菌也是本发明的保护范围。
[0067] 在本发明的【具体实施方式】中，上述方法制备的产头孢菌素 G具体为将PDB1S-H7导 入所述大肠杆菌突变体PG22得到的重组菌PG22/pDBlS-H7,将PDB1S-H7导入所述大肠杆 菌突变体PG15得到的重组菌PG15/pDBlS-H7,将PDB1S-H7导入所述大肠杆菌突变体PG14 得到的重组菌PG14/pDBlS-H7,将PDB1S-H7导入所述大肠杆菌突变体PG20得到的重组菌 PG20/pDBIS-H7，将pDBIS-H7导入所述大肠杆菌突变体PG03得到的重组菌PG03/pDBIS-H7， 将PDB1S-H7导入所述大肠杆菌突变体PG05得到的重组菌PG05/pDBlS-H7,将pDBlS-H7导 入所述大肠杆菌突变体PGOl得到的重组菌PG01/pDBlS-H7,将PDB1S-H7导入所述大肠杆 菌突变体PG16得到的重组菌PG16/pDBlS-H7,将PDB1S-H7转入大肠杆菌K12得到重组菌 K12/pDBlS-H7。
[0068] 上述方法制备的产头孢菌素 G的重组菌在制备头孢菌素 G或7 -氨基去乙酰氧基 头孢烷酸（7 - ADCA)中的应用也属于本发明的保护范围。
[0069] 本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种产量较高的制备头孢菌素 G的方 法。
[0070] 本发明所提供的制备头孢菌素 G的方法，包括上述产头孢菌素 G的重组菌经阿拉 伯糖诱导培养得到诱导后重组菌，用所述诱导后重组菌催化青霉素 G进行催化反应得到头 孢菌素 G。
[0071] 上述制备头孢菌素 G的方法中，阿拉伯糖诱导培养在阿拉伯糖的浓度为 0. 2g/100mL的培养基中进行，所述诱导培养的温度可为20-37°C (如30°C -37°C或30°C)， 所述诱导培养的时间可为10小时-30小时(如12-20小时或12小时)。
[0072] 实验证明，本发明所制备的产头孢菌素 G的重组菌的头孢菌素 G的产量为 2. 67mM-29. OlmM，具体如下：PG22/pDBlS-H7 的头孢菌素 G 产量为 29. OlmM，PG15/pDBlS-H7 的头孢菌素 G产量为21. 48mM，PG14/pDBlS-H7的头孢菌素 G产量为17. 88mM，PG20/ PDB1S-H7的头孢菌素 G产量为17. 42mM，PG03/pDBlS-H7的头孢菌素 G产量为12. 44mM， PG05/pDBlS-H7的头孢菌素 G产量为12. 19mM，PG01/pDBlS-H7的头孢菌素 G产量为 10. 92mM，K12/PDB1S-H7的头孢菌素 G产量为2. 67mM。大肠杆菌本来不能产生头孢菌素 G， 本发明首次在大肠杆菌实现了 G-7-ADCA的生产。而且通过对大肠杆菌的改造提高了头孢 菌素 G的产量，产量比棒状链霉菌提高了 30 - 40倍。
【附图说明】
[0073] 图 Ia 为 PGOl 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2 :PG01。
[0074] 图 Ib 为 PG02 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2 :PG02。
[0075] 图 Ic 为 PG04 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2 :PG04。
[0076] 图 Id 为 PG06 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2 :PG06。
[0077] 图 Ie 为 PG08 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2 :PG08。
[0078] 图 If 为 PGlO 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2 :PG10。
[0079] 图 Ig 为 PG12 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2 :PG12。
[0080] 图 Ih 为 PG03 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2 :PG03。
[0081] 图 Ii 为 PG14 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2,3 :PG14。
[0082] 图 Ij 为 PG16 的 PCR 验证。M :marker ;1，3 :K12 ;2,4,5 :PG16。
[0083] 图 Ik 为 PG17 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2 :PG17。
[0084] 图 11 为 PG18 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2,3 :PG18。
[0085] 图 Im 为 PG19 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2 :PG19。
[0086] 图 In 为 PG05 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2 :PG05。
[0087] 图 Io 为 PG15 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2,3 :PG15。
[0088] 图 Ip 为 PG20 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2,3 :PG20。
[0089] 图 Iq 为 PG21 的 PCR 验证。M :marker ;1 :K12 ;2 :PG21。
[0090] 图 Ir 为 PG22 的 PCR 验证。M :marker ;1，3, 5, 7, 10 :K12 ;2, 4, 6, 8, 9 :PG22。
[0091] 图2为工程菌中扩环酶蛋白表达的电泳检测结果。
[0092] M:蛋白质分子量标准；l:K12/pDBlS-H7的细胞破碎上清液，2:PG01/pDBlS-H7的 细胞破碎上清液，3:PG02/pDBlS-H7的细胞破碎上清液，4:PG03/pDBlS-H7的细胞破碎上清 液，5: PG04/pDBIS-H7的细胞破碎上清液，6: PG05/pDBIS-H7的细胞破碎上清液，7: PG06/ PDB1S-H7的细胞破碎上清液，8:PG08/pDBlS-H7的细胞破碎上清液，9:PG10/pDBlS-H7的 细胞破碎上清液，10:PG12/pDBlS-H7的细胞破碎上清液，ll:PG14/pDBlS-H7的细胞破碎 上清液，12: PG15/pDB IS-H7的细胞破碎上清液，13: PG16/pDB IS-H7的细胞破碎上清液， 14:PG17/pDBlS-H7的细胞破碎上清液，15:PG18/pDBlS-H7的细胞破碎上清液，16:PG19/ PDB1S-H7的细胞破碎上清液，17:PG20/pDBlS-H7的细胞破碎上清液，18:PG21/pDBlS-H7的 细胞破碎上清液，19:PG22/pDBlS-H7的细胞破碎上清液。
[0093] 图3为G-7-ADCA标准品的HPLC图谱。
[0094] 图4为PG22/pDBlS-H7的全细胞催化转化产物的HPLC图谱。
[0095] 图5为pDBIS的物理图谱。
【具体实施方式】
[0096] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为 常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0097] 下述实施例中，大肠杆菌 K12 (Tomoya Baba, Takeshi Ara, Miki Hasegawa, Yuki Takai, Yoshiko Okumura, Miki Baba, Kirill A Datsenko, Masaru Tomita, Barry L Wanner, and Hirotada Moril. Construction of Escherichia coli K-12in-frame, single-gene knockout mutants: the Keio collection. Molecular Systems Biology (2006) :1-11.)是一株非病原菌，遗传背景清楚，世代时间短、容易培养且 培养基原料低廉。大肠杆菌K12本身不产G-7-ADCA。大肠杆菌K12公众可从中国科学院微 生物研究所获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
[0098] 下述实施例中，脱乙酰氧基头孢菌