用作组蛋白去乙酰化酶抑制剂的异羟肟酸类化合物及其用途的制作方法

专利名称：用作组蛋白去乙酰化酶抑制剂的异羟肟酸类化合物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明属于制药技术领域，具体涉及一种用作组蛋白去乙酰化酶抑制剂的异羟肟酸类化合物及其用途。
背景技术：
包括肿瘤在内许多疾病的形成是一个相当复杂的过程，涉及到各种基因如何响应内外环境的变化，从而实现在时间和空间上表达的调控。近年来遗传学中兴起的一个前沿领域——表观遗传学(Epigenetics)为解答这些问题提供了新思路。表观遗传的分子基础主要涉及到两个方面 一个是针对DNA的甲基化修饰，另一个是针对染色质组蛋白的乙酰化修饰。除了DNA序列作为遗传编码外，表观基因机制是基因表达和随后的蛋白质合成的最基本的调节因素。在真核细胞中，在G0相，DNA被核小体紧密填充，以致于DNA不能接近转录元件。组蛋白乙酰化反应是一个决定性的表观基因过程，可以重塑转录元件与DNA的接近能力，从而引发基因表达。现在有大量的证据表明，包围DNA的染色质蛋白重建是基因调控表观遗传学的根本机制，这包括组蛋白尾部可逆的转录后修饰，如赖氨酸残基乙酰化、赖氨酸残基和精氨酸残基的甲基化、丝氨酸残基的磷酸化、赖氨酸残基的泛素化和类泛素化。其中，组蛋白的乙酰化修饰最为普遍。组蛋白的乙酰化修饰在基因表达调控中发挥作用。组蛋白在体内的乙酰化作用发生在蛋白质N端遗传保守的赖氨酸氨基上，但组蛋白H3和H4的乙酰化修饰比H2A和H2B更具广泛性。组蛋白H3乙酰化的重要位点是Lys9和Lysl4,组蛋白H4的乙酰化位点是Lys5、 Lys8、 Lysl2和Lysl6。
组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase， HDAC)和组蛋白乙酰基转移酶(histone aceyl transferase, HAT)决定组蛋白的乙酰化。核心组蛋白的乙酰化水平是HDACs和HATs共同调控的结果。HDAC是多蛋白质复合物的催化亚单位，参与组蛋白和非组蛋白的蛋白质去乙酰化。HDAC介导核小体结构改变和调节基因表达，参与细胞周期进程和分化，并且与多种疾病如癌症、急性髓性白血病、病毒和感染等的发生与发展有关。 一般情况下，组蛋
4白乙酰化水平增强与基因转录活性的增强有关，而乙酰化水平过低与基因表达抑制有关。
通过对组蛋白的化学修饰，能够使核小体的构型改变。对组蛋白的修饰作用发生在蛋白质N端遗传保守的赖氨酸氨基上。这些赖氨酸残基在生理pH条件下带正电荷，带正电荷的赖氨酸残基与DNA磷酸根骨架的氧负离子相互作用，使得DNA被组蛋白包围得更紧密。HAT将乙酰辅酶A(乙酰CoA)乙酰基部分转移到核心组蛋白氨基末端上特定Lys残基的s-氨基基团。氨基上的正电荷被消除，这时DNA分子本身所带有的负电荷有利于DNA构象的展开，核小体的结构变得松弛。这种松弛的结构促进了转录因子和协同转录因子与DNA分子的接触，因此组蛋白乙酰化可以激活特定基因的转录过程。HDAC则移去组蛋白Lys残基上的乙酰基，恢复组蛋白的正电性，带正电荷的Lys残基与DNA分子的电性相反，增加了 DNA与组蛋白之间的吸引力，使启动子不易接近转录调控元件，从而抑制转录。
HDAC和HAT都不直接与DNA结合。HAT与其他组蛋白乙酰化酶和转录因子形成复合物，而HDAC是作为与其它转录共抑制物的复合物被募集的。组蛋白的活性是通过转录后修饰来调控的。HDAC1和HDAC2的磷酸化反应导致HDAC活性增加。HDAC不但使组蛋白发生去乙酰作用，而且可以使非组蛋白发生去乙酰作用，如p53和GATA-l。乙酰化的p53显示其与靶序列有较强的亲和力。
许多研究已证实了组蛋白髙/低乙酰化在肿瘤发生中起重要作用。 一方面，人们发现，组蛋白乙酰化和脱乙酰化的变化与肿瘤细胞的形态变化有关；另一方面，HAT (例如p300/CBP、 pCAF、 ACTR等)或HDAC可与一些癌基因和抑癌基因(如参与细胞周期调控的有P53、 Rb、 p16、 p21、 p27等抑癌基因)产物相互作用，从而修饰或介导这些产物对与细胞分化和细胞增殖有关的基因转录的作用。通过对去乙酰化的抑制作用，可以导致染色质过乙酰化，促进癌细胞的基因活化，从而导致细胞分化或死亡。
HDAC抑制剂的抗肿瘤机制有赖于基因表达的调控，大量体内和体外实验证实其抗肿瘤机制有以下几点。
