一种聚乙二醇修饰及蛋白质融合表达的整合素阻断剂ap-25及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制肿瘤血管生成、具有整合素亲和性和结合能力的一种整合素阻断剂，此阻断剂是一种多肽，此多肽经过了聚乙二醇修饰，修饰后延长了多肽的半衰期，降低了免疫原性；此阻断剂与牛血清白蛋白、热休克蛋白、伴侣素、谷胱甘肽转移酶(GST)、信号肽、免疫球蛋白融合表达，有利于二硫键的正确形成，延长了半衰期，同时还给增加了融合蛋白特有的一些功能，该修饰和融合表达后的整合素阻断剂多肽可用于实体肿瘤的治疗。本发明设计的整合素阻断剂多肽科学、合理、可行有效，能作为制备治疗人类实体肿瘤的治疗药物，其极大拓展了该整合素阻断剂的治疗谱，具有显著的社会价值和市场价值。
【专利说明】—种聚乙二醇修饰及蛋白质融合表达的整合素阻断剂AP-25及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制肿瘤血管生成、具有整合素亲和性和结合能力的一类整合素阻断剂，此阻断剂是一种聚乙二醇修饰或融合多肽，该整合素阻断剂聚乙二醇修饰或融合多肽可用于制备治疗血管性疾病，包括类风湿、眼病及肿瘤药物中的应用。
【背景技术】
[0002]新生血管生成，在正常生理条件下，受到高度调节，在生殖、胚胎发育、组织修复和创伤愈合中是必不可少的过程，同时新生血管的生成也与很多疾病有着密切联系，如类风湿关节炎、眼科疾病如年龄相关性黄斑变性(AMD)、肿瘤等。
[0003]类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是临床最常见的炎性关节病和主要致残因素之一。类风湿关节炎的病因和发病机制尚未完全明了，其基本病理特点是血管炎和滑膜炎。关节内滑膜血管增生，形成血管翳，导致滑膜增厚，渗出增多，分泌多种细胞因子，侵犯软骨并引起骨质损害。对其周围的肌腔、韧带、腱鞘以及肌肉等组织也均可侵蚀，从而影响关节的稳定，容易发生关节畸形而出现功能障碍。血管炎亦可侵犯周身各脏器组织，形成系统性疾病。
[0004]年龄相关性黄斑变性(AMD)主要表现国视网膜色素上皮细胞对视细胞外节盘膜吞噬消化能力下降，结果使未被完全消化的盘膜残余小体潴留于基底部细胞原浆中，并向细外排出形成玻璃膜疣，进而引起玻璃膜本断裂，脉络膜毛细血管通过破裂的玻璃膜时进入视网膜神经上皮下，形成脉络膜新生血管，由于新生血管壁的结构异常，导致血管的渗漏和出血,从而引发一系列的继发性病变。
[0005]研究表明，实体瘤的生长依赖于新生血管生成，新生血管不仅可以提供肿瘤所需要的营养和氧气，排泄代谢产物，而且是远处转移的途径。因此，阻断新生血管形成可能成为阻止肿瘤生长和转移的手段，从而激发了对促血管生成分子和抗血管生成分子的广泛研究。
[0006]相比传统肿瘤治药物疗，肿瘤血管生成抑制剂最大优点在于:①选择性作用于血管内皮细胞，全身毒副作用小；②靶细胞为血管内皮细胞，药物易从血液中到达与之接触发生作用；③血管内皮细胞无或少突变，不易产生耐药性，可长期用药；④可与放化疗方法联合应用并减轻后者的毒副反应。
[0007]目前，国际上开发出的整合素阻断剂已进入II期临床。而我国尚未有相似或同类产品进入市场，非常有必要开发我国自主知识产权的此类药物。ZL2005100403785高效抑制血管生成多肽及其制备方法和应用，介绍几种整合素抑制剂，其一为整合素阻断剂多妝序列为:Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys_Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro (序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)(命名为 AP-25),该序列包含 了 整合素配体序列(Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly)和新生血管抑制序列(Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro)，其中整合素配体序列中含有 RGD-4C 序列(Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly)，整合素阻断剂多肽序列可以有效地结合于肿瘤特异性表达的整合素亚型，并且该序列中含有新生血管抑制序列，能够抑制肿瘤新生血管形成，进而达到抑制肿瘤生长和转移的效果。该多肽经反复体内外活性评价证实具有较好的抑瘤效果，能够显著抑制内皮细胞迁移、抑制肿瘤新生血管生成，从而抑制肿瘤的生长。然而上述多肽的半衰期短，拟用临床人的给药是每天静脉滴注，这给患者带来了一定的痛苦。
[0008]但是AP-25有两对二硫键，二硫键在合成过程中容易错配，形成沉淀，产率低，不容易产业化；另外AP25的体内半衰期短，临床上使用需要静脉滴注，来保证长时间内体内血药浓度。对于AP25的上述不足，需要通过修饰或融合蛋白来改进，以便将其开发成创新药物。
