完全人源抗vegf抗体及其使用方法

专利名称：完全人源抗vegf抗体及其使用方法
完全人源抗VEGF抗体及其使用方法
相关申请本申请要求美国临时申请60/853，260的优先权，该临时申请于2006年10月20
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背景技术：
血管内皮生长因子(VEGF)是一类主要的促血管生成蛋白，其参与内皮细胞激活、 增殖、和生存，特别是参与视网膜增殖性病变和肿瘤发生过程。VEGF属于VEGF-PDGF(血 小板衍生生长因子)超家族，为小糖蛋白二聚体，可结合表达在血管和淋巴内皮细胞上 的受体。目前在VEGF家族中有七种已知配体VEGF-A (VEGF)、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、 VEGF-E(衍生自病毒)、或胎盘生长因子(PIGF)-I和-2。这些VEGF配体通过结合三种已知 VEGF受体(VEGF-R)中一种或多种来实现其作用，每种VEGF受体都具有酪氨酸激酶的活性。 绝大多数的VEGF-Rl (Flt-I)表达在内皮细胞和单核细胞上，可结合VEGF和VEGF-B，介导内 皮和单核细胞的迁移。VEGF-R2 ( S卩，人KDR或鼠Flk-I)主要表达在内皮细胞上，对VEGF (以 及VEGF-C和VEGF-D的特定片段)有选择性，介导VEGF诱导的内皮细胞增殖，生存和迁移， 以及血管通透性。VEGF-R3(Flt-4)主要表达在淋巴内皮细胞上，可与VEGF-C和VEGF-D结 合促进淋巴管生成。VEGF-R1，VEGF-R2，和VEGF-R3各自表达在某些肿瘤细胞上。VEGF与 VEGF受体的结合引发受体二聚化，导致随后的受体激活和信号转导。VEGF与VEGF-R2的结 合可开启某信号转导通路，该通路在促血管生成中起主导作用。这个通路包括受体激活以 及随后产生的细胞内信号传导。在这种情况下的受体激活需要三个基本事件(I)VEGF与 VEGF-R2结合，(II)受体二聚化，以及(III)受体酪氨酸激酶的受体自身磷酸化(以及由此 的激活)。细胞内信使例如磷脂酶C和磷脂酰肌醇-3-激酶可直接结合VEGF-R2的自身磷 酸化形式并被受体酪氨酸激酶磷酸化，这随后引发细胞内的级联信号传导并导致细胞核信 号，该信号最终促使细胞增殖、迁移和生存(抗凋亡)，并提高血管通透性。血管生成异常与多种疾病状态相关，包括癌症(Holash 2002)。VEGF信号通路是 唯一一个被证实的在正常血管生长中和多种疾病相关的病态血管生长中都起作用的信号 传导通路(Erikkson 1999 ；Ferrara 1999 ；Yancopoulos 2000)。VEGF 可促进血管内皮细胞 生长以及增加血管通透性(Ferrara 2004)。以前的研究揭示，在大多数肿瘤种类中VEGF的表达水平都有提高(Berkman 1993 ；Brown 1993 ；Brown 1995 ；Dvorak 1995 ；Mattern 1996)。研究表明患眼部血管增生 性疾病如湿性AMD的病人中VEGF的水平升高。湿性AMD在总的AMD病例中仅占约10%，但 却在因AMD导致的失明中占到近90%。湿性AMD以脉络膜新生血管(CNV)为特征，即在视 网膜的视网膜色素上皮细胞层下面的异常血管生长。VEGF-A被认为在这些血管生成中起主 要作用，这些血管在黄斑下面渗漏并导致视网膜扭曲和视力损伤。已有多个分子被开发用于抑制VEGF与其受体间的相互作用，或抑制VEGF受体的 酪氨酸激酶活性，这些分子已在临床研究的多个阶段。例如，BAY43-9006 (索拉非尼，拜耳公 司)，SUl 1248 (舒尼替尼)，和瓦他拉尼(Vatalanib，诺华公司)都是VEGF-R2激酶抑制剂，已被作为潜在的癌症药物开发。VEGF-TRAP (Regeneron，赛诺非安万特公司)是VEGF-Rl和 VEGF-R2的胞外结构域杂合体，对VEGF有高度的结合亲和力(Holash 2002 ；Dupont 2005)。 VEGF-TRAP目前正在进行治疗实体肿瘤的临床研究。抗体还被广泛开发用作VEGF通路的 抑制剂。例如，IMC-ICll (Imclone)是结合VEGF-R2的契合单克隆抗体(Hunt 2001)。目前 正在进行临床研究，以确定IMC-ICll在治疗恶性肠癌中的疗效。⑶P-791 (Imclone)是一 个聚乙二醇化的人源化Fab，可结合VEGF-R2。IMC-1121B (Imclone)是一个完全人源单克 隆抗体，可结合VEGF-R2，具有较高的亲和力，可阻断VEGF和VEGF-R2间的相互作用(Miao， H. Q. ， et al. 2005. Biochem Biophys Res Commun 345 438-445)。 IMC—18F1(Imclone) ^ 一个完全人源的单克隆抗体，可结合VEGF-Rl，具有较高的亲和力，可阻断VEGF和VEGF-Rl 间的相互作用。2C3 (Peregrine)是一个鼠源抗体，可结合VEGF并可阻断VEGF和VEGF-R2 间的相互作用，但不阻断VEGF-Rl。Ranibizumab (Lucentis ，Genentech)是一个衍生自 贝伐单抗的人源化的Fab，最近被批准用于治疗湿性急性黄斑变性(AMD) (MicheIs 2004 ； Rosenfeld 2005)。最常用的靶向作用于VEGF的生物制剂是人源化的IgGl单克隆抗体贝伐单抗 (a. k. a.，Avastin Genentech ；本发明中也被称为BM-1)。贝伐单抗是通过将鼠源单克 隆抗体A. 4. 6. 1进行人源化开发得到，其含有约93%的人源序列和7%鼠源序列(Presta 1997 ；Ferrara 2004)。贝伐单抗与VEGF的结合亲和力为约为500pM，可抑制VEGF与 VEGF-Rl和VEGF-R2的结合。贝伐单抗在人体内的消除半衰期为17-21天(Ferrara2004)。 贝伐单抗已被批准用于治疗恶性肠癌(Presta 1997 ；Rosenfeld 2005)。研究还显示，贝伐 单抗可能可以用于治疗新生血管性AMD (Michels 2005)。虽然多种分子已被开发用于抑制VEGF通路，但仍然需要更多具有更好结合特性 和治疗性质的分子。本发明提供了可结合VEGF并抑制VEGF通路的完全人源抗体。由于这 些抗体是完全人源的，因此它们可以作为治疗物质使用，且不具有先前开发的非人源抗体、 契合抗体、或人源化抗体所具有的免疫原性副作用。

发明内容
某些实施方式提供了一种抗体，其含有如SEQ ID NO :2所示的重链序列和SEQ IDNO :3所示的轻链序列。某些其他实施方式提供了一种抗体，其含有如SEQ ID N0:4所示 的重链序列和SEQ ID NO :5所示的轻链序列。在某些上述实施方式中，所述抗体含有IgG2 恒定区。在某些上述实施方式中，所述抗体与hVEGF165结合的Kd值为彡2.0nM。在某些实 施方式中，所述抗体结合hVEGF165上的某一抗原表位，该抗原表位与贝伐单抗结合的抗原表 位重叠。在某些实施方式中，所述抗体可阻断hVEGF165与VEGF-Rl和VEGF-R2的结合。某些实施方式提供了在所需对象中抑制血管生成的方法，该方法通过在所述对象 中给药治疗有效剂量的抗体，该抗体含有如SEQ ID NO :2所示的重链序列和SEQ ID NO 3 所示的轻链序列。某些其他实施方式提供了在所需对象中抑制血管生成的方法，该方法通 过在所述对象中给药治疗有效剂量的抗体，该抗体含有如SEQ ID NO :4所示的重链序列和 SEQ IDNO 5所示的轻链序列。某些实施方式提供了在所需对象中治疗与血管生成异常相关的疾病的方法，该方 法包括对所述对象给药治疗有效剂量的抗体，该抗体含有如SEQ ID NO :2所示的重链序列和SEQ ID NO :3所示的轻链序列。某些其他实施方式提供了在所需对象中治疗与血管生成 异常相关的疾病的方法，该方法包括对所述对象给药治疗有效剂量的抗体，该抗体含有如 SEQ IDNO 4所示的重链序列和SEQ ID NO 5所示的轻链序列。某些实施方式提供了在所需对象中治疗与VEGF信号传导相关的炎症性疾病的方 法，该方法包括对所述对象给药治疗有效剂量的抗体，该抗体含有如SEQ ID N0:2所示的 重链序列和SEQ ID NO :3所示的轻链序列。某些其他实施方式提供了在所需对象中治疗 与VEGF信号传导相关的炎症性疾病的方法，该方法包括对所述对象给药治疗有效剂量的 抗体，该抗体含有如SEQ ID NO :4所示的重链序列和SEQ ID NO :5所示的轻链序列。某些实施方式提供了在所需对象中治疗湿性急性视网膜黄斑变性或糖尿病视网 膜病变的方法，该方法包括对所述对象给药治疗有效剂量的抗体，该抗体含有如SEQ ID NO :2所示的重链序列和SEQ ID NO :3所示的轻链序列。某些其他实施方式提供了在所需 对象中治疗湿性急性视网膜黄斑变性或糖尿病视网膜病变的方法，该方法包括对所述对象 给药治疗有效剂量的抗体，该抗体含有如SEQ ID NO :4所示的重链序列和SEQ ID NO :5所 示的轻链序列。某些实施方式提供了在所需对象中治疗与VEGF信号传导增加相关的癌症的方 法，该方法包括对所述对象给药治疗有效剂量的抗体，该抗体含有如SEQ ID NO :2所示的重 链序列和SEQ ID NO :3所示的轻链序列。某些其他实施方式提供了在所需对象中治疗与 VEGF信号传导增加相关的癌症的方法，该方法包括对所述对象给药治疗有效剂量的抗体， 该抗体含有如SEQ ID NO 4所示的重链序列和SEQ ID NO 5所示的轻链序列。某些实施方式提供了一种成套物件(kit)，其含有一种抗体，该抗体含有如SEQ IDNO :2所示的重链序列和SEQ ID NO :3所示的轻链序列。其他实施方式提供了一种成套 物件，其含有一种抗体，该抗体含有如SEQ ID NO :4所示的重链序列和SEQ ID NO :5所示的 轻链序列。某些实施方式提供了多核苷酸，该多核苷酸编码如SEQ ID NO 2, SEQ ID NO :3， SEQID N0:4，和/或SEQ ID NO :5所示的氨基酸序列。某些其他实施方式提供了载体，该载 体含有这些多核苷酸，某些其他实施方式提供了含有这些载体的宿主细胞。


