用于调节dna甲基化的喹啉衍生物的制作方法

专利名称：用于调节dna甲基化的喹啉衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及喹啉衍生物的化合物、组合物、制剂、试剂盒、用法和生产方法，更具体 地，涉及4-苯胺基喹啉衍生物，作为DNA甲基化酶的抑制剂、DNA甲基化的调节剂和用于预 防或治疗与DNA甲基化异常有关的疾病(例如，癌症和血液学恶性肿瘤)的治疗剂。
背景技术：
在5' -m5CpG-3'序列的胞嘧啶残基的C_5位甲基化通过基因的沉默而在基因 表达中起到重要的作用(Smith, Α. F. A. Curr. Opin. Genet. Devel.，1999，9，657)。负责在 复制过程中维持这些甲基化模式的主要的酶是DNA甲基转移酶DNMTl (Siedlecki等人， Biochem. Biophys. Res. Comm.，2003，306，558)。DNA甲基化是许多遗传性疾病综合症的病 因，并且还可以在人的癌症形成过程中具有重要的作用。它是造血组织肿瘤中最常见的分 子改变(Egger等人，Nature，2004，429，457)，并且可能涉及其它肿瘤类型；例如，散发性结 直癌患者中有一定的比例表现出编码MLHl的基因的甲基化和使该基因沉默(Kane等人， Cancer Res. ，1997，57，808)。得到最广泛研究的抑制剂DNMTl为自杀性抑制剂例如阿扎胞苷(Vidaza (S))和地 西他滨(Dacogen )，都是代替胞嘧啶结合在DNA中并且不可逆地捕获所述酶的抗代谢物 (Egger 等人，Nature，2004，429,457 ；Zhou 等人，J. Mol. Biol.，2002，321,599)。两种化合物 现在在临床上用于治疗脊髓发育异常综合征和淋巴组织增生性疾病，但是都有相当大的毒 性(Leone等人，Clin. Immunol.，2003，109，89)。大概是由于在DNA中并入了 5-氮杂胞苷。 将地西他滨结合到DNA链中具有低甲基化作用(hypomethylation effect)。分化的细胞的 每个类别都有自己的不同的甲基化模式。在染色体重复之后，为了保存这种甲基化模式，母 链上的5-甲基胞嘧啶用于互补性子代DNA链的直接甲基化。将胞嘧啶的5位碳替换为氮干 扰这个正常的DNA甲基化过程。在甲基化的特定位置用地西他滨替换5-甲基胞嘧啶产生不 可逆的DNA甲基转移酶失活，大概是由于在酶和地西他滨之间形成了共价键(Juttermarm 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994，91，11797)。通过特异性地抑制DNMTl (维持甲基化 所需的酶)，可以预防肿瘤抑制基因的异常甲基化。已经描述了只有几种的其它小分子的DNA甲基化抑制剂，包括psammaplin海绵代 谢物(psammaplin sponge metabolite) ( Pifia等人，J. Org. Chem.，2003，68，3866)，其是 DNA甲基转移酶的有力的直接抑制剂，但是在细胞试验中效力较小(Godert等人，Bioorg. Med. Chem. Lett.，2006，16，3330)。其它非核苷类去甲基化试剂例如(_) _表没食子酸儿茶 素-3-没食子酸酯、胼屈嗪、和普鲁卡因胺也被证明在使基因复活方面的效力比地西他滨 差得多(Chuang 等人，Mol. Cancer Ther.，2005，4，1515)。因此，仍需要开发可用于预防或治疗与异常的DNA甲基化有关的疾病(例如，癌症 和血液学恶性肿瘤)的有效的DNA甲基化调节剂。

发明内容
在一个方面中，本发明提供式(I)的化合物或其生理可接受的盐或磷酸酯前体药 物、或羧酸酯或氨基酸酯前体药物， 其中Gi、G2、G3、和G4各自独立地为C、N、或N+(在R6-R9连接于N时);G5和G6各自 独立地为CH或N ;G7和G8各自独立地为CH、C(在R2连接于C时)、N、或N+(在R2连接于N 时)，D1和D2各自分别为CH、C (在R3连接于C时)、N、或N+(在R3连接于N时)。
R6、R7、R8 禾口 R9 各自分别为 H、卤素、CF3> OCF3> CN、CONHR4、CONR4R5、SO2Me、SO2NHR4、 SO2NR4R5, NHCOR4, NHR4, NR4R5, OR4、NO2 或 CH2R4,其中 R4 和 R5 各自独立地为 H、低级 C1-C6 烷 基或环烷基，所述低级C1-C6烷基或环烷基任选被氨基、羟基、甲氧基、-CN、-COOH或-SO2NH2 基团取代，或具有一个或多个氧、硫或氮原子作为环烷基结构的一部分，所述环烷基结构可 以表示吗啉、吡咯烷、哌啶、吡咯烷、硫代吗啉、咪唑或4-甲基哌嗪或可以是由-N =取代-CH =环碳，R2和R3各自独立地为H、NHR\ NR4R5, OR4、NO2或CH2R4,其中R4和R5如上所定义，X可以是H或C1-C6烷基，所述烷基任选被氨基、羟基或甲氧基取代，或具有一个或 多个氧或氮原子作为环烷基结构的一部分，所述环烷基结构可以代表氮杂环丁烷、吡咯烷、 哌啶、哌嗪或吗啉；Y 可以是 CONR4、NR4CO, 0, S(O)Jn = 0 至 2]、(CH2)Jk = 1 至 6]、-CH = CH-、NR4 或两个芳香环之间的直接键(即，在两个芳香环之间的C-C键)，其中R4和R5如上所定义；O、m和P代表组成部分Z的连接位置；Z可以为式(II)中表示的基团Q1-Q43之一； 其中六是0、3(0)1> = 0至2]或NR4，其中R4如上所定义，G9-G13各自独立地为C、N或N+(其中R1tl-R13与N相连)；但G9-G13中至少三个是C ； 并且R10、R11、R12、R13 和 R14 各自分别为 H、卤素、烷基、CF3, OCF3、CN、CONHR4、CONR4R5、SO2Me、 SO2NHR4, SO2NR4R5, NHCOR4, NHR4, NR4R5, OR4、NO2 或 CH2R4,其中 R4 和 R5 如上所定义。可以理解式(I)化合物可以以不同的几何和对映体形式存在，并且包括这些各自 的异构体的纯净形式和混合物，以及任何其生理学上的功能性盐衍生物或磷酸酯或羧酸酯 或氨基酸酯前体药物。在另一方面，本发明提供式(III)的化合物，或其药学可接受的盐，磷酸酯前体药
