本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类含脲基的ido1和ido2双重抑制剂，它们的制备方法，以及含有这些化合物的药物组合物及其在治疗恶性肿瘤方面的用途。
背景技术：
当前，癌症已成为人类死亡的主要原因之一，2016年美国被诊断为癌症的患者达到了160多万人，而由于癌症死亡的患者接近60万人。我国2015年新增癌症患者达到了430万人，因癌症死亡的人数达到了280万人。预计到2030年，全世界因癌症死亡的人数将攀升至1310万。因此，癌症已成为一个必须高度重视的公共卫生问题乃至社会问题。人体的免疫系统负责保卫机体健康，其中t细胞在肿瘤的监控和杀伤中起着至关重要的作用。然而肿瘤细胞能通过多种机制来抑制t细胞的抗肿瘤活性，从而逃避免疫系统的攻击，产生了免疫逃逸。随着肿瘤学与免疫学发展不断深入，围绕人体免疫系统来治疗肿瘤逐步被科研界与产业界所接受，成为新药研发的热门领域。
吲哚胺2,3-双加氧酶-1(ido1)是一种分解色氨酸(tryptophan)的重要酶，在多种肿瘤细胞中表达，介导肿瘤诱导的免疫抑制。这种酶可局部降解色氨酸，钝化免疫系统的肿瘤监视作用及防止肿瘤排斥。ido1通过多种途径影响与机体免疫系统相关的免疫抑制性分子，最终导致肿瘤细胞的免疫逃逸，进一步转化成癌症。抑制ido1的活性对于肿瘤的治疗有着显著的促进作用，针对这种酶的特异性抑制剂，具有治疗各种类型肿瘤的潜力。目前，ido1已经成为抗肿瘤免疫疗法最重要的小分子调控靶点。
吲哚胺-2,3-双加氧酶-2(ido2)是ido1的同源蛋白，含有420个氨基酸，氨基酸序列上与ido1同源性达到43％，但与色氨酸2,3-加氧酶(tdo)蛋白的结构没有相似型。人和小鼠的ido1与ido2的编码基因呈头-尾相连的串联形式排列在第8号染色体上。ido2蛋白的表达没有ido1广泛，但在抗原提呈细胞、人类原发肿瘤包括胃癌、结肠癌、肾脏都有持续表达。在人胰腺癌中，ido2不但表达于肿瘤组织内，而且表达于肿瘤引流淋巴结内。与ido1一样也是催化色氨酸经犬尿氨酸途径代谢的限速酶，研究发现，ido1与ido2在肿瘤的免疫治疗方面可能有着协同增效的作用。
技术实现要素：
本发明的目的在于寻找结构新颖、活性高以及副作用小的抗肿瘤候选化合物。这些化合物通过与其他抗肿瘤药物联用，从而达到提高现有抗肿瘤药物疗效并降低剂量和毒性的作用。
本发明公开了通式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。
其中r1、r2各自独立地代表：h、f、cl、br、cf3、ch3、och3、cn或no2。r1、r2优选各自独立地代表f、cl或br。
r3代表：c1～c8直链烷基或c3～c6环烷基；r3优选c2～c5直链烷基或c3～c5环烷基。
通式(i)的化合物可与药学上可接受的酸形成酸加成盐，所述酸包括：氯化氢、溴化氢硫酸、碳酸、草酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸或阿魏酸。
本发明优选的部分化合物如下：
本发明通式(i)化合物及其药学上可接受的酸加成盐(i.a)可用下列方法制备：
更具体的方法包括：
其中：
由化合物ii制备化合物iii的过程，反应试剂为亚硝酸钠和2mol/l盐酸，溶剂为水。
由化合物iii经重氮化制备化合物iv的过程，反应试剂为亚硝酸钠、6mol/l盐酸和氯化钠，溶剂为冰醋酸。
由化合物iv与取代苯胺(v)经胺化制备化合物vi的过程，去酸剂为碳酸氢钠，溶剂为乙醇和水。
由化合物vi制备化合物vii的过程，反应物为n,n’-羰基二咪唑(cdi)，溶剂为乙酸乙酯。
由化合物vii制备化合物i的过程，首先由化合物vii与异氰酸酯在强碱辅助下于无水溶剂中反应，生成的产物不经分离直接加水进行水解得到目标化合物i；所述的强碱为氢化钠、叔丁醇钾或叔丁醇钠，优选氢化钠；所述的溶剂为四氢呋喃、1,4-二氧六环、甲苯、n,n-二甲基甲酰胺，优选四氢呋喃。
由化合物i经成盐制备化合物i·a的过程，反应物(a)为氯化氢、溴化氢、硫酸、磷酸、碳酸、草酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸或阿魏酸；溶剂优选为甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、甲苯或四氢呋喃，或任意几种的混合溶剂。
本发明的另一目的在于提供一种药物组合物，其包括药物有效剂量的本发明的化合物或其盐和药学上可接受的载体。
