 861 ggtgcacgct ggccagcacg cgcgtccagg tcctccgcgt
2 2 921 tgctcagggc gaacggagtc caaaaagggc gcgtgcccag
2 2 981 gctttgagtt gcactcgcac accgtgcccg gtctgggcgt
2 3 041 taggatacag cgcctgcata agccacctga gcctttgcgc
2 3101 cttcagagaa gaacatgccg attggccgga caggccgcgt
23161 cgtgcacgca gcaccttgcg cacatttcgg ccccaccggt
2 3221 tcttcacgat cttggccttg gcgctgcccg ttttcgctcg
23281 tcacatccat ttcaatcacg gcttccgtgt agacacttaa
23 341 gctcgccttc gatctcagcg gcagcccgtg ggctcgtgat
2 3 4 01 gcttgtaggt cacctctgca caggaatcgc cccatcatcg
2 3 4 61 tcacaaaggt cttgttgctg gcggtgctcc tcgttcagcc
2 3 521 aggtcttgca tacggccgcc cagtagtttg aagttcgcct
2 3 581 ttagatcgtt atccacgtgg cgcagcctcc atgcccttct
2 3 641 cccacgcaga cacgatcggc cgtaatttca ctttccgctt
2 3 701 cgctgggctc ttcctcttcc cgccactggg tcgtcttcat
2 3 761 tcagccgccg cactgtgcgc gattagcacc ggtgggttgc
23 821 tgaaacccac catttgtagc ctcgctgtcc acgattacct
2 3 8 81 ctggtgatgg cgggcgctcg ctttttcttc ttgggcgcaa
2 3 941 tggccaaatc cgccgccgag tgtgcgcggc accagcgcgt
24 0 01 cttgtgatga gtcttcctcg cctcatccgc ttttttgggg
ttcaataaag gccgtctgcg agggacacgt ggcagctcgg tcgggcgccg tacacagggt ctcttgtcgg
gcaaatgctt ccgtttaaaa tgcgatactg tgaagttttc atatcttgaa tgcagcactg agatcagatc
aactttggta gctgccttcc cgtagtggca tcaaaaggtg aaagccttga tctgcttaaa
caagacttgc tcggtgttgg ctagactgct tgctccttat
cggaaaactg agatctgcac ccttcagcgc ttatcatsat
cagcggtgca gccacaacgc
aacgactgca ggtacgcctg
gtgaaggtca agagcttcca
gctgcaaccc cttggtcagg
tacttgtcca tcagcgcgcg acactcagcg ggtteatcac tcttgcgtcc gcataccacg ttacctcctt tgecatgett gccacatctt ctctttcttc ggcttgggag aagggegett gtcgatggcc gcgggctggg tccteggact cgatacgccg
13324 061 gcgcccgggg aggcggcggc gtcctccatg gttgggggac
24121 gtcgcgccgc accgcgtccg ctgctcctct tcccgactgg
24181 ccatttcctt ctcctatagg agtcgagaag aaggacagcc
24 241 taaccgcccc ctctgagttc tgccgccaac gcgcctacca
243 01 ccttccccgt cgaggcaccc gattatcgag caggacccag
243 61 gttttgtaag cgaagacgac
244 21 aggacaacgc agaggcaaac ggacgaaagg catggcgact
244 81 acctagatgt gggagacgac gcgccagtgc gccattatct
24 541 gcgacgcgtt gcaagagcgc agcggatgtc agccttgcct
24 601 acgaacgcca cctattctca ccaagaaaac ggcacatgcg
24661 agcccaaccc gcgcctcaac gccagaggtg cttgccacct
24721 atcacatctt tttccaaaac ccgtgccaac cgcagccgag
24 781 cggacaagca gctggccttg tgatatcgcc tcgctcaacg
2 4 841 aagtgccaaa aatctttgag gcgcgcggca aacgctctgc
