一种芽孢杆菌及其应用
【技术领域】
[0001 ]本发明设及芽抱杆菌技术领域，特别设及一种抗病耐盐的芽抱杆菌。
【背景技术】
[0002] 真菌病害严重危及全球粮食安全，植物病害中有70%-80%是病原真菌的侵染所导 致。水稻稻攝病Pyriculariao巧ae化V.在全球85个国家中的爆发，造成了 10%-35%的粮食 损失，甚至一些真菌类病害还导致了严重的动植物死亡和灭绝。菌核菌能够侵害400余种植 物，包括十字花科、豆科、茄科、菊科和織形花科等，为油菜=大病害之首，产量损失严重时 可达80%。化学防治是目前防治真菌病害最有效的措施，我国每年化学农药的使用量为50-60万吨，对环境和生态带来了严重的污染和危害，在一些国家和地区化学杀菌剂已经被限 制使用。而生物防治因其见效快、杀菌谱广、环境友好和不易产生抗性等特点，具有广阔的 应用前景。
[0003] 用于生物防治的微生物种类主要有细菌、真菌、放线菌和病毒。然而，近年来，随着 生防细菌的发掘和研究，寻找新的具有病原真菌括抗作用的细菌难度越来越大，但是筛选 新的具有病原真菌括抗作用的细菌仍然具有重要的科学价值的实用价值。
【发明内容】
[0004] 由于盐湖高盐、高渗透压的特殊环境，其中蕴含着丰富的耐盐微生物资源，我国有 大小盐湖1000多个，而对盐湖中微生物资源的开发利用相对较少。本研究针对上述问题，结 合我国的种植资源，从茶卡盐湖采集的渺泥和湖水样品中分离得到了 51株细菌，并对运51 株细菌的16S rDNA、gyrB基因、病原真菌括抗能力和耐盐能力等进行检测分析，旨在获得高 效广谱的耐盐生防菌，W期为植物真菌病害的防治及生防菌在高盐地区的应用提供材料。
[0005] 因此，本发明提供了一种芽抱杆菌（Bacillus),所述芽抱杆菌为萎缩芽抱杆菌 (Bacillus atro地aeus);所述萎缩芽抱杆菌选自被定名为BalO的菌株，且所述BalO保藏于 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、，保藏编号为CGMCC No. 12053;和/或所 述萎缩芽抱杆菌选自被定名为Ba27的菌株，且所述Ba27保藏于中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中屯、，保藏编号为CGMCC No. 12054。
[0006] -种如本发明的芽抱杆菌的应用。
[0007] 在本发明中，所述芽抱杆菌用于防治白菜黑斑病、水稻纹枯病、苹果轮纹病、西瓜 枯萎病、水稻稻攝病、草替炭痘病、苹果腐烂病、油菜菌核病、小麦赤霉病、黄瓜黑星病、棉花 黄萎病、辣椒疫霉病、苹果根腐病和相橘疮挪病中的至少一种。
[000引在本发明中，所述芽抱杆菌用于保护0.5-15%的高盐环境下生长的生物，优选用于 保护1-15%的高盐环境下生长的植物，更优选用于保护1-5%的高盐环境下生长的农作物。所 述农作物例如可W是：白菜（Brassica pekinensis Rupr.)、水稻（0;ryza sativa)、西瓜 (Citrullus lanatus)、油菜(Brassica campestris)、小麦（Triticum aestivum)、棉花 (Gossypium spp)、辣椒（Capsicum annuum L.)、苹果（Malus pumila Mill.)和草替 (Rragaria ananassa Duch.)等中的至少一种。
[0009] -种对本发明上述两种的芽抱杆菌分别进行遗传改良后得到的工程菌。其中，由 于该工程菌是W本发明的芽抱杆菌为祀标，而且采取的手段一般是向其中转入和/或敲除 特定的基因和/或序列等，因此，该工程菌仍然为芽抱杆菌或者说仍为萎缩芽抱杆菌。另外， 所述工程菌可W为提高了对上述病害活性的工程菌。还可W为兼具其他病虫害活性的工程 困株。
[0010] -种如本发明的工程菌的应用。
[0011] 在本发明中，所述工程菌用于防治白菜黑斑病、水稻纹枯病、苹果轮纹病、西瓜枯 萎病、水稻稻攝病、草替炭痘病、苹果腐烂病、油菜菌核病、小麦赤霉病、黄瓜黑星病、棉花黄 萎病、辣椒疫霉病、苹果根腐病和相橘疮挪病中的至少一种。
[0012] 在本发明中，所述工程菌用于保护0.5-15%的高盐环境下生长的生物，优选用于保 护1-15%的高盐环境下生长的植物，更具体地是用于保护1-5%的高盐环境下生长的农作物。 所述农作物例如可W是：白菜（Brassica pekinensis R叫r)、水稻（0;ryza sativa)、西瓜 (Citrullus lanatus)、油菜(Brassica campestris)、小麦（Triticum aestivum)、棉花 (Gossypium spp)、辣椒（Capsicum annuum L.)、苹果（Malus pumila Mill.)和草替 (Rragaria ananassa Duch.)等中的至少一种。
[0013] -种包含如本发明的芽抱杆菌的组合物。其中的芽抱杆菌可W包括本发明的野生 菌株BalO和/或Ba27，也可W包括对本发明的野生菌株BalO和/或Ba27进行遗传改良后得到 的工程菌。所述组合物可W为固态形式，也可W为液态形式。所述组合物还可W包含与本发 明的芽抱杆菌具有增效作用的其他物质，该物质可W是微生物来源杀虫物质，也可W是杀 虫化合物。所述组合物进一步可W包括与本发明的芽抱杆菌相配合的辅剂、增稠剂和/或分 散剂，例如所述辅剂可W选自棉子油、藍麻油、桐油、液体石蜡、豆油、A1、A2、邻苯二甲酸二 甲醋、邻苯二甲酸二下醋等;增稠剂有膨润±、硬脂酸侣、地凝胶、龙胶粉、F1、黄原胶等:分 散剂有拉开粉、NN0、LFS、B1、碳黑等。
[0014] -种如本发明的组合物的应用。