HDAC抑制剂可以诱导肿瘤细胞凋亡，其治疗作用在于可以选择性地诱导肿瘤细胞凋亡，大量的临床实验结果和临床前动物实验证明，HDAC抑制剂可以在正常细胞和肿瘤细胞之间实现选择性。剂量极限毒性包括，血小板 损伤、恶心、使疲劳等症状，但在很多情况下，这些副作用在临床上是可以 控制的。体外实验表明，转化细胞对于HDAC抑制剂的反应主要由细胞的 类型决定，而不是由HDAC抑制剂的结构和浓度决定。HDAC抑制剂对增 生和停滞的肿瘤细胞会产生细胞毒性，而正常细胞可以抵抗HDAC抑制剂 诱导的细胞死亡。转化细胞对HDAC抑制剂会产生不同表型改变，包括G1 期停滞、终末分化、线粒体介导的caspase依赖的调亡等。在正常细胞和转 化细胞中都存在组蛋白乙酰化，所以出现在转化细胞中的细胞毒性并不是因 为HDAC抑制剂在它们中的活性不同所致。但是对于不同的转化细胞， HDAC抑制剂诱导细胞死亡的机制是不同的。
HDAC抑制剂还可以阻滞细胞周期和促进细胞分化。HDAC抑制剂最初 是由于其具有诱导细胞分化而被发现的，这种作用与视网膜母细胞瘤蛋白
(pRb)和相关蛋白介导的在Gl/S边界的细胞周期停滞紧密相关。HDAC 抑制剂通过CDKNlA(p21wafl/cipl)的上调或者通过细胞周期蛋白的下调， 从而在Gl/S边界诱导细胞周期停滞，HDAC抑制剂介导的生长停滞通过直 接影响染色质发生结构变化，导致特定位点基因表达。尽管受影响的基因不 足基因总数的2%，但却具有特殊的功效。
HDAC抑制剂还可以通过激活G2相关卡以介导G2/M相停滞。在特定 的条件下，G2相关卡的丢失可以用来确定肿瘤细胞对HDAC抑制剂的凋亡 敏感程度。与HDAC抑制剂相关的G2关卡可能与臂间的异染色质的的髙度 乙酰化有关，G2关卡的丧失能够导致染色体的分离和核的片断化。此外， 在抑癌基因Rb介导的反应中，HDAC抑制剂也起重要作用。
大量实验表明，不同的肿瘤坏死因子受体超家族成员与其配基在HDAC 抑制剂处理后均被活化。研究证明，HDAC抑制剂诱导的细胞凋亡与诱导一 个或多个死亡受体和/或配基有关。然而通过死亡受体的信号传导对于HDAC 抑制剂诱导的细胞凋亡是否是必须，当前仍然存在争议。
一些独立的研究结果强烈支持线粒体凋亡通路在HDAC抑制剂介导的 肿瘤细胞死亡的重要作用。他们认为BCL2或者BCL-X1阻断了凋亡通路， 抑制了不同的HDAC抑制剂介导的凋亡。但是HDAC抑制剂究竟如何激发 内部细胞凋亡的机制还需要进一步的研究。目前认为激发机制与选择性激活或诱导BH3-only蛋白和调控活性氧自由基(ROS)有关。
HDAC抑制剂可抑制肿瘤血管生成，这与促血管生成基因表达程度降低 有关。大多数HDAC抑制剂能够下调血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成 纤维细胞生长因子(bFGF)、缺氧诱导因子-la (HIFla)、血管生成素、内 膜内皮激酶-2 (TIE2)和内皮一氧化氮合酶合成酶(eNOS)。 HDAC抑制剂 可以下调趋化因子受体4 (C-X-C motif CXCR4)的表达，趋化因子受体对 于骨髓前体细胞的归巢和内皮细胞循环至新血管生成位点是非常重要的，这 两种情形在非转化内皮细胞和肿瘤细胞系中均存在。此外，HDAC抑制剂可 以抑制内皮祖细胞的分化。以上研究结果表明，HDAC抑制剂能够通过改变 血管生成基因，从而抑制血管的生成，特别是对于早期肿瘤，可以阻断营养 供给，抑制肿瘤的扩散。
越来越多地证据表明，HDAC抑制剂可以通过直接作用于恶性细胞，或 者提髙免疫细胞的活性从而增强抗肿瘤免疫能力。HDAC抑制剂通过上调主 要组织相容性复合物(MHC)的I和H类蛋白、共促进黏着分子(如CD40、 CD80、 CD86)和细胞间粘着分子1 (ICAM1)的表达来增强肿瘤细胞的免 疫原性。最近的研究结果表明，HDAC抑制剂诱导肿瘤细胞表面的MHC第 I类链相关分子MICA和MICB表达。SAHA可以通过抑制促免疫因子，如 肿瘤坏死因-a (TNFa)、白(细胞)介素-1 (IL-1)和干扰素-y (IFNy)，诱 导急性移植物抗宿主病(GVHD)。 HDAC抑制剂对多种细胞因子有调节作 用，有可能作为新型免疫制剂治疗自身免疫性疾病和组织器官移植的免疫排 斥作用。
此外，HDAC抑制剂对神经系统疾病的治疗作用和放射增敏作用。 HDAC是目前最具有发展前景的一类非激酶抗癌靶标。HDAC是转录过 程中主要的调控子，而且在其它细胞过程中也起着重要的作用。HDAC抑制 剂是目前已经验证的治疗人类癌症的新策略。目前已经发现了多种结构类型 的组蛋白去乙酰化酶抑制剂，包括(1)短链脂肪酸及其盐，如丁酸和异戊 酸钠；(2)异羟膀酸，如SAHA (Vorinostat)和LBH-589 ( Panobinostat);