24 901 aacaggaaaa cagcgaaaat ggtggaactc gagggtgaca
2 4 961 acgcgcgcct agccgtacta ccactttgcc tacccggcac
2 5 021 ttaacctacc ccccaaggtc gctgatcgtg cgccgtgcgc
2 5 081 agcccctgga gagggatgca ggagggccta cccgcagttg
2 5141 gcgacgagca gctagcgcgc tgccgacttg gaggagcgac
2 5201 gcaaactaat gatggccgca tgagtgcatg cagcggttct
25261 ttgctgaccc ggagatgcag gcactacacc tttcgacagg
2 5321 gctacgtacg ccaggcctgc ctgcaacctg gtctcctacc
2 5381 ttggaatttt gcacgaaaac tcattccacg ctcaagggcg
2 5441 aggcgcgccg cgactacgtc tctatgctac acctggcaga
2 5 5 01 cggccatggg cgt仁tggcag cctcaaggag ctgcagaaac
2 5 5 61 tgct aaagca aaactf tgaag cgagcgctcc gtggccgcgc
gacggggacg cgctcggggg
gccaccaccg ccgcttgagg gaggaccgct
gtgctgttga agcgatgtgc ccgcgcgtac ttctaccccg tgcaagatac cggcagggcg ggtcttggac gaaagtcact aaacgcagca atgagcacag aatttgcaag tggcttcaaa gtgctcgtta cgcaagctag aagatctcca cgccttgggc cgcgactgcg cagtgcttgg gacctatgga
gggacgacac tggtttcgcg tcatggagtc cctccaccga
cagtaccaac tcgggcgggg agcatctgca ccctcgccat ccccc333cg tatttgccgt ccctatcctg ctgtcatacc gcgacgagaa ctggagtgtt tcgaggtcac tcatgagtga
cgcgcgagcc ccgtggagct aggaaacatt scgtggagct aaaacgtgct tttscttstt aggagtgcaa cggccttcaa2 5 621 acctggcgga catcattttc cctgcaacag ggtctgccag
2 5 681 acttcaccag tcaaagcatg tatcctagag cgctcaggaa
2 5 741 tcttgcccgc cacctgctgt gcccattaag taccgcgaat
258 01 gccctccgcc gctttggggc agccaactac cttgcctacc
2 5861 actctgacat aatggaagac ggagtgtcac tgtcgctgca
2 5 921 acctatgcac cccgcaccgc gctgcttaac gaaagtcaaa
2 5 981 ttatcggtac ctttgagctg aaagtccgcg gctccggggt
2 6 041 tgaaactcac tccggggctg caaatttgta cctgaggact
2 6101 accacgccca cgagattagg cccgccaaat gcggagctta
2 6161 ccgcctgcgt cattacccag gcaagccatc aacaaagccc
2 6221 gccaagagtt tctgctacga ggacccccag tccggcgagg
2 6281 agctcaaccc aatccccccg gcagccgcgg gcccttgctt
2 6341 cccaggatgg cacccaaaaa cacccacgga cgaggaggaa
2 6401 tactgggaca gtcaggcaga aggaggacat gatggaagac
2 6461 tgggagagcc tagacgagga tgtcagacga aacaccgtca
2 6 521 ccctcggtcg cattcccctc caaccggttc cagcatggct
2 6581 acaacctccg ctcctcaggc gccgacccaa ccgtagatgg
26641 gacaccactg gaaccagggc cgccgttagc ccaagagcaa
2 6 701 caacagcgcc aaggctaccg acgccatagt tgcttgcttg
2 6 761 caagactgtg ggggcaacat ttctctacca tcacggcgtg
2 6821 gccttccccc gtaacatcct acagcccata ctgcaccggc
2 6 8 81 ggcagcggca gcggcagcaa caaaggcgac cggatagcaa
2 6 941 gactctgaca aagcccaaga gcaggaggag gagcgctgcg
