>[0036] gl、由SEQ ID No. 11所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0037] g2、在SEQ ID No. 11所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或 几个氨基酸残基得到的具有β -内酰胺酶活性的由gl)衍生的蛋白质。
[0038] 上述方法中，所述扩环酶基因可为bll_bl3中的任一种DNA分子：
[0039] bll)其编码序列是SEQ ID No. 2的cDNA分子或基因组DNA ;
[0040] bl2)在严格条件下与bll)或bl2)限定的DNA分子杂交且编码所述扩环酶的cDNA 分子或基因组DNA ;
[0041] bl3)与bll)或bl2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且编码所述扩环酶 的cDNA分子或基因组DNA ;
[0042] 所述乙酰辅酶A合成酶基因可为dll-dl3中的任一种DNA分子：
[0043] dll)其编码序列是SEQ ID No. 4第216-2177位的cDNA分子或基因组DNA ;
[0044] dl2)在严格条件下与dll)或dl2)限定的DNA分子杂交且编码所述乙酰辅酶A合 成酶的cDNA分子或基因组DNA ;
[0045] dl3)与dll)或dl2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且编码所述乙酰辅 酶A合成酶的cDNA分子或基因组DNA。
[0046] 上述严格条件可为如下：50°C，在7%十二烷基硫酸钠（SDS)、0. 5M似?04和ImM EDTA的混合溶液中杂交，在50°C，2XSSC，0. 1%SDS中漂洗；还可为：50°C，在7% SDS、0. 5M NaPO4和ImM EDTA的混合溶液中杂交，在50°C，I X SSC，0. 1%SDS中漂洗；还可为：50°C，在 7% SDS、0. 5M NaPO4 和 ImM EDTA 的混合溶液中杂交，在 50°C，0. 5XSSC，0. 1%SDS 中漂洗； 还可为：50°C，在 7%SDS、0.5M NaPOdPlmM EDTA 的混合溶液中杂交，在 50°C，0.1XSSC， 0. 1%SDS中漂洗；还可为：50°C，在7% SDS、0. 5M NaPO4和ImM EDTA的混合溶液中杂交，在 65°C，0. 1XSSC，0. 1%SDS中漂洗；也可为：在6XSSC，0. 5%SDS的溶液中，在65oC下杂交， 然后用 2 X SSC, 0· 1%SDS 和 I X SSC, 0· 1%SDS 各洗膜一次。
[0047] 上述"同一性"指与天然核酸序列的序列相似性。"同一性"可以用肉眼或计算机 软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比（％)表示，其 可以用来评价相关序列之间的同一性。
[0048] 上述方法中，所述扩环酶基因通过含有扩环酶基因表达盒的重组表达载体导入所 述受体菌中，所述扩环酶基因表达盒中，启动所述扩环酶基因转录的启动子是PBAD启动 子；
[0049] 所述用乙酰辅酶A合成酶基因替换丙酮酸氧化酶基因中，所述乙酰辅酶A合成酶 基因含有SEQ ID No. 4的第62-195位所示的启动子FumA,所述启动子FumA位于所述乙酰 辅酶A合成酶基因的编码序列上游。
[0050] 本发明中所述扩环酶基因表达盒可含有所述扩环酶基因和启动所述扩环酶基因 转录的启动子。本发明中所述扩环酶基因表达盒指能够在宿主细胞中表达SEQ ID No. 2所 示的所述扩环酶基因的DNA，该DNA不但可包括启动所述扩环酶基因转录的启动子，还可包 括终止所述扩环酶基因转录的终止子。进一步，所述扩环酶基因表达盒还可包括增强子序 列。
[0051] 在本发明的一个实施方式中，pBAD启动子的核苷酸序列如SEQ ID No. 13的第 994 - 1266 位。
[0052] 在本发明的一个实施方式中，所述含有扩环酶基因表达盒的重组表达载体是将 SEQ ID No. 13所示的pDBIS载体的NcoI和EcoRI位点间的片段替换为SEQ ID No. 2所示 的脱乙酰氧基头孢菌素 C合成酶(扩环酶）基因得到的重组载体PDB1S-H7。