(3)苯甲酰胺，如MS-275 (Entinostat)和MGCD0103; (4)环四肽，如 trapoxin和FK-228;还有乙酮、三氟甲基酮、酮酰胺、2-氨基苯胺、硫醇及 其乙酰化衍生物等作为药效团的组蛋白去乙酰化酶抑制剂。
7然而这些备选药物大部分还停留在临床前研究状态， 一部分已进入临床 研究。其中SAHA结构如式Vfl所示，已经于2006年获得FDA批准上市，仅 被批准用于治疗皮肤T-细胞淋巴瘤——治疗一种罕见的癌症。
(vn)
然而，到目前为止，SAHA药物能较好治疗实体瘤的临床证据还比较少， 人们尚不详细和充分了解SAHA药物及其治疗的深层机理以及对不同肿瘤 的作用异常，因此该药物在应用领域还只能停留在经验和有限的区域内。另 外，SAHA药物具有心脏方面的副反应。而且通过X射线晶体衍射结构分 析及构效关系表明SAHA具有3个区域金属结合区(metal binding),与酶 活性位点的氨基酸残基形成氢键，并与Z^+螯合;连接链区(linker)，占有酶 的狭窄通道，其链的长度决定金属结合区与Zn"的结合状况；表面识别区 (surface recognition),与酶活性位点外侧的氨基酸残基结合，决定抑制剂分 子对酶的识别及结合程度，辅助金属结合区与Zi^+螯合。由于直接作用于锌 离子，使其存在一定的毒性作用。
MS-275如式丽所示，是一种苯甲酰胺的衍生物，是有效的组蛋白去乙 酰基酶抑制剂，在临床前研究中表现出抗肿瘤活性。有实验证实，能够有效 地抑制晚期急性髓系白血病患者体内的组蛋白去乙酰基酶的活性，而没有显 著的心脏毒性。
(vm)
而当前肿瘤发病率越来越高，迫切需要了一种具有较低毒性的治疗肿瘤 药物，也需要更多可供选择的组蛋白去乙酰化酶抑制剂药物。本发明由此而 来。

发明内容
本发明目的在于提供一种新型组蛋白去乙酰酶抑制剂，解决了现有技术 中治疗肿瘤以及白血病等药物组蛋白去乙酰酶抑制剂种类较少、疗效不够确 切以及毒性较大等问题。
为了解决现有技术中的这些问题，本发明提供的技术方案是-
一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，<formula>formula see original document page 9</formula>
其中，Ar为芳基或杂环基，其任选被一个或多个选自下列的基团所取 代Cl-8烷基、Cl-8垸氧基、卤素、硝基、Cl-8氨基烷基、Cl-8烷基氨基、 Cl-8硫代烷基、Cl-8卤代烷基、Cl-8卤代烷氧基、Cl-8酯基、苯基或杂环 基；Ri选自氢或Cl-8烷基。
优选的，2、根据权利要求1所述的化合物，其特征在于所述的芳基为 苯基。
优选的，所述的杂环基选自吡啶、噻吩、呋喃、吡咯或咪唑。
优选的，所述的芳基或杂环基任选被一个或多个选自下列的基团所取 代Cl-8烷基、卤素、硝基或Cl-8卤代烷基。
优选的，所述的芳基或杂环基任选被一个或多个选自下列的基团所取 代- Cl-4的垸基、卤素、硝基或Cl-4的卤代烷基。
优选的，Rl为氢。
本发明中的各基团一般具有如下意义
术语"垸基"指直链或支链；Cl-n烷基则表示个碳原子的饱和的 脂烃基，包括直链和支链基团(例如"Cl-20烷基"，是指该基团为烷基，且 烷基的碳链碳原子数量在1 20之间，即含l个碳原子、2个碳原子、3个 碳原子等，直至包括20个碳原子的垸基。而该1-20的限制并不包括烷基上 的取代的碳原子数，如取代烷氨基中的"烷基"，当没有特别限制其碳原子 数时，仅指其中指明的垸基部分的碳原子数为1-20，而并不包括垸基上的取代基的碳原子数以及氨基上的其他取代基的碳原子数。而釆用"Cl-8垸基" 的表述则表示该烷基中含有1 8个碳原子的烷基。)
术语"垸氧基"为通过氧原子连接的烷基；如Cl-8垸氧基包括甲氧基、 乙氧基、丙氧基；Cl-8垸氧基，是指垸氧基中的垸基的碳原子数为1 8。
卤代烷基，表示卤素原子取代的烷基，该取代包括单取代和多取代，其 中烷基的概念如上所述。Cl 8卤代垸基，是指卤代垸基中的烷基的碳原子 数为1 8。卤代烷基指垸基上H原子被卤素原子取代的基团；如全氟垸基 是指垸基上的H全部被F取代的基团。
烷基氨基的结构为烷基-NH-。氨基烷基的结构为NH2-烷基-。硫代 烷基是指具有硫原子取代的垸基。
杂环基，是指含有N、 O、 S等杂原子的由3到8个环原子的环状基团， 在该基团中，杂原子可以只含有N原子，也可以含有O或S原子。其中杂 原子的数目可以为一个，也可以为多个。该杂环可以为饱和的类环烷结构， 也可以为不饱和的芳环类结构。更具体地，该术语含氮杂环基包括但不限于 吡咯基、四氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、哌嗪基、嘧啶基、咪唑基 等。
