香豆素类化合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于新化合物技术领域，尤其涉及一种香豆素类化合物及其制备方法和应 用。
【背景技术】
[0002] 毛果鱼藤为豆科植物毛果鱼藤（Derris eriocarpa How)的干燥根、藤，亦称"鸡血 藤"、"藤子甘草"等，分布在广西、云南一带。其根、茎入药；茎棕黄色，有多数黄色瘤状突起 物，断面淡黄色，纤维状。毛果鱼藤具有利尿除湿、镇咳化痰的功效，常用于广西壮族民间验 方，如治疗膀胱炎、肾炎、尿道炎、咳嗽等症状。因其民间用药的显著疗效，引起了越来越多 研宄人员的关注。
[0003] 自由基是人体生命活动中多种生化反应的中间代谢物质，在生命活动中有重要影 响。过量的自由基具有广泛的病理学效应，会对机体的生命活动带来不利影响。研宄表明， 人类的衰老、癌变、老年性痴呆、炎症以及心脑血管等疾病几乎都与自由基有关。机体适当 地补充外源性抗氧化剂，可以清除体内过剩的氧自由基，将对生物体产生有益的作用，因此 天然产品的抗氧化能力成为了该领域的研宄热点。毛果鱼藤藤茎中富含多种香豆素类化合 物，是其主要的活性成分。目前，对毛果鱼藤藤茎的研宄有资源调查，药材性状、薄层、紫外 光谱的鉴别以及抗炎镇痛、止咳祛痰等药理、毒理学方面的研宄，而对其提取工艺、生物活 性、化学成分等方面研宄甚少，对其香豆素类化合物的提取工艺和抗氧化作用的研宄尚未 见报道。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是提供一种香豆素类化合物及其制备方法和应用，具体 是从毛果鱼藤中提取分离出的一个新的香豆素类衍生化合物及其制备方法和在抗氧化方 面的用途。
[0005] 为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：香豆素类化合物，化学结构式 为：
[0006]
[0007] 上述香豆素类化合物，化学名称为：6〃，2-二甲基-2H-吡喃-3'，4'-苯并吡 喃-4, 5-二甲氧香豆素（6"，2-dimethyl-2H-pyran_3'，4' -dihydrobenzofuran-4, 5-dimet hoxy-2H-chromen-2-〇ne) 〇
[0008] 上述香豆素类化合物的制备方法，从毛果鱼藤的藤茎中提取分离而得。
[0009] 上述香豆素类化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0010] 〈1>将毛果鱼藤的藤茎烘干后进行粉碎，称取粉碎的毛果鱼藤，加入10倍体积 95%乙醇，80°C下水浴回流提取2h，提取3次，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩烘干得到浸 膏；
[0011] 〈2>将所得浸膏用石油醚反复多次萃取，合并、浓缩萃取液，得到石油醚层萃取 物；
[0012] 〈3>将石油醚层萃取物进行反相硅胶柱层析分离，用石油醚-乙酸乙酯系统进行 梯度洗脱，收集并通过薄层色谱检测合并各流分，用旋转蒸发仪分别进行浓缩；所述梯度洗 脱液为体积比1〇:〇、1〇:1、1〇:3、10:4、10:5的石油醚-乙酸乙酯的混合液；
[0013] 〈4>取步骤〈3>中显示多烷氧基取代的呋喃香豆素类特征的流分进行反相硅胶柱 层析分离，用石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱，收集并通过薄层色谱检测合并各流分； 所述梯度洗脱液为体积比16:0. 9、13:1、10:1. 2的石油醚-乙酸乙酯的混合液；将体积比 10:1. 2的石油醚-乙酸乙酯的混合液洗脱浓缩得到的固体用丙酮溶解，-4摄氏度静置48h， 得到结晶，将晶体再用丙酮溶解，进行重结晶，即得。