[0053] 在本发明的一个【具体实施方式】中，所述野生型大肠杆菌为大肠杆菌K12。
[0054] 所述大肠杆菌突变体PGOl是将大肠杆菌K12的α -酮戊二酸脱氢酶基因（sucA) 替换为两端带有FRT位点的卡那霉素抗性基因从而将大肠杆菌K12的α -酮戊二酸脱氢 酶基因（sucA)敲除(缺失）的大肠杆菌Κ12突变体。
[0055] 所述大肠杆菌突变体PG03是将大肠杆菌突变体PGOl的丙酮酸氧化酶基因（poxB) 替换为SEQ ID No. 4的第216-2177位所示的乙酰辅酶A合成酶基因（acs)和卡那霉素抗 性基因得到的大肠杆菌突变体PG03 (简称PG03)。PG03的构建方法如下：
[0056] i、将PGOl的FRT位点之间的卡那霉素抗性基因删除，消除PGOl的卡那霉素抗 性，得到大肠杆菌突变体PGOl Λ kan (简称PGOl Λ kan);
[0057] ii、将PGOl Akan的丙酮酸氧化酶基因（poxB)替换为SEQ ID No. 4的第216-2177 位所示的乙酰辅酶A合成酶基因（acs)和卡那霉素抗性基因得到的突变体即为大肠杆菌突 变体PG03 (简称PG03)。在本发明的一个实施方式中，该替换通过将SEQ ID No. 4所示的 poxBup-FumA-acs-kan-poxBdown 与 PGOl Λ kan 进行同源重组实现。SEQ ID No. 4 中，第 1-61位是poxB的上游同源臂poxBup、第62-195位是启动子FumA，第216-2177位是乙酰辅 酶A合成酶基因（acs)，第2858-3652位是卡那霉素抗性基因 kan，第3907-3970位是poxB 的下游同源臂poxBdown。
[0058] 所述大肠杆菌突变体PG05是将大肠杆菌K12进行所述al、所述a2和所述a4改造 得到的大肠杆菌K12突变体PG05,其构建方法如下：
[0059] i、消除PG03的卡那霉素抗性，得到大肠杆菌突变体PG03 Λ kan (简称 PG03 Δ kan)〇
[0060] ii、将PG03 Λ kan的异柠檬酸裂合酶基因（aceA)替换为卡那霉素抗性基因得到 PG05。在本发明的一个【具体实施方式】中，将PG03 Λ kan的异朽1檬酸裂合酶基因（aceA)替 换为卡那霉素抗性基因。
[0061] 所述大肠杆菌突变体PG15是将大肠杆菌K12进行所述al、所述a3和所述a4 的改造得到的大肠杆菌突变体PG15 (简称PG15)。在本发明的一个【具体实施方式】中，将 PG03Akan的β -内酰胺酶基因（ampC)替换为卡那霉素抗性基因得到PG15。
[0062] 所述大肠杆菌突变体PG14是对所述大肠杆菌K12进行所述al和所述a3的改造得 到的突变体。在本发明的一个【具体实施方式】中，将PGOl Akan的β -内酰胺酶基因（ampC) 替换为卡那霉素抗性基因得到PG14。
[0063] 所述大肠杆菌突变体PG16是对所述大肠杆菌K12进行所述al和所述a2的改造 得到的突变体。在本发明的一个【具体实施方式】中，将PGOl Akan的异柠檬酸裂合酶基因 (aceA)替换为卡那霉素抗性基因得到PG16。
[0064] 所述大肠杆菌突变体PG20是将PG16 Λ kan的β -内酰胺酶基因（ampC)替换为 卡那霉素抗性基因从而将β -内酰胺酶基因（ampC)敲除得到的大肠杆菌突变体，其基因 型为Λ sucA Λ aceA Λ ampC: :Kan。所述PG16 Λ kan是将PG16的FRT位点之间的卡那霉 素抗性基因删除，得到大肠杆菌突变体PG16 Λ kan (简称PG16 Λ kan)。
[0065] 所述大肠杆菌突变体PG22是对所述大肠杆菌K12进行所述al和所述a2和所述 a3和所述a4的改造得到的突变体。在本发明的一个【具体实施方式】中，是将PG15 Λ kan的 异柠檬酸裂合酶基因（aceA)替换为卡那霉素抗性基因得到得到PG22。所述PG15 Λ kan是 将PG15的FRT位点之间的卡那霉素抗性基因删除，得到大肠杆菌突变体PG15 Λ kan。
[0066] 上述方法制备的产头孢菌素 G的重组