物，或羧酸酯或氨基酸酯前体药物， 其中，R6、R7、R8和 R9 各自分别为 H、卤素、CF3> OCF3> CN、CONHR4、CONR4R5、SO2Me、 SO2NHR4, SO2NR4R5, NHCOR4, NHR4, NR4R5, OR4、NO2 或 CH2R4,其中 R4 和 R5 各自独立地为 H、C1-C6 烷基、或环烷基，所述C1-C6烷基或环烷基任选被一个或多个氨基、羟基、甲氧基、-CN，-COOH 或-SO2NH2基团取代；X为H，或C1-C6烷基，所述C1-C6烷基任选被一个或多个氨基、羟基或甲氧基取代；Y 为 CONR4、NR4CO, 0、S (0) η (η = 0 至 2)、(CH2) k (k = 1 至 6)、-CH = CH-或 NR4，其 中R4和R5如上所定义；G7和G8各自独立地为CH或N，D1和D2各自独立地为CH或N，o、m和ρ代表基团Z的连接位置；Z为上式(II)中表示的基团Q1-Q43之一，其中A为0、S (O)w [W = 0至2]或NR4，其中R4如上所定义；G9-G13各自独立地为C、N或N+(其中R10-R13与N相连)，但G9-G13中至少三个为C，R10、R11、R12、R13 和 R14 各自分别为 H、卤素、烷基、CF3、OCF3、CN、CONHR4、CONR4R5、SO2Me、 SO2NHR4, SO2NR4R5, NHCOR4, NHR4, NR4R5, OR4、NO2 或 CH2R4,且其中 R4 和 R5 如上所定义。在又一个方面中，本发明提供治疗或预防与异常的DNA甲基化有关的疾病(例如， 癌症)的方法，包括给予式(I)或(III)的化合物或其盐或前体药物，其中R2-R1^G1-GmCK m、ρ、X、Y、Ζ、和A如上述分别对于各式所定义的。优选地，需要治疗或预防这种疾病的受试者需要使其维持甲基化酶DNMTl的功能 /活性有一定的降低，优选这种功能/活性降低至少25%，更优选降低至少50%，最优选降 低至少75%。考虑到DNA甲基化酶活性的至少25%降低可能是有利的。所述方法还包括共同给予一种或多种治疗剂和/或治疗。优选所述治疗方法另外 包括在给予上述定义的式(I)或(III)的化合物或其盐或前体药物之前、过程中和之后对 受试者给予一种或多种化疗治疗剂或生物学治疗剂或使所述受试者经历辐射治疗。尽管这些化合物典型地用于人类受试者的疾病预防或治疗，但是它们也可以用于 治疗或预防其它哺乳动物的疾病，例如温血动物受试者(例如，其它灵长类动物、农畜例如 牛、和运动动物和宠物例如马、狗、和猫)。在又一个方面中，本发明提供药物组合物，所述药物组合物包括上述定义的式(I) 或(III)的化合物或其盐或前体药物，和药学可接受的赋形剂、辅助剂、载体、缓冲剂或稳 定剂。在又一个方面中，本发明提供用于合成或生产上述定义的式(I)或(III)的化合 物或其盐或前体药物的方法。这种方法的实例在以下反应方案1-6中举例说明。
在又一个方面中，本发明提供生产用于对受试者给药的药物的制备方法，所述药 物包括上述定义的式(I)或(III)的化合物或其盐或前体药物。一些优选的式(I)的化合物列举在以下表1中，其中R2、R3和R4为H，且A为NH，表 1.本发明的一些优选化合物 (R2、R3 和 R4 为 H, D1 和 D2 为 CH，X 为 H，和 A 为 NH) *如果没有指定，R6-R9 = H要认识到本发明的某些化合物可以以一种或多种不同的对映体或非对映体形式 存在。应该理解，所述对映体或非对映体形式都被包括在本发明的上述各个方面中。在说明书中自始至终使用的术语“药理学可接受的盐”应该理解为是指任何酸或 碱衍生的盐，所述盐由盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马 酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲烷磺酸、羟乙基磺酸(isoethonic acid)等，以及碳酸钾、氢氧化钠或氢氧化钾、氨水、三乙胺、三乙醇胺等形成。在本发明的一些实施方案中，式(I)或(III)的化合物的盐是与以下的酸形成的 盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、羧酸、磺酸、硫代酸(sulfoacid)或膦酸(phospho acid)、乙酸、 丙酸、羟基乙酸、琥珀酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、乳酸、 草酸、葡糖酸、葡糖二酸、葡糖醛酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、水杨酸、4-氨基水杨 酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、扑酸、烟酸、异烟酸、氨基酸、谷氨酸、天冬氨酸、 苯基乙酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羟基乙烷磺酸、乙烷-1，2- 二磺酸、苯磺酸、4-甲基苯磺酸、 萘-2-磺酸、萘-1，5- 二磺酸、2-或3-磷酸甘油酸、葡糖-6-磷酸、N-环己基氨基磺酸、和 抗坏血酸。在一些实施方案中，所述盐为钠盐、钙盐、锂盐、钾盐、铵盐、或三烷基铵盐。在一些优选的实施方案中，Z为Q1、Q2、Q 3、Q4、Q9、或Q10。在一些优选的实施方 案中，所述化合物为式(III)的结构，尺6、矿、铲、和1 9各自为1^为!^为0)冊或冊0); Z为Q2或Q9 ;A为NH，和Z连接在m或ρ位。在一些优选的实施方案中，所述化合物为式 (III)的结构，铲、矿、铲、和R9各自为H ;Χ为H ;Υ为C0NH，Z为Q2 ；A为NH ；和Z连接在ρ位。 