专利名称：野生苹果黄酮的提取方法
技术领域：
本发明涉及野生苹果黄酮的提取方法。
背景技术：
野生苹果生物黄酮主要为儿茶素、表儿茶素、原花青素等黄烷-3醇结构的低聚及高聚黄酮类化合物，作为一种天然存在的强效抗氧化剂，具有显著清除人体内自由基功能，医学研究证明人类有70多种疾病与自由基有关，如心血管类、癌症、类风湿、早衰等，现代药理学研究发现，具有黄烷-3醇结构的黄酮还具有显著的降低低密度脂蛋白的作用。槲皮素作为苹果多酚中的主要物质，药理学研究具有的功效。其中根皮素和根皮甙具有平缓降血压的作用。
从苹果中提取高含量的苹果总黄酮的研究还没有报导，处于野生状态的苹果由于口味太差(苦，涩)，还没有人去研究、开发，通过研究发现野生苹果中黄酮类成分是产生苦涩味的主要成分，其原料中黄酮类化合物的含量是普通苹果(山东烟台红富士)的8倍，苹果皮中的4倍。
发明内容
本发明的目的是提供一种以野生苹果为原料，进行苹果黄酮的提取方法。
本发明的野生苹果黄酮的提取方法，包括以下步骤1)将野生苹果原料用压榨机压榨，过滤得到澄清苹果汁；2)将压榨后的皮渣用浓度为30～99％的C1～C6低级醇的水溶液进行提取，提取液在负压0.70～1.0大气压下减压浓缩回收醇，过滤得到澄清提取液；3)将步骤1)和2)所得的澄清液合并，用大孔树脂的吸附柱进行吸附；4)用浓度为10～100％的C1～C6低级醇或其混合液，或其水溶液或其混合物的水溶液进行解吸附；5)将解吸附的溶液，在负压0.70～1.0大气压下回收溶剂，得到野生苹果黄酮。
综合考虑工业化效率和溶剂使用量两个因素，通常，用大孔树脂进行吸附时，使提取液的流速为每小时0.5～5倍树酯体积，解吸附时解吸附的流速为每小时0.5～4倍树酯体积。
为了达到工业化高效率批量生产，一般使减压浓缩的温度为25～100摄氏度，温度低于25摄氏度浓缩速度太慢，温度高于100摄氏度，对成分破坏太大，会导致成品含量不能够达到70％以上。
本发明中，大孔树脂可选用聚苯乙烯与功能基团交联的树脂，如型号为Diaion HP 20-21的大孔树脂。C1～C6低级醇可选自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇等。
试验表明，以采摘不成熟的野生苹果为好，可采摘各个生长阶段的果实，重量为5克、10克、20克、50克、100克、200克、300克的野生苹果。在对苹果进行压榨不破碎比破碎效果好，因为在对苹果进行破碎过程中，苹果处于和空气充分接触中，容易使苹果中的抗氧化的黄酮类物质被氧化，从而降低成品的抗氧化活性。在对压榨完汁的皮渣进行提取的时候，使用浓度高于30％的醇类主要原因是防止提取出野生苹果中含量丰富的蛋白质类和多糖类等大分子物质，一方面提高产品的纯度，另外一方面能够保护吸附剂不被污染，延长其使用寿命。
本发明以野生苹果为原料，提取苹果黄酮的方法简单易行，一步纯化就可以使成品中总黄酮含量达到70％以上，所用原料为不能够食用的野生苹果，成本低且避免了资源浪费。在提取过程中没有使用任何有毒溶剂，不污染环境，便于工业化生产。得到的野生苹果黄酮可以用于食品抗氧化剂，其抗氧化性是人工合成抗氧化剂2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)的20倍，并且毒性远远低于人工合成的抗氧化剂，可以用于代替BHT等人工合成的抗氧化剂添加到食品、油类等产品中；作为保健食品原料开发出具有清除自由基、美容养颜的保健食品。
具体实施例方式
下面对本发明的最佳实施例做了详细说明。该实施例只是为了说明本发明，本发明并不局限在所列举的实施例中。