本发明所述的化合物可以添加药学上可接受的载体制成常见的药用制剂，如片剂、胶囊、粉剂、糖浆、液剂、悬浮剂、针剂，可以加入香料、甜味剂、液体或固体填料或稀释剂等常用药用辅料。
本发明所述的化合物在临床上的给药方式可以采用口服、注射等方式。
一般地，本发明的化合物用于治疗时，人用剂量范围为1mg～1000mg/天。也可根据剂型的不同和疾病严重程度，使用剂量超出该范围。
本发明部分化合物的药理学实验及结果如下：
一、检测部分目标化合物在酶水平抑制ido1/2的活性
实验方法
建立ido1/2酶活性抑制分子筛选模型，检测阳性对照药epacadostat在此模型上的抑制ic50值及抑制率，结果与多篇文献报道相近，说明筛选模型构建成功。ido酶可以催化色氨酸上的吡咯环氧化裂解产生n’-甲酰犬尿氨酸(n’-formylkynurenine)。在室温环境下，将40nm的ido酶及900um的l-色氨酸混合，并加入反应缓冲液(20mmascorbate,3.5ummethyleneblueand0.2mg/mlcatalasein50mmpotassiumphosphatebufferph6.5)，在室温反应3小时，然后在酶标仪上进行紫外测定，检测波长为321nm。酶活性百分率(％)＝(od值给药孔－od值本底)/(od值对照孔－od值本底)×100％，然后用prismgraphpadsofeware软件拟合计算ic50值。
实验结果见表1
表1部分目标化合物在酶水平对ido1和ido2的ic50
二、检测部分目标化合物对人结肠癌细胞ht29的抑制活性
实验方法
采用磺酰罗丹明b(srb)比色法，将对数生长期的ht29人结肠癌细胞吹打成单细胞悬液，接种于96孔培养板(5x103细胞/孔)，每孔加入培养基200μl，于37℃、5％co2培养箱中培养过夜；待细胞贴壁后，加入适当浓度的受试化合物和阳性对照药后在培养箱中再培养72小时。加入10％三氯醋酸后于4℃下固定1小时。用双蒸水洗涤5次，干燥后，每孔加入70微升srb溶液(4mg/ml)，室温染色20分钟，1％醋酸洗涤5次，干燥。每孔加入100μl10mmtris-base溶液使srb溶解。酶标仪检测各孔od值(检测波长：515nm)；记录结果；按下列公式计算抑制率：抑制率(％)＝(od对照－od给药)/od对照×100％，并计算ic50。
表2部分目标化合物对人结肠癌细胞ht29的抑制活性ic50
具体实施方式
实施例1
n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-乙基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-1)的制备
3-氨基-4-氨基肟基呋咱(iii)的制备
向装有h2o(120ml)的1l三颈瓶中加入nano2(62.67g,0.91mol)，室温(25℃)搅拌溶解，缓慢滴加丙二腈(ii)(30g,0.45mol)溶于450ml2mol/l盐酸的溶液，室温搅拌过夜，冷却至0℃，滴加盐酸羟胺(69.74g,1.0mol)溶于80ml水的溶液，加毕后搅拌30分钟，20℃以下用10mol/l氢氧化钠溶液调节ph至10，升温至35℃反应2小时，再加热至回流反应2小时。冷却至室温，反应液用乙酸乙酯萃取(100ml×3)，饱和nacl洗两次(30ml×2)，无水na2so4干燥过夜，减压蒸除溶剂得到白色粉末46.8g，收率72％，m.p.192-193℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):10.45(s,1h),6.25(s,2h),6.17(s,2h)；ms(esi(-)70v)m/z:142[m-h]-。
4-氨基-n-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(iv)的制备
将化合物iii(20.75g,145mmol)，h2o(300ml)，冰醋酸(150ml)和6mol/lhcl(75ml,435mmol)加到1l三颈瓶中，升温至45℃，搅拌至化合物iii完全溶解，加入nacl(25.42g,435mmol)，搅拌至溶解，冷却降温至0℃，缓慢滴加nano2(10g,145mmol)溶于35ml水的溶液，0℃以下搅拌4小时，升至室温，抽滤，滤饼水洗，水/乙醇重结晶得白色粉末12.1g，收率51.3％，m.p.188-189℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):13.40(s,1h),6.30(s,2h)；ms(esi(-)70v)m/z:161[m-h]-。