在一些优选的实施方案中，所述化合物为式(III)的结构，R6、R7、R8、和R9各自为Η;Χ为H; Y为CONH ；Z为Q9 ;Α为NH ；和Z连接在ρ位。在一些优选的实施方案中，所述化合物为式 (III)的结构，R6、R7、R8、禾口 R9各自为H ;Χ为H ；Y为CONH或NHCO ；Z为Q2 ;Α为ΝΗ，和Z连 接在m位。在一些优选的实施方案中，所述化合物为式(III)的结构，R6、R8、和R9各自为H; R7为We2 ；X为H ;Y为CONH或NHCO ；Z为Q2 ;Α为ΝΗ，和Z连接在m位。在一些优选的实施 方案中，所述化合物为式(III)的结构，R6、R8、和R9各自为H;R7为Cl ；X为H ;Y为CONH ;Z 为Q2 ；A为NH，和Z连接在ρ位。在一些优选的实施方案中，所述化合物为式(III)的结构， 尺6、1 7、1 8、和1 9分别为!^、或(1。在一些实施方案中，Z为Q9、Q39或Q42。在其它更具体 的实施方案中，所述化合物是式(III)的结构，R6、R7、R8和R9各自为H;X为H;Y为CONH或 NHCO ；Z为Q9、Q39或Q42 ;A为S 为0 ；且Z连接在m或ρ位上。在其它具体的实施方案 中，所述化合物是式(III)的结构，R6、R7、R8和R9各自为H ;Χ为H ;Υ为CONH, Z为Q9 ;Α为 S 为0;且Z连接在ρ位上。在其它具体的实施方案中，所述化合物是式(III)的结构， R6> R7> R8和R9各自为H ;X为H ;Y为CONH ；Z为Q39 ;Α为S ;w为0 ；且Z连接在ρ位上。在 另外其它具体的实施方案中，所述化合物是式(III)的结构，R6 > R7、R8和R9各自为Η;Χ为 H ;Υ为CONH ；Z为Q42 ;Α为S ;w为0 ；且Z连接在ρ位上。本发明的一个方面为药物组合物，所述药物组合物包括上述定义的式(I)或 (III)的化合物、盐、或前体药物，和药学可接受的载体。在所述药物组合物的一些实施方案 中，所述化合物、盐或前体药物为固体形式。在一些实施方案中，所述药物组合物为口服剂 型。在一些实施方案中，所述药物组合物为可注射的剂型。在一些实施方案中，所述药物组 合物为局部用剂型。本发明的一个方面为抑制细胞中的DNA甲基化的方法，包括使细胞接触上述定 义的式⑴或(III)的化合物或其盐或前体药物，使得细胞中的DNA甲基化活性受到抑制。本发明的一个方面为抑制细胞中DNA甲基化的方法，包括使细胞接触上述定义 在式(I)或(III)在化合物或其盐或前体药物，使得细胞中的DNA甲基转移酶活性受到抑 制。在一些实施方案中，通过DNA甲基转移酶DNMTl的降解抑制DNA甲基转移酶的活性。 在一些实施方案中，所述接触步骤包括使细胞接触生物学有效量的上述定义的式(I)或(III)的化合物或其盐或前体药物，使得细胞中DNA甲基转移酶DNMTl的活性被抑制至少 50%。在一些实施方案中，所述接触步骤包括使细胞接触生物学有效量的上述定义的式(I) 或(III)的化合物或其盐或前体药物，使得细胞中DNA甲基转移酶DNMTl的活性被抑制至 少 25%。本发明的一个方面为用于使细胞中DNA甲基化被抑制的基因的活性恢复的方法， 包括使细胞接触生物学有效量的上述定义的式(I)或(III)的化合物或其盐或前体药物， 使得DNA甲基化被抑制的基因的活性相对于没有所述化合物、盐、或前体药物的存在下的 情况升高至少25%。在一些实施方案中，接触的步骤包括使细胞接触生物学有效量的上述 定义的式(I)或(III)的化合物或其盐或前体药物，使得DNA-甲基化被抑制的基因的转 录物的转录活性或转录水平升高至少25%。在一些实施方案中，所述DNA甲基化被抑制的 基因选自以下的组14-3-3 Sigma, ABLl (Pl)、ABO、APC, AR(雄激素受体)、BLTl (白细胞 三烯Β4受体)、BRCAl、CALCA (降钙素)、CASP8 (半胱天冬酶8)、小窝蛋白1、CD44、CFTR、 C0X2、CSPG2(多能聚糖)、CX26(连接蛋白26)、Cyclin(细胞周期调节蛋白)A1、DBCCRU ECAD (上皮细胞钙粘蛋白)、内皮缩血管肽受体B、EPHA3、EPO (红细胞生成素)、ER(雌激 素受体)、FHIT、GPC3 (磷脂酰肌醇聚糖3)、GST-pi、H19、H-钙粘着蛋白(CDH13)、γ -球 蛋白、HIC1、hMLHl、H0XA5、IGF2 (胰岛素样生长因子 II)、IGFBP7、IRF7、LKBU LRP-2 (巨 蛋白)、MDGI (乳房来源的生长抑制剂)、MDRl、MDR3 (PGY3)、MGMT (06甲基鸟嘌呤甲基转移 酶)、MUC2、MYODU N33、NEP (中性肽链内切酶24. 1)/CALLA, NIS (碘化钠同向转运基因)、 P14/ARF、P15(CDKN2B)、P16(CDKN2A)、P27KIPl、p57 KIP2、PAX6、PgR(孕酮受体)、RAR-β 2、 RASSFl、RBl (视网膜母细胞瘤)、TERT、TESTIN、TGFBRI、THBSl (凝血酶敏感蛋白-1)、 TIMP3、TLS3 (T-网素)、尿激酶(uPA)、VHL (脑视网膜血管瘤)、WTl、和Z02 (闭锁小带2)。 M.D. ANderson Cancer Center的网址提供关于这些肿瘤抑制基因的详细信息。参见www. mdanderson. org/departments/methylation/dlndex. cfm？ pn = D02B3250-57D7-4F61-88 358636A8073A08的网址，其被全文并入本文作为参考。本发明的一个方面为用于治疗患有与异常的DNA甲基化有关的疾病的患者的方 法，包括对所述患者给予药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的上述定义的式 (I)或(III)的化合物或其盐或前体药物和药学可接受的载体。