一种水貂出血性肺炎灭活疫苗制备方法及其应用与流程

文档序号:11116842阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种水貂出血性肺炎灭活疫苗制备方法,包括以下步骤:

(1)培养分离鉴定的铜绿假单胞菌强毒株ZHDL9:将分离鉴定的铜绿假单胞菌强毒株ZHDL9接种于LB琼脂培养基,无菌环境下挑选单菌落于液体培养基中,培养至细菌培养液在OD600处的吸光度值为0.6~0.8之间,再37℃扩大培养12h,然后25℃避光静止培养三天以上直至呈绿色荧光;

(2)灭活处理:向铜绿假单胞菌菌液中缓慢加入甲醛灭活,边加入边震荡,使其充分混匀,直至甲醛溶液的终浓度为菌液体积总量的0.4%,置于37°摇床震荡处理,摇床转速160-180r/min,灭活处理72小时,涂板检验菌液是否彻底灭活;

(3)配苗:将灭活检验合格的铜绿假单胞菌强毒株ZHDL9菌液离心,取上清液,向上清液中加入饱和硫酸铵溶液,使上清液中的蛋白质沉淀,离心,取沉淀的蛋白质,将沉淀的蛋白质用无菌生理盐水溶解,调整多组份蛋白浓度为500ug/ml,加入佐剂,4度过夜,即得。

2.根据权利要求1所述的水貂出血性肺炎灭活疫苗制备方法,其特征在于:步骤(3)中的佐剂为基于铝的佐剂。

3.根据权利要求2所述的水貂出血性肺炎灭活疫苗制备方法,其特征在于:所述基于铝的佐剂为氢氧化铝胶体佐剂。

4.根据权利要求3所述的水貂出血性肺炎灭活疫苗制备方法,其特征在于:氢氧化铝胶体佐剂的终浓度为0.5mg/ml。

5.一种权利要求1-4中任一项所述的制备方法所制得的水貂铜绿假单胞菌上清液灭活疫苗。

6.一种权利要求1-4中任一项所述的制备方法所制得的上清液灭活疫苗在防治水貂出血性肺炎中的应用。

7.根据权利要求6所述的上清液灭活疫苗在防治水貂出血性肺炎中的应用,其特征在于:肌肉注射本发明的上清液多组分蛋白灭活疫苗,免疫剂量按照500ug每只。

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