图1 :XPA. 10. 064和XPA. 10. 072的重链可变区(包括HCDR)和轻链可变区(包括 LCDR)。图 2 :XPA. 10. 064 IgG2 与人 hVEGF165 结合的 Biacore 分析。图 3 :XPA. 10. 072 IgG2 与人 hVEGF165 结合的 Biacore 分析。图4 贝伐单抗与人hVEGF165结合的Biacore分析。图 5 贝伐单抗(BMl)、XPA. 10. 064 和 XPA. 10. 072 对人 hVEGF165 与 VEGF-Rl 结合 的抑制作用。图 6 贝伐单抗(BMl)、XPA. 10. 064 和 XPA. 10. 072 对人 hVEGF165 与 VEGF-R2 结合 的抑制作用。图 7 贝伐单抗(BMl)、XPA. 10. 064 (064)和 XPA. 10. 072 (072)结合 hVEGF165 抗原 表位的分析。
图8 =XPA. 10. 064和G153-694的共定位。A列为XPA. 10. 064的染色结果。B列为 G153-694的染色结果。C列为核染料的染色结果。D列为合并后的图像，强度高的(白色) 表示共定位。图9 =XPA. 10. 072和G153-694的共定位。A列为XPA. 10. 072的染色结果。B列为 G153-694的染色结果。C列为核染料的染色结果。D列为合并后的图像，强度高的(白色) 表示共定位。图 10 :XPA. 10. 064 IgG2 (A)和 XPA. 10. 072 IgG2 (B)对 HUVEC 的生长抑制。图11 对 HUVEC 用 hVEGF165 进行剂量滴定(dose titration)后，VEGF-R2 的磷酸 化水平升高。图12 对HUVEC用hVEGF165加贝伐单抗进行剂量滴定(dose titration)后， VEGF-R2的磷酸化水平降低。图 13 :XPA. 10. 064 (064)和 XPA. 10. 072 (072) IgG2 抑制 hVEGF165 诱导的 VEGF-R2
磷酸化。图14 基底胶栓(Matrigel Plugs)的可视计分。由于PH07-VAL-021血红蛋白试 验未获得胶栓实验的发现，因此开发了可视计分。图15 基底胶栓实验显示在多个剂量的贝伐单抗(BM-I)、XPA. 10. 064 (064)，和 XPA. 10. 072(072)存在下，血管生成的抑制。图16:基底胶栓实验测定的血管生成抑制。数值为两个不知情的打分员 (blind scorers)给出的结果的平均值。(A)无细胞；⑶DU145加α KLH ； (C)贝伐单抗 (0. lmg/kg) ； (D)贝伐单抗(lmg/kg) ； (E)贝伐单抗(5mg/kg) ； (F)XPA. 10. 064(0. Img/ kg) ； (G) XPA. 10. 064 (lmg/kg) ； (H) XPA. 10. 064 (5mg/kg) ； (I)XPA. 10. 072(0. lmg/kg) ； (J) XPA. 10. 072 (lmg/kg) (K)XPA. 10. 072 (5mg/kg)。图17 =XPA. 10. 064和XPA. 10. 072在体内对A673肿瘤生长的抑制。(1)只有溶 媒；(2)0. 5mg/kg 的 XPA. 10. 064 IgG2 ； (3) 5mg/kg 的 XPA. 10. 064 IgG2 ； (4)0. 5mg/kg 的 XPA. 10. 072 IgG2 ； (5) 5mg/kg 的 XPA. 10. 072 IgG2 ； (6) 5mg/kg 的 CH0. KLH IgG2 ； (7) 0. 5mg/ kg的贝伐单抗；⑶5mg/kg的贝伐单抗(第8组)。
具体说明书本发明的以下说明仅旨在描述本发明的多种实施方式。同样的，所讨论的具体改 进不应被理解为对本发明范围的限制。本领域熟练技术人员可以很容易地知道，在不跳出 本发明范围的情况下可以做出多种等同物、改变和修改，应理解这样的等同实施方式是包 括在本发明中的。
缩略语本发明中使用了如下的缩略语:ADCC，抗体-依赖的细胞介导的细胞毒反应；AMD， 年龄相关性黄斑变性；CDC，补体依赖性的细胞毒反应；CNV，脉络新生血管；C0PD，慢性阻塞 性肺疾病；HUVEC，人脐静脉内皮细胞；hVEGF，人VEGF ；mVEGF,鼠VEGF ；PD,药效动力学；PK， 药物代谢动力学；RA，类风湿性关节炎；RIA，放射性免疫共沉淀；VEGF，血管内皮生长因子； VEGF-R，血管内皮生长因子受体；VHL，视网膜及中枢神经血管瘤病(von Hippel/Lindau)；X-反应性，交叉反应性。 定义本发明中的“抗体”是指任意免疫球蛋白，包括可结合某特定抗原的单克隆抗体、 多克隆抗体、或多特异性抗体或双特异性抗体。一个完整的抗体包含两条重链和两条轻链。 每条重链由一可变区和第一、第二、以及第三恒定区组成，每条轻链由一可变区和一恒定区 组成。抗体呈“Y”型，“Y”型结构的颈部由两条重链的第二和第三恒定区组成，其通过二硫 键结合。“Y”型结构的每条臂包括一条重链的可变区和第一恒定区，其与一条轻链的可变区 和恒定区相结合。轻链和重链的可变区决定抗原的结合。两条链中的可变区通常含有三个 高变环状结构，称为互补决定区(⑶R)(轻链(L)的⑶R包含IXDR1、IXDR2和IXDR3，重链 (H)的 CDR 包含 HCDR1、HCDR2、HCDR3)。三个 CDR 介于被称为构架区(FrameworkRegions， FR)的侧翼序列(franking stretches)之间，构架区比⑶R更加高度保守并形成一个支架 支撑超变环。重链和轻链的恒定区与抗原结合无关，但具有多种效应功能。根据其重链恒 定区的氨基酸序列可将抗体分类。抗体的主要种类有IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，这些种类 中的一些类又被分为亚类，如IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl或IgA2等。本发明中的“抗原结合片段”进一步指免疫球蛋白片段或抗体片段(即，免疫球蛋 白分子的至少一段具有免疫活性的部分)，例如Fab、Fab'、F(ab' )2、Fv片段、单链抗体分 子、由含有一个或多个CDR的免疫球蛋白分子的任何片段形成的多特异性抗体。另外，本发 明中的抗原结合片段还可含有来自某特定人源免疫球蛋白的一个或多个CDR，其被移接至 来自一个或多个不同人源免疫球蛋白的框架区。抗原结合片段可结合母免疫球蛋白或母抗 体结合的靶位。抗体的“Fab”片段是指由一条轻链(包括可变区和恒定区)和一条重链的可变区 和第一恒定区经二硫键结合起来的那部分抗体分子。"Fab' ”片段是指包含了部分铰链区的Fab片段。"F(ab' )2”是指 Fab'的二聚体。抗体的“Fe”是指由一条重链的第二、第三恒定区经二硫键与另一条重链的第二、 第三恒定区结合组成的那部分抗体。抗体的Fc段负责多种不同的效应功能如ADCC，和CDC， 但不参与抗原的结合。抗体的“Fv”是指含有完整抗原结合位点的最小抗体片段。Fv片段由单条轻链的 可变区和单条重链的可变区结合组成。“单链Fv抗体”或“scFv”是指由轻链可变区与重链可变区直接相连或通过一个肽 链连接而成的工程抗体(Houston 1988)。“单链抗体Fv-Fc抗体”或“scFv-Fc”是指由连接到某抗体Fc段的scFv组成的工 程抗体。本发明中的“抗原表位”是指抗原分子中与抗体结合的那部分氨基酸或原子基团。 在本发明中，如果两种抗体表现出对抗原的竞争性结合，则这两种抗体在该抗原上结合相 同的抗原表位。例如，如果本发明中公开的某抗体或其抗原结合片段与贝伐单抗竞争结合 VEGF，则该抗体被认为是与贝伐单抗结合相同的抗原表位。本发明中的“VEGF”或“VEGF配体”是指目前已知的七种VEGF配体VEGF_A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E(衍生自病毒)、或胎盘生长因子(PIGF)-I 或-2。就 VEGF-A 而言，目前已知有四种剪接变体，每种都显示出独特的生物学功能。