纳米基底膜的制备方法与流程

本发明涉及肿瘤细胞的检测领域，具体为一种纳米基底膜的制备方法。

背景技术：

目前循环肿瘤细胞检测是基于不同荧光素标记的各种抗体对细胞的荧光染色，然后在显微镜下进行多色荧光成像分析，这就需要让细胞紧密的平铺贴附于培养皿底部，因此对器件的材料和表面化学修饰有一定的要求。纳米结构材料因其特殊的物理化学性质在生物医学领域得到广泛的研究和应用。纳米结构是指尺寸在几纳米到几百纳米之间的结构，细胞外基质（即extracellularmatrix，简称ecm）和基底膜（即basementmembrane，简称bm）具有这样的纳米结构，ecm的纳米结构尺寸在260nm～340nm，bm表面的纳米结构在30nm～400nm之间，形成了人体中供细胞附着生长的纳米结构环境；细胞表面的微绒毛、丝状伪足同样是纳米尺寸结构，因此天然地与ecm、bm有高亲和性。这些人体自身的纳米结构具有影响细胞间的相互作用、促进细胞增殖与信号传递，促进ecm合成等功能。在体外环境下，具有纳米结构的基底适合细胞的迅速贴附。虽然目前现有的应用纳米基底检测ctcs的技术虽然优势明显，但存在一重要缺陷：纳米基底制备技术对工艺要求极高，成本昂贵，只能制备尺寸很小纳米基底，造成现有的纳米基底仅能处理分析微量的血液样本，可低至0.5ml，而无能力分析较大量的血液样本。研究发现，检测的血液标本量越大，结果才越准确可信，检测微量血液标本容易造成诊断误差。所以目前相关研究仍处于纳米基底制备条件的探索阶段，无法应用于临床。

下表是目前纳米基底制备方法及优缺点：

技术实现要素：

为了克服现有技术的缺陷，提供一种耗材成本低、高效吸附、结构精确、适用范围广的检测方法，本发明公开了一种纳米基底膜的制备方法。

本发明通过如下技术方案达到发明目的：

一种纳米基底膜的制备方法，其特征是：按如下步骤依次实施：

a.制备：选用聚苯乙烯作为基底，用氧等离子体轰击基底，制得纳米基底，随后用原子力显微镜证实纳米基底的纳米结构，观察纳米结构的高宽比、表面均方和粗糙度rq，用x射线光电子能谱分析仪分析纳米基底制备前后基底的氧元素含量；

b.修饰：将制得的纳米基底浸泡于质量百分比浓度不低于10%的氨基硅烷中，使纳米基底的表面覆盖上正电荷，随后将纳米基底置于摇床上浸泡2hour，摇床的摇动频率为60次/转，摇动浸泡后取出，用蒸馏水清洗，再置于温箱内烘干，烘干后取出纳米基底膜，用x射线光电子能谱分析仪检测修饰前后氮元素的含量。

所述的纳米基底膜的制备方法，其特征是：步骤a制备时，氧等离子体的功率不低于600w，轰击基底的时间不少于5min，纳米基底的结构尺寸为9.6cm²/nm；

步骤b修饰时，纳米基底在氨基硅烷溶液中的浸泡时间不少于2hour，氨基硅烷溶液的质量百分比浓度为5%，摇床的摇动频率不低于60次/转，温箱内的温度在85℃±10℃。

本发明创新性地采用成本低廉的聚苯乙烯作为基底，通过运用较高功率的氧等离子体轰击聚苯乙烯基底，并延长一定的处理时间，可以迅速地在聚苯乙烯基底上制备出均匀的纳米结构；随后用氨基硅烷修饰具有纳米结构的聚苯乙烯基底，使基底覆盖上正电荷，以达到更有效吸附细胞的目的。

本发明的有益效果是：耗材成本低，高效吸附，结构精确，适用范围广。

附图说明

图1是本发明的流程示意图；

图2是原子力显微镜观察到的经制备步骤后制得的纳米基底的照片；

图3是原子力显微镜观察到的经修饰步骤后制得的纳米基底膜的照片。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步说明本发明。

实施例1

一种纳米基底膜的制备方法，如图1所示，按如下步骤依次实施：

a.制备：选用聚苯乙烯作为基底1，用600w氧等离子体对基底1轰击5分钟，制得如图2所示的纳米基底2，纳米基底2的结构为9.6cm²/nm，随后用原子力显微镜证实纳米基底2的纳米结构，观察纳米结构2的高宽比、表面均方和粗糙度rq，用x射线光电子能谱分析仪（即x-rayphotoelectronspectroscopyanalysis，简称xps）分析纳米基底2制备前后基底的氧元素含量；

b.修饰：将制得的纳米基底2浸泡于质量百分比浓度为5%的氨基硅烷中2hour，使纳米基底2的表面覆盖上正电荷3，随后将纳米基底2置于摇床上浸泡2hour，摇床的摇动频率为60次/转，摇动浸泡后取出，用蒸馏水清洗，再置于85℃的温箱内烘干，烘干后取出如图3所示的纳米基底膜4，用xps检测修饰前后氮元素的含量。

技术特征：

技术总结
本发明涉及肿瘤细胞的检测领域，具体为一种纳米基底膜的制备方法。一种纳米基底膜的制备方法，其特征是：按如下步骤依次实施：a.制备：选用聚苯乙烯作为基底(1)，用600w氧等离子体对基底(1)处理5分钟；b.修饰：将制得的纳米基底(2)浸泡于质量百分比浓度为5%的氨基硅烷中，随后将氨基硅烷浸泡、清洗、烘干。本发明耗材成本低，高效吸附，结构精确，适用范围广。

技术研发人员：万源;祝琳;田巍;张群
受保护的技术使用者：上海浦美生物医药科技有限公司
技术研发日：2016.08.16
技术公布日：2017.11.10