[0015] -种如本发明所述的组合物在防治白菜黑斑病、水稻纹枯病、苹果轮纹病、西瓜枯 萎病、水稻稻攝病、草替炭痘病、苹果腐烂病、油菜菌核病、小麦赤霉病、黄瓜黑星病、棉花黄 萎病、辣椒疫霉病、苹果根腐病和相橘疮挪病中的至少一种中的应用。
[0016] -种如本发明所述的组合物在保护0.5-15%的高盐环境下生长的生物，优选在保 护1-15%的高盐环境下生长的植物，更优选在保护1-5%的高盐环境下生长的农作物中的应 用。所述农作物例如可W是：白菜（Brassica pekinensis Rupr)、水稻（0;ryza sativa)、西 瓜(Citrullus lanatus)、油菜(Brassica campestris)、小麦(Triticum aestivum)、棉花 (Gossypium spp)、辣椒（Capsicum annuum L.)、苹果（Malus pumila Mill.)和草替 (Rragaria ananassa Duch.)等中的至少一种。
[0017] -种包含如本发明的芽抱杆菌的农药制剂。其中的芽抱杆菌可W包括本发明的野 生菌株BalO和/或Ba27,也可W包括对本发明的野生菌株BalO和/或Ba27进行遗传改良后得 到的工程菌。
[0018] -种如本发明的农药制剂的应用。
[0019] -种如本发明所述的农药制剂在防治白菜黑斑病、水稻纹枯病、苹果轮纹病、西瓜 枯萎病、水稻稻攝病、草替炭痘病、苹果腐烂病、油菜菌核病、小麦赤霉病、黄瓜黑星病、棉花 黄萎病、辣椒疫霉病、苹果根腐病和相橘疮挪病中的至少一种中的应用。
[0020] -种如本发明所述的农药制剂在保护0.5-15%的高盐环境下生长的生物，优选在 保护1-15%的高盐环境下生长的植物，更优选在保护1-5%的高盐环境下生长的农作物中的 应用。所述农作物例如可W是：白菜（Brassica pekinensis Rupr)、水稻（0;ryza sativa)、 西瓜(Citrullus lanatus)、油菜(Brassica campestris)、小麦(Triticum aestivum)、棉 花（Gossypium spp)、辣椒（Capsicum annuum L.)、苹果（Malus pumila Mill.)和草替 (Rragaria ananassa Duch.)等中的至少一种。
[0021] 在本发明中，术语"保护"的意思是通过预防和/或治疗祀标生物产生的病虫害等， 从而使祀标生物免于或减轻遭受所述病虫害的为害。例如通过使用所述芽抱杆菌预防和/ 或治疗白菜的白菜黑斑病。
【附图说明】
[0022] 图1为基于gy巧基因序列构建的系统进化树。
[0023] 图2为筛选到的菌株BalO、Ba27及对照菌株B916、Bsl68和Bal0316在LB培养基上的 生长曲线。
[0024] 图3为筛选到的菌株BalO、Ba27及对照菌株B916、Bsl68和Bal0316在含10%NaCl的 LB培养基上的生长曲线。
[0025] 图4为筛选到的菌株BalO、Ba27及对照菌株B916、Bsl68和Bal0316在含15%NaCl的 LB培养基上的生长曲线。
[0026] 图5为耐盐生防菌BalO和Ba27W及对照菌株在高盐PDA培养基中的抑菌能力检测 图。
[0027] 菌种保藏 本发明筛选的一株芽抱杆菌被定名为BalO,该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中屯、，保藏编号为CGMCC No. 12053,保藏日期为2016年Ol月15日，保藏地 址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。其系统分类为Bacillus 曰troph曰euso
[0028] 本发明筛选的另一株芽抱杆菌被定名为Ba27,该菌株保藏于中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中屯、，保藏编号为CGMCC No. 12054,保藏日期为2016年Ol月15日， 保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。其系统分类为 Bscillus 曰troph曰eus。
【具体实施方式】
[0029] W下通过优选的实施例的形式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不 构成对本发明的限制。
[0030] 实施例1 1.1材料 病原菌：14种供试病原真菌白菜黑斑病菌Alternaria brassicae Berk.Saxe、水稻纹 枯病菌Thanatephorus cucumeris Frank Donk、苹果轮纹病菌Botryospuaeria berengerianaf . sp . Piricola、西瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum、稻稻攝病菌 Pyricularia oryz曰e C曰v曰r曰、草替炭痘病菌Colletotrichum fr曰g曰rise Brooks、苹果腐 烂病菌切1〇39〇招1]1日]1(1311111'；[。日、油菜菌核病菌5.3(31日1'01：；[01'111]1化化.）（1日6日巧、小麦赤霉 病菌F^isaHum graminearum Sehw、棉花黄萎病菌Ve;rticillium dahlia Kleb、辣椒疫霉病 菌Ph}ftophthora capsici和苹果根腐病菌F'usariumspp.、相橘疮挪病菌Sphaceloma fewcetti和黄瓜黑星病菌Cladosporium州州merinum由武汉科诺公司提供。
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