[0009]文献报道中，对分子结构进行修饰或改造是解决半衰期较短、需连续给药问题的常用方法，其中以化学修饰应用最为广泛，常用的化学修饰剂有聚乙二醇(polye thyleneglycol, PEG)、葡聚糖、聚氨基酸、聚酸酐等。PEG具有无毒、无免疫原性、水溶性好的特点，被美国食品与药物管理局(FDA)认可作为药品的辅助原料和修饰剂。蛋白质类药物经PEG修饰后，分子量增加，肾小球的滤过率减少，PEG的屏障作用保护了蛋白质不易被蛋白水解酶水解，同时减少了中和抗体的产生，这些均有助于蛋白质类药物生物半衰期的延长。目前已有多种PEG修饰的蛋白质类药物上市销售。但PEG修饰同时也可能影响蛋白质的生物学活性，其影响大小与修饰剂、修饰条件及蛋白质本身的性质有关。对于具体的蛋白质，其最佳修饰需通过制备PEG修饰的蛋白质及生物活性研究来决定。合成小分子多肽的PEG修饰研究起步较晚，但已引起不少研究者的关注。
[0010]另外，也可以应用基因工程技术方法对分子结构进行修饰或改造。含有二硫键的多肽在生产过程中容易形成包涵体，产率低，易降解等，通过构建融合载体表达融合蛋白不仅提高了产率，延长了半衰`期还增加了一些融合蛋白特有的功能。通过融合表达得到的蛋白主要有以下几个优点:一、增强了目的蛋白的稳定性，尤其对小分子量的多肽稳定性提高极为显著；二、目的蛋白易于分离，利用融合蛋白成熟的抗体、配体、底物进行亲和层析，可以快速获得纯度高的融合蛋白；三、目的蛋白表达率高，目的蛋白与融合蛋白共用一套完善的表达元件，显著提高了目的蛋白的表达率；四、目的蛋白溶解性好，由于融合蛋白的存在，目的蛋白往往能在胞内形成良好的空间构象，且大多数具有水溶性。融合表达也存在一些缺点如过程繁琐不易于产业化等。
[0011]AP-25与分子伴侣(伴侣素、热休克蛋白)融合表达有利于二硫键正确配对，促进空间构象的形成，与HSP融合表达能搞高稳定性，免受细胞内蛋白酶的破坏，降低了 AP-25在体内与其他蛋白质结合的机率；与GST融合表达能增强细胞的抗损伤、抗癌变能力；与免疫球蛋白融合表达能增强机体的免疫力提高药效；与信肽融合表达有利于AP-25在体内的跨膜转移，有利于药物高效的、正确的作用于靶点。
[0012]PEG修饰一般会影响多肽的活性，原因是容易把活性位点遮盖，需要经过大量的筛选，才能获得活性不变，而半衰期延长的多肽。另外蛋白质融合表达后，等于重新获得一种新结构分子，新分子的活性、安全性、理化性质(包括分子量、空间结构等)都发生了变化，需要重新进行评价，才能获得有益效果的分子。
【发明内容】
[0013]发明目的[0014]本发明针对mPEG-SC-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro (修饰位点为 N 端丙氛酸，序列中含有两对二硫键，配对方式为 1-4、2_3) λ BSA-Ala-Cy s-Asp-Cy s-Ar g-Gly-Asp-Cy s-Phe-Cy s-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro (N 端融合，序列中含有两对二硫键，配对方式为 1_4、2_3)、Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-BSA(C 端融合，序列中含有两对二硫键，配对方式为 1_4、2_3) λ HSP-Ala-Cy s-Asp-Cy s-Ar g-Gly-Asp-Cy s-Phe-Cy s-GIy-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro (N 端融合，序列中含有两对二硫键，配对方式为 1_4、2_3) λAla-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-HSP (C 端融合，序列中含有两对二硫键，配对方式为 1_4、2_3) λCpn-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-GIy-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro (N 端融合，序列中含有两对二硫键，配对方式为 1-4、2_3) λAla-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-CyS-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Cpn (C 端融合，序列中含有两对二硫键，配对方式为 1-4、2_3)、GST-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys_Gly-Gly-GIy-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro (N 端融合，序列中含有两对二硫键，配对方式为 1-4、2_3)、Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-GST (C 端融合，序列中含有两对二硫键，配对方式为 1-4、2_3) λ SP-Ala-Cy s-Asp-Cy s-Ar g-Gly-Asp-Cy s-Phe-Cy S-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro (N 端融合，序列中含有两对二硫键，配对方式为 1_4、2_3)、Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-SP (C 端融合，序列中含有两对二硫键，配对方式为 1_4、2_3)、Ig-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro (N 端融合，序列中含有两对二硫键，配对方式为 1-4、2-3)、Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-1g (C 端融合，序列中含有两对二硫键，配对方式为1-4、2-3)做了进一步研究，发现在相同给药剂量下能显著提高对多种肿瘤细胞增殖的抑制作用。
[0015]技术方案
[0016]一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂AP-25，其中整合素阻断剂的序列为mPEG-SC-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-ASP-Arg-Ala-Ala-Val-PiO (序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)(命名为AP-25)，其特征在于所述的mPEG-SC的分子量范围为500-40000。
[0017]作为一种优化方式所述的一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂AP-25，其特征在于所述的mPEG-SC (单甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺碳酸酯)的分子量为20000，修饰位点为N端丙氨酸，PEG与丙氨酸上的游离氨基发生缩合反应。[0018]一种融合表达的整合素阻断剂AP-25，其中整合素阻断剂的序列为BSA-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-AIa-Ala-Val-PiO (序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)，其特征在于所述的融合蛋白为BSA，N端融合表达。
[0019]一种融合表达的整合素阻断剂AP-25，其中整合素阻断剂的序列为Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-AIa-Val-Pro-BSA (序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)，其特征在于所述的融合蛋白为BSA，C端融合表达。
[0020]一种融合表达的整合素阻断剂AP-25，其中整合素阻断剂的序列为HSP-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pix)(序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)，其特征在于所述的融合蛋白HSP的分子量范围为68-90kD，N端融合表达。
[0021]一种融合表达的整合素阻断剂AP-25，其中整合素阻断剂的序列为Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-AIa-Val-Pro-HSP (序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)，其特征在于所述的融合蛋白HSP的分子量范围为68-90kD，C端融合表达。
[0022]作为一种优化方式所述的融合表达的整合素阻断剂AP-25，其特征在于所述的融合蛋白HSP的分子量为70kD。
[0023]一种融合表达的整合素阻断剂AP-25，其中整合素阻断剂的序列为Cpn-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-AIa-Ala-Val-PiO (序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)，其特征在于所述的融合蛋白为Cpn, N端融合表达。
[0024]一种融合表达的整合素阻断剂AP-25，其中整合素阻断剂的序列为Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-AIa-Val-Pro-Cpn (序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)，其特征在于所述的融合蛋白为Cpn, C端融合表达。
[0025]一种融合表达的整合素阻断剂AP-25，其中整合素阻断剂的序列为GST-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-AIa-Ala-Val-PiO (序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)，其特征在于所述的融合蛋白为GST，N端融合表达。