含165个氨基酸的异构 体(VEGF165，SEQ ID NO 1)可同时以肝素结合的形式以及可溶的形式存在。含121个氨基 酸的异构体(VEGF121)缺失人VEGF165中对应于在第115位残基和第159位残基间的区域的 片段，且只以可溶性形式存在。较长的189和206个氨基酸的异构体(分别对应于VEGF189 和VEGF2J保留了与肝素结合的能力。本发明中提供的抗体对VEGF165表现出高结合亲和 力，但在某些实施方式中，可能对非人VEGF蛋白或其他VEGF异构体产生交叉作用或表现出 低水平的结合亲和力。本发明中对某种状态的“治疗”或“疗法”可指预防或减轻该状态，减缓该状态发生 或发展的速度，减少发展为该状态的风险，预防或延迟与该状态相关的症状发展，减少或终 止与该状态相关的症状，产生该状态的完全或部分的逆转，或以上的组合。对于肿瘤来说， “治疗”或“疗法”可以指根除某肿瘤的部分或全部，抑制或减缓肿瘤的生长和转移，预防或 减缓肿瘤的发展，或以上的某些组合。本发明中的“特异性结合”是指，两分子间的非随机结合反应，如抗体与导致该抗 体产生的配体间的反应。在本发明中，特异性结合第一种配体的抗体可表现出与第二种配 体的交叉反应性或低水平的结合亲和力。在某些实施方式中，一种可特异性结合某配体的 抗体与该配体的结合亲和力(Kd)彡10_7M(如^ΧΙΟΛ ,ΙΟΛυΧΙ ^Μ,Κ^Μ,ΙΟ,Μ)。本 发明中的Kd是指解离速度与结合速度的比值(k。ff/k。n)，可通过本领域公知的方法测定。在 另外的实施方式中，一种可特异性结合第一种配体的抗体，其与第一种配体的结合亲和力 可高于或低于与第二种配体结合的亲和力至少10倍(如彡15倍，彡20倍，彡50倍，彡IO2 倍，> IO3倍，> IO4倍)。在另外的实施方式中，一种可特异性结合某配体的抗体其结合亲 和力(Kd)为《1(ΤΜ，但对第二种配体可几乎不表现出结合亲和力。本发明中的“被分离”是指“经人工”由自然状态改变。如果自然界中出现某种“被 分离”的组合物或物质，那么其已经被改变或脱离其原始环境，或二者均有发生。例如，某一 活体动物体内天然存在的多核苷酸或多肽是未“被分离”的，但如果这些多核苷酸或多肽与 之在天然状态下共存的物质足够分离并以足够纯的状态存在，则可以认为是“被分离”。本 发明中的“被分离”不排除与其他化合物或物质混合的人造或合成混合物，也不排除不影响 活性的杂质的存在。本发明中“载体”是指一种运载工具，可将编码某蛋白的多核苷酸操作性地插入其 中从而使该蛋白获得表达。载体可用于转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传元件在 宿主细胞内得以表达。举例来说，载体包括质粒、噬菌粒、柯斯质粒、人工染色体如酵母人工 染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或Pl衍生的人工染色体(PAC)、细菌噬菌体如λ噬 菌体或Μ13噬菌体，以及动物病毒等。用作载体的动物病毒种类有逆转录病毒(包括慢病 毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳 头多瘤空泡病毒(如SV40)。载体可含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始 序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。载体还可包 括协助其进入细胞的成分，包括但不限于，病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳。本发明中“宿主细胞”是指导入载体的细胞。宿主细胞可选自多种细胞种类，包括 例如细菌细胞如大肠杆菌或枯草菌，真菌细胞如酵母细胞或曲霉菌细胞，昆虫细胞如果蝇S2细胞或夜蛾Sf9细胞，或者动物细胞如成纤维细胞，CHO细胞，COS细胞，NSO细胞，HeLa 细胞，BHK细胞，HEK 293细胞，或人细胞。本发明中的“与血管生成异常相关的疾病”是指，任何由于血管生长增加，特别是 与VEGF信号通路相关联的血管生长增加，而导致、加剧、或以其他形式相关联的状态。这些 状态包括由依赖于新生血管才能生长的肿瘤，眼部疾病例如湿性AMD，以及炎症状态例如类 风湿性关节炎、牛皮癣、硬皮病、慢性阻塞性肺部疾病，或哮喘。本发明中的“阻断结合”或“竞争性结合”的能力是指抗体将两个分子间结合的相 互作用抑制到50 %或更高的能力。在某些实施方式中，这种抑制作用可以大于60 %，在某 些实施方式中大于70%，在某些实施方式中大于80%，在某些实施方式中大于90%。在某 些实施方式中，被抑制的结合相互作用可以是贝伐单抗与hVEGF165的结合。在某些实施方 式中，被抑制的结合相互作用可以是hVEGF165与VEGF-Rl和/或VEGF-R2结合。本发明中的“治疗有效剂量”是指，某种药物有效治疗某种疾病或状态的剂量或浓 度。例如，对于本发明中公开的抗体在治疗癌症上的用途来说，抗体的治疗有效剂量是指在 该剂量或浓度下，该抗体可以根除全部或部分肿瘤、抑制或减缓肿瘤生长及转移、预防或延 缓肿瘤的发展，或以上的某些组合。又例如，治疗剂量可从约0. 01mg/kg到约100mg/kg，如， 在约0. 01mg/kg和约50mg/kg之间(如，约0. lmg/kg, lmg/kg,或10mg/kg)。在某些实施方 式中，初始治疗剂量不超过约100mg/kg或50mg/kg，后续治疗剂量为至少0. 01mg/kgo某给 药剂量可以是每天给药、两周给药、每周给药、或每月给药。
完全人源VEGF抗体完全人源抗体与鼠源抗体、契合抗体、或人源化抗体相比，在安全性和疗效上都有 多个潜在优势。第一，完全人源抗体不含非人源残基，从而使其在给药后不易产生宿主免疫 反应。第二，与其他抗体种类相比，完全人源抗体通常表现出较低的清除率。降低的清除率 可以允许较低的剂量和给药频率。本发明中提供了两种完全人源抗体，XPA. 10. 064和XPA. 10. 072，其可特异性结 合hVEGF165。XPA. 10. 064和XPA. 10. 072通过用hVEGF165筛选噬菌体展示scFv文库得 到。XPA. 10. 072的重链和轻链可变区序列分别在SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3中列出， XPA. 10. 064的重链和轻链可变区序列分别在SEQ ID NO :4和SEQ ID NO :5中列出。在 SEQ IDNO :2中列出的XPA. 10. 072重链可变区含有CDR，在第31-35位氨基酸残基(CDRH1， SEQID NO 6)，第50-66位氨基酸残基(CDRH2，SEQ ID NO 7)，以及在第99-108位氨基酸残 基(CDRH3，SEQ ID NO 8)。在SEQ ID NO 3中列出的XPA. 10. 072轻链可变区含有CDR，在 第 26-35 位氨基酸残基(072CDRL1，SEQ ID NO :9)，第 51-57 位氨基酸残基(072CDRL2，SEQ ID NO 10)，以及在第 90-100 位氨基酸残基(072CDRL3, SEQ ID N0:11)。在 SEQ ID N0:4 中 列出的XPA. 10. 064重链可变区含有CDR，在第31-35位氨基酸残基(CNRH1, SEQ IDNO 6)， 第50-66位氨基酸残基(CDRH2，SEQ ID NO 7)，以及在第90-108位氨基酸残基(CDRH3，SEQ ID NO 8)。在SEQ ID NO 5中列出的XPA. 10. 064轻链可变区含有⑶R，在第26-35位氨基 酸残基(064CDRL1,SEQ ID NO 12)，第 51-57 位氨基酸残基(064CDRL2, SEQ ID NO :13)，以 及在第 90-100 位氨基酸残基(064CDRL3, SEQ ID NO 14)。鉴于XPA. 10. 064 和 XPA. 10. 072 这两禾中 scFv 在 ELISA 实验中可结合 hVEGF165，具有高亲和力，而且可抑制HVEGF165与VEGF-Rl和VEGF-R2的结合，因此选择将这些抗体 转换成scFv-Fc和IgG2，以用于其它功能性研究。Biacore分析结果显示，XPA. 10. 064和 XPA. 10. 072的IgG2对hVEGF165表现出了相似的高结合亲和力，但是对mVEGF165只表现出微 弱的结合力。两种抗体都可结合hVEGF121。XPA. 10. 064和XPA. 10. 072的IgG2对hVEGF165 的结合亲和力分别为1. 5nM和1. 7nM，两种抗体的解离速率约为贝伐单抗的两倍。Biacore 分析结果还显示，XPA. 10. 064 和 XPA. 10. 072 的 IgG2 对 hVEGF165 与 VEGF-Rl 和 VEGF-R2 的 结合抑制作用比贝伐单抗更强。XPA. 10. 064和XPA. 10. 072抑制VEGF信号传导的作用通过 ELISA实验得到证明，两种抗体都可抑制hVEGF165诱导的VEGF-R2的磷酸化。抗原表位分析显示，XPA. 10. 064和XPA. 10. 