27001 tctggcgccc aacgaaicccg aacaggattt ttcccactct
27061 gtatgctata tttcaacaga ctgaaaataa aaaacaggtc
2 7121 tctgcgatcc ctcacccgca gaagatcagc ttcggcgcac
cccgaacgcctgcttaaaac
ttgcagaactttaggaactt
gcacttcctagcgactttgt
cactgctaccttctgcagct
gtgagcggtgacggtctact
tccctggtttgcaattcgca
cagggtccctcgcctgacga
tggscgtcggcttaccttcg
ttctacgaagaccaatcccg
ggccacattcttggccaatt
gggtttactt
ccgccgcagccctatcagca
gaagctgcagctgccgccgc
ggaggttttggacgaggagg
agcttccgaggtcgaagagg
gccggcgccccagaaategg
gccgccggcactgcccgttc
cggtaagtccaagcagccgc
ctcatggcgcgggcacaaga
ctccttcgcccgccgctttc
gcattactaccgtcatctct
cagcagcggccacacagaag
aatccacagcggeggcagea
tatcgacccgcgagcttaga
gcaggggcca
gctgcctgtatcacaaaagc2 7181 gctggaagac gcggaggctc ctgactctta aggactagtt
2 7241 tcgcgccctt tctcaaattt ctccagcggc cacacccggc
2 7301 gccagcacct gtcgtcagcg cccacgccct acatgtggag
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2 7421 ctacatgagc gcgggacccc ggaatccgcg cccaccgaaa
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2 7781 tcagatcggc ggcgccggcc caggcaatcc taactctgca
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2 7 961 tattcctaac tttgacgcgg tacgactgaa tgttaagtgg
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2 8 0 81 ccgcgactcc ggtgagtttt gatcatatcg agggcccggc
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2 8201 ccagcgcccc ctgctagttg gttctcactg tgatttgcaa
2 8261 ctgtcctaac cttggattac actagagtac ccggggatct
2 8321 tattcccttt aactaataaa ttacttaaaa tcagttagca
2 8381 aatttctgtc cagtttattc ctcccagctc tggtattgca
2 8441 gcttcc仁cct ggctgcaaac aatgtcagtt tcctcctgtt
28501 cctgtccatc cgcacccact gaagcgcgca agaccgtctg
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2 8 621 ttcttactcc tccctttgta gagtccccct ggggtactct
2 8 681 ctttgcgcct atccgaacct gcttgcgctc aaaatgggca
tcttcagtaa aagcgcgaaa
atactgcgcg actacgtcat
ccattatgag caaggaaatt
ttgcggctgg agctgcccaa
acatgatatc ccgggtcaac
cggctattac tgtaccagga ttcagatgac ccgggcaggg cggtgagctc gtccttcatt gctctggagg accccttctc
C3CC3C3CCt
aagtcccgct taactcaggg tataactcac ctcgcttggt cacgcctcgt cattggaact gggacctccc
taaaggactc ggcggacggc
tgaaacacct ggtccactgt
gctactttga
attgcccgag gettgcccgt
agegggacag gggaccctgt
atcaagatcc
tctagttata aaagcatcac
agcagcacct ccttgeectc
tttctccaca atctaaatgg
atcttcatgt tgttgcagat
tatccatatg acaeggaaac
tcccccaatg ggtttcaaga