4-氨基-n-(3-溴-4-氟苯基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(vi-1)的制备
将化合物iv(10g,61.53mmol)溶于乙醇(300ml)中，加3-溴-4-氟苯胺(v-1)(12.86g,67.68mmol)，再加nahco3(12.92g,153.83mmol)溶于150ml水的溶液，升温至60℃，tlc检测反应，待化合物iv反应完全后停止反应。减压蒸除溶剂，残留物用乙酸乙酯(100ml)溶解，水洗三次(30ml×3)，饱和nacl洗两次(30ml×3)，无水na2so4干燥过夜，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯/正己烷重结晶得微黄色固体8.03g，收率41.3％，m.p.179-180℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.46(s,1h),8.89(s,1h),6.99(t,j＝8.8hz,1h),6.81(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),6.56-6.51(m,1h),6.28(s,2h)；ms(esi(-)70v)m/z:314[m-h]-。
3-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮(vii-1)的制备
将化合物vi-1(10g,31.64mmol)溶于乙酸乙酯(120ml)中，加n,n'-羰基二咪唑(7.7g,47.64mmol)，25℃反应，tlc跟踪反应至原料反应完。用1mol/lhcl(116ml×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，残留物用甲醇重结晶得10.6g白色固体，收率98％，m.p.192-193℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):8.10(dd,j＝6.2,2.4hz,1h),7.74(m,1h),7.61(t,j＝8.7hz,1h),6.63(s,2h)；ms(esi(-)70v)m/z:340[m-h]-。
n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-乙基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-1)的制备
将60％的氢化钠(140mg,3.51mmol)与无水四氢呋喃(3ml)混合，搅拌下降温至-78℃后，缓慢滴加化合物vii-1(0.4g,1.17mmol)溶于3ml无水四氢呋喃的溶液，滴加完毕后搅拌1小时，向反应液中滴加异氰酸乙酯(viii-1)(99mg,1.4mmol)溶于1ml无水四氢呋喃的溶液,反应2小时，升温至-68℃继续反应2小时，再次升温至-58℃反应过夜。将反应液缓慢升温至-8℃(10℃/小时)，加入1mlh2o，在此温度下反应3小时后，抽滤，滤液减压蒸除四氢呋喃，加入乙酸乙酯(20ml)溶解，用饱和氯化铵(10ml×2)和饱和nacl(10ml×2)洗涤，无水硫酸钠干燥保存，减压蒸除溶剂，得棕黄色油状物。柱层析分离(淋洗剂：二氯甲烷：乙酸乙酯＝10:1)，得白色固体0.16g，收率36.1％，m.p.192-194℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.41(s,1h),9.01(s,1h),8.94(s,1h),7.22(dd,j＝6.0,2.5hz,1h),7.17(t,j＝8.8hz,1h),7.09(brs,1h),6.91–6.81(m,1h),3.22–3.07(m,2h),1.06(t,j＝7.1hz,3h)；13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.43,152.30,150.36,141.87,138.83,137.71,125.16,121.71(d,j＝7.1hz),116.00(d,j＝22.8hz),107.10(d,j＝22.2hz),34.47,15.08.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc12h13brfn6o3:387.0211；found:387.0213.