应清楚的是，某些式(I)化合物可呈现互变异构现象。式(I)化合物 可以以未溶剂化的形式存在，也可以以溶剂化的形式存在。甚至，本发明某 些式(I)化合物可以存在多晶现象。
式(I)化合物的适合的药学上可接受的盐可以是式(I)化合物的酸加 成盐，可以是如以下无机或有机酸所生成的酸-加成盐盐酸、氢溴酸、硫 酸、三氟乙酸、柠檬酸或马来酸；可以是具有足够酸性的式(I)化合物的 盐，如碱金属盐或碱土金属盐(钙盐、镁盐或铵盐等)。式(I)化合物的另 一种适合的药学上可接受的盐可以是在给予式(I)化合物后在人或动物体 内形成的盐。
本发明的又一目的在于提供一种式(II)的化合物中间体，
10<formula>formula see original document page 11</formula>(II)
其中，Ar为芳基或杂环基，其任选被一个或多个选自下列的基团所取 代Cl-8垸基、Cl-8烷氧基、卤素、硝基、Cl-8氨基垸基、Cl-8烷基氨基、 Cl-8硫代烷基、Cl-8卤代烷基、Cl-8卤代烷氧基、Cl-8酯基、苯基或杂环 基；Ri选自氢或Cl-8烷基。
本发明的又一目的在于提供一种药物组合物，其特征在于所述药物组合 物包括该化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的稀释剂或载体。
可将本发明的化合物以前药的形式给药。前药是指经过生物体内转化后 才具有药理作用的化合物。可使用前药改变本发明化合物的物理化学性质或
药物动力学方面性质。当本发明的化合物含有可连接改变性质基团的适当基 团或取代基团时，可形成前药。
本发明的又一目的在于提供该化合物或其药学上可接受的盐在制备药 物方面的应用，其特征在于所述药物用于治疗与细胞分化或增殖相关的实体 瘤或白血病。
本发明的又一目的在于提供一种制备该化合物或其药学上可接受的盐 的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤
(1)使式(IV)的化合物
<formula>formula see original document page 11</formula>(V)
(2)使步骤(1)中式(V)的化合物与式(VI)的化合物Ar、 X 、
0々、(VI)
反应得到式(n)的化合物；
(3)式(n)的化合物水解酸化后在适当的活化试剂中与羟胺反应得
到式(I)的化合物；
其中Ar为芳基或杂环基，其任选被一个或多个选自下列的基团所取代 Cl-8垸基、Cl-8烷氧基、卤素、硝基、Cl-8氨基烷基、Cl-8垸基氨基、 Cl-8硫代烷基、Cl-8卤代垸基、Cl-8卤代垸氧基、Cl-8酯基、苯基或杂环 基；Ri选自氢或Cl-8垸基；X选自卤素。
更为优选的，采用3-(5-硝基苯并bl噻吩-2-基)烯丙酸乙酯IV经铁粉还原 可得到中间体V,然后与不同取代的磺酰氯反应，得到中间体II。将得到的
乙酯水解、酸化，制得中间体羧酸m;然后以氯甲酸乙酯为活化试剂，制得
中间体混合酸酐，将酸酐的四氢呋喃溶液滴加至羟胺的甲醇溶液中，室温搅 拌；反应完毕，蒸除溶剂，以乙酸乙酯溶解，用饱和氯化铵溶液分配；有机 层用无水硫酸镁干燥，减压蒸去溶剂，即可以得到通式为(I)的目标化合物。
(I )
为制备相应的药物组合物，除了至少一种本发明的活性物质外，还使用 载体材料、填料、溶剂、稀释剂、着色剂或粘结剂。助剂的选择及其用量取 决于该药物的给药途径，如口服、静脉注射、腹腔注射、皮内、肌肉、鼻内 或局部使用。片剂、包衣片、胶囊、颗粒剂、滴剂、液体剂型以及糖浆剂等 形式的制剂适于口服，而溶液、悬浮剂、喷雾剂等适用于非肠道、局部和吸 入给药。给患者或实验动物给药剂量根据患者或动物的体重、施用方式、指 症和病症情况给药。
12本发明的化合物经药物活性研究证实，该化合物具有与阳性药物SAHA 和MS-275类似的活性，可以应用于治疗与细胞分化或增殖相关的实体瘤或 白血病的药物方面。
具体实施例方式
以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明。应理解，这些实施例是 用于说明本发明而不限于限制本发明的范围。实施例中采用的实施条件可以 根据具体厂家的条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的 条件。
实施例13-(5-硝基苯并[bl噻吩-2-基)烯丙酸乙酯1的合成
