一种含有甲基营养型芽孢杆菌与叶枯唑的杀细菌组合物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种杀细菌组合物，所述组合物含有活性成分甲基营养型芽孢杆菌和叶枯唑，其中二者的重量比为30:1-1:30。本发明还涉及一种杀细菌剂，其含有1～90重量％所述的杀细菌组合物，余量为农药上可接受的载体和助剂。进一步地，本发明还涉及所述杀细菌组合物或杀细菌剂用于防治烟草青枯病、水稻白叶枯病或大白菜软腐病的应用。相比单剂而言，甲基营养型芽孢杆菌和叶枯唑组合后的增效系数均在130以上，具有良好的增效作用；本发明的杀细菌组合物能良好地延缓单剂的抗药性。
【专利说明】-种含有甲基营养型芽抱杆菌与叶枯睡的杀细菌组合物及 其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及农药领域，特别是杀细菌剂领域，具体地说是含有甲基营养型芽抱杆 菌和叶枯哇的杀细菌组合物及其应用。 技术背景
[0002] 甲基营养型芽抱杆菌炬acillus methylotrophicus)是芽抱杆菌属中的一个种。 革兰氏阳性，葡萄糖、阿拉伯糖、接触酶、脂肪酶、脈酶及氧化酶均呈阳性、好氧，杆状，具备 运动能力。
[0003] 研究发现芽抱杆菌菌株中不存在常见的毒素基因（皿L、BcET、NHE、entFM)、銷磯脂 酶（S地)、磯脂酶（PI-PLC);也不与NHE、皿L抗体反应。认为分离自传统发酵食品芽抱杆菌 菌株在安全性上是有保证的。
[0004] 在我国农业快速发展过程中，病虫危害是制约我国农业持续稳定发展的重要因 素。近年来，我国农作物病害年平均发生面积超过1亿公顷，每年粮食的病虫危害损失约 为3000多万吨，致使我国经济损失高达300多亿。据统计，我国被农药污染的农田达933 万hm2 W上，每年死于农药污染食品的为0. 83万人，每年因农药污染造成的直接经济损失 就高达160多亿元人民币。利用无公害农药防治植物病害，减少化学农药使用量和减轻农 药污染，保证食品安全和发展有机农业已成为本世纪我国发展现代农业和有机农业当务之 急。
[0005] 另一方面，近年来，随着作物品种、种植条件的改变，原有的一些并未引起太多重 视的细菌性病害逐渐成为重要病害。例如，烟草青枯病、水稻白叶枯病、大白菜软腐病等细 困性病吉危吉越来越严重。
[0006] 芽抱杆菌因其安全性和能产生多种抗菌物质及酶的特性而受到生物防治工作者 的偏爱。而且经培养发酵可加工成生物菌剂，开发应用潜力大。目前已有一些优良的芽抱 杆菌菌株应用于生产实践。
[0007] 甲基营养型芽抱杆菌是芽抱杆菌的一种，具有高杀细菌活性、杀菌谱广及具有促 生作用的环境友好型生物菌株。
[000引叶枯哇，又称喔枯哇，主要用来防治植物细菌性病害，对水稻白叶枯病和细菌性条 斑病、巧枯溃瘍病有较好的防治效果。内吸杀细菌剂。具有良好治疗和预防作用。对细菌病 害有较好的防效。抗雨水冲刷，喷药后4小时遇雨对药效无影响。本品属低毒性杀细菌剂。 无致癌、致崎、致突变作用。对鱼类安全。急性口服LD50 ;原药小鼠为3180-6200mg/kg，原 药大鼠急性经口 LD50为3160-8250mg/kg。大鼠W含0. 25mg/kg饲养一年无不良影响。
[0009] 近年来的大田应用中发现，上述两种已知杀细菌剂在应用过程中出现了杀菌活性 不够高，同时个别病害也逐渐出现了抗药性。
【发明内容】
[0010] 本发明旨在提供一种有效防治烟草青枯病、水稻白叶枯病、水稻细菌性条斑病、巧 橘溃瘍病、大白菜软腐病等细菌性病害的杀细菌组合物。该杀细菌组合物相比单剂具有良 好的增效作用，且能延缓单剂的抗药性，同时安全无毒、环境友好。
[0011] 本发明是该样实现的：
[0012] 本发明涉及一种杀细菌组合物，其特征在于，所述组合物含有活性成分甲基营养 型芽抱杆菌和叶枯哇，其中二者的重量比为30:1-1:30。
