一种发酵过程中添加亮氨酸生产γ‑聚谷氨酸的方法与流程

文档序号:11809415阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种发酵过程中添加亮氨酸生产γ-聚谷氨酸的方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)CGMCC3336 菌种的活化:在富含营养的固体培养基斜面上于 37℃培养 16 小时,制备得到成熟的斜面种子,固体培养基的成分包含:蛋白胨 10g/L,酵母粉 5g/L,NaCl10g/ L,琼脂 20g/L, pH7.2 ;

2)种子液的制备 :

将一环上述种子转入装有液体种子培养基的三角瓶中,37℃,220rpm 培养16小时至对数生长期 ;其中,种 子 液 培 养 基 组 成(g/L):葡萄糖 30 ;酵母膏 7 ;胰蛋白胨 10 ; 磷酸氢二钾0.5;硫酸镁0.5,pH7.2;500ml 的三角瓶中分装 50ml 培养基 ;

3)发酵罐发酵:

发酵罐培养基成分为(g/L):葡萄糖 80,谷氨酸钠 80,硝酸铵 18,氯化钠10, 硫酸镁0.5, 氯化钙1.0, 硫酸亚铁0.01,精氨酸 0.44,组氨酸 0.26,苏氨酸 0.5, 蛋氨酸 0.4,谷氨酰胺 0.5,吡哆醇 0.001, pH7.2 ;

发酵条件:5L 发酵罐装液量为 3L,种子液的接种量为10%,发酵温度 37℃,发酵中添加亮氨酸,通风量 1.0vvm,转速 400rpm,初始 pH 为7.2 。

2.根据权利要求1所述的一种发酵过程中添加亮氨酸生产γ-聚谷氨酸的方法,其特征在于,步骤(3)中发酵中添加亮氨酸浓度为0.2~1.0g/L。

3.根据权利要求1所述的一种发酵过程中添加亮氨酸生产γ-聚谷氨酸的方法,其特征在于,步骤(3)中发酵中,添加亮氨酸时间为发酵20~48小时。

4.一种权利要求1~3任一所述的发酵过程中添加亮氨酸生产γ-聚谷氨酸的测定方法,其特征在于,本发明采用高效液相色谱仪测定D-谷氨酸浓度与 L-谷氨酸浓度,其高效液相色谱仪的工作条件以及样品的制备:

仪器:Agilent1200 高效液相色谱仪,配紫外可见检测器和工作站;

色谱柱:大赛璐 CR(+)/(CR-) 手性柱;

流动相:pH2.0 高氯酸水溶液;

流速:0.4mL/min;

柱温:25℃ ;

检测波长:UV200nm ;

样品制备:发酵液经二次醇沉复溶后,与等体积 6mol/L 盐酸在 110℃进行水解,水解前样品用流动相稀释适当倍数,水解后样品用流动相稀释适当倍数,经 0.22μm 滤膜过滤,滤液供液相色谱分析。

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