将5.2 g (0.025 mol)5-硝基苯并[b]噻吩-2-甲醛和13.06 g(0.0375 mol) 三苯基乙氧羰基次甲基膦烷置于三颈瓶中，加入150 ml甲苯，回流反应12 h。 反应完毕，蒸去甲苯。混合物经柱层析分离得到类白色固体。
Mp: 145-146 *C 。 1H-画R(300 Hz，CDC13) S: 8.66 (d， J=2.2 Hz， 1H)， 8.22(dd， Jl=2.2 Hz， J2-8.9 Hz， 1H)， 7.84-7.93 (m， 2H)， 7.59 (s, 1H)， 6.37(d， J=15.7 Hz， 1H)， 4.29(q， J-7.1 Hz， 2H)， 1.36(t， J-7.1 Hz， 2H)。
5-硝基苯并[b噻吩-2-甲醛的合成
在IO "C， 30 min内将三乙胺(106.3 g， 1.05 mol)滴加到2-氯5-硝基苯 甲醛(93.0 g， 0.5 mol)和二噻烷(39.9 g， 0.26 mol)的乙醇溶液中，然后反应混 合物在35 t:反应8h。将混合物冷却至o r,依次固体过滤，水洗，干燥。 将粗产物溶于THF,经活性炭脱色，减压蒸去溶剂，得到5-硝基苯并bl噻 吩-2-甲醛(90.1 g， 87%)。产物以乙酸重结晶得到黄色固体。
Mp: 201-203 " 。 ^-NMR: 6 10.19 (s，lH)， 9.05 (d，lH,J = 2.2 Hz)， 8.60 (s，lH), 8.36 (d，lH，J = 9 Hz)， 8.32 (d*d, Jl = 2.2 Hz ，J2 = 9 Hz)。 Anal. Calcd for C9H5N03S: C, 52.17; H， 2.43; N， 6.76. Found: C, 52.23; H, 2.50; N，
6.73e三苯基乙氧羰基次甲基膦垸的合成
Ph、
Ph—P=CHC02Et Ph
将52.4 g (0.2 mol)的三苯基膦溶于500 ml无水苯中，机械搅拌下滴 入40 g(0.24 mol)溴乙酸乙酯，加热回流5h。冷却后过滤，固体用3x20 ml 苯洗涤。干燥后得溴代乙氧羰基亚甲基三苯基鳞。产品为白色粉末状固体 84.0 g，收率为97.8%。 Mp. 151-153 "。在2L的烧杯中，将42.0 g溴代 乙氧羰基亚甲基三苯基鳞溶于1 L水中(滤去不溶物)，滴加氢氧化钠溶液 至酚酞试纸呈碱性，下层有粘稠有机物生成。以二氯甲烷萃取(2x200 ml), 无水硫酸镁干燥，蒸去溶剂得白色固体。用乙酸乙酯-石油醚重结晶，得到 无色片状结晶24.0g,收率69.03%, mp. 116-117 C 。
实施例23-(5-氨基苯并[b噻吩-2-基)烯丙酸乙酯2的合成
向三颈瓶中加入8.4 g铁粉，lOml冰乙酸，0.5 g氯化铵和50 ml乙醇， 在搅拌下批量加入4.2 g (0.015 mol) 3-(5-硝基苯并b噻吩-2-基)烯丙酸乙 酯，回流反应至反应完全。冷却过滤，用乙醇洗涤铁泥。加入碳酸钾水溶液 至反应呈碱性，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，得黄色固体。
Mp: 99-101 t: 。 tH-謹R(500 Hz，CDCI3) S: 7.82 (dd， Jl=0.5 Hz， J2-15.6 Hz， IH)， 7.54 (d， J-8.6 Hz， IH)， 7.28 (s， IH)， 7.03(d, J-2.2 Hz, IH)， 6.81 (dd， Jl=2.3 Hz, J2=8.5 Hz， IH)， 6.26 (d, J=15.6 Hz， IH)， 4.26 (q， J-7.1 Hz， 2H)， 3.72(br s， 2H)， 1.34 (t， J=7.1 Hz， 2H)。
实施例3 (E)-3-(5-(4-甲基苯基)磺胺基苯并[b噻吩基)烯丙酸乙 酯的合成
将3-(5-氨基苯并[bl噻吩-2-基)烯丙酸乙酯15 mmol溶于无水四氢呋喃
1450mL，加入三乙胺18mmo1，在室温滴加的对甲苯磺酰氯(18 mmol)的四氢 呋喃溶液。2h后反应完全，蒸去溶剂，残余物用乙酸乙酯溶解，用1M的 氢氧化钠水溶液，饱和食盐水洗涤，干燥，蒸去溶剂即得目标产物。