072可结合hVEGF165上的线性抗原表 位，且这些抗原表位与贝伐单抗结合的抗原表位至少在某种程度上重叠。免疫组化分析显 示，与贝伐单抗不同，XPA. 10. 064和XPA. 10. 072都表现出大范围的组织交叉反应性。两种 抗体都可抑制HUVEC的增殖，都可在体内抑制血管生成和肿瘤生长。表1列出了 XPA. 10. 064 和XPA. 10. 072的性质总结。因此，在某些实施方式中提供了分别含有如SEQ ID NO 4和SEQ ID NO 5所列的 XPA. 10. 064轻链和重链的抗体。在其他实施方式中，提供了分别含有如SEQ ID NO :2和 SEQID NO 3所列的XPA. 10. 072轻链和重链的抗体。鉴于本发明中提供的抗体对hVEGF165 和hVEGFm有高亲和力，以及可阻断VEGF与VEGF-Rl和VEGF-R2的结合及阻断VEGF-诱导 的受体磷酸化，这些抗体可用于抑制VEGF信号传导及阻断VEGF通路。在这个基础上，所述 抗体可用于治疗与VEGF表达相关的多种状态。本发明中提供的抗体已被发现可抑制HUVEC增殖以及在体外抑制血管生成。因 此，所述抗体可用于治疗与血管生成增加相关的多种状态。例如，所述抗体可用于治疗癌 症，通过抑制肿瘤位点的血管增殖从而抑制肿瘤生长。相同地，所述抗体可用于治疗癌症， 通过破坏肿瘤位点的血管，从而导致肿瘤坏死。本发明中公开的抗体在治疗癌症方面的疗 效在体内已经得到证实。某些实施方式提供的抗体可抑制血管生成和/或肿瘤生长，其抑制程度与贝伐单 抗相近或更强。在体内A673肿瘤生长抑制实验中，XPA. 10. 064和XPA. 10. 072在所有的测 试剂量中都抑制了 A673肿瘤的生长，抑制程度与贝伐单抗相近。某些实施方式公开的抗 体在以低于贝伐单抗的剂量或浓度给药时也抑制了血管生成和/或肿瘤生长，抑制程度与 贝伐单抗相同或更高。本发明中提供的抗体与贝伐单抗相比，可表现出相似或更佳的药代 动力学性质。例如，所述抗体与贝伐单抗相比可表现出更长的循环半衰期或更低的免疫原 性。在某些实施方式中，所述抗体与贝伐单抗相比表现出相似或更佳的药代动力学性质，但 所述抗体的给药间隔可长于贝伐单抗，且不具有贝伐单抗在给药间隔较长时导致的负面作 用。本发明中公开的抗体可用于治疗任何与血管生成异常相关的状态，所述血管生成 异常至少部分被VEGF通路控制。这些状态，通常与VEGF表达水平升高相关，包括与血管生 成增加相关的眼部疾病，如湿性AMD或增殖性视网膜病变如糖尿病性视网膜病变，糖尿病 肾病和其他糖尿病血管增生疾病，囊性纤维化病以及多种肿瘤(Amoroso 1997 ；McColley 2000 ；Khamaisi 2003)。可用本发明中公开的抗体治疗的肿瘤种类包括但不限于恶性肿瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤、白血病、或淋巴的恶性肿瘤。更具体地，可用本发明中公开的抗体治疗的肿瘤种 类包括但不限于鳞状细胞癌例如上皮鳞状细胞癌，肺癌包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌， 腹膜癌、肝细胞癌、胃癌例如胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞脑瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱 癌、肝肿瘤(heptoma)、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、直肠 癌、肠癌、外阴癌、甲状腺癌、肝细胞癌、肛门癌、阴茎癌、头颈癌、以及儿童癌如小儿肉瘤。此 外，肿瘤可以是恶性的(如，癌症)或良性的(如增生、囊肿、拟孢囊、错构瘤和良性肿瘤)。可用本发明中公开的抗体治疗的肿瘤种类也可包括与某特定生物标记相关的癌 症。例如，生物标记包括，但不限于，视网膜及中枢神经血管瘤病(von Hippel/Lindau,VHL) 肿瘤抑制基因中的突变和/或缺氧诱导因子1 α (ΗΙΡ-1 α )的过量表达。在某些实施方式 中，所述抗体可用于治疗在VHL肿瘤抑制基因中存在突变的癌症。VHL基因中的突变会导致 缺氧诱导转录因子Ia和2α组成性稳定，从而结合VEGF基因的增强子元件并刺激血管生 成(HarridOOO)。可用本发明中公开的抗体进行治疗的VHL突变的肿瘤种类包括，例如，中 枢神经系统血管母细胞瘤、视网膜血管母细胞瘤、内淋巴囊肿瘤，透明细胞性肾细胞癌和/ 或肾囊肿、嗜铬细胞瘤、胰腺囊肿、神经内分泌瘤、附睾和阔韧带囊腺瘤。首先根据是否存在 VHL基因突变对受试对象通过已知方法进行选择或筛选，筛选方法例如使用突变特异性的 巢式逆转录聚合酶链式反应或巢式单链构象多态性分析的分子检测方法(Ashida et al.， J.Urol. 169:20898-93(2003))。再挑选出识别的对象，并用本发明中的抗体进行治疗。在 其他实施方式中，所述抗体可用于在对象中治疗有ΗΙΡ-Ια过量表达的癌症。ΗΙΡ-Ια过 量表达可通过对组织(如，脑组织、乳房组织、宫颈组织、食管组织、口咽组织、卵巢组织和 前列腺组织)进行活组织检查的方法检查。再对筛选出的对象用所述抗体治疗或者用所 述抗体与HIP-I α抑制剂联用治疗，HIP-I α抑制剂例如2_甲氧雌二醇、4_0_甲基三白草 酉享(4-0-methylsarcerneol)、双木月旨素 A (manassantinA)、双木月旨素 Bl (manassantin Bi)、 NSC-134754、NSC-643735、拓扑替康、50166336、？乂-478、1 115777、西妥昔单抗、103051 、以及 非甾体抗炎药(见 Kimbro&Simons，Endocrine-Related Cancer, 13 739-749 (2006)) 其他可用本发明中描述的抗体治疗的状态包括炎症性状态如类风湿性关节炎、牛 皮癣、硬皮病、慢性阻塞性肺疾病，以及哮喘。某些实施方式提供的抗体可用于治疗某种已 经对贝伐单抗疗法产生耐药性的状态。本发明中提供的抗体可用于多种非治疗用途。在某些实施方式中，所述抗体可作 为亲和纯化剂用于纯化hVEGF165，其他VEGF异构体，或其片段。在这些实施方式中，可通过 本领域已知方法将所述抗体固定在某固相上，如树脂或滤纸上。所述抗体也可以用于从溶 液中沉淀hVEGF165，其他VEGF异构体，或其片段。在其他非治疗用途的实施方式中，所述 抗体可应用于多种体外或体内的诊断或检测中。在某些这样的实施方式中，所述抗体可以 缀合到某可检测的标记上。在某些这样的实施方式中，所述抗体可以不缀合到某可检测的 标记上，但可通过可结合所述抗体的标记抗体来检测。某些实施方式中公开的抗体可用于 检测hVEGF165的表达。在某些这样的实施方式中，所述抗体可用于诊断与hVEGF165表达升 高相关的状态。例如，所述抗体可与来自某对象的生物样本接触，从而诊断在该对象中与 hVEGF165表达升高相关的状态。同样地，所述抗体可直接给药于所述对象，利用本领域中已 知方法检测所述抗体与hVEGF165的结合。突变的抗原表位结合研究表明，本发明中公开的抗体结合VEGF上的线性抗原表位，该抗原表位与贝伐单抗识别的抗原表位至少部分重叠。因此，在某些实施方式中，本发 明中公开的抗体可结合含有hVEGF165第79-94位氨基酸残基(SEQ ID NO=D的抗原表位， 或由hVEGF165第79-94位氨基酸残基(SEQ ID NO :1)组成的抗原表位。同样地，所述抗体 可结合与SEQ ID NO :1的第79-94位氨基酸残基所对应的序列完全或部分重叠的抗原表 位。基于抗原表位的重叠，某些实施方式中公开的抗体可竞争性地抑制贝伐单抗与hVEGF165 的结合。本发明中提供的抗体在优选的情况下在人体中的清除半衰期(T1/2)可与贝伐单 抗相似或更高，贝伐单抗的半衰期为17-21天。清除半衰期，指给药抗体的血浆浓度降至低 一半时所需的时间，可通过本领域中的已知方法计算。某些实施方式中公开的抗体的清除 半衰期可以是至少17天。在某些其他实施方式中，可以是17-21天，在某些这样的实施方 式中可以是大于21天。本发明中公开的抗原结合片段可含有全长抗体的某一片段或某几片段，例如， Fab.Fab'、F(ab' )2、Fv、或scFv片段。这些片段可由全长抗体经本领域已知的方法制得， 例如用酶进行蛋白水解剪切，如用木瓜蛋白酶制得Fab片段或用胃蛋白酶制得F (ab ‘ ) 2片 段。某些实施方式中公开的抗体可含有来自SEQ ID NOs 2-5的一种或多种⑶R，其被移接 至一种或多种人源框架区。本领域技术人员可知，本发明中提供的抗体可与多种缀合物偶联或关联或联 用(参见，例如， “Conjugate Vaccines “，Contributions to Microbiology and Immunology, J. M. Cruse andR. E. Lewis, Jr. (eds· )，Carger Press，New York，(1989))。这 些缀合物与所述抗体的连接可通过共价键、亲和结合、夹入(intercalation)、协同结合、复 合、关联、混合、或添加等，以及其他方法。某些实施方式中，所述的抗体可通过工程化使其 含有抗原表位结合部位以外的特定位点，这些位点可被用于结合一种或多种缀合物。