专利名称：嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物用于治疗由包含亮氨酸拉链和不育α基序的激酶(ZAK)介导的 ...的制作方法
嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物用于治疗由包含亮氨酸拉链和不育CI基序的激酶(ZAK)介导的疾病的用途本发明涉及如下定义的式I的嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物或其可药用盐在制备用于治疗由ZAK介导的疾病的药物组合物中的用途，涉及式I的嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物或其可药用盐在治疗由ZAK介导的疾病中的用途，以及涉及治疗罹患由ZAK介导的疾病的温血动物包括人的方法，该方法通过给需要此治疗的所述动物施用有效剂量的式I的嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物或其可药用盐来进行。包含亮氨酸拉链和不育α基序的激酶(ZAK)是属于信号转导分子的MAPKKK家族的丝氨酸-苏氨酸激酶(Gross, Ε. Α.，等人，J. Biol. Chem. 277 13873-13882，2002)。通过检索与酵母不育-20(Me20)类似的序列，随后筛选胎盘cDNA文库和 5，端(5-prime)RACE, Liu 等人克隆了 ZAK (Liu, Τ. -C.，等人；Biochem. Biophys. Res. Commun. 274 :811-816，2000)。该推测出的800-氨基酸蛋白质具有9IkD的计算分子量。ZAK 含有N端激酶催化结构域，随后是亮氨酸拉链基序和不育α基序(SAM)。RNA印迹分析在心脏、胎盘、肺、肝和胰中检测到3. 0-kb ZAK转录物的最高表达。Gotoh, I.等人(J. Biol. Chem. 276 :4276-4286,2001.)克隆了小鼠 Zak 的两种选择性剪切形式，他们将其分别命名为Mltk-α和Mltk-β。该推测的803个氨基酸和4 个氨基酸的蛋白质分别具有91. 7和51. 3kD的计算分子量。两种蛋白质均含有N端激酶结构域，随后是亮氨酸拉链基序，且两者均有核输出信号。这2种蛋白质在它们的C端序列上不同，其中Mltk-α具有SAM结构域，而Mltk-β具有与TAKl (MAP!3K7)的C端区类似的序列。 人组织的RNA印迹分析在心脏和骨骼肌中检测到最高水平表达的约7. 7kb的转录物。在心脏和骨骼肌中还检测到约3. 3和1. 6kb的小转录物。转染至C0S-7细胞时，小鼠Mltk-α 和Mltk-β定位于细胞质中。核输出的抑制增加了两种蛋白质的细胞核蓄积。通过对人Jurkat T细胞cDNA表达文库筛选MAPK级联成员，以及随后的5，端 RACE, Gross, Ε. Α.等人(上述引文)鉴定了 2种ZAK剪切变体，MRK-α和MRK-β，其在它们的3’ (3-prime)端不同。该推测的800个氨基酸和456个氨基酸的蛋白质分别具有91. 1 和51. 5kD的计算分子量。人MRK-α和MRK-β具有与小鼠Mltk-a和Mltk-β相同的蛋白质结构域结构。人MRK亚型的共同激酶结构域与MLK1(MAP;3K9)和MLK2 (MAPIlO)的那些共享52%的相似性，并且其与TAKl的共享47%的同一性。RNA印迹分析在所有检测的组织中检测到7. 5kb的主要转录物，以及3. 8和1. 6kb的较少量的转录物。在骨骼肌和心脏中检测到最高的表达，以及在大脑和肾中检测到弱表达。转录物特异性探针鉴定3. Skb转录物为MRK- α，以及7. 5kb转录物为MRK- β。通过被转染的人肝细胞瘤细胞系的免疫沉淀，Liu等人(上述引文)确定了 ZAK可形成寡聚物。通过体外激酶分析，他们发现ZAK活化JNK/SAPK1 (MAPL8)和NFKB。ZAK的过表达导致细胞凋亡。应用在C0S-7细胞中的共转染分析，Gotoh等(上述引文)发现小鼠Mltk-a和 Mltk- β 两者均活化 Erk2 (MAPKl)、Jnk、p38 (MAPK14)和 Erk5 (MAPK7)。两种 Mltk 均通过磷酸化和活化相应的MAP激酶激酶从而活化所有测试的MAP激酶通路。Mltk- α和Mltk- β还通过响应高渗性介质渗透冲击的自磷酸化从而被活化。小鼠成纤维细胞中Mltk-α而非 Mltk-β的表达导致肌动蛋白应力纤维的破裂以及巨大的形态学改变。Mltk-α的激酶死亡突变体不会引起这些改变，以及P38通路的抑制显著地阻断了 Mltk-α诱导的应力纤维破裂和形态学改变。Gross等(上述引文)发现在经转染的C0S-1细胞中表达的MRK-β显示出自磷酸化以及针对一般测试底物的激酶活性。关键赖氨酸(lys40至丙氨酸的突变破坏了这些活性。应用固相蛋白质激酶测试、瞬时转染以及转染的人MRK-β对转染的犬肾细胞内源蛋白质影响的分析的组合，Gross等(上述引文)发现MRK-β优先通过MKK3 (MAP2K3)/ MKK6 (MAP2K6)活化 ERK5/p38_ γ，以及通过 ΜΚΚ4 (ΜΑΡ2Κ4) /ΜΚΚ7 (ΜΑΡ2Κ7)活化 JNK。MRK 的表达增加了处于细胞周期的G2/M期的细胞群，而显性负性MRK减弱了由γ放射引起的G2 停滞。此外，细胞暴露于Y放射诱导了 MRK活性。Gross等(上述引文)推断MRK可能介导、放射信号，导致细胞周期停滞，以及MRK活性是细胞中细胞周期检查点调节所必需的。Yang发现哺乳动物ZAK通过Mkk7活化Jnk。