[0014] 上述香豆素类化合物用作非药用抗氧化剂。
[0015] 上所述香豆素类化合物在制备药用抗氧化剂方面的应用。
[0016] 发明人从毛果鱼藤的藤茎中提取，根据薄层色谱法检测引导，再经反相硅胶柱层 析，采用石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱进一步系统分离、重结晶获得了一种香豆素 类化合物（以下简称化合物1)。经X-单晶衍射、波谱解析以及化学方法确定了其化学结构， 认定化合物1为新的香豆素类化合物，属于天然的活性成分，易溶于醇类等溶剂，为亲脂性 化合物。抗氧化的活性的DPPH ·自由基的清除活性实验及超氧阴离子实验证明，本发明的 化合物1具有很好的抗氧化作用，其DPPH ·自由基的清除活性的IC5tl值远小于阳性药对照 的抗坏血酸，且对超氧阴离子的清除活性的IC5tl值与阳性药也相差不大，与文献报道的香 豆素类化合物秦皮乙素、瑞香素和双白瑞香素活性相比，也具有优良的抗氧化活性。因此， 本发明的香豆素类化合物可用作药用或非药用的抗氧化剂等。
【附图说明】
[0017] 图1是化合物1的单晶衍射图。
[0018] 图2是DPPH自由基的清除试验的曲线图。
[0019] 图3是超氧阴离子的清除试验的曲线图。
【具体实施方式】
[0020] 一、化合物1的制备
[0021] 〈1>将毛果鱼藤的藤茎烘干后进行粉碎，用IL的圆底烧瓶提取粉碎的毛果鱼藤， 加入10倍体积95%乙醇，80°C下水浴回流提取2h，提取3次，过滤，合并滤液，重复上述操 作，共提取粉碎的毛果鱼藤的量10. 5kg，滤液减压浓缩烘干得到浸膏I. 05kg ;
[0022] 〈2>将所得浸膏用石油醚反复多次萃取，合并、浓缩萃取液，得到石油醚层萃取物 25. 5g ；
[0023] 〈3>将石油醚层萃取物进行反相硅胶柱层析分离，用石油醚-乙酸乙酯系统（梯 度洗脱液为体积比（V/V) 10:0、10:1、10:3、10:4、10:5的石油醚-乙酸乙酯的混合液）进行 梯度洗脱，收集，经过薄层色谱检测（TLC)，365nm，254nm紫外检测及碘蒸气显色，合并相同 的流分，共得到4个流分，分别表示为：Fr. 1，Fr. 2, Fr. 3, Fr. 4 ;Fr. 1用薄层层析板分析可 知有三个点，极性较小，第一个点在365nm下观察呈现黄绿色，其他两个点都是蓝色荧光； Fr. 2在薄层板显示有两个点，在365nm的荧光下观察均为黄色荧光；Fr. 3和Fr. 4在紫外灯 下显示的点都超过四个，物质种类相对较多；用旋转蒸发仪分别进行浓缩，用于进一步分离 纯化；
[0024] <4>Fr. 1的组分在紫外灯下365nm有黄绿色点出现，这是多烷氧基取代的呋喃香 豆素类的特征颜色，所以选取Fr. 1流分进行反相硅胶柱色谱分离，用石油醚-乙酸乙酯系 统（梯度洗脱液为体积比（V/V)16:0.9、13 :1、10:L2的石油醚-乙酸乙酯的混合液）进 行梯度洗脱，经过TLC检测，365nm，254nm紫外检测及碘蒸气显色，合并相同流分，收集石油 醚：乙酸乙酯=10:1. 2(V/V)的流分，减压浓缩得到固体，然后用丙酮溶解，-4摄氏度静置 48h，得到结晶，将晶体再用丙酮溶解，进行重结晶，即得化合物1。
[0025] 二、化合物1的结构确定
[0026] 1.结构测定
[0027] 理化与光谱数据：异羟肟酸铁反应，取盐酸羟胺甲醇液0.5ml，加试液数滴，加两 滴氢氧化钾甲醇试液使溶液呈碱性，在水浴沸煮一分钟，冷却后加 5%的盐酸溶液使溶液呈 酸性，加 1 %的FeCl3溶液2滴，溶液呈现紫红色，证明有内酯结构。
[0028] 该化合物为淡黄色针状晶体，全波长扫描最大吸收波长为307nm， 1HNMlUeOOMHz, MeOH)、13CNMR(15