在一些实施方案中，所 述组合物通过以下的途径给药口服给药、非肠道给药、局部给药、腹膜内给药、静脉内给 药、动脉内给药、透皮给药、舌下给药、肌肉内给药、直肠给药、经口含化给药、鼻内给药、脂 质体给药、通过吸入给药、阴道给药、眼内给药、通过局部递送给药、皮下给药、脂肪内给药 (intraadiposally)、关节内给药、或鞘内给药。在一些实施方案中，所述药物组合物为口 服给药。在一些实施方案中，所述方法另外包括对所述患者给予与所述药物组合物组合的 第二治疗剂。在一些实施方案中，所述第二治疗剂为地西他滨或阿扎胞苷。在一些实施方 案中，所述第二治疗剂选自组蛋白脱酰基酶抑制剂、抗生素药、烷化剂、维甲酸类、激素药、 植物来源的药物、生物学药、白细胞介素、干扰素、细胞因子、免疫调节剂、和单克隆抗体。 在一些实施方案中，所述组蛋白脱酰基酶抑制剂选自曲古抑菌素A、软木酰基苯胺异羟肟 酸、oxamflatin、软木酸双异羟肟酸、间羧酸肉桂酸双异羟肟酸、pyroxamide, trapoxin A、 apicidin、缩酚酸肽、N-(2-氨基苯基)-4-[N-(卩比啶-3-基甲氧基羰基)氨基甲基]苯甲 酰胺、丁酸、丁酸苯酯和精氨酸丁酸酯。
在一些实施方案中，所述与异常的DNA甲基化有关的疾病选自血液学病症、良性 肿瘤和癌症。在一些实施方案中，所述血液学病症选自急性骨髓性白血病、急性早幼粒细胞 性白血病、急性淋巴母细胞性白血病、慢性粒性白血病、脊髓发育异常综合征、和镰刀形红 细胞贫血病。在一些实施方案中，所述疾病为癌症，并且选自以下乳腺癌、皮肤癌、骨癌、前 列腺癌、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、脑癌、喉癌、胆囊癌、胰腺癌、直肠癌、甲状旁腺癌、甲状 腺癌、肾上腺癌、神经组织癌、头和颈癌、结肠癌、胃癌、支气管癌、和肾癌、基底细胞癌、溃疡 型和乳头型鳞状细胞癌、转移性皮肤癌、骨肉瘤、尤因肉瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(veticulum cell sarcoma)、骨髓瘤、巨细胞瘤、小细胞肺肿瘤、胆结石、胰岛细胞瘤、原发性脑肿瘤、急 性和慢性淋巴细胞瘤和粒细胞瘤、毛细胞瘤、腺瘤、过度增生、髓样癌、嗜铬细胞瘤、黏膜神 经瘤(mucosal neuronms)、肠道神经节细胞瘤(intestinalganglloneuromas)、±曾生性角膜 神经瘤、类马凡氏体型(marfanoidhabitus)肿瘤、Wilm’ s瘤、精原细胞瘤、卵巢肿瘤、平滑 肌瘤、子宫颈非典型增生和原位癌、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、软组织肉瘤、恶性类癌 瘤、局部的皮肤病损、蕈样肉芽肿(mycosis fimgoide)、横纹肌肉瘤、卡波济氏肉瘤、骨源性 肉瘤、恶性血钙过多、肾细胞肿瘤、真性红细胞增多症(polycythermia vera)、腺癌、多形性 胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforma)、白血病、淋巴瘤、恶性黑色素瘤、和表皮样癌。在又一个方面中，本发明提供用于抑制细胞中的DNA甲基化的方法，包括使细胞 接触上述定义的式(I)或(III)的化合物或其盐或前体药物，使得细胞中的DNA甲基化活 性相对于给予化合物之前的DNA甲基化活性得到抑制，优选被抑制25%，更优选优选被抑 制 50%。在又一个方面中，本发明提供用于选择性抑制细胞中的DNA甲基转移酶DNMTl活 性的方法，包括使细胞接触本发明的化合物，使得细胞中的DNA甲基转移酶DNMTl的活性 被抑制的程度大于DNA甲基转移酶DNMT3a或DNMT3b被抑制的程度。根据所述方法，DNA甲基转移酶DNMTl的活性通过DNA甲基转移酶DNMTl的降解 而得到抑制。根据所述方法，接触的步骤包括使细胞接触生物学有效量的本发明的化合物，使 得细胞中的DNA甲基转移酶DNMTl活性被抑制至少50%。根据所述方法，接触的步骤包括使细胞接触生物学有效量的本发明的化合物，使 得细胞中的DNA甲基转移酶DNMTl活性被抑制至少25%。在又一个方面中，本发明提供用于恢复细胞中的DNA甲基化被抑制的基因的活性 的方法，包括使细胞接触生物学有效量的本发明的化合物，使得DNA甲基化被抑制的基因 的活性相对于没有化合物存在的情况升高至少25%，优选升高至少50%。DNA甲基化被抑 制的基因的活性包括但不限于甲基化受到抑制的基因的转录活性。在又一个方面中，本发明提供用于治疗患有与异常的DNA甲基化有关的疾病的患 者的方法，包括对所述患者给予药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的上述定义 的式(I)或(III)的化合物或其盐或前体药物和药学可接受的载体。根据所述方法，所述组合物通过以下的途径给药口服给药、非肠道给药、局部给 药、腹膜内给药、静脉内给药、动脉内给药、透皮给药、舌下给药、肌肉内给药、直肠给药、经 口含化给药、鼻内给药、脂质体给药、通过吸入给药、阴道给药、眼内给药、通过局部递送给 药、皮下给药、脂肪内给药、关节内给药、或鞘内给药。
根据所述方法，所述方法另外包括对患者给予与所述药物组合物组合的第二治 疗剂。根据所述方法，所述第二治疗剂可以是地西他滨或阿扎胞苷。根据所述方法，所述第二治疗剂可以选自组蛋白脱酰基酶抑制剂、抗生素药、烷化 剂、维甲酸类、激素药、植物来源的药剂、生物学药剂、白细胞介素、干扰素、细胞因子、免疫 调节剂、和单克隆抗体。根据所述方法，所述与异常的DNA甲基化有关的疾病选自血液学病症、良性肿瘤 禾口癌症。癌症的实例包括但不限于急性骨髓性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、急性淋 巴母细胞性白血病、慢性粒性白血病、脊髓发育异常综合征、和镰刀形红细胞贫血病。