实施例2
n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-正丙基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-2)的制备
以vii-1(0.4g,1.17mmol)，异氰酸正丙酯(viii-2)(119mg,1.4mmol),60％氢化钠(140mg,3.51mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，二氯甲烷：乙酸乙酯＝10：1)，得白色固体0.15g，收率32％，m.p.185-187℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.41(s,1h),9.02(s,1h),8.94(s,1h),7.22(dd,j＝6.1,2.7hz,1h),7.18(t,j＝8.8hz,1h),7.12(brs,1h),6.87-6.82(m,1h),3.31-3.01(m,2h),1.49-1.39(m,2h),0.87(t,j＝7.4hz,3h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.45,152.34(d,j＝9.7hz),150.34,141.81,138.81,137.69,125.17,121.66(d,j＝13.3hz),115.98(d,j＝23.2hz),107.12(d,j＝21.9hz),41.30,22.61,11.22.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc13h15brfn6o3:401.0368；found:401.0365.
实施例3
n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-异丙基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-3)的制备
以vii-1(0.4g,1.17mmol)，异氰酸异丙酯(viii-3)(119mg,1.4mmol),60％氢化钠(140mg,3.51mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，二氯甲烷：乙酸乙酯＝10：1)，得白色固体0.31g，收率66.1％，m.p.177-179℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.42(s,1h),9.02(s,1h),8.83(s,1h),7.22(dd,j＝6.2,2.8hz,1h),7.16(t,j＝8.8hz,1h),7.00(brs,1h),6.83(m,1h),3.81-3.73(m,1h),1.11(d,j＝6.5hz,6h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.69,152.06(d,j＝67.2hz),149.75,141.19,138.96,137.22,125.40,121.98(d,j＝6.8hz),115.99(d,j＝23.2hz),107.15(d,j＝22.1hz),41.66,22.32.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc13h15brfn6o3:401.0368；found:401.0372.
实施例4
n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-正丁基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-4)的制备
以vii-1(0.4g,1.17mmol)，异氰酸正丁酯(viii-4)(139mg,1.4mmol),60％氢化钠(140mg,3.51mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，石油醚：乙酸乙酯＝5：1)，得白色固体0.24g，收率49.8％，m.p.158-160℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.40(s,1h),8.99(s,1h),8.90(s,1h),7.21(dd,j＝6.1,2.7hz,1h),7.16(t,j＝8.8hz,1h),7.08(brs,1h),6.83(m,1h),3.13-3.03(m,2h),1.44-1.37(m,2h),1.33-1.20(m,2h),0.88(t,j＝7.2hz,3h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.46,152.32(d,j＝6.1hz),150.32,141.78,138.82,137.65,125.17,121.70(d,j＝6.8hz),115.97(d,j＝23.2hz),107.12(d,j＝22.0hz),39.16,31.43,19.43,13.59.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc14h17brfn6o3:415.0524；found:415.0526.