ctagttacct ccaatggcat<image>image see original document page 137</image>30301 tgtttcaacg tgtttatttt gtcatttttc attcagtagt
3 0361 atagccccac caccacatag ttaatcaaac tcacagaacc
3 0421 ctagtattca acctgccacc acacagtcct ttctccccgg
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3 0 721 aggatagggc ggtggtgctg gctgccgccg ccgctccgtc
3 0 781 ctgcaggaat acaacatggc ttcgcaccgc ccgcagcata
3 0 841 aggcgccttg tcctccgggc cacttaaatc agcacagtaa
3 0 901 ctgcagcaca gcaccacaat gcaaggcgct gtatccaaag
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权利要求
1. 嵌合腺病毒表达载体，所述载体包含表达盒，该表达盒包含以下元件(a)可操作地连接于编码toll样受体3(TLR-3)激动剂的核酸的第一启动子；和(b)可操作地连接于编码异源多肽的核酸的第二启动子。
2. 如权利要求1所述的嵌合腺病毒表达载体，其中所述编码 TLR-3激动剂的核酸包括编码dsRNA的核酸。
3. 如权利要求1所述的嵌合腺病毒表达载体，其中所述编码 TLR-3激动剂的核酸包括选自SEQIDNOS: 3、 4、 5、 8、 9、 10、 11和12的序列。
4. 如权利要求1所述的嵌合腺病毒表达载体，其中所述异源多肽是HIV包膜多肽。
5. 如权利要求4所述的嵌合腺病毒表达载体，其中所述HIV包膜多肽选自gp41、 gpl20和gp160。
6. 如权利要求1所述的嵌合腺病毒表达载体，其中所述异源多肽是流感HA多肽。
7. 如权利要求1所述的嵌合腺病毒表达载体，其中所述第一启动子和第二启动子相同。
8. 如权利要求7所述的嵌合腺病毒表达载体，其中所述第一启动子和第二启动子都是CMV启动子。
9. 免疫原性组合物，包含权利要求1所述的表达载体和药物可接受的载体。
10. 激发免疫反应的方法，所述方法包括给予哺乳动物个体免疫原性有效量的权利要求1所述的载体，其中所述免疫反应针对异源多肽，并且其中给药途径选自口腔、鼻内或粘膜。
11. 如权利要求IO所述的方法，其中所述异源多肽在选自树突细胞、^:褶细胞和肠上皮细胞的细胞中表达。
12. 如权利要求10所述的方法，其中所述哺乳动物是人。
13. 免疫原性组合物，所述组合物包含(a) 包含可操作地连接于编码异源多肽的核酸的启动子的嵌合腺病毒表达载体；(b) TLR-3激动剂；和(c) 药物可接受的载体。
14. 如权利要求13所述的组合物，其中所述启动子是CMV启动子。
15. 如权利要求13所述的组合物，其中所述TLR-3激动剂选自dsRNA和聚力几胞苷酸。
16. 如权利要求13所述的组合物，其中所述异源多肽是HIV包膜多肽。
17. 如权利要求16所述的组合物，其中所述HIV包膜多肽选自 gp41、 gpl20和gpl60。
18. 如权利要求13所述的组合物，其中所述异源多肽是流感HA 多肽。
19. 如权利要求13所述的组合物，其中所述TLR-3激动剂在所述异源多肽给药的48小时内给药。
20. 如权利要求13所述的组合物，其中所述TLR-3激动剂是包括选自SEQIDNOS: 3、 4、 5、 8、 9、 10、 11和12的序列的核酸。
21. 激发免疫反应的方法，所述方法包括给予哺乳动物个体(a) 包含可操作地连接于编码异源多肽的核酸的启动子的嵌合腺病毒表达载体；(b) TLR-3激动剂，其中所述免疫反应针对所述异源多肽。
22. 如权利要求21所述的方法，其中所述启动子选自CMV启动子和人/5肌动蛋白启动子。
23. 如权利要求21所述的方法，其中所述异源多肽是HIV包膜多肽。
24. 如权利要求23所述的方法，其中所述HIV包膜多肽选自 gp41、 gpl20和gpl60。
25. 如权利要求21所述的方法，其中所述异源多肽是流感HA多肽。
26. 如权利要求21所述的方法，其中所述TLR-3激动剂是dsRNA。
27. 如权利要求21所述的方法，其中所述TLR-3激动剂在所述嵌合腺病毒表达载体给药的48小时内给药。
28. 包含在SEQ ID NO: 1、 2、 3、 7、 14、 15、 16或17中描述的序列的分离的核酸。
全文摘要
本发明提供了嵌合腺病毒载体以及使用所述载体激发针对目的抗原的免疫反应的方法。
文档编号C07H21/04GK101432291SQ200780015345
公开日2009年5月13日申请日期2007年2月28日优先权日2006年2月28日
发明者希恩·N·塔克申请人:瓦克萨特公司

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技术研发人员：希恩.N.塔克
技术所有人：瓦克萨特公司
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