Mp: 154-157 "C。 ^-醒R(500 Hz，CDC13) &: 7.82 (dd， Jl=0.5 Hz， J2-15.6 Hz， 1H)， 7.65(d， J=8.3 Hz， 2H)， 7.62 (d, J=8.6 Hz, 1H)， 7.34 (s， 1H), 7.21 (d， J=8.4 Hz， 2H)， 7.07(dd， J1-2.1 Hz， J2-8.4 Hz， 1H)， 6.76(s， 1H) 6.28 (d， J-15.6 Hz， 1H)， 4.26 (q， J=7.1 Hz， 2H)， 2.36 (s， 3H)， 1.33 (t， J=7.1 Hz， 3H)。
实施例4(E)-3-(5-(4-甲基苯基)磺胺基苯并[b噻吩-2-基)烯丙酸的
合成
将15 mmol的(E) 3-(5-(4-甲基苯基)磺胺基苯并[b噻吩J-基)烯丙酸乙 酯溶于30 mL的四氢呋喃，加入0.6 M的氢氧化锂水溶液30 mL，室温搅拌 过夜。加入150mL水，乙酸乙酯萃取，弃去有机层，下层水溶液酸化至pH 等于3，乙酸乙酯萃取(3x50 mL)，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸 镁干燥，减压蒸去溶剂，即得到相应3-(5-取代苯基磺胺基苯并bl噻吩-2-基) 烯丙酸，收率为95%。
实施例5 (E)-N-羟基-3-(5-苯基磺胺基苯并[bl噻吩-2-基)烯丙酰胺 (化合物l)的制备
在OTC条件下，将盐酸羟胺(l g， 15 mmol)的甲醇(10mL)溶液滴加到 氢氧化钾(0.84 g， 15 mmol)的甲醇(4mL)溶液中。混合物搅拌15min， 然后过滤生成的氯化钾，滤液用于下面步骤。
在0 C将氯甲酸乙酯(1.3 g， 12mmo1)的四氢呋喃溶液滴加到 (E)-3-(5-(4-甲基苯基)磺胺基苯并[b噻吩-2-基)烯丙酸(3.73 g， 10 mmol)和N-甲基吗啉(1.3 g， 13 mmol)的四氢呋喃溶液中，混合物反应30min。 过滤除去生成的盐，将滤液滴加到上述制备的羟胺的甲醇溶液中，反应混合 物室温搅拌30 min。将溶剂蒸出，加入乙酸乙酯和饱和氯化铵溶液进行分配， 有机层用无水硫酸镁干燥，蒸除溶剂，得到黄色固体。
Mp: 265-267 'C 。 'H-顏R(500 Hz，DMSO-d6) S: 12.56(s， NHOH)， 10.32(s， NHOH)， 7.82 (dd， Jl=0.5 Hz， J2-15.6 Hz， 1H)， 7.65(d， J=8.3 Hz， 2H), 7.62 (d， J=8.6 Hz， 1H)， 7.34 (s， 1H)， 7.21 (d， J-8.4 Hz， 2H)， 7.07(dd， Jl=2.1 Hz， J2-8.4 Hz， 1H)， 6.76(s， 1H) 6.28 (d， J=15.6 Hz， 1H)， 2.36 (s， 3H)。 HRMS Found: m/z 389.0624 (M+H)+; Calcd forC15H"N403S: M， 388.4606c
实施例6 (E)-N-羟基-3-(5-(4-甲基苯基)磺胺基苯并[bl噻吩-2-基)烯 丙酰胺(混合物2)的制备
制备方法将实施例3中的对甲苯磺酰氯用苯磺酰氯替换，其它制备方 法同实施3、 4和5。
Mp: 234 236 " 。 ^-歴R(500 Hz，DMSO隱d6) " 12.56(s， NHOH)， 10.32(s， NHOH), 7.82 (d， J-8.5 Hz， 1H)， 7.79 (d， J=15.6 Hz， 1H)， 7.74 (s， 1H)， 7.66(s， 1H)， 7.63(s， 1H)， 7.56 (d， J=2.0 Hz， 1H)， 7.32 (d， J=8.5 Hz， 3H)， 7.16(dd， J1-2. Hz， J2=8.7 Hz， 1H)， 6.20 (d， J-15.6 Hz， 1H)。 HRMS Found: m/z 375.0468 (M+H)+; Calcd for C17H"N204S2: M， 374.0395。
实施例7 (E)-N-羟基-S-(S-(^叔丁基)苯基)磺胺基苯并bl噻吩-:2-基H 烯丙酰胺(化合物3)的制备
HN一OHHN一OH
制备方法将实施例3中的对甲苯磺酰氯用对叔丁基苯磺酰氯替换，其 它制备方法同实施3、 4和5。
Mp: 177-179 " 。 ^-画R(500 Hz,DMSO-d6) S: 12.56(s， NHOH)， 10.32(s， NHOH)， 7.82 (dd， Jl=0.5 Hz， J2=15.6 Hz， 1H)， 7.65(d， J=8.3 Hz， 2H)， 7.62 (d， J=8.6 Hz， 1H)， 7.34 (s， 1H)， 7.21 (d， J-8.4 Hz， 2H)， 7.07(dd， Jl=2.1 Hz， J2=8.4 Hz， 1H), 6.76(s， 1H) 6.28 (d， J=15.6 Hz， 1H), 1.33 (s， 9H)。 HRMS Found: m/z 429.0948 (M-H)-， 453.0913 (M+Na)+; Calcd for C21H22I\204S2: M， "0.1021。