例如， 这种位点可包括一种或多种反应性氨基酸残基，例如半胱氨酸或组氨酸残基，以促使其与 某缀合物形成共价连接。在某些实施方式中，所述抗体可间接连接于某缀合物，或通过另一 个缀合物连接。例如，所述抗体可与生物素缀合，然后间接缀合至另一种亲和素缀合的缀合 物。在某些实施方式中，与公开的抗体相连或联合使用的缀合物可包含一种或多种物 质，这些物质旨在改变所述抗体的一种或多种药物代谢性质(PK)，例如聚乙二醇(PEG)可 增加所述抗体的半衰期或降低其免疫源性(见，例如，Katre 1990)。在某些实施方式中，缀合物可含有一种或多种细胞因子，其在本发明中指任何在 细胞上作为细胞间调节因子的蛋白。细胞因子的实例包括但不限于淋巴细胞因子、单核因 子、人生长激素、N-甲硫氨酰基人生长激素、牛生长激素、甲状旁腺激素、甲状腺素、胰岛素、 胰岛素原、耻骨松弛激素、耻骨松弛激素原、卵泡刺激素(FSH)、促甲状腺素(TSH)、黄体生 成素(LH)、肝生长因子、纤维原生长因子、泌乳刺激素、胎盘催乳激素、肿瘤坏死因子α和 β、缪勒(氏)管抑制物质、小鼠促性腺激素相关肽、抑制素、活化素、整联蛋白、促血小板生 成素(TPO)、神经生长因子如NGF-β、血小板生长因子、转化生长因子如TGF-a和TGF-β、 胰岛素样生长因子I和II、促红细胞生成素(EPO)、成骨因子、干扰素如干扰素- α、-β、 和-Y ；集落刺激因子如巨噬细胞-CSF、粒细胞巨噬细胞CSF、和粒细胞-CSF、白介素如 IL-U IL-I a、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL—10、IL-11、以及 IL-12、肿瘤坏死因子如TNF-ci和TNF-β，以及其他多肽因子。本发明中的抗体及其抗原结合物 可以与前述的任意细胞因子联合应用和/或给药。 在某些实施方式中，与所述的抗体结合或联用的缀合物可含有一种或多种化疗 药物，本发明中所述的化疗药物是指任何可用于治疗癌症的物质。化疗药物实例包括，但 不限于，替莫唑胺、特异性结合IGFl受体的抗体、洛那法尼(Ionafarnib)、骨化三醇、坦西 莫司、伊立替康、喜树碱、阿霉素、亚德里亚霉素，毒素类例如蓖麻毒素、白喉毒素或其他细 菌、真菌、植物或动物来源的毒素，凝结剂、烷化剂例如噻替派和环磷酰胺(CYTOXAN )、烷 基磺酸盐类例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡，氮丙啶类例如苯佐替派(benzodopa)、卡波 醌、美妥替哌(meturedopa)、乌瑞替派(uredopa)，乙撑亚胺类和甲基蜜胺类如六甲蜜胺、 曲他胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基三聚氰胺，氮芥类例如苯丁酸 氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、盐 酸氮芥氧盐酸盐(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑、新恩比兴、苯芥胆甾 醇、泼尼莫司汀、曲磷胺和尿嘧啶氮芥，亚硝基脲类如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫 司汀、尼莫司汀、雷莫司汀，抗生素类如阿克拉霉素、放线菌素、氨茴霉素(authramycin)、 重氮丝氨酸、博来霉素(bleomycins)、放线菌素C、卡奇霉素、卡拉星(carabicin)、卡波霉 素(carnomycin)、嗜癌霉素、色霉素、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧化-L 正亮氨酸、阿霉素、表阿霉素、依索比星、依达比星、麻西罗霉素(marcellomycin)，丝裂霉 素、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素(peplomycin)、紫菜霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉 素、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素、链脲佐菌素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他汀、佐 柔比星、抗代谢剂如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)，叶酸类似物如二甲叶酸、甲氨蝶呤、 蝶罗呤、三甲曲沙、嘌呤类似物如氟达拉滨，6-巯基嘌呤，硫咪巯鸟嘌呤(thiamiprine)， 硫鸟嘌呤，嘧啶类似物如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿嘧啶、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧 尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、5-FU、雄激素类例如卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环 硫雄醇、美雄烷、睾内酪，抗肾上腺类例如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦，叶酸补充剂例如亚 叶酸、醋葡醛内酯、醛磷酰胺甙、氨基乙酰丙酸、安吖啶、bestrabucil、比生群、依达曲沙 (edatraxate)、地磷酰胺(defofamine)、秋水仙胺、地吖醌、依氟鸟氨酸(elformithine)、 依利醋铵、依托格鲁、硝酸镓、羟基脲、香菇多糖、氯尼达明、米托胍腙、米托蒽醌、莫哌达醇、 硝氨吖啶(nitracrine)、喷司他丁、蛋氨氮芥(phenamet)、吡柔比星、鬼臼毒素、2-乙基胼 (2-ethylhydrazide)、甲苄胼、PSK 、雷佐生、西佐喃、锗螺胺、细交链孢菌酮酸、三亚胺醌、 三(2-氯乙基)胺、氨基甲酸乙酯、长春地辛、达卡巴嗪、甘露醇氮芥、二溴甘露醇、二溴卫 矛醇、哌泊溴烷、加西托星(gacytosine)、阿糖胞苷(“Ara-C")、环磷酰胺、噻替派、紫 杉醇类例如紫杉醇(泰素 ，百时美施贵宝公司肿瘤部，普林斯顿，新泽西)以及多西他塞 (泰素帝 TAX0TERE , Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France)，阿博利斯(ABRAXANE)(结合 白蛋白的粒径为约130nm的紫杉醇注射用混悬剂)，苯丁酸氮芥，吉西他滨，6-硫鸟嘌呤， 巯嘌呤，甲氨蝶呤，钼类类似物如顺钼或卡钼、赛特钼(satraplatin)、奥沙利钼、长春碱， 钼，依托泊苷(VP-16)，异环磷酰胺，丝裂霉素C，米托蒽醌，长春新碱，长春瑞宾，诺维本， 米托蒽醌，替尼泊苷，柔红霉素，氨基蝶呤，希罗达，伊班瞵酸钠，CPT-11，端粒酶抑制剂RFS 2000，二氟甲基鸟氨酸(DMFO)，维甲酸，埃斯培拉霉素(esperamicins)、卡培他滨、吉西他 滨(gemcitabine)，以及药用可接受的盐类、酸类、和/或以上任一的衍生物。化疗药物也可包括抗激素药物，其作用于调控或抑制激素在肿瘤上的作用，例如抗雌激素类药物包括他 莫西芬、雷洛西芬、抑制4(5)_咪唑类的芳香化酶，4-羟基他莫西芬，曲沃昔芬，雷洛昔芬， LY117018,奥诺前列素，托瑞米芬(法乐通)，以及抗雄激素类包括氟他胺，尼鲁米特，比卡 鲁胺，亮丙瑞林，戈舍瑞林。本发明提供的抗体和抗原结合片段可与任一前述化疗药物联合 使用和/或给药。在某些实施方式中，与公开的抗体相连的缀合物可含有一种或多种可检测的标 记。所述标记包括，但不限于，放射性同位素如123I、124I、125I、mI、35S、3H、mIn、112In、14C、64CU、 67CU、86Y、88Y、9°Y、177LU、211At、186Re、188Re、153Sm、212Bi、和 32P、其他镧系元素、化学发光标记物、 荧光标记物例如荧光素、罗丹明、丹黄酰(dansyl)、藻红素、或得克萨斯红(Texas Red), 以及酶_底物标记物例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、或β -D-半乳糖苷酶。为治疗与高VEGF表达水平和/或血管生成增加相关的疾病，本发明中的抗体可以 在某有效剂量下与药用可接受的媒介进行制剂。这种制剂可以包括生理可耐受的液体、凝 胶、固体运载物(carrier)、稀释剂、佐剂、或辅料，或以上的某些组合。有效剂量部分取决 于对象的体重、年龄、和健康状况，以及给药途径和肿瘤发展程度。含有所述抗体的药物制 剂可单独给药或与其他已知治疗物质联合给药。例如，所述抗体可以与任何已知的可抑制 VEGF信号通路的治疗药物联合用药，包括其他抗体或基于抗体的药物。同样地，抗体也可 与不抑制VEGF信号通路但靶向作用于与目的疾病相关的另一通路或另一症状的治疗药物 联合用药。例如，本发明中的抗体可与化疗、放疗、和/或手术联用，以治疗癌症。