实施例1取野生苹果(平均单个重量在40克左右，新疆伊梨，夏季采摘)1000公斤，用袋式压榨机，在10～50℃，压榨得到苹果汁600升，过120目滤布后，用板框过滤器过滤，得到澄清液体590升；取苹果皮渣400公斤，用浓度为65％的乙醇水溶液2000升，回流提取2小时，得到提取液1600升，减压浓缩(负压0.75大气压，温度55摄氏度)到体积400升，静置冷却12小时，吸取上清液通过板框过滤器，得到380升液体；合并苹果汁和提取液，共得到970升液体，以每小时150升的流速通过体积为200升的大孔树脂层析柱，进行吸附。吸附完成后，用500升体积的去离子水进行冲洗，去除杂质；用浓度为70％的乙醇水溶液600升体积进行解吸附，流速400升/小时，最终得到650升体积的洗脱液体，减压浓缩(负压0.92大气压，温度35摄氏度)到密度1.08，体积为61升；将浓缩液喷雾干燥得到成品21.3公斤，经紫外分光光度法(中国药典2000版一部)检测总黄酮含量为78.9％。
实施例2取野生苹果(平均重量在100克左右/个，新疆伊梨，夏季采摘)200公斤，用袋式压榨机，得到苹果汁120升(密度1.02-1.10)，过120目滤布后，用板框过滤器过滤，得到澄清液体119升；取苹果皮渣80公斤，用75％浓度甲醇水溶液400升，回流提取2小时，得到提取液320升，减压浓缩(负压0.70大气压，温度70℃)到体积81升，静置冷却12小时，吸取上清液体通过板框过滤器，得到80升液体；合并苹果汁和提取液，共得到199升液体，以每小时40升的流速通过体积为40升的大孔树脂层析柱，进行吸附。吸附完成后，用100升体积的去离子水进行冲洗，去除杂质；用100％甲醇100升体积进行解吸附，流速40升/小时，最终得到120升体积的洗脱液体，减压浓缩(负压0.75大气压，温度90摄氏度)到密度1.08，体积为13升；将浓缩液喷雾干燥得到成品5.3公斤，经紫外分光光度法(中国药典2000版一部)检测总黄酮含量为82.1％。
实施例3取野生苹果(平均重量在5克左右/个，新疆伊梨5月采摘)10公斤，用手工食品压榨机，得到苹果汁5.20升(密度1.02)，过120目滤布后，滤纸过滤，得到澄清液体4.8升；取苹果皮渣4.9公斤，用95％浓度正丁醇水溶液20升，回流提取2小时，得到提取液18升，旋转蒸发器浓缩(负压0.85大气压，温度低于65摄氏度)到体积5升，静置冷却12小时，吸取上清液体过滤，得到5升液体；合并苹果汁和提取液，共得到10.1升液体，以每小时4升的流速通过体积为2升的大孔树脂层析柱，进行吸附。吸附完成后，用5升体积的去离子水进行冲洗，去除杂质；用30％乙醇的水溶液10升体积进行解吸附，流速4升/小时，最终得到12升体积的洗脱液体，减压浓缩(负压0.85大气压，温度低于65摄氏度)到密度1.06公斤/升，体积为1升；将浓缩汁喷雾干燥得到成品150克，经紫外分光光度法(中国药典2000版一部)检测总黄酮含量为76.1％。
实施例4取野生苹果(平均重量在10克左右/个，新疆伊梨6月1日采摘)10公斤，用手工食品压榨机，得到苹果汁6.20升(密度1.02)，过120目滤布后，滤纸过滤，得到澄清液体5.8升；取苹果皮渣4.2公斤，用30％浓度乙醇水溶液20升，回流提取2小时，得到提取液18升，实验室旋转蒸发器(20L)浓缩(负压0.85大气压，温度30摄氏度)到体积5升，静置冷却12小时，吸取上清液体滤纸过滤，得到5升液体；合并苹果汁和提取液，共得到10.8升液体，以每小时4升的流速通过体积为2升的大孔树脂，进行吸附。吸附完成后，用5升体积的去离子水进行冲洗，去除杂质；用40％浓度甲醇的水溶液10升体积进行解吸附，流速4升/小时，最终得到12升体积的洗脱液体，减压浓缩(负压0.85大气压，温度30摄氏度)到密度1.06公斤/升，体积为1升；将浓缩汁喷雾干燥得到成品190克，经紫外分光光度法(中国药典2000版一部)方法检测总黄酮含量为74.3％。