实施例5
n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-正己基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-5)的制备
以vii-1(0.4g,1.17mmol)，异氰酸正己酯(viii-5)(178mg,1.4mmol),60％氢化钠(140mg,3.51mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，二氯甲烷：乙酸乙酯＝12：1)，得白色固体0.28g，收率54.1％，m.p.146-148℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.42(s,1h),9.02(s,1h),8.92(s,1h),7.22(dd,j＝6.1,2.6hz,1h),7.17(t,j＝8.9hz,1h),7.10(brs,1h),6.85(m,1h),3.13-3.07(m,2h),1.46-1.39(m,2h),1.27(brs,6h),0.87(t,j＝6.5hz,3h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.46,152.34,150.31,141.76,138.82,137.68,125.17,121.70(d,j＝6.8hz),115.96(d,j＝23.2hz),107.10(d,j＝22.2hz),39.53,30.94,29.31,25.96,22.04,13.88.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc16h21brfn6o3:443.0837；found:443.0848.
实施例6
n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-环己基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-6)的制备
以vii-1(0.4g,1.17mmol)，异氰酸环己酯(viii-6)(175mg,1.4mmol),60％氢化钠为(140mg,3.51mmol)原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，石油醚：乙酸乙酯＝6：1)，得白色固体0.17g，收率32.9％，m.p.189-191℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.40(s,1h),9.01(s,1h),8.84(s,1h),7.27–7.20(m,1h),7.20-7.12(m,1h),7.02(m,1h),6.90-6.76(m,1h),3.58-3.39(m,1h),1.86-1.73(m,2h),1.72-1.59(m,2h),1.39-1.05(m,6h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.49,151.88(d,j＝65.8hz),150.12,141.67,138.63,137.45,125.16,121.66(d,j＝6.5hz),115.99(d,j＝23.2hz),107.14(d,j＝21.8hz),48.28,32.48,25.05,24.20.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc16h19brfn6o3:441.0681；found:441.0683.
实施例7
n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-正辛基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-7)的制备
以vii-1(0.4g,1.17mmol)，异氰酸正辛酯(viii-7)(217mg,1.4mmol)，60％氢化钠(140mg,3.51mmol)，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，石油醚：乙酸乙酯＝6：1)，得淡黄色固体0.27g，收率49.0％，m.p.130-132℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.42(s,1h),9.02(s,1h),8.91(s,1h),7.27–7.20(m,1h),7.17(t,j＝8.8hz,1h),7.10(m,1h),6.91-6.79(m,1h),3.13-3.04(m,2h),1.45-1.42(m,2h),1.26(brs,10h),0.86(t,j＝6.2hz).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.58,152.32(d,j＝11.9hz),149.90,141.29,138.81,137.38,125.26,121.81(d,j＝6.7hz),115.88(d,j＝23.1hz),107.09(d,j＝22.0hz),39.52,39.25,31.15,29.18,28.58,26.19,22.00,13.78.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc18h25brfn6o3:471.1150；found:471.1147.
实施例8
n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-叔丁基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-8)的制备
以vii-1(0.4g,1.17mmol)，异氰酸叔丁酯(viii-8)(139mg,1.4mmol)，60％氢化钠(140mg,3.51mmol)，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，二氯甲烷：乙酸乙酯＝20：1)，得白色固体0.18g，收率37.0％，m.p.174-175℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.41(s,1h),9.00(s,1h),8.67(s,1h),7.22-7.20(m,1h),7.20–7.13(m,1h),6.93(s,1h),6.84–6.75(m,1h),1.29(s,9h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.49,152.31,150.53(d,j＝65.0hz),141.50,138.69,137.62,125.25,121.67(d,j＝7.0hz),115.98(d,j＝28.3hz),107.14(d,j＝17.4hz),49.98,28.58.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc14h17brfn6o3:415.0524；found:415.0525.