血液学病症的实例包括但不限于乳腺癌、皮肤癌、骨癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、非 小细胞肺癌、脑癌、喉癌、胆囊癌、胰腺癌、直肠癌、甲状旁腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、神经 组织癌、头和颈癌、结肠癌、胃癌、支气管癌、和肾癌、基底细胞癌、溃疡型和乳头型鳞状细 胞癌、转移性皮肤癌、骨肉瘤、尤因肉瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(veticulum cell sarcoma)、 骨髓瘤、巨细胞瘤、小细胞肺肿瘤、胆结石、胰岛细胞瘤、原发性脑肿瘤、急性和慢性淋巴细 胞瘤和粒细胞瘤、毛细胞瘤、腺瘤、过度增生、髓样癌、嗜铬细胞瘤、黏膜神经瘤(mucosal neuronms)、肠道神经节细胞瘤(intestinalganglloneuromas)、增生性角膜神经瘤、类马凡 氏体型(marfanoidhabitus)肿瘤、Wilm’ s瘤、精原细胞瘤、卵巢肿瘤、平滑肌瘤、子宫颈非 典型增生和原位癌、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、软组织肉瘤、恶性类癌瘤、局部的皮肤 病损、蕈样肉芽肿(mycosis fimgoide)、横纹肌肉瘤、卡波济氏肉瘤、骨源性肉瘤、恶性高血 钙症、肾细胞肿瘤、真性红细胞增多症(polycythermia vera)、腺癌、多形性胶质母细胞瘤 (glioblastoma multiforma)、白血病、淋巴瘤、恶性黑色素瘤、和表皮样癌。本发明另外的方面可以从以下描述变得显而易见，以下描述只是作为例子给出， 并且参考了随附的合成反应方案。参考文献的并入在本说明书提及的所有的出版物和专利申请都被并入本文作为参考，相当于明确 地和分别地表明每个单独的出版物和专利申请都被并入作为参考的程度。附图简述

图1举例说明由不同浓度的本发明的代表性化合物引起的ρ 16的RNA表达水平的升高。发明详述尽管本文中已经展示和描述了本发明的优选实施方案，但是对于本领域技术人员 显而易见的是，这种实施方案只是通过例子提供。可以由本领域技术人员想到许多的变体、 变化、和替换而不背离本发明。应该理解，本文中所述的本发明的实施方案的各种替代方案 都可以用于实践本发明。意在随后的权利要求定义本发明的范围，并且由此涵盖这些权利 要求范围内的方法和结构及其等价物。本发明提供喹啉衍生物的化合物、组合物、制剂、试剂盒、用法和生产方法，更具体 地，涉及4-苯胺基喹啉衍生物，作为DNA甲基化酶的抑制剂、DNA甲基化的调节剂和用于预 防或治疗与DNA甲基化异常有关的疾病(例如，癌症和血液学恶性肿瘤)的治疗剂。
我们已经出乎意料地发现一系列4-苯胺基喹啉化合物(例如，式⑴或式(III) 的化合物)通过选择性地降解DNMTl而特异性地抑制DNA甲基转移酶DNMTl的细胞功 能。相比之下，以前的4-苯胺基喹啉鐺双季盐已经表现出结合于DNA小沟(Leupin等人， Biochemistry，1986，25，5902 ;Squire 等人，Nucleic Acids Res.，1997，25，4072)。这些 化合物已经表现出为细胞毒的，并且最初是作为抗癌药开发的。(Atwell & Cain，J.Med. Chem.，1973，16，673 ；Denny 等人，J.Med· Chem.，1979，22，134)，但是发现被考虑用于临床 试验的实例(NSC 176319)毒性太大(Plowman & Adamson, Pharmacol.，1978，17，61)。尽管不希望束缚于本发明化合物的确切作用机制，但是我们认为本发明的4-苯 胺基喹啉衍生物与现有技术的4-苯胺基喹啉鐺双季盐相比应该在抑制DNMTl和/或抑制 细胞中的DNA甲基化方面更具特异性，这是由于它们具有较少的带电的取代基或者由具有 较低PKa值的基团取代季喹啉鐺和/或吡啶鐺官能团。因此，本发明化合物应该具有降低 的细胞毒性，并且更特异性地调节细胞中的DNA甲基化活性。1.制备本发明化合物的方法本发明的化合物可以通过以下反应方案1-6中所示的方法制备，并且在具体的实 施例中给出。在反应方案1中，其中Y为CONH和Z为Ql的式(I)的化合物的制备可以通过使 4_(吡啶基)吡啶鐺与硝基苯胺(2)反应，用H2/Pd将其还原为胺(3)，然后使其与4-硝基 苯甲酸反应，得到酰胺(6)，将其季铵化(例如，用MeOTs)，得到吡啶鐺化合物(7)。将这些 化合物用铁粉/HCl还原，得到胺(8)，使其与4-氯喹啉偶联并且在必要的情况下经过另外 的处理，得到式(I)的化合物。 在反应方案2中，其中Y为NHCO和Z为Ql的式(I)的化合物可以如下制备，使用 偶联剂例如EDCI或CDI使N-乙酰基氨基苯甲酸(9)与4-硝基苯胺反应，得到酰胺(10)， 将其用含稀HCl的1，4-二噁烷水解，得到胺(11)。使其与4-吡啶基吡啶鐺氯化物反应，得 到胺(12)。如上所述将其季铵化(例如，用MeOTs)，得到吡啶鐺化合物(13)，将其还原为胺 (14)，然后如前所述与4-氯喹啉偶联，并且在必要的情况下经过另外的处理，得到式(I)的 化合物。 在反应方案3中，其中Y为NHCO和Z为Q3的式⑴的化合物可以如下制备， 使4-氯喹啉(15)和4-乙酰基氨基苯胺(16)偶联，得到苯胺基喹啉(17)，将其去封闭 (deblocking)，得到苯胺基喹啉(18)。使乙酰基苯甲酸(19)与氨基胍反应，得到脒基腙 (guanylhydrazones) (20)，使用EDCI或其它偶联剂使其与苯胺基喹啉(18)偶联，得到式I 的化合物。
方者3
⑴ 2-氛基胍/MeOH/c. HC/回流；(ii) Et0H/H20(2:l)/c.HC/回流；(iii)2N HC/EtOH/ 回流；(iv)EDCI/DMAP/DMF/RT在反应方案4中，其中Y为NHCO和Z为Q2的式(I)的化合物可以如下制备，使 4_苯胺基喹啉(18)与N-乙酰基苯甲酸(21)偶联，得到酰胺(22)，将其水解为胺(23)，然 后与2-氨基-6-氯-4-甲基嘧啶反应，得到式I的化合物。 在反应方案5中，其中Y为CONH和Z为Q3的式(I)的化合物可以如下制备，使硝 基苯乙酮(24)与氨基胍反应，随后用Fe/HCl(25)还原产物脒基腙，得到胺(26)。使其与 4-硝基苯甲酰氯反应，并且再次将产物酰胺(27)还原为胺(28)。然后使其与4-氯喹啉偶联，得到式I的化合物。