[0026]一种融合表达的整合素阻断剂AP-25，其中整合素阻断剂的序列为Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-AIa-Val-Pro-GST (序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)，其特征在于所述的融合蛋白为GST，C端融合表达。
[0027]一种融合表达的整合素阻断剂AP-25，其中整合素阻断剂的序列为SP-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pix)(序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)，其特征在于所述的融合蛋白为信号肽(SP), N端融合表达。
[0028]一种融合表达的整合素阻断剂AP-25，其中整合素阻断剂的序列为Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-AIa-Val-Pro-SP (序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)，其特征在于所述的融合蛋白为信号肽(SP), C端融合表达。
[0029]—种融合表达的整合素阻断剂AP-25，其中整合素阻断剂的序列为Ig-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pix)(序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)，其特征在于所述的融合蛋白为Ig，N端融合表达。
[0030]一种融合表达的整合素阻断剂AP-25，其中整合素阻断剂的序列为Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-AIa-Val-Pro-1g (序列中含有两对二硫键，配对方式为1_4、2_3)，其特征在于所述的融合蛋白为Ig，C端融合表达。
[0031]一种聚乙二醇修饰的或融合表达的整合素阻断剂AP-25在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于所述的肿瘤为起源于人的头颈部、脑、甲状腺、胰腺、肺脏、肝脏、食管、胃、乳腺、肾脏、胆囊、结肠/直肠、卵巢、子宫、子宫颈、前列腺、膀胱、睾丸的原发/继发的癌或肉瘤。
[0032]AP-25基因序列为:GCC TGC GAC TGC CGA GGC GAC TGC TTC TGT GGC GGC GGCGGCATT GTC AGG AGG GCC GAC CGA GCC GCC GTC CCC。
[0033]有益效果
[0034]1、为了延长多妝 Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro 的半衰期，我们米用不同分子量的聚乙二醇(PEG)对此多肽进行了修饰和进行融合表达AP-2 5，发现mPEG-SC2Qk-AP-2 5、BSA-AP-25、AP-25-BSA、HS`P-AP-25、AP-25-HSP、Cpn-AP-25、AP_25_Cpn、GST-AP-25、AP-25-GST、SP-AP-25、AP-25-SP、Ig-AP-25, AP-25-1g 具有延长了 AP-25 半衰期，但又不影响其体内外活性的特点。一个多肽的修饰产物属于一个新型分子，往往与修饰前的分子在活性上产生不同的效果。本发明针对上述整合素阻断剂mPEG-SC2Qk-AP-25、BSA-AP-25、AP-25-BSA、HSP-AP-25、AP-25-HSP、Cpn-AP-25、AP_25_Cpn、GST-AP-25、AP-25-GST、SP-AP-25、AP-25-SP、Ig-AP-25, AP_25_Ig对多种肿瘤有治疗作用进行了大量的体内外活性研究，发现给药频率降低的情况下，mPEG-SC-AP-25、BSA-AP-25、HSP-AP-25、Cpn-AP-25、GST-AP-25、SP-AP-25、Ig-AP-25对多种血管性疾病，包括类风湿、眼病、肿瘤保持了很好的抑制作用，拓展了其社会价值和经济价值。
[0035]2、研究发现，在该整合素阻断剂多肽的N端特别优化进行了聚乙二醇修饰，最终优化的序列为:mPEG-SC-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys_Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val -Ar g-Ar g-A I a-A sp -Ar g-A I a-A I a-Va 1-Pr ο,其含有 PEG 和 25 个氛基酸的多妝，分子中RGD-4C序列具有整合素亲和性和结合能力，研究表明其起作用靶点为整合素α νβ 3和ανβ 5结合，但主要的结合靶点仍为整合素ανβ 3，并且该序列中含有新生血管抑制序列，从而抑制肿瘤新生血管形成，进而达到抑制肿瘤生长和转移的效果。经前期试验表明PEG修饰如果再C端的话，会影响其活性，造成活性降低，遮盖了其活性位点，说明PEG修饰位点是本发明的关键因素。
