一种用于猪抗病育种的遗传分子标记方法和应用与流程

文档序号:12167711阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于猪抗病育种的遗传分子标记方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)猪FUT2基因变异位点的筛选和确定

提取待测样本的耳组织DNA;以包含FUT2基因的待测样本基因组DNA为模板,进行PCR扩增,PCR扩增的DNA模板采用混合DNA,每5个个体的DNA样作为1个DNA池,一共构建10个DNA池作为扩增模板,上下游引物序列为:

上游引物为:5’-CACAGCCATGCAAGACAAGG-3’

下游引物为:5’-AAAGAAGAATGGGGAGCCGA-3’;

测序结果进行Blast比对,发现在FUT2基因扩增片段的编码区中并未存在变异位点,但是在该基因ATG起始密码子上游-84bp处存在1个SNP位点;

2)利用FUT2基因ATG起始密码子上游-84bp标记对猪核心群全面检测基因型

对每个个体样品猪提取基因组DNA为模板进行PCR扩增,扩增片段包含ATG起始密码子上游195bp序列的PCR引物,目的片段长度203bp,上下游引物序列为:

上游引物为:5’-AGGGGAAACACACCCTCAAAA-3’

下游引物为:5’-GGGAGAACAGGGAGCGGTTA-3’;

3)扩增产物用SSCP方法进行分析,选择引物扩增产物出现3条带中间的第2和第3这2条带的样本为抗病育种中的有利个体;

4)对FUT2基因-84bp(C→T)突变与F18大肠杆菌抗性之间进行关联分析及抗性标记的确定。

2.根据权利要求1所述的分子标记方法,其特征在于,待测样本选择大白猪,每个个体采取耳组织样约1.0g,放入1.5mL的离心管内,置-20℃存放。采用常规酚-氯仿法提取基因组DNA,超纯水溶解后用NanoDrop-1000微量核酸测定仪测定其浓度和纯度,根据其浓度用超纯水稀释成100mg/μL,-20℃保存备用。

3.根据权利要求1所述的分子标记方法,其特征在于,所述PCR扩增体系:基因组混合DNA(100ng/μL)1.0μL,PCRMaster-Mix 10.0μL,上下游引物(10pmol/L)F1/R1各1.0μL,加ddH2O补足至20μL;条件为:95℃预变性5min,95℃变性30s,63℃退火30s,72℃延伸50s,35个循环,72℃延伸10min,最后4℃保存备用。

4.权利要求1-3中任一所述的用于猪抗病育种的遗传分子标记方法在猪抗病育种过程中进行标记辅助选择的应用。

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