[0013] 优选地，该杀细菌组合物中甲基营养型芽抱杆菌和叶枯哇的重量比为10:1? 1:10。
[0014] 更优选地，该杀细菌组合物中甲基营养型芽抱杆菌和叶枯哇的重量比为5:1? 1:5。
[0015] 本发明涉及一种杀细菌剂，其特征在于，该杀细菌剂含有1?90重量％的如上所 述的杀细菌组合物，余量为农药上可接受的载体和助剂。
[0016] 优选地，该杀细菌剂含有3?80重量％的如上所述的杀细菌组合物。
[0017] 更优选地，该杀细菌剂含有15?70重量％的如上所述的杀细菌组合物。
[001引所述载体和助剂为分散剂1-10%、润湿剂0. 5-5%、崩解剂1-15%、粘结剂1-4%、 载体加至100%。
[0019] 所述分散剂可W为工业副产物分散剂，如木质素及其衍生物等；阴离子型表面活 性剂的分散剂焼基硫酸盐类，焼基酷聚氧己帰基離甲酵缩合物硫酸盐等；非离子型表面活 性剂的分散剂，如焼基酷聚氧丙帰基離嵌段共聚物，焼基酷聚氧己帰磯酸醋等；水溶性高分 子物质分散剂和无机分散剂；或者是上述一种和几种的混合；
[0020] 所述润湿剂可W为焼基硫酸盐类，焼基酷聚氧己帰基離甲酵缩合物硫酸盐，拉开 粉，S0PA，十二焼基苯賴酸轴，净洗剂，农乳2000系列，润湿渗透剂T，LS94、LWET/F、聚氧己 帰基離类等；或者是上述一种和几种的混合；
[0021] 所述崩解剂可W为硫酸馈、硫酸轴，碳酸轴、碳酸氨轴、碳酸馈、氯化馈等；或者是 上述一种和几种的混合；
[0022] 所述粘结剂可W为淀粉、聚己二醇、化咯焼丽、聚己帰醇、尿素等；或者是上述一种 和几种的混合；
[0023] 所述载体可W为高岭±，活性白±，娃藻±，泥煤，轻质碳酸巧，白碳黑，叶腊石，滑 石粉，方解石等；或者是上述一种和几种的混合。
[0024] 除非另有说明，本发明所涉及的"％ "均为"重量百分比"。
[0025] 本发明之制备方法是：将计量好的甲基营养型芽抱杆菌母药、叶枯哇原药、分散 齐U、润湿剂、崩解剂和载体投入混合机中，混合均匀后粉碎，将粉碎后的物料与粘结剂的水 溶液（2%的水溶液）捏合；捏合后的物料经造粒机造粒；去除大于5mm和小于0. 5mm的颗 粒，烘干即可。不合适的颗粒经重新捏合后再造粒。
[0026] 进一步地，本发明还涉及将上述杀细菌组合物或杀细菌剂用于防治烟草青枯病 (Pseudomonas solanacearum 巧.F. Smith) Smith)、水稻白叶枯病(Xanthomonas oryzae Swing et al. pv. oryzlcola (Fang et al) Swing et al)或大白菜软腐病(Erwinia carotovora subsp. carotovora (Jones) Bergey et al.)的应用。
[0027] 所述甲基营养型芽抱杆菌母药的制备和提取方法是按照中国专利201210579899、 发明名称为"一种甲基营养型芽抱杆菌的生物菌剂及其制备方法和应用"中所记载的方法 来制得的。
[0028] 关于本发明技术方案的效果，具体如下：
[0029] (1)相比单剂而言，甲基营养型芽抱杆菌和叶枯哇组合后的增效系数均在130 W 上，具有良好的增效作用；
[0030] (2)本发明的杀细菌组合物能良好地延缓单剂的抗药性。
【具体实施方式】
[0031] 下面叙述本发明的四个实施例
[0032] 本发明的甲基营养型芽抱杆菌按照中国专利201210579899、发明名称为"一种甲 基营养型芽抱杆菌的生物菌剂及其制备方法和应用"中所记载的方法来制得的。
[0033] 实施例1.制备水分散粒剂杀菌药物（1000公斤）
[0034] 主成分甲基营养型芽抱杆菌为1%，即10公斤。叶枯哇为10%，即10公斤。并含 有下述各种助剂，分散剂T36为5%、即50公斤，分散剂27002%，即20公斤；润湿剂十二焼 基硫酸轴3%，即30公斤；崩解剂硫酸胺3%，即30公斤；粘结剂聚己二醇3%，即30公 斤；载体白炭黑为140公斤，载体高岭±余量为590公斤。