与其他治 疗药物“联用”的抗体不是必须与该药物同时给药。在另一种治疗物质给药之前或之后给 药的抗体在本发明中也被认为是与该治疗药物“联用”。抗体可以通过皮下、腹腔、静脉、肌 肉、皮下或透皮注射以及其他方式给药。某些实施方式提供了表达所述抗体的表达系统。这些表达系统包括编码所述抗体 的多核苷酸，含有这些多核苷酸的载体，以及含有这些载体的宿主细胞。编码所述抗体的多 核苷酸可通过本领域已知方法被分离或合成，并插入可复制的载体中进行放大或克隆。编 码所述抗体可变轻链和可变重链(Vh)的多核苷酸可从单个载体中表达，或者可用两个 分开的载体表达，再在体外进行组装。在某些实施方式中，它们可以在同一细胞中由两个分 开的载体中共同表达并在细胞内进行组装(见，例如，美国专利号5，595，898)。适用的载 体可含有多种调控序列，如启动子、增强子、或转录起始序列，以及用于表型选择的编码标 记物的基因。这样的附加序列在本领域中公知。在某些实施方式中，所述载体可含有编码 人IgG2免疫球蛋白的重链恒定区(Ch)和轻链恒定区(Q)的多核苷酸序列。或者，所述载 体可仅表达所述抗体的Vh和\链，而表达出的多肽含有一 Fv片段而不是完整的抗体。载 体可以插入适当的宿主细胞中从而放大或表达所述的多核苷酸序列。所述宿主细胞可以在 本领域已知的多种培养液中培养并产生抗体，培养液例如最低基本培养液(MEM) (Sigma)、 RPMI-1640 (Sigma)，Dulbecco 改良 Eagle 培养液(DMEM) (Sigma)和 Ham' s FlO (Sigma)。 培养液可添加多种物质，例如激素、生长因子、盐类、缓冲液、核苷、抗生素、微量元素，葡萄 糖、或其他能量源。培养条件例如温度和PH可通过本领域公知的参数进行调节。本发明所述的抗体可含有缀合物用于向癌细胞中进行特异性传递。另外，所述抗 体与肿瘤细胞的结合可以用于招募宿主免疫反应。这种宿主免疫反应可通过双价抗体得到 增强，双价抗体的其中一个结合位点对应于本发明提供的完全人源抗体而另一个结合位点则识别细胞毒T细胞。在某些实施方式中，所述的抗体可含有高岩藻糖含量的寡聚多糖。在其他实施方 式中，所述的抗体可含有低岩藻糖含量，例如无岩藻糖的Fc抗体。本发明所述的低岩藻糖 抗体可通过具有低岩藻糖糖基化活性的细胞系制得，例如大鼠YB2/0细胞(ShinkaWa2003) 或 CHO 变体细胞系 Lecl3 (Shields 2002)。药物组合物。本发明的范围内包括了药物组合物，其含有本发明所述的抗体或抗 原结合片段以及关联的药用可接受的运载物(例如，以单个组合物形式存在或分开存在于 成套物件中)。药物组合物可通过药学领域任何公知的方法制备；见，例如，Gilman，et al.， (eds) (1990), The Pharmacological Bases of Therapeutics,8th Ed. ,Pergamon Press ； A. Gennaro(ed. )，Remington' s Pharmaceutical Sciences，18th Edition，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania. ；Avis, et al.，(eds.) (1993)Pharmaceutical Dosage Forms -Parenteral MedicationsDekker, New York ；Lieberman, et al.，(eds.) (1990)，Pharmaceutical Dosage Forms Tablets Dekker, New York ；以及 Lieberman，et al.，(eds.)(1990)，Pharmaceutical Dosage Forms !Disperse SystemsDekker,New York.含有本发明中所述抗体或抗原结合片段的药物组合物，可选择与另一化疗药物联 合，并可采用常规药用可接受辅料和添加剂通过常规的方法制备。所述的药用可接受的辅 料和添加剂包括，无毒的可兼容的填充物、粘合剂、崩解剂、缓冲液、防腐剂、抗氧剂、润滑 剂、搅味剂、增稠剂、着色剂、乳化剂以及类似物。所有的给药途径都可使用，包括但不限于， 注射途径(如，皮下注射、静脉注射，腹腔注射、肌肉注射、外用给药、腹腔注射、吸入、颅内 注射)以及非注射途径(如，口服给药、鼻腔给药、眼内给药、舌下给药、直肠给药、或外用给 药)。注射剂可制备成常规的形式，可以是液体溶液或混悬液，可以是固体形式，该固体 形式可在注射前于液体中形成溶液或混悬液，或者是乳剂。所述的注射剂，溶液和乳剂也 可含有一种或多种辅料。辅料包括，例如，水、盐、葡萄糖、甘油、或乙醇。另外，如果需要的 话，用于给药的药物组合物还可以含有少量的无毒佐剂如保湿剂或乳化剂，PH缓冲剂、稳定 剂、增溶剂、以及其他这样的物质，例如，醋酸钠、山梨醇酐单月桂酸酯、油酸三乙醇胺和环 糊精。在本发明的某个实施方式中，注射制剂中使用的药用可接受运载物包括水相介 质、非水相介质、抗微生物物质、等渗物质、缓冲液、抗氧剂、局部麻醉剂、助悬剂和分散剂、 乳化剂、螯合剂、及其他药用可接受的物质。水相介质的实例包括氯化钠注射液，林格氏液注射液，等渗葡萄糖注射液，无菌水 注射液，葡萄糖和乳酸林格氏注射液。非水相注射介质包括植物来源的不挥发性油，棉花子 油，玉米油，芝麻油，和花生油。细菌抑制或真菌抑制浓度的抗菌物质可加入包装在多剂量 容器中的注射制剂中，抗菌物质包括酚类或甲酚类，汞制剂，苯甲醇，氯代丁醇，甲基和丙基 对羟基苯甲酸酯、噻汞撒、氯苯甲烷铵和氯苯乙铵。等渗剂包括氯化钠和葡萄糖。缓冲液包 括磷酸盐和枸橼酸酸盐缓冲液。抗氧化剂包括硫酸氢钠。局部麻醉剂包括盐酸普鲁卡因。 助悬剂和分散剂包括羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、和聚乙烯吡咯烷酮。乳化剂包括 聚山梨醇酯80 (吐温-80)。金属离子的螯合剂包括EDTA(乙二胺四乙酸)或EGTA(乙二醇 四乙酸)。药用运载物还可包括用于水混溶介质的乙醇、聚乙二醇、丙二醇；以及用于PH调节的氢氧化钠、盐酸、枸橼酸、或乳酸。在本发明的某一实施方式中，注射给药的制剂可包括现用的无菌溶液、使用前现 与溶剂混合的无菌干燥的可溶物，如冻干粉，包括皮下片、注射即用的无菌混悬剂、使用前 现与介质混合的无菌干燥不溶产品以及无菌乳剂。所述溶液可以为水相或非水相。本发明所述的抗体或其抗原结合片段，可以选择与另一个化疗药物关联，可对所 述抗体或其抗原结合片段的浓度进行调节，使得一次注射可提供有效量，并产生理想的药 理效果。本领域公知，精确的剂量取决于，尤其是，病人或动物的年龄、体重、以及状态。在本发明的某一实施方式中，单位剂量的注射制剂包装在一个安瓿、一支管或一 支带有针的针筒中。本领域习知，所有注射给药的制剂应为无菌。在本发明的某一实施方式中，通过在某适当的溶剂中溶解所述抗体或其抗原结合 片段可制备无菌冻干的粉末，所述抗体或抗原结合片段可选择与另一化疗物质联合，或者 与其药物可接受的衍生物联合。所述溶剂可含有一种辅料，其可使所述粉末或由所述粉末 制得的重组溶液的稳定性提高或其他药理组分得到改善。适用的辅料包括，但不限于，葡萄 糖、三梨糖醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他适用的物质。所述溶剂还 可含有缓冲液，如枸橼酸缓冲液、磷酸钠或磷酸钾缓冲液或其他本技术人员公知的缓冲液， 在一种实施方式中，缓冲液的PH为中性。在本领域技术人员公知的标准条件下进行所述溶 液随后的过滤除菌，以及冻干可制得理想的制剂。在一种实施方式中，将所得的溶剂分装至 小管中进行冻干。每支小管可容纳单次剂量或多次剂量的所述抗VEGF抗体或其抗原结合 片段或其组合物。每支小管中的装入量可略微高于每次剂量所需或多次剂量所需(例如约 10%过量)，从而保证取样精确和给药精确。冻干粉可在适当的条件下储存，如在约4°C到 室温范围。冻干粉用注射用水重溶后得到可注射给药的制剂。在本发明的一种实施方式中， 将冻干粉加至注射用水中或其他适当的液体运载物中进行重溶。精确的剂量取决于所选的 治疗。该剂量可根据经验确定。本发明提供了以下实施例，旨在更好地说明本发明，而不应被理解为限制本发明 的范围。对于提到的具体材料，其仅仅旨在说明而不在于限制本发明。本领域技术人员在 无需创造性劳动以及不离开本发明范围的情况下，开发出等同的方法或反应物。应理解，对 本发明中所述的过程可以做出多种变动但仍然包括在本发明的范围内。发明人认为这样的 变动包括在本发明的范围内。实施例实施例1 制备可结合hVEGF!的抗体使用固定的hVEGF165筛选人源单链FV(SCFV)噬菌体展示文库，确定一组具 有结合hVEGF165能力的抗体片段。通过标准方法进行筛选(如Methods in Molecular Biology, vol. 178 :Antibody Phage Display :Method and Protocols Edited by P. M. 0' Brien and R. Aitken, Humana Press ； , "Panning of Antibody Phage-Display Libraries, "Coomber, D.W. J. , pp.133-145, 禾口"Selection of Antibodies Against Biotinylated Antigens, ” Chames, P.