式(I)的化合物 其中R表示R6-R9
厂 27: X = NO2 11 28: X = NH2
(i)氛基胍/MeOH/.c. HC/回流；
(ii)Fe粉/Et0H/H20/cat HCl/回 流；(111)4-确基笨曱酰氯/吡啶/ 二嚙烷/回流；(iv)4-氯喹琳 /EtOH/cat. HCl/回流在反应方案6中，其中Y为CONH和Z为Q2的式⑴的化合物可以如下制备，使硝 基苯胺(2)与2-氨基-6-氯-4-甲基嘧啶偶联，并且用Fe/HCl还原得到的产物(27)，得到 胺(28)。使其与4-硝基苯甲酰氯偶联，并且如前所述将产物酰胺(29)还原，得到胺(30)。 如上所述使其与4-氯喹啉偶联，得到式(I)的化合物。
式(I )的化合物 其中R表示RH^
Η「29: X = NO2 “ 30: X = NH2
(i)2-氨基-6-氯-4-曱基嘧啶/2-乙氧基乙醇， C.HCI，回流；(ii)Fe/2:1 EtOHiH20,2% ν/ν AcOH/回流，(iii)4-硝基笨曱酰氯/吡啶， 二嚙烷 / ~ 50 "C ； (iv)4-氯喹啉 /1:2: Et0H:H20/cat.c.HCl/回流式⑴化合物，其中A为S，可以根据方案7制备。适当取代的硫醇，其中X为 NO2 (31)或NH2(32)，可以与氯代Q衍生物(33)反应，其中33表示Q1-Q43中任何一个，其中 A (或在Q3的情况下，在连接点处的键)被Cl替代，得到结构34 (X = NO2)或35 (X = NH2) 的化合物。结构34的化合物可以用适当的还原剂(例如铁和盐酸)还原得到结构35的化 合物。适当取代的苯甲酰氯(36)与结构35的化合物反应得到结构37的化合物。用适当 的还原剂(例如铁和盐酸)还原结构37的化合物得到结构38的化合物。结构38的化合 物与适当取代的4-氯喹啉(39)反应得到结构(I)的化合物，其中Q表示Q1-Q43中的任何 一个且w为O。用适当的氧化剂(例如间氯过苯甲酸)进一步氧化得到结构(I)的化合物， 其中表示Q1-Q43中的任何一个且w为1或2。
式I化合物(W=I或2 )
式I化合物(W=O )本发明的喹啉衍生物包括其任何药学可接受的盐、酯、或这种酯的盐、或在对包括 人在内的动物给药时能够提供(直接地或间接地)其生物学活性代谢物或残基的任何其它 化合物。因此，例如，本公开还涉及本发明化合物的前体药物和药学可接受的盐，这种前体 药物的药学可接受的盐、和其它生物等价物。术语“前体药物”表示制备为无活性形式的治疗剂，其在体内或细胞中在内源性酶 或其它化学试剂和/或条件的作用下转化为活性形式(即，药物)。特别地，本发明的喹啉 衍生物的前体药物形式可以通过使用包含羧基的有机化合物与化合物中的任何羟基基团 形成一个或多个酯键来制备，或者根据WO 93/2451、或WO 94/26764和美国专利5，770，713 中公开的方法制备为SATE[(S-乙酰基-2-巯基乙基)磷酸酯)衍生物。术语“药学可接受的盐”是指本发明化合物的生理和药学可接受的盐，S卩，在此保 持了母体化合物的希望的生物活性但是没有赋予不希望的毒理学作用的盐。因此，优选排 除4-苯胺基喹啉鐺双季盐。药学可接受的碱加成盐是与金属或胺形成的，例如碱金属和碱土金属或有机胺。 用作阳离子的金属的实例为钠、钾、镁、钙等。适合的胺的实例为N，N' _ 二苄基乙二胺、氯 普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、二环己基胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺、和普鲁卡因(参见例如， Berge 等人，“Pharmaceutical Salts, “ J. of Pharma Sci.，1977，66，1-19)。所述酸性 化合物的碱加成盐是通过使游离酸形式与充分量的所需碱以常规方式接触而形成盐来制 备的。可以通过使盐接触一种酸并且以常规方式分离游离酸来使游离酸形式再生。游离酸 形式在某些物理性能(例如，在极性溶剂中的溶解度)方面与它们各自的盐形式略有不同，但是对于本发明的目的，盐在其它方面是与它们各自的游离酸相同的。如本文中使用的，“药物加成盐”包括本发明的组合物的一种酸形式组分的药学可 接受的盐。这些包括胺的有机酸或无机酸盐。适合的药学可接受的盐是本领域中公知的，包 括各种无机酸和有机酸的碱性盐，诸如例如，与无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸或磷酸；与有 机羧酸、磺酸、硫代酸或膦酸或N-取代的胺磺酸，例如乙酸、丙酸、羟基乙酸、琥珀酸、马来 酸、羟基马来酸、甲基马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、乳酸、草酸、葡糖酸、葡糖二酸、葡糖 醛酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙酰氧 基苯甲酸、扑酸、烟酸或异烟酸；和与氨基酸，例如在自然界中在合成蛋白质时涉及的20种 α -氨基酸，例如谷氨酸或天冬氨酸，并且还有苯基乙酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、 乙烷-1，2- 二磺酸、苯磺酸、4-甲基苯磺酸、萘-2-磺酸、萘-1，5- 二磺酸、2-或3-磷酸甘 油酸、葡糖-6-磷酸、N-环己基氨基磺酸(环己烷氨基磺酸盐的形式)，或其它酸性的有机 化合物，例如抗坏血酸。化合物的药学可接受的盐也可以使用药学可接受的阳离子来制备。 适合的药学可接受的阳离子为本领域技术人员公知的，包括碱金属。碱土金属、铵和季铵阳 离子。碳酸盐或碳酸氢盐也是可能的。本发明还包含经过分离的化合物。