FABP4表达水平显著下降(P〈0.01)。
[0031]实施例二间充质干细胞成脂诱导分化培养基间充质干细胞成脂诱导分化培养基，包括DMEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度:FBS 10%体积百分比、谷氨酰胺1%体积百分比、青霉素-链霉素1%体积百分比、吲哚美辛200 yM、胰岛素100 nM、地塞米松10 nM、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤1 yM和盐酸法舒地尔0.1 yMo
[0032]制备方法:向DMEM/F12培养基中，按所述浓度加入FBS、谷氨酰胺、抗生素、吲哚美辛母液、胰岛素母液、地塞米松母液、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤母液和盐酸法舒地尔母液，搅拌均匀，过膜除菌即得。
[0033]卩引哚美辛母液的制备:取lOOmg，用50%甲醇溶解，配成20mM的母液，储存于_20度。胰岛素母液的制备:取100mg，用0.0lmol/L盐酸溶解，配成100 yM的母液，储存于-20度。地塞米松母液的制备:取lg，用95%乙醇溶解，配成10 y M的母液，-20度保存。3-异丁基-1-甲基黄嘌呤母液的制备:取50mg，用95%乙醇溶解，配成ImM的母液，储存于-20度。盐酸法舒地尔母液的制备:取100mg，用50%甲醇溶解，配成0.1mM的母液，储存于_20度。
[0034]实施例三间充质干细胞成脂诱导分化培养基间充质干细胞成脂诱导分化培养基，包括DMEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度:FBS 15%体积百分比、谷氨酰胺1%体积百分比、抗生素1%体积百分比、吲哚美辛150UM、胰岛素50 nM、地塞米松10 nM、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤2 yM和盐酸法舒地尔0.2 uM0
[0035]制备方法:与实施例二中的制备方法类似。
[0036]实施例四间充质干细胞成脂诱导分化培养基间充质干细胞成脂诱导分化培养基，包括DMEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度:FBS 10%体积百分比、谷氨酰胺2%体积百分比、青霉素-链霉素1%体积百分比、吲哚美辛200 yM、胰岛素100 nM、地塞米松15 nM、3_异丁基-1-甲基黄嘌呤lyM和盐酸法舒地尔 0.1 yMo
[0037]制备方法:与实施例二中的制备方法类似。
[0038]实施例五骨髓间充质干细胞的成脂诱导分化取P3代骨髓间充质干细胞，以5000个/cm2的密度接种于六孔板中，并用含10% (v/v)FBS的DMEM/F12培养基进行培养，待细胞汇合度达80%时，弃去培养基，分别加入诱导培养基1和诱导培养基2，每3天换液一次。诱导培养3周后，用油红0进行成脂鉴定，结果如图3所示；同时，用qPCR鉴定成脂细胞相关基因FABP4的表达水平，结果如图4所示。
[0039]从图3和图4可知:本发明提供的培养基所诱导分化的细胞，成脂细胞更多，脂滴更多更饱满，成脂相关基因FABP4的表达水平更高(与诱导培养基2相比，P〈0.01)，说明其成脂诱导分化效果更好。
[0040]实施例五脐带间充质干细胞的成脂诱导分化取P3代脐带间充质干细胞，以5000个/cm2的密度接种于六孔板中，并用含10% (v/v)FBS的DMEM/F12培养基进行培养，待细胞汇合度达80%时，弃去培养基，分别加入诱导培养基1和诱导培养基2，每3天换液一次。诱导培养3周后，用油红0进行成脂鉴定，结果如图5所示；同时，用qPCR鉴定成脂细胞相关基因FABP4的表达水平，结果如图6所示。
[0041]从图5和图6可知:本发明提供的培养基所诱导分化的细胞，成脂细胞更多，脂滴更多更饱满，成脂相关基因FABP4的表达水平更高(与诱导培养基2相比，P〈0.01)，说明其成脂诱导分化效果更好。
[0042]实施例六羊膜间充质干细胞的成脂诱导分化取P3代羊膜间充质干细胞，以5000个/cm2的密度接种于六孔板中，并用含10% (v/v)FBS的DMEM/F12培养基进行培养，待细胞汇合度达80%时，弃去培养基，分别加入诱导培养基1和诱导培养基2，每3天换液一次。诱导培养3周后，用油红0进行成脂鉴定，结果如图7所示；同时，用qPCR鉴定成脂细胞相关基因FABP4的表达水平，结果如图8所示。
[0043]从图7和图8可知:本发明提供的培养基所诱导分化的细胞，成脂细胞更多，脂滴更多更饱满，成脂相关基因FABP4的表达水平更高(与诱导培养基2相比，P〈0.01)，说明其成脂诱导分化效果更好。