[00巧]配制工艺为；将计量好的甲基营养型芽抱杆菌母药、叶枯哇原药分散剂T36、分散 剂2700、润湿剂十二焼基硫酸轴、崩解剂硫酸馈、载体白炭黑和高岭±投入混合机中，揽拌 均匀，经气流粉碎机粉碎。将粉碎后的物料与粘结剂聚己二醇的水溶液捏合，捏合成膏状后 经造粒机造粒；用筛子将大于5mm和小于0. 5mm的颗粒去除；合适的颗粒经干燥，检测合格 后包装。不合适的颗粒经捏合机重新捏合后再造粒。
[0036] 实施例2.制备水分散粒剂杀菌药物（1000公斤）
[0037] 主成分甲基营养型芽抱杆菌为20%，即200公斤。叶枯哇原药为20%，即200公 斤。并含有下述各种助剂，分散剂MNS9010%、即100公斤；润湿剂LS940. 5%，即5公斤； 崩解剂氯化馈10%，即100公斤；粘结剂尿素4%，即40公斤；载体滑石粉余量为355公 斤。
[003引配制工艺同实施例1
[003引实施例3.巧IJ备可湿性粉剂杀菌药物（1000公斤）
[0040] 主成分甲基营养型芽抱杆菌为12%，即120公斤。叶枯哇为20%，即200公斤。即 并含有下述各种助剂，分散剂NW0 8%、即80公斤；润湿剂4896为5%，即50公斤；载体白 炭黑为15%，即150公斤公斤。高岭±余量为400公斤。
[00川 配制工艺
[0042] 按照配方要求，投入分散剂NN0、MF- 5、高岭±，开动揽拌机，投入甲基营养型芽 抱杆菌母药和叶枯哇原药，白炭黑，最后缓慢加入润湿剂，料投完后在前混合机混合15-30min，开启粉碎机，分机转速38- 45,加料速度180- 250Kg/h，粉碎毕后在后混合机混合 15-30min，包装，即可制成甲基营养型芽抱杆菌和叶枯哇可湿性粉剂。
[0043] 实施例4.制备可湿性粉剂杀菌药物（1000公斤）
[0044] 主成分甲基营养型芽抱杆菌为20%，即200公斤。叶枯哇20%，即200公斤。即 并含有下述各种助剂，分散剂NW0 8%、即80公斤；润湿剂4896为5%，即50公斤；载体白 炭黑为15%，即150公斤公斤。高岭±余量为320公斤。
[0045] 配制工艺同实施例3
[004引生物测定：
[0047]甲基营养型芽抱杆菌与叶枯哇组合对烟草青枯病的毒力测定 [004引 1.试验条件
[0049] 1. 1供试病原菌：
[0050] 烟草青枯病菌Pseudomonas solanacearum化F. Smith) Smith,由西北农林科技大 学植保学院植物病理研究室保存和提供。
[0051] 供试菌种在TTC培养基上培养，温度17-22 °C，相对湿度90%。
[0052] 1. 2供试植物；在灭菌±培育烟苗至4?5叶期。
[005引 2.试验设计
[0054] 2. 1供试药剂：
[0(巧5] 内含100亿/克甲基营养型芽抱杆菌LW-6母液炬acillus methylotrophilus)， 由西北农林科技大学植保学院植物病理研究室保存和提供。
[0056] 叶枯哇（Bismerthlazol)97%原药，由浙江龙湾化工公司提供。
[0057] 2. 2药剂浓度和配比设计及溶液配制：
[0058] 甲基营养型芽抱杆菌溶液；称取0. Olg内含100亿/克甲基营养型芽抱杆菌LW-6 母液，加入含0. 1 % TweenSO乳化剂的无菌水98. 5ml，揽拌均匀，配制成lOOmg/L母液，再用 含0. 1% TweenSO乳化剂的无菌水稀释成10、5、2. 5、1.25、0. 625、0. 3125mg/L浓度备用； [005引叶枯哇溶液：称取0. 01g97 %叶枯哇原药，用0. 2mlDMF溶解，加入含0. 1 % TweenSO乳化剂的无菌水96. 8ml配制成lOOmg/L母液，再用含0. 1 % TweenSO乳化剂的无 菌水稀释成10、5、1、0. 5、0. 1、0. 05mg/L浓度备用；