，et al. pp. 147-157)。简单的说，用50 μ 1溶于PBS的浓度为10 μ g/ml的重组hVEGF165 (R&D Systems,分 类号293-VE)对NUNC MAXISORP板的三个孔中进行包被。经过4°C过夜培养后，用含5% 牛奶的PBS溶液在室温下对自由结合位点进行包封一小时。然后，在包封后的孔中加入约 200 μ 1溶于5%牛奶的PBS的噬菌体库，室温培养大约一到两小时。冲洗孔并使用标准方法洗脱结合的唾菌体(见，如Sambrook and Russell, Molecule Cloning :A Laboratory Manual, 3rdEdition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001) 洗脱后的噬菌体在 37°C时感染对数生长期的大肠杆菌TGl宿主细胞，进行扩增。以2500rpm的转速离心5分 钟收集被感染的TGl细胞，并铺板至15cm 2YT-氨苄青霉素-2%葡萄糖琼脂板上，30°C培养 过夜。然后使用扩增的噬菌体重复筛选过程。筛选、洗脱和扩增的循环过程重复三轮，浓度逐渐降低(如第一轮用50yg/ HilhVEGF165，第二轮用10yg/ml，第三轮用10 μ g/ml)，直到铺板的TGl细胞的单克隆被用于 接种96孔板中的培养液。将微量培养生长至0D600达到0. 6，加入ImM IPTG诱导可溶性 scFv的表达，并在30°C振荡培养过夜。旋转沉淀细菌，使用周质提取物，以标准ELISA检测 法检测scFv对固定hVEGF165的结合。实施例2 使用XPA. 10. 064和XPA. 10. 072 scFv阻断 hVEGF^与VEGF警体的结合使用基于微孔板的竞争性筛选DELFIA实验(Perkins Elmer, Walthm, ΜΑ)检测实 施例1中具有hVEGF165结合能力的噬菌体克隆，阻断hVEGF165与VEGF-Rl和/或VEGF-R2 的结合能力。简单的说，将生物素化的hVEGF165溶液以1 1的体积比加入到实施例1中得到 的周质提取物中，使HVEGF165的终浓度为0. 5 μ g/ml。将100 μ 1该混合物加入到VEGF-Rl 或 VEGF-R2 包被的板中(R&D Systems :VEGF-Rl/Flt_l，货号 321-FL ;VEGF-R2/KDR/Flk_l， 货号357-KD)，室温培养1. 5小时。用PBST洗板。以50 μ 1/孔加入溶于DELFIA检测缓冲 液的1 250稀释的Europrium-链霉素溶液。室温培养一小时，然后使用DELFIA洗涤缓 冲溶液洗涤。以50 μ 1/孔加入DELFIA增强缓冲液，并将板在室温培养5分钟。使用实时 荧光Gemini读板仪读板。实施例3. scFv向scFv-Fc和IgG的转化选用在实施例2中对hVEGF165与VEGF-Rl和/或VEGF-R2结合抑制超过60 % 的两个 scFv, XPA. 10. 064 和 XPA. 10. 072，用于转化 scFv-Fc 和 / 或 lgG。XPA. 10. 064 和 XPA. 10. 072的轻链可变区(包括轻链⑶Rs)和轻链可变区(包括轻链⑶Rs)如图1所示。 重链 CDRs (如HCDR1，HCDR2 和 HCDR3)和轻链 CDRs (如LCDR1，LCDR2 和 LCDR3)通过 Kabat 计数系统石角定(Kabat, E. A. , et al. 1987, in Sequence of Proteins of Immunological Interest, USDepartment of Health and Human Services, NIH, USA)。 XPA. 10. 064 禾口 XPA. 10. 072的HCDRl，HCDR2和HCDR3被确定为如SEQ ID Nos. 6，7和8分别所示的氨基酸 序列。XPA. 10. 064 的 LCDRl，LCDR2 和 LCDR3 被确定为如 SEQ ID Nos. 12，13 和 14 分别所 示的氨基酸序列。XPA. 10. 072的LCDRl，LCDR2和LCDR3被确定为如SEQ ID Nos. 9，10和 11分别所示的氨基酸序列。为了将XPA. 10. 064 和 XPA. 10. 072 转化为 scFv-Fc 融合蛋白，将 scFv 的 cDNAs 克 隆至真核表达载体，该真核表达载体经修饰后可编码gramma-2 ( γ 2)重链恒定区CH2和CH3 结构域的基因(U. S. Patent No. 7，192，737 ；WO 2004/033693)。为了将XPA. 10. 064和XPA. 10. 072转化为lgG，将重链和轻链的可变区克隆入至真 核表达杂体，该真核表达载体编码kappa (κ), lambda ( λ )，或gamma-2 ( γ 2)重链和轻链恒 定区基因(US 2006/0121604)。按前人所述方法(US 2006/0121604)，在细胞中瞬时表达XPA. 10. 064和 XPA. 10. 072的scFv-Fc和IgG抗体。在培养的第六天收集转染细胞的上清液。使用蛋白-A色谱纯化 IgG0 实施例 4 用 Biacore 分析 XPA. 10. 064 和 XPA. 10. 072 的 scFv-Fc 和 IgG 结 合动力学使用BIAC0RE 2000 和 CM5 传感芯片(Biacore)检测 XPA. 10. 064 和 XPA. 10. 072 的scFv-Fc的结合亲和力，其中蛋白A/G(PierCe)以高密度固定在所有的流动细胞上。实 验所用稀释缓冲液和流动缓冲溶液为含有1 50稀释的Chemiblocker (Chemicon)的 HBS-EP(Biacore)溶液。抗体捕捉通过在流动细胞2 (fc2)上以20 μ 1/分钟的速度注射入 不定体积的稀释过的XPA. 10. 064和XPA. 10. 072的scFv进行，从而实现约50-70 RU的抗 体捕捉。抗体的浓度约为0. 5 μ g/ml。用Kinject将sf21细胞表达的hVEGF165以30 μ 1/ 分钟的速度注射5分钟以上，并带有15分钟的fcl和fc2的解离。以三倍系列稀释制备 四个 hVEGF165 稀释液，得到的浓度为 5 μ g/ml (119nM) ,1.667 μ g/ml (39. 7ηΜ)，0· 55 μ g/ ml (13. 2ηΜ)和 0. 185 μ g/ml (4. 4ηΜ)。以 50 μ 1 每分钟的速度注入 IOOmM HCl 两次，每次 12 秒，进行再生(Regenerations)。用Scrubber2处理数据，并在对照流动细胞注射和空白注 射两次参考后，根据1 1 Langmuir作用模型修正。XPA. 10. 064和XPA. 10. 072的scFv-Fcs 表现对hVEGF165几乎一致的高结合亲和力。用相似的方法检测了 XPA. 10. 064和XPA. 10. 072 IgG2的结合动力学。XPA. 10. 064 和XPA. 10.072 IgG2s均可特异性结合hVEGF165，两者亲和力相近，均为低的个位数纳摩尔级 别(图2-4)，同时表现出微弱的HiVEGF165结合力。两种抗体都表现出了与贝伐单抗类似的 ka 值(表 2)。实施例 5. XPA. 10. 064 and XPA. 10. 072 IgGs 对 hVEGF，和 VEGF 警体结合的 阻断作用使用Biacore 2000 和 CM5 芯片检测 XPA. 10. 064 和 XPA. 10. 072 IgG2 阻断 hVEGF165 与VEGF-Rl和/或VEGF-R2结合的能力。通过氨基偶联(Biacore)将VEGF受体(R&D Systems)以约15，000的密度固定在 CM5芯片上。VEGF-R2固定在fc2而VEGF-Rl固定在fc4。流动细胞1和3作为参照，使用 与受体固定的流动细胞相同的方法激活和阻断。以1 1的比例将抗体样本或缓冲溶液 与0. 15 μ g/ml溶于HBS-EP冲洗缓冲溶液的hVEGF165溶液混合。抗体的最终浓度为15，5， 1. 667,0. 556,0. 185,0. 0617,0. 0206 和 0 μ g/ml。在Biacore 分析开始前培养样品至少一小 时。所有样品都重复注射，每组抗体重复都有其各自的阳性和阴性对照(分别为没有VEGF 抗体和没有VEGF)。样品以IOul/分的速度向所有流动细胞注射1.5分钟。以50ul/分的 速度注射GlyCene，pH 1.75用于再生。为了分析数据，结合相的线性部分(30秒到1分钟)的斜率采用线性拟合确定。用 每一点的信号减去最接近空白的值，然后除以对应100%的对照信号(无抗体)从而确定该 周期中的抑制百分比。数据由GraphPad Prism绘制成图，并用sigmoidal量效曲线拟合计 算 EC50。 XPA. 10. 064 和 XPA. 10. 072 IgG2 都能阻断 hVEGF165 和 VEGF-Rl 与 VEGF-R2 结合， 其阻断水平与贝伐单抗相近(图5-6，表3)。表3