经过分离的化合物是指化合物占存在于混合物 中的化合物的至少10 %、优选20 %、更优选50 %和最优选80%，并且在生物试验中进行试 验时表现出可检测到的(即，统计显著的)直接或间接的DNA甲基化抑制活性，所述生物试 验例如组合的亚硫酸氢盐限制性内切酶酶切分析或COBRA (Xiong，Ζ. ；Laird, P. W. Nucleic Acids Res. 1997，25，2532-2534)、放射性标记的甲基结合试验(Francis, K. Τ. ；Thompson， R. W. ；Krumdieck, C. L. Am. J. Clin. Nutr. 1977, 30, 2028-2032),和在 Ghoshal 等人 (2005) 11 :4727-41中以及以下实施例部分描述的DNMT试验。优选地，相对于对DNMT3a和 DNMT3b的抑制活性，本发明的化合物选择性地抑制DNMTl的活性。2.本发明的药物制剂根据本发明，本发明的化合物可以配制为药学可接受的组合物，用于治疗各种疾 病和病况。本发明的药学可接受的组合物包括一种或多种本发明的化合物以及一种或多种 无毒的、药学可接受的载体和/或稀释剂和/或助剂和/或赋形剂(所述载体和/或稀释 剂和/或助剂和/或赋形剂在本文中统称为“载体”材料)、以及根据需要的其它活性成分。本发明的化合物通过任何途径给药，优选为适合于这种途径的药物组合物形式， 所述给药途径如以下举例说明的并且依赖于要治疗的病况。所述化合物和组合物可以通过 多种给药途径进行，例如口服给药、非肠道给药、腹膜内给药、静脉内给药、动脉内给药、透 皮给药、舌下给药、肌肉内给药、直肠给药、经口含化给药、鼻内给药、脂质体给药、通过吸入 给药、阴道给药、眼内给药、通过局部递送给药(例如借助导管或支架)、皮下给药、脂肪内 给药、关节内给药、或鞘内给药。所述药物制剂可以任选地另外包括以一定量加入的赋形剂，所述赋形剂的量足以 增加组合物稳定性、保持产品为溶液形式、或预防与给予本发明的制剂有关的副作用(例 如，可能的溃疡、血管的刺激或外渗)。赋形剂的实例包括但不限于甘露醇、山梨醇、乳糖、葡 萄糖、环糊精(例如，α-环糊精、β-环糊精、和Y-环糊精)和改性的、无定形的环糊精 (例如羟丙基_、羟基乙基_、葡糖基_、麦芽糖基_、麦芽三糖基(maltotriosyl-)、羧酰胺基甲基_、羧甲基_、磺基丁基醚_、和二乙基氨基_取代的α、β-、和Y-环糊精)。可以为 此目的使用环糊精例如得自Janssen Pharmaceuticals的Encapsin 或等价物。对于口服给药，所述药物组合物可以为例如片剂、胶囊、悬浮液或液体的形式。所 述药物组合物优选制成包含治疗有效量的活性成分的剂量单元的形式。这种剂量单元的 实例为片剂和胶囊。对于治疗目的，片剂和胶囊可以包含除活性成分之外的常规的载体， 例如，粘合剂例如阿拉伯胶、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、山梨醇、或黄蓍胶；填料例如磷酸钙，甘 氨酸，乳糖，玉米淀粉，山梨醇，或蔗糖；润滑剂例如硬脂酸镁、聚乙二醇、二氧化硅、或滑石； 崩解剂例如马铃薯淀粉，调味剂或着色剂，或可接受的润湿剂。通常为含水或含油的溶液、 悬浮液、乳液、糖浆或酏剂形式的口服的液体制备物可以包含常规的添加剂，例如助悬剂、 乳化剂、非水试剂、防腐剂、着色剂和调味剂。用于液体制备物的添加剂的实例包括阿拉伯 胶、杏仁油、乙醇、精馏椰子油、明胶、葡萄糖浆、甘油、氢化的可食用脂肪、卵磷脂、甲基纤维 素、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、丙二醇、山梨醇、或山梨酸。对于局部应用，本发明的化合物还可以制备为用于施用于皮肤、或鼻子和咽喉的 粘膜的适合形式，并且可以为霜剂、膏剂、液体喷雾剂或吸入剂、锭剂、或咽喉涂剂的形式。 这种局部制剂可以另外包括化合物例如二甲亚砜(DMSO)，以促进活性成分的表面渗透。对于眼和耳的应用，本发明的化合物可以作为在疏水性或亲水性基质中配制的液 体或半液体形式存在，例如膏剂、霜剂、洗液、涂剂或粉剂。对于直肠给药，本发明的化合物可以为与常规的载体(例如，可可脂、蜡或其它甘 油酯)混合的栓剂的形式。或者，本发明的化合物可以为用于在递送时在适当的药学可接受的载体中重构的 粉末形式。所述药物组合物可以通过注射给药。用于非肠道给药的制剂可以为含水或非水的 等渗无菌注射溶液或悬浮液的形式。这些溶液或悬浮液可以从包含一种或多种载体的无菌 的粉末或颗粒制备，所述载体如对于用于口服给药的制剂所述的。化合物可以溶解于聚乙 二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、苯甲醇、氯化钠、和/或各种缓冲液。3.用于给予本发明的化合物/组合物的方法本发明的化合物或制剂可以通过任何途径给药，优选为适合于这种途径的药物组 合物形式，所述给药途径如以下举例说明的并且依赖于要治疗的病况。所述化合物或制剂 可以通过如下的给药途径给药口服给药、非肠道给药、局部给药、腹膜内给药、静脉内给 药、动脉内给药、透皮给药、舌下给药、肌肉内给药、直肠给药、经口含化给药、鼻内给药、脂 质体给药、通过吸入给药、阴道给药、眼内给药、通过局部递送给药(例如，通过导管或支 架)、皮下给药、脂肪内给药、关节内给药、或鞘内给药。本发明的化合物和/或组合物还可 以以缓慢释放剂型给药或共同给药。本发明的化合物和/或组合物可以以任何常规的剂型给药和共同给药。本发明范 围内的共同给药限定为表示将超过一种的治疗剂在并行的治疗过程中给药，以便实现改善 的临床结果。这种共同给药还可以是在时间上共同进行的，也就是说，在重叠的时间段内共 同给药。本发明的化合物或包含本发明化合物的组合物可以以0. l-1000mg/m2的剂量对宿 主给药，任选地为l-200mg/m2，任选地为l_50mg/m2，任选地为l_40mg/m2，任选地为l_30mg/m2，任选地为l_20mg/m2，或任选地为5_30mg/m2。药物制剂可以以任何常规形式与选自以下组的一个或多个成员共同给药，所述组 包括输注流体、治疗性化合物、营养性流体、抗微生物的流体、缓冲液和稳定剂。