实施例9
n-(4-氟苯基)-4-(3-乙基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-9)的制备
4-氨基-n-(4-氟苯基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(vi-2)的制备
将化合物iv(10g,61.53mmol))溶于乙醇(300ml)中，加4-氟苯胺(v-2)(7.52g,67.68mmol))，而后加nahco3(12.92g,153.83mmol)的水溶液(150ml水)，升温至60℃，tlc检测反应，待iv反应完全后，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯(100ml)溶解，水洗三次(30ml×3)，饱和nacl洗两次(30ml×2)，无水na2so4干燥过夜，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯/正己烷重结晶得粉红色固体6.91g，收率43％，m.p.214-215℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.25(s,1h),8.71(s,1h),7.05-6.99(m,2h),6.83-6.81(m,2h),6.24(s,2h).
4-(4-氟苯基)-3-[(4-氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基]-1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮(vii-2)
将化合物vi-2(10g,42.16mmol)溶于乙酸乙酯(120ml)中，加n,n'-羰基二咪唑(10.25g,63.24mmol)，25℃搅拌反应，tlc跟踪反应，至原料反应完，用1mol/lhcl(150ml×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，甲醇重结晶得10.9g白色固体，收率99％，m.p.203-204℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):7.65-7.64(m,2h),7.42-7.37(m,2h),6.60(s,2h).
n-(4-氟苯基)-4-(3-乙基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-9)的制备
以vii-2(0.3g,1.15mmol)，异氰酸乙酯(viii-1)(98mg,1.38mmol)，60％氢化钠(138mg,3.45mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，二氯甲烷：乙酸乙酯＝10：1)，得白色固体0.13g，收率36.7％，m.p.177-179℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.24(s,1h),8.90(s,1h),8.83(s,1h),7.08(brs,1h),7.00(m,2h),6.88(m,2h),3.22–3.05(m,2h),1.07(t,j＝7.1hz,3h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.68,156.51,151.07(d,j＝167.7hz),141.39,139.46,136.07,123.31(d,j＝8.0hz),114.90(d,j＝22.5hz),34.3414.90.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc12h14fn6o3:309.1106；found:309.1103.
实施例10
n-(4-氟苯基)-4-(3-正丙基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-10)的制备
以vii-2(0.4g,1.53mmol)，异氰酸正丙酯(viii-2)(157mg,1.84mmol)，60％氢化钠(183mg,4.59mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，二氯甲烷：乙酸乙酯＝10：1)，得白色固体0.17g，收率34.7％，m.p.175-176℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.25(s,1h),8.91(s,1h),8.85(s,1h),7.11(brs,1h),7.00(m,2h),6.88(m,4.9hz,2h),3.10-3.04(m,2h),1.50-1.40(m,2h),0.87(t,j＝7.4hz,3h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.56,156.40,151.28(d,j＝153.7hz),141.68,139.39,136.36,123.13(d,j＝7.9hz),114.88(d,j＝22.4hz),41.25,22.60,11.22.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc13h16fn6o3:323.1262；found:323.1269.
实施例11
n-(4-氟苯基)-4-(3-异丙基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-11)的制备
以vii-2(0.4g,1.53mmol)，异氰酸异丙酯(viii-3)(157mg,1.84mmol)，60％氢化钠(183mg,4.59mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，二氯甲烷：乙酸乙酯＝20：1)，得白色固体0.20g，收率40.8％，m.p.183-185℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.22(s,1h),8.86(s,1h),8.81(s,1h),7.00(brs,3h),6.87(brs,2h),3.99-3.57(m,1h),1.11(brs,6h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.76,156.58,150.63(d,j＝136.0hz),141.07,139.57,135.91,123.43(d,j＝6.0hz),114.92(d,j＝21.8hz),41.63,22.35.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc13h16fn6o3:323.1262；found:323.1269.