实施例8 (￡)-^羟基-3-{5-(2，4，6-三甲基苯基)磺胺基苯并[1>1噻吩-2-基M烯丙酰胺(化合物4)的制备
制备方法将实施例3中的对甲苯磺酰氯用2，4，6-三甲基苯磺酰氯替换， 其它制备方法同实施3、 4和5。
Mp: 218-219 t: 。 iH-NMR(500 Hz，DMSO-d6) S: 12.56(s， NHOH)， 10.32(s， NHOH)， 7.82 (dd, Jl=0.5 Hz， J2-15.6 Hz， 1H), 7.62 (d， J=8.6 Hz， 1H)， 7.34 (s， 1H)， 7.20 (s， 2H)， 7.07(dd， Jl=2.1 Hz， J2=8.4 Hz, 1H), 6.76(s， 1H) 6.28 (d， J=15.6 Hz， 1H)， 2.64 (s， 6H)， 2.36(s， 3H)。 HRMS Found: m/z 415.0792 (M-H) ， "7.0937 (M+H)+; Calcd for C20H20N2O4S2: M, 416.0864。
实施例9生物活性研究
以上述实施例获得的不同浓度本发明药物作用于人非小细胞肺腺癌细 胞株(A549)和人大细胞肺癌细胞(NCI-H661) 72 h后，WST-8法检测药 物对细胞增殖的影响。
HN一OH
17药物阳性性药物SAHA和MS-275为本实验室合成，结构见

图1和图
2c
试剂与仪器HyQR改良型RPMI 1640培养基、DMEM培养基、WST-8 (Sigma)、电子耦合试剂l-Methoxy PMS (Sigma)、胰酶。C02培养箱、 无菌操作台、酶标仪、离心机、移液枪、移液管、离心管和96孔板等。 方法
1) 肿瘤细胞株培养
人大细胞肺癌细胞(NCI-H661):用含10%胎牛血清的RPMI 1640培 养基，于37'C、5。/。C02的培养箱中培养。人非小细胞肺癌细胞株(A549): 用10%胎牛血清的DMEM培养基，于37"、 5°/。C02的培养箱中培养。
2) 细胞活力测定
取处于指数生长期，状态良好的细胞，加入适量胰酶消化细胞，收集细 胞离心，弃上清。用含血清的培养液重新混悬细胞，然后计数，并将细胞密 度稀释至2x104个/ml密度。
取细胞悬液接种于96孔板上，100fil/孔(含肿瘤细胞5000个/孔)。将 培养板转入恒温C02培养箱中，在37", 5%C02及饱和湿度条件下培养 24小时。
受试化合物先用DMSO配制成0.1M的储存液，再根据需要稀释样品(单 位nM)。加入受试化合物50 jil/孔，培养72小时，每组设3个平行孔，并 重复实验。
化合物作用72小时后，去掉细胞生长培养液，将WST-8加入96孔板 中，10 ^L/孔，置于培养箱中在37T孵育1.5小时，酶标仪在450 nm波长 处检测每孔的吸光度(650 nm波长处校正)。
(1)细胞的存活率将各测试孔的OD值减去本底OD值(完全培养 基+WST-8，无细胞)或空白药物孔OD值(完全培养基+不同稀释度的受试 药物+WST-8，无细胞)，各重复孔的OD值取均数iSD。
细胞的存活率以T/C。/。表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的 OD值。
细胞存活率％ =(加药细胞OD/对照细胞OD) xl00
(2)求出T/C-50。/。时的药物浓度(IC50)。抑制率高于50%的化合物，用GraphPad Prism 5.0软件计算IC50值。 实验结果
生物活性测试结果表明，本发明化合物对A549和NCI-H119的增殖均 有不同程度的抑制作用，部分化合物的活性与MS-275相当，其中化合物2 优于SAHA和MS-275。
实验结果见表1。
表l本发明化合物对A549和NCI-H661增殖的抑制作用
化合物编号IC50(pM)
A549NCI-H661
1>100>100
21.6261.383
33.1222.193
43.9824.516
SAHA1.6460.1326
MS-2755.4122.187