[0044]以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种间充质干细胞成脂诱导分化培养基，其特征在于:包括DMEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度:FBS 5~50%体积百分比、谷氨酰胺0.5~5%体积百分比、抗生素0.5~5%体积百分比、吲哚美辛50~500 μΜ、胰岛素50~500 ηΜ、地塞米松5~50 ηΜ、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤0.5-5 μ M和盐酸法舒地尔0.05-0.5 μ Μ。
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞成脂诱导分化培养基，其特征在于:包括DMEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度:FBS 5-20%体积百分比、谷氨酰胺0.5-2%体积百分比、抗生素0.5-2%体积百分比、吲哚美辛100~300 μΜ、胰岛素50~200 ηΜ、地塞米松5~20ηΜ、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤0.5~3 μ M和盐酸法舒地尔0.1~0.3 μ Μ。
3.根据权利要求2所述的间充质干细胞成脂诱导分化培养基，其特征在于:包括DMEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度:FBS 10%体积百分比、谷氨酰胺1%体积百分比、抗生素1%体积百分比、吲哚美辛200 μΜ、胰岛素100 ηΜ、地塞米松10 ηΜ、3_异丁基-1-甲基黄嘌呤I μM和盐酸法舒地尔0.1 μΜ。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的间充质干细胞成脂诱导分化培养基，其特征在于:所述间充质干细胞选自骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞或羊膜间充质干细胞。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的间充质干细胞成脂诱导分化培养基，其特征在于:所述抗生素包括青霉素和链霉素。
6.根据权利要求1所述的间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法，其特征在于:包括如下步骤:向DMEM/F12培养基中，按所述浓度加入FBS、谷氨酰胺、抗生素、吲哚美辛母液、胰岛素母液、地塞米松母液、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤母液和盐酸法舒地尔母液，搅拌均匀，过膜除菌即得。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的间充质干细胞成脂诱导分化培养基在间充质干细胞成脂诱导分化中的用途。
8.一种间充质干细胞成脂诱导分化方法，其特征在于:包括如下步骤:a)培养间充质干细胞山)待细胞汇合度符合要求时，弃去所述步骤a)中的培养基，加入权利要求1至5中任一项所述的间充质干细胞成脂诱导分化培养基培养2~4周。
9.根据权利要求8所述的间充质干细胞成脂诱导分化方法，其特征在于:所述间充质干细胞选自骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞或羊膜间充质干细胞。
【专利摘要】本发明提供一种间充质干细胞成脂诱导分化培养基，属于干细胞技术领域，包括DMEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度：FBS 5~50%体积百分比、谷氨酰胺0.5~5%体积百分比、抗生素0.5~5%体积百分比、吲哚美辛50~500μM、胰岛素50~500nM、地塞米松5~50nM、 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤0.5~5μM和盐酸法舒地尔0.05~0.5μM。本发明提供的间充质干细胞成脂诱导分化培养基具有诱导效率高等优点。
【IPC分类】C12N5-077
【公开号】CN104830757
【申请号】CN201510176993
【发明人】陈海佳, 王一飞, 葛啸虎, 戴国胜, 卢瑞珊
【申请人】广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年4月15日