小鼠成纤维细胞中激酶死亡Zak 的表达破坏肌动蛋白应力纤维并引起形态学改变(Yang，J. -J.，Biochem. Biophys. Res. Commun. 297 :105-110,2002)。野生型^ik的表达增加了处于细胞周期中G2/M期的细胞数目。Yang推断ZAK活性可能参与调节肌动蛋白组织以及G2停滞。通过共转染的人胚肾细胞的免疫沉淀，Yang发现表位标记的ZZAPK(ZNF33A)和 ZAK 之间的直接相互作用(Yang, J. -J. , Biochem. Biophys. Res. Commun. 301 :71-77，2003)。 突变分析表明ZAK的SAM结构域是与ZZAPK结合所需要的。通过在大鼠成纤维细胞系中共表达，Yang发现ZZAPK抵消了 ZAK对G2/M细胞周期停滞的影响。Zak是培养的大鼠心肌细胞中细胞肥大的阳性调节器。Huang等发现显性负性^^ 蛋白质的表达抑制了这些培养物中TGF-β诱导的心脏肥大的特征，包括增加的细胞大小、 升高的心钠素(ANF)的表达以及增加的肌动蛋白纤维的组织(Huang，C.-Y.等，Biochem. Biophys. Res. Commun. 324 :424-431，2004)。此外，显性负性 Mkk7 阻断了 Tgf-β 和 Zak 诱导的Anf表达。！1皿叫推断241(通过16 -0-241(-]\0 7-4咿信号通路介导16 -0诱导的心脏肥大。ZAK 过表达与心脏肥大相关(Huang，等.BBRC 2004 ；324 :973)。已发现ZAK信号诱导MMP-2活性，并且同时减少MMP-9活性。合并考虑，ZAK活性可能是阻止心脏纤维化进展的合适干预。作为大肠杆菌感染的结果，志贺(Shiga)毒性引起溶血尿毒症综合征。涉及激酶活化的志贺毒素的毒性(Korcheva，等.Am J Pathol 2005 ；166 323)似乎受到ZAK激酶活化的控制(Jandhyala，等.Cellular Microbiology2008 ；10 :1468)。出人意料地发现，式I的嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物可用于治疗由ZAK介导的疾病，这是由于观察到ZAK是式I的嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物的靶点。因此，本发明涉及式I的嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物或其可药用盐单独或者与其它活性化合物组合在制备治疗由ZAK介导的疾病的药物组合物中的用途，
权利要求
1.式I的嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物或其可药用盐在制备治疗由ZAK介导的疾病的药物组合物中的用途，
2.根据权利要求1的用途，其中式I的嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物是4-甲基-3- [ [4- (3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]-N- [5- (4-甲基-IH-咪唑-1-基)_3_ (三氟甲基)苯基]苯甲酰胺。
3.根据权利要求2的用途，其中所述嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物以其盐酸盐一水合物的形式应用。
4.根据权利要求1的用途，其中Py表示5-嘧啶基，R5表示-N(R1)-C(O)-R2，R1是氢， &是[[(3幻-3-( 二甲基氨基)-1-吡咯烷基]甲基]-3-(三氟甲基)苯基，且礼是甲基。
5.治疗或预防由ZAK介导的疾病的方法，该方法包括施用式(I)的嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物
6.根据权利要求5的方法，其中所述嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物是4-甲基-3- [ [4- (3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]-N- [5- (4-甲基-IH-咪唑-1-基)_3_ (三氟甲基)苯基]苯甲酰胺。
7.根据权利要求5的方法，其中所述嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物以其盐酸盐一水合物的形式应用。
8.根据权利要求1-4任一项的用途或根据权利要求5-7任一项的方法，其中所述由 ZAK介导的疾病选自溶血尿毒症综合征、心脏肥大、心脏纤维化进展以及卵巢癌。
全文摘要
本发明涉及其中基团具有本文所定义的含义的式(I)的嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物或其可药用盐在制备用于治疗由ZAK介导的疾病的药物组合物中的用途，涉及式(I)的嘧啶基氨基苯甲酰胺衍生物或其可药用盐在治疗由ZAK介导的疾病中的用途，以及涉及治疗罹患由ZAK介导的疾病的包括人在内的温血动物的方法，该方法通过给需要此治疗的所述温血动物施用有效剂量的式(I)的嘧啶基氨基苯甲酰胺或其可药用盐来进行。
文档编号A61P13/00GK102341102SQ201080010571
公开日2012年2月1日 申请日期2010年3月5日 优先权日2009年3月6日
发明者D·法布罗, P·W·曼雷 申请人:诺瓦提斯公司