[0060] 各混配溶液；分别取5、9、10、14、9mll0mg/L甲基营养型芽抱杆菌溶液分别加入到 5、6、4、4、29mll0mg/L叶枯哇溶液中制成lOmg/L甲基营养型芽抱杆菌?叶枯哇1:1、3:2、 5:2、7:2和9:2溶液，再用含0. 1% TweenSO乳化剂的无菌水稀释成100、50、12. 5、6. 25mg/ L5个质量试验浓度，每个质量浓度设4个重复。
[0061] 对照溶液；0. 2mlDMF加95ml含0. 1 % TweenSO乳化剂的无菌水。
[00的]3.测定方法：
[0063] 选取在灭菌±上培育长势好的4?5叶期烟苗，喷雾处理后自然瞭干，2化左右将 幼苗取出接种烟草青枯病，接种量为5ml/株。
[0064] 每处理设3次重复，每重复10株烟苗，处理后移栽至装有灭菌±的苗鉢中，处理放 置于温室28?36C条件下，每天观察烟苗生长情况，3天后空白对照重复发病时调查防治 效果，15天后调查烟草植株发病情况，统计发病率和病情指数，计算防效。
[0065] 4.数据统计分析
[0066] 参照生测标准方法NY/T1156. 6-2006,根据Sun&Johnson(1996)的共毒系数法 (CTC)来评价药剂混配的增效作用，即CTC《80为枯抗作用，80 < CTC < 120为相加作用， CTC> 120为增效作用。
[0067] W病情指数计算出各个处理防效，所有数据均采用SAS6. 12系统软件进行分析， 求出毒力回归方程式、相关系数（r)和ECs。(95%置信度）。
[006引 5.结果与分析：
[0069] 采取5点法取5个代表性的配比，并将该5个配比和标准药剂进行毒力测定。甲 基营养型芽抱杆菌和叶枯哇复配对烟草青枯病的毒力测定结果见表1。由表1可见，甲基营 养型芽抱杆菌与叶枯哇W 1: 1、3: 2、5: 2、7:2和9:2的比例混配对烟草青枯病菌均表现出 增效作用，其ECs。值分别为0. 40、0. 47、0. 51、0. 62和0. 72mg/L，共毒系数分别为138. 18、 135. 95、152. 48、142. 62和134. 55,其中W 5:2的比例混配增效作用最好。
[0070] 表1甲基营养型芽抱杆菌和叶枯哇复配对烟草青枯病的毒力测定结果
[0071]
【权利要求】
1. 一种杀细菌组合物，其特征在于，所述组合物含有活性成分甲基营养型芽孢杆菌和 叶枯唑，其中二者的重量比为30:1-1:30。
2. 根据权利要求1所述的杀细菌组合物，其特征在于，二者的重量比为10:1?1:10。
3. 根据权利要求1所述的杀细菌组合物，其特征在于，二者的重量比为5:1?1:5。
4. 一种杀细菌剂，其特征在于，该杀细菌剂含有1?90重量％权利要求1至3任一所 述的杀细菌组合物，余量为农药上可接受的载体和助剂。
5. 根据权利要求4的杀细菌剂，其特征在于，该杀细菌剂含有3?80重量％的杀细菌 组合物。
6. 根据权利要求4的杀细菌剂，其特征在于，该杀细菌剂含有15?70重量％的杀细菌 组合物。
7. 根据权利要求4至6任一所述的杀细菌剂，其特征在于，所述载体和助剂为分散剂 1-10%、润湿剂0. 5-5%、崩解剂1-15%、粘结剂1-4%、载体加至100%。
8. 根据权利要求1至3任一所述的杀细菌组合物或权利要求4-7任一所述的杀细菌剂 用于防治烟草青枯病、水稻白叶枯病或大白菜软腐病的应用。
【文档编号】A01N63/00GK104397035SQ201410654499
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月17日 优先权日:2014年11月17日
【发明者】唐满仓, 马玉明, 叶龙江, 李林强 申请人:陕西恒田化工有限公司