实施例12
n-(4-氟苯基)-4-(3-正丁基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-12)的制备
以vii-2(0.4g,1.53mmol)，异氰酸正丁酯(viii-4)(182mg,1.84mmol)，60％氢化钠(183mg,4.59mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，二氯甲烷：乙酸乙酯＝20：1)，得白色固体0.15g，收率28.8％，m.p.149-151℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.26(s,1h),8.89(s,1h),8.86(s,1h),7.08(brs,1h),7.05-6.93(m,2h),6.94-6.74(m,2h),3.23-2.98(m,2h),1.43-1.40(m,2h),1.35-1.15(m,2h),0.90(brs,3h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.75,156.58),151.08(d,j＝189.7hz),141.17,139.54,135.96,123.41(d,j＝8.0hz),114.92(d,j＝22.5hz),39.06,31.18,19.29,13.46.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc14h18fn6o3:337.1419；found:337.1420.
实施例13
n-(4-氟苯基)-4-(3-正己基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-13)的制备
以vii-2(0.4g,1.53mmol)，异氰酸正己酯(viii-5)(234mg,1.84mmol))，60％氢化钠(183mg,4.59mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，石油醚：乙酸乙酯＝6：1)，得白色固体0.20g，收率35.7％，m.p.155-157℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.26(s,1h),8.90(s,1h),8.87(s,1h),7.10(brs,1h),7.00(m,2h),6.87(m,2h),3.13-3.07(m,2h),1.53-1.37(m,2h),1.35-1.20(m,6h),0.87(t,j＝6.3hz,3h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.69,156.52,151.07(d,j＝171.9hz),141.29,139.43,136.06,123.30(d,j＝7.9hz),114.86(d,j＝22.5hz),39.31,30.85,29.14,25.85,21.97,13.79.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc16h22fn6o3:365.1732；found:365.1736.
实施例14
n-(4-氟苯基)-4-(3-环己基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒i-14)的制备
以vii-2(0.4g,1.53mmol)，异氰酸环己酯(viii-6)(230mg,1.84mmol)，60％氢化钠(183mg,4.59mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，石油醚：乙酸乙酯＝8：1)，得白色固体0.16g，收率29.1％，m.p.201-203℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.27(s,1h),8.88(s,1h),8.83(s,1h),7.19-6.93(m,3h),6.86(dd,j＝8.9,4.8hz,2h),3.58-3.39(m,1h),1.93-1.73(m,2h),1.73-1.59(m,2h),1.41-1.03(m,6h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.56,156.39,150.79(d,j＝88.2hz),141.63,139.32,136.33,123.09(d,j＝8.1hz),114.90(d,j＝22.5hz),48.19,32.51,25.09,24.19.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc16h20fn6o3:363.1575；found:363.1577.
实施例15
n-(4-氟苯基)-4-(3-正辛基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-15)的制备
以vii-2(0.3g,1.15mmol)，异氰酸正辛酯(viii-7)(214mg,1.38mmol)，60％氢化钠(138mg,3.45mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，二氯甲烷：乙酸乙酯＝15：1)，得淡黄色固体0.15g，收率33.3％，m.p.130-132℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.27(s,1h),8.90(s,1h),8.87(s,1h),7.10(brs,1h),7.00(m,2h),6.87(m,2h),3.13-3.06(m,2h),1.51-1.37(m,2h),1.27(brs,10h),0.86(t,j＝6.4hz,3h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.65,156.48,151.07(d,j＝162.8hz),141.35,139.37,136.14,123.23(d,j＝7.8hz),114.83(d,j＝22.5hz),39.44,38.89,31.18,29.24,28.62,26.23,22.02,13.83.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc18h26fn6o3:393.2045；found:393.2056.
实施例16
n-(4-氟苯基)-4-(3-叔丁基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-16)的制备
以vii-2(0.4g,1.53mmol)，异氰酸叔丁酯(viii-8)(182mg,1.84mmol)，60％氢化钠(183mg,4.59mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，二氯甲烷：乙酸乙酯＝25：1)，得白色固体0.12g，收率23.1％，m.p.176-178℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.29(s,1h),8.89(s,1h),8.69(s,1h),7.08-6.94(m,3h),6.84(dd,j＝8.9,4.8hz,2h),1.29(s,9h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.60,156.43,150.48(d,j＝61.8hz),141.35,139.25,136.30,123.17(d,j＝8.0hz),114.92(d,j＝22.5hz),49.96,28.59.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc14h18fn6o3:337.1419；found:337.1423.