贝伐单抗XPA. 10. 064XPA. 10. 07权利要求
1.一种被分离的抗体或其抗原结合片段，含有，(1)一重链可变区，含有以下重链⑶R氨基酸序列SEQ ID NO 6, SEQ ID NO -J, SEQ IDNO :8，和 / 或(2)一轻链可变区，含有以下轻链CDR氨基酸序列(a) SEQ ID N0:9，SEQ ID N0:10，和 SEQID NO 11，或(b) SEQ ID NO: 12，SEQ ID NO: 13 禾口 SEQ ID NO: 14。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区含有如SEQID NO: 2所示的氨基酸序列。
3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区含有如SEQID NO :4所示的氨基酸序列。
4.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有如SEQID N0:3所示的氨基酸序列。
5.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有如SEQID N0:5所示的氨基酸序列。
6.如权利要求1-5任一所示的抗体或其抗原结合片段，其进一步含有一IgG 2恒定区。
7.如权利要求1-5任一所示的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体与hVEGF165结合 的Kd值为彡2. OnM0
8.如权利要求1-5任一所示的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体与hVEGF165结合 的抗原表位与贝伐单抗结合的抗原表位重叠。
9.如权利要求1-5任一所示的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体可阻断hVEGF165 与VEGF-Rl和VEGF-R2的结合。
10.一种在所需对象中抑制血管生成的方法，包括对所述对象给药治疗有效剂量的如 权利要求1-5任一所述的抗体或其抗原结合片段。
11.一种在所需对象中治疗与血管生成异常相关的疾病的方法，包括对所述对象给药 治疗有效剂量的如权利要求1-5任一所述的抗体或其抗原结合片段。
12.—种在所需对象中治疗与VEGF信号传导相关的炎症疾病的方法，包括对所述对象 给药治疗有效剂量的如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述疾病选自下组类风湿性关节炎、牛皮癣、硬 皮病、慢性阻塞性肺部疾病、以及哮喘。
14.一种在所需对象中治疗湿性急性视网膜黄斑变性或糖尿病视网膜病变的的方法， 包括对所述对象给药治疗有效剂量的如权利要求1-5任一所述的抗体或其抗原结合片段。
15.一种在所需对象中治疗与VEGF信号传导增高相关的癌症的方法，包括对所述对象 给药治疗有效剂量的如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段进一步含有一缀合物。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述缀合物选自下组毒素、细胞因子，以及化疗 药物。
18.一种成套物件，含有如权利要求1-5任一所述的抗体或其抗原结合片段。
19.一种被分离的多核苷酸，其编码如SEQ ID NO :2，SEQ ID NO :3，SEQ ID NO :4，SEQIDNO :5,SEQ ID N0:6，SEQ ID N0:7，SEQ ID N0:8，SEQ ID N0:9，SEQ ID NO 10, SEQ IDNO 11，SEQ ID NO: 12，SEQ ID NO: 13，或 SEQ ID NO : 14 任一所示的氨基酸序列。
20.一种被分离的载体，含有如权利要求19所述的多核苷酸。
21.一种被分离的宿主细胞，含有如权利要求20所述的载体。
22.一种完全人源抗体，其中所述抗体含有一种或多种选自下组的特征(1)与hVEGF165结合的Kd值至少10倍低于该抗体与mVEGF165结合的Kd值；(2)与hVEGF165 结合的 Kd 值彡 2. OnM ；(3)与hVEGF165结合的抗原表位与贝伐单抗结合的抗原表位重叠；(4)阻断hVEGF165与VEGF受体的结合；或(5)抑制hVEGF165诱导的VEGF受体的磷酸化。
23.如权利要求22所述的完全人源抗体，其中所述抗体与hVEGF165结合的Kd值 ≤ 2. OnM。
24.如权利要求22所述的完全人源抗体，其中所述抗体与hVEGF165结合的抗原表位与 贝伐单抗结合的抗原表位重叠。
25.如权利要求22所述的完全人源抗体，其中所述抗体阻断hVEGF165与VEGF受体的结合。
26.如权利要求25所述的完全人源抗体，其中所述VEGF受体为VEGF-Rl或VEGF-R2。
27.如权利要求22所述的完全人源抗体，其中所述抗体可抑制hVEGF165诱导的VEGF受 体的磷酸化。
28.如权利要求22所述的完全人源抗体，其中所述抗体含有一重链可变区，该重链可 变区含有以下重链CDR氨基酸序列:SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，和SEQ ID NO :8。
29.如权利要求28所述的完全人源抗体，其进一步含有一轻链可变区，该轻链可变区 含有以下轻链 CDR 氨基酸序列=SEQ ID NO :9，SEQ ID NO :10，禾口 SEQ ID NO :11。
30.如权利要求29所述的完全人源抗体，其中所述重链可变区含有如SEQID N0:2所 示的氨基酸序列，所述轻链可变区含有如SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列。
31.如权利要求28所述的完全人源抗体，其进一步含有一轻链可变区，该轻链可变区 含有以下轻链 CDR 氨基酸序歹Ij =SEQ ID NO :12，SEQ ID NO 13 和 SEQ ID NO :14。
32.如权利要求31所述的完全人源抗体，其中所述重链可变区含有如SEQID NO 4所 示的氨基酸序列，所述轻链可变区含有如SEQ ID NO :5所示的氨基酸序列。
33.如权利要求1-5任一所述的抗体或抗原结合片段，其为完全抗体。
34.如权利要求33所述的抗体，其为单克隆抗体。
35.如权利要求33所述的抗体，其为多克隆抗体。
36.如权利要求33所述的抗体，其为重组抗体。
37.如权利要求33所述的抗体，其为双特异性抗体。
38.如权利要求33所述的抗体，其为人源化抗体。
39.如权利要求33所述的抗体，其为契合抗体。
40.如权利要求33所述的抗体，其为完全人源抗体。
41.一种被分离的人源抗体，其含有一轻链可变区，该轻链可变区含有如SEQ ID NO 3 所示的氨基酸序列，和一重链可变区，该重链可变区含有如SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列。
42.一种被分离的人源抗体，其含有一轻链可变区，该轻链可变区含有如SEQ ID NO 5 所示的氨基酸序列，和一重链可变区，该重链可变区含有如SEQ ID NO :4所示的氨基酸序 列。
43.一种药物组合物，其含有如权利要求41所述的抗体和一药用可接受的运载物。
44.一种药物组合物，其含有如权利要求42所述的抗体和一药用可接受的运载物。
45.一种药物组合物，其含有如权利要求1-5任一所述的抗体或抗原结合片段，以及一 药用可接受的运载物。
46.一种被分离的抗体或其抗原结合片段，其含有XPA. 10. 064或XPA. 10. 072的重链互 补决定域中的至少一条，以及XPA. 10. 064或XPA. 10. 072的轻链互补决定域中的至少一条。
47.如权利要求46所述的被分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链互补决定域 选自下组:XPA. 10. 064 或 XPA. 10. 072 的 HCDRl、HCDR2、HCDR3、以及其组合。
48.如权利要求46所述的被分离的抗体或抗原结合片段，其中所述轻链互补决定域选 自下组:XPA. 10. 064 或 XPA. 10. 072 的 LCDRl、LCDR2、LCDR3、以及其组合。
全文摘要
血管内皮生长因子(VEGF)的过量表达与多种状态相关联，这些状态涉及血管生长异常。本发明公开了可特异性结合人VEGF的完全人源抗体，其可抑制VEGF与VEGF-R1和VEGF-R2的结合，从而抑制VEGF的信号传导。由于它们具有抑制VEGF信号传导的活性，本发明中公开的抗体可用于在体内和体外治疗血管生成以及多种与血管生成相关的状态。
文档编号A61K39/395GK102006885SQ200780047541
公开日2011年4月6日 申请日期2007年10月22日 优先权日2006年10月20日
发明者琳达·玛萨特, 瓦尔特·罗伯特·比索普, 舒曼·罗摩占罗, 黄超白 申请人:佐马技术有限公司, 先灵公司