[0036]聚乙二醇(PEG)是一类具有独特理化性质的大分子聚合物，它具有良好的生物相容性，无毒、无抗原性。蛋白质或多肽药物经PEG修饰后，其主要的生物学功能保持不变，并且经PEG修饰能赋予蛋白质和多肽类药物多种优良性能:⑴增加稳定性，延长血浆半衰期；(2)降低免疫原性和抗原性；(3)降低毒副作用；(4)减小被水解酶降解的可能性、降低被肾脏清除的速率；(5)改善药物体内分布和动力学行为等。
[0037]聚乙二醇(mPEG-SC)修饰后多肽的靶点不变，延长多肽分子的体内半衰期、清除率低、降低了免疫原性和抗原性，并且抗肿瘤活性保持不变，但是降低了给药频率，修饰后由原来每天给药一次，变为每2-3天给药一次。
[0038]发明人经过大量实验获知该整合素阻断剂体内实验具有明显的抗肿瘤效果，并且副作用少，用量少成本低。说明本发明设计的聚乙二醇修饰的整合素阻断剂多肽科学、合理、可行有效，能作为制备治疗人类实体肿瘤的治疗药物，为将来药物开发提供了新的思路和前景，具有显著的社会价值和市场价值。
[0039]表1、AP-25 和 mPEG-SC-AP-25 的比较
[0040]
【权利要求】
1.一种聚乙二醇修饰及蛋白质融合表达的整合素阻断剂AP-25，其特征在于所述的整合素阻 断剂的序列为如下任一序列:
mPEG-SC-AP-25:mPEG-SC-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro ；
BSA-AP-25:BSA-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro ；
BSA-AP-25:Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-AIa-Val-Pro-BSA ；
HSP-AP-25:HSP-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro ；
HSP-AP-25:Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-HSP ；
Cpn-AP-25:HSP-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1le-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro ；
Cpn-AP-25:Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-HSP ；
GST-AP-25:HSP-A1a-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro ；
GST-AP-25:A1a-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-HSP ；
SP-AP-25:HSP-Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro ；
SP-AP-25:Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-HSP ；
Ig-AP-25:HSP-A1a-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro ；
Ig-AP-25:A1a-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-1Ie-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-HSPo
2.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰及蛋白质融合表达的整合素阻断剂AP-25，其特征在于所述的mPEG-SC的分子量分别为5000、10000、20000、40000。
3.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰及蛋白质融合表达的整合素阻断剂AP-25，其特征在于所述的融合蛋白为BSA、HSP、Cpn, GST、SP、Ig。
4.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰及蛋白质融合表达的整合素阻断剂AP-25，分为在N、C端融合表达两种类型。
5.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂AP-25在制备治疗血管性疾病中的应用，包括类风湿、眼病及肿瘤药物中的应用，其特征在于所述的肿瘤为起源于人的胃部、皮肤、头颈部、甲状腺、胰腺、肺脏、食管、乳腺、肾脏、胆囊、结肠/直肠、卵巢、子宫、子宫颈、前列腺、膀胱、睾丸的原发/继发的癌或肉瘤。
【文档编号】C07K19/00GK103819542SQ201410069627
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年2月28日 优先权日:2014年2月28日
【发明者】徐寒梅, 王祥 申请人:中国药科大学