实施例5取野生苹果(平均重量在200克左右/个，新疆伊梨6月30日采摘)10公斤，用手工食品压榨机，得到苹果汁6.50升(密度1.02)，过120目滤布后，滤纸过滤，得到澄清液体6.4升；取苹果皮渣3.5公斤，用浓度75％乙醇水溶液18升，回流提取2小时，得到提取液15升，实验室旋转蒸发器(20L)浓缩(负压0.85大气压，温度100摄氏度)到体积5升，静置冷却12小时，吸取上清液体滤纸过滤，得到5升液体；合并苹果汁和提取液，共得到11.4升液体，以每小时4升的流速通过体积为2升的大孔树脂，进行吸附。吸附完成后，用5升体积的去离子水进行冲洗，去除杂质；用25％甲醇的水溶液20升体积进行解吸附，流速4升/小时，最终得到22升体积的洗脱液体，减压浓缩(负压0.85大气压，温度100摄氏度)到密度1.06公斤/升，体积为1升；将浓缩液喷雾干燥得到成品180克，经紫外分光光度法(中国药典2000版一部)检测总黄酮含量为72.3％。
实施例6取野生苹果(平均重量在300克左右/个，新疆伊梨6月30日采摘)10公斤，用手工食品压榨机，得到苹果汁6.60升(密度1.02)，过120目滤布后，滤纸过滤，得到澄清液体6.5升；取苹果皮渣3.4公斤，用75％浓度甲醇水溶液18升，回流提取2小时，得到提取液15升，实验室旋转蒸发器(20L)浓缩(负压0.85大气压，温度70摄氏度)到体积5升，静置冷却12小时，吸取上清液体滤纸过滤，得到5升液体；合并苹果汁和提取液，共得到1 1.5升液体，以每小时4升的流速通过体积为2升的大孔树脂，进行吸附。吸附完成后，用5升体积的去离子水进行冲洗，去除杂质；用乙醇∶正丁醇∶水＝30∶30∶40溶液30升体积进行解吸附，流速4升/小时，最终得到33升体积的洗脱液体，减压浓缩(负压0.85大气压，温度70摄氏度)到密度1.06公斤/升，体积为1升；将浓缩汁喷雾干燥得到成品120克，经紫外分光光度法(中国药典2000版一部)方法检测总黄酮含量为71.8％。
权利要求
1.野生苹果黄酮的提取方法，其特征是包括以下步骤1)将野生苹果原料用压榨机压榨，过滤得到澄清苹果汁；2)将压榨后的皮渣用浓度为30～99％的C1～C6低级醇的水溶液进行提取，提取液在负压0.70～1.0大气压下减压浓缩回收醇，过滤得到澄清提取液；3)将步骤1)和2)所得的澄清液合并，用大孔树脂的吸附柱进行吸附；4)用浓度为10～100％的C1～C6低级醇或其混合液，或其水溶液或其混合物的水溶液进行解吸附；5)将解吸附的溶液，在负压0.70～1.0大气压下回收溶剂，得到野生苹果黄酮。
2.根据权利要求1所述的野生苹果黄酮的提取方法，其特征是步骤2)减压浓缩的温度为25～100摄氏度。
3.根据权利要求1所述的野生苹果黄酮的提取方法，其特征是用大孔树脂进行吸附时，提取液的流速为每小时0.5～5倍树酯体积。
4.根据权利要求1所述的野生苹果黄酮的提取方法，其特征是解吸附的流速为每小时0.5～4倍树酯体积。
全文摘要
本发明公开的野生苹果黄酮的提取方法，包括以下步骤1)将野生苹果原料用压榨机压榨，过滤得到澄清苹果汁；2)将压榨后的皮渣用浓度为30～99％的C
文档编号C07D311/00GK1616447SQ200410066618
公开日2005年5月18日 申请日期2004年9月21日 优先权日2004年9月21日
发明者闫卫东, 邵云东 申请人:浙江大学