实施例17
n-(3-氯-4-氟苯基)-4-(3-正丙基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(vi-3)的制备
将化合物iv(8g,49.22mmol)溶于乙醇(200ml)中，加3-氯-4-氟苯胺(v-3)(7.88g,54.14mmol)，而后加nahco3(0.34g,123.05mmol)的水溶液(100ml水)，升温至60℃，tlc检测反应，待iv反应完全后，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯(80ml)溶解，水洗三次(30ml×3)，饱和nacl洗两次(30ml×2)，无水na2so4干燥保存过夜，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯/正己烷重结晶得微黄色固体6.02g，收率65.03％，m.p.160-162℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.46(s,1h),8.89(s,1h),7.22(t,j＝9.1hz,1h),6.97(dd,j＝6.5,2.6hz,1h),6.75-6.70(m,1h),6.29(s,2h),3.37(brs,2h).
4-(3-氯-4-氟苯基)-3-[(4-氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基]-1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮(vii-3)的制备
将化合物vi-3(6g,22.09mmol)溶于乙酸乙酯(78ml)中，加n,n'-羰基二咪唑(5.37g,33.14mmol)，室温(25℃)反应，tlc跟踪监测反应，至原料反应完终止反应。用1mol/lhcl(80ml×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，甲醇重结晶得6.37g白色固体，收率97％。m.p.180-181℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):7.99(dd,j＝6.6,2.1hz,1h),7.74-7.76(m,1h),7.63(t,j＝8.8hz,1h),6.60(s,2h).
n-(3-氯-4-氟苯基)-4-(3-正丙基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-17)的制备
以vii-3(0.4g,1.17mmol)，异氰酸正丙酯(viii-2)(137mg,1.61mmol),60％氢化钠(161mg,4.02mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，二氯甲烷：乙酸乙酯＝15：1)，得淡绿色固体0.16g，收率33.3％，m.p.169-171℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.42(s,1h),9.02(s,1h),8.93(s,1h),7.21(t,j＝9.1hz,1h),7.16-7.11(m,1h),7.09(brs,1h),6.87-6.74(m,1h),3.11-3.04(m,2h),1.52-1.40(m,2h),0.87(t,j＝7.4hz,3h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):154.38,151.81(d,j＝92.9hz),150.35,141.84,138.80,137.47,122.36,121.02(d,j＝6.8hz),118.69(d,j＝18.6hz),116.23(d,j＝21.7hz),41.30,22.60,11.21.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc13h15clfn6o3:357.0873；found:357.0875
实施例18
n-(3-氯-4-氟苯基)-4-(3-异丙基脲基)-nˊ-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒i-18)的制备
以vii-3(0.4g,1.34mmol)，异氰酸异丙酯(viii-3)(137mg,1.61mmol)，60％氢化钠(161mg,4.02mmol)为原料，操作同i-1，柱层析分离(淋洗剂，石油醚：乙酸乙酯＝3：1)，得白色固体0.40g，收率83.3％，m.p.163-165℃。1h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.42(s,1h),9.03(s,1h),8.83(s,1h),7.21(t,j＝9.1hz,1h),7.15-7.06(m,1h),7.00(brs,1h),6.85-6.76(m,1h),3.88-3.61(m,1h),1.11(d,j＝6.4hz,6h).13c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):154.39,151.37(d,j＝67.2hz),150.26,141.73,138.78,137.43,122.37,121.00(d,j＝6.8hz),118.70(d,j＝23.2hz),116.23(d,j＝22.1hz),41.62,22.59.hrms(esi):m/z[m+h]+.calcdforc13h15clfn6o3:357.0873；found:357.0875。