上述实例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技 术的人是能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护 范围。凡根据本发明精神实质所做的等效变换或修饰，都应涵盖在本发明的 保护范围之内。
19
权利要求
1.一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中，Ar为芳基或杂环基，其任选被一个或多个选自下列的基团所取代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤素、硝基、C1-8氨基烷基、C1-8烷基氨基、C1-8硫代烷基、C1-8卤代烷基、C1-8卤代烷氧基、C1-8酯基、苯基或杂环基；R1选自氢或C1-8烷基。
1.其中，Ar为芳基或杂环基，其任选被一个或多个选自下列的基团所取 代Cl-8垸基、Cl-8垸氧基、卤素、硝基、Cl-8氨基烷基、Cl-8垸基氨基、 Cl-8硫代烷基、Cl-8卤代烷基、Cl-8卤代烷氧基、Cl-8酯基、苯基或杂环 基；Ri选自氢或Cl-8烷基。
2、 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于所述的芳基为苯基。
3、 根据权利要求l所述的化合物，其特征在于所述的杂环基选自吡啶、 噻吩、呋喃、吡咯或咪唑。
4、 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于所述的芳基或杂环基任 选被一个或多个选自下列的基团所取代Cl-8烷基、卤素、硝基或Cl-8卤 代烷基。
5、 根据权利要求4所述的化合物，其特征在于所述的芳基或杂环基任 选被一个或多个选自下列的基团所取代Cl-4的烷基、卤素、硝基或Cl-4 的卤代烷基。
6、 根据权利要求l所述的化合物，其特征在于R1为氢。
7、 一种式(II)的化合物中间体，其中，Ar为芳基或杂环基，其任选被一个或多个选自下列的基团所取 代Cl-8烷基、Cl-8烷氧基、卤素、硝基、Cl-8氨基烷基、Cl-8垸基氨基、 Cl-8硫代烷基、Cl-8卤代烷基、Cl-8卤代烷氧基、Cl-8酯基、苯基或杂环 基；Rt选自氢或Cl-8垸基。
8、 一种药物组合物，其特征在于所述药物组合物包括权利要求1 6中 任意一项的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的稀释剂或载体。
9、 权利要求1 6任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备 药物方面的应用，其特征在于所述药物用于治疗与细胞分化或增殖相关的实 体瘤或白血病。
10、 一种制备权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐的方法， 其特征在于所述方法包括以下步骤(1)使式(IV)的化合物<formula>formula see original document page 3</formula>(V)(2) 使步骤(1)中式(V)的化合物与式(VI)的化合物 Ar、 ，X<formula>formula see original document page 3</formula> (VI)反应得到式(II)的化合物；(3) 式(II)的化合物水解酸化后在适当的活化试剂中与羟胺反应得 到式(I)的化合物；其中Ar为芳基或杂环基，其任选被一个或多个选自下列的基团所取代 Cl-8烷基、Cl-8垸氧基、卤素、硝基、Cl-8氨基烷基、Cl-8垸基氨基、 Cl-8硫代烷基、Cl-8卤代烷基、Cl-8卤代烷氧基、Cl-8酯基、苯基或杂环 基；Rt选自氢或Cl-8垸基；X选自卤素。
全文摘要
本发明公开了一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中，Ar为芳基或杂环基，其任选被一个或多个选自下列的基团所取代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤素、硝基、C1-8氨基烷基、C1-8烷基氨基、C1-8硫代烷基、C1-8卤代烷基、C1-8卤代烷氧基、C1-8酯基、苯基或杂环基；R₁选自氢或C1-8烷基。该化合物制备的药物可用于治疗与细胞分化或增殖相关的实体瘤或白血病。
文档编号C07D333/60GK101648940SQ20091003413
公开日2010年2月17日 申请日期2009年8月20日 优先权日2009年8月20日
发明者民 吉, 吴晓晴, 魏红涛 申请人:苏州东南药物研发有限责任公司