患者可以静脉内接受所述药物制剂。优选的给药途径为静脉内输注。任选地，本 发明的药物制剂可以直接输注，而无需事先重构。由于增加的制剂稳定性，患者可以灌输药物制剂1、2、3、4、5或更多个小时。延长 的输注时间能够实现给予治疗性制剂的灵活的时间表。作为选择或另外地，可以根据患者的需要调节输注的速度和容积。药物制剂的输 注管理可以根据已有的流程进行。药物制剂可以以任何常规形式与选自以下组的一个或多个成员共同输注，所述组 包括输注流体、治疗性化合物、营养性流体、抗微生物的流体、缓冲液和稳定剂。任选地，可 以将以下治疗性组分与本发明的制剂共同输注，所述治疗性组分包括但不限于抗肿瘤药、 烷化剂、作为维甲酸超家族成员的药物、抗生素药、激素药、植物来源的药物、生物学药剂、 白细胞介素、干扰素、细胞因子、免疫调节剂、和单克隆抗体。本发明范围内的共同输注限定为表示将超过一种的治疗剂在并行的治疗过程中 输注，以便实现改善的临床结果。这种共同输注可以同时、重叠、或顺序地进行。在一个特 定的实例中，药物制剂和输注流体的共同输注可以通过Y形连接器进行。静脉内给药的药物制剂的药代动力学和代谢与静脉内给药的本发明化合物的药 代动力学和代谢相似。4.本发明的药物组合物的联合治疗本发明的化合物或药物制剂可以用于与胞苷类似物联合，所述胞苷类似物例如 5-氮杂-2'-脱氧胞苷(地西他滨)、和5-氮杂-胞苷(阿扎胞苷)。地西他滨是其相关的天然核苷(脱氧胞苷)的拮抗剂。这两种化合物之间唯一的 结构差异在于在地西他滨的胞嘧啶环中的5位存在有氮，而脱氧胞苷在这个位置为碳。地西他滨具有多重的药理学特征。在分子水平，其并入DNA是S期依赖性的。在 细胞水平，地西他滨可以诱导细胞分化并且产生血液学毒性。地西他滨的最重要的功能是其特异性地和有力地抑制DNA甲基化的能力。如上对 于例如CpG岛中胞嘧啶甲基化所述的，胞嘧啶甲基化为5-甲基胞嘧啶发生在DNA的水平。 在细胞内，地西他滨首先通过脱氧胞苷激酶转化为其活性形式，磷酸化的5-氮杂-脱氧胞 苷，所述脱氧胞苷激酶主要在细胞周期的S期过程中合成。地西他滨对脱氧胞苷激酶的催 化位置的亲合力与天然的底物脱氧胞苷相似。在被脱氧胞苷激酶转化为其三磷酸酯形式之 后，地西他滨以与天然底物(dCTP)相似的速度被并入到正在复制的DNA中。Bouchard和 Momparler(1983)Mol. Pharmacol. 24 109-114。将地西他滨结合到DNA链中具有低甲基化作用(hypomethylation effect)。分 化的细胞的每个类别都有自己的不同的甲基化模式。在染色体重复之后，为了保存这种甲 基化模式，母链上的5-甲基胞嘧啶用于互补性子代DNA链的直接甲基化。将胞嘧啶的5位 碳替换为氮妨碍这个正常的DNA甲基化过程。在甲基化的特定位置用地西他滨替换5-甲 基胞嘧啶产生不可逆的DNA甲基转移酶失活，大概是由于在酶和地西他滨之间形成了共价 键。Juttermann 等人(1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91 :11797_11801。通过特异性地抑制DNA甲基转移酶(甲基化所需的酶)，可以预防肿瘤抑制基因的异常甲基化。本发明的化合物或药物制剂可以与组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)联合使用，以便以 协同方式进一步调节基因的转录，例如，用于恢复由组蛋白的超甲基化和乙酰基化沉默的 基因的转录。本发明的化合物或药物制剂可以与组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)联合使用，以便以 协同方式进一步调节基因的转录，例如，用于恢复由组蛋白的超甲基化和乙酰基化沉默的 基因的转录。HDAC在基因的转录沉默中起到重要的作用。组蛋白上的乙酰基化的量由两种类型 酶的相反活性来控制，所述两种类型的酶为组蛋白乙酰基转移酶(HAT)和组蛋白脱乙酰基 酶(HDAC)。这些酶的底物包括位于组蛋白H3、H4、H2A、和H2B的氨基末端尾部中的赖氨酸 残基的e-氨基基团。这些氨基酸残基被HAT乙酰基化，而被HDAC脱乙酰基化。在由HDAC 从组蛋白赖氨酸除去乙酰基基团时，赖氨酸残基恢复正电荷，由此凝缩核小体结构并且使 其中包含的基因沉默。因此，为了激活由组蛋白的脱乙酰基酶沉默的这些基因，应该抑制 HDAC的活性。通过抑制HDAC，组蛋白被乙酰基化并且紧紧地包裹在脱乙酰基化的组蛋白芯 周围的DNA松弛。DNA结构的打开导致特异基因的表达。除了组蛋白的脱乙酰基化之外，HDAC还可以通过脱乙酰基化转录因子调节基因 表达,例如，p53 (肿瘤抑制基因)、GATA-I、TFIIEjn TFIIF0 Gu 和 Roeder (1997) Cell 90 595-606 (p53)；和 Boyes 等人(1998) Nature 396 :594_598 (GATA-I)。HDAC 还通过例如转 录阻抑参与细胞周期调节，所述转录阻抑通过动员HDAC的RB肿瘤抑制剂蛋白质调节的。 Brehm等人(1998) Nature 391 :597_601。因此，HDAC的抑制应该激活肿瘤抑制基因例如 P53和RB的表达，并且从而促进由这些基因诱导的细胞生长抑制、分化和凋亡。如上所述，许多基因(例如，肿瘤抑制基因)的异常的转录沉默直接与癌症和其它 疾病的发病机理有关。DNA中胞嘧啶残基的甲基化以及从组蛋白除去乙酰基基团是基因沉 默的两个主要的机制。由于癌症相关基因的甲基化和/或组蛋白脱乙酰基酶，这些基因的 表达受到抑制或完全沉默。同时，这些基因的表达是诱导转化细胞的生长抑制、分化、和/ 或凋亡性细胞死亡所需要的。这些基因在转化细胞中的无活性导致这些细胞的不受控制的 增殖，其最后导致癌症。通过将本发明的化合物/组合物与HDAC抑制剂组合，可以有效地使诱导转化细胞 生长抑制、分化和细胞死亡所需要的基因复活。本发明的化合物/组合物抑制所述基因的 DNA甲基化，特别是在调节区中的DNA甲基化，由此导致所述基因的转录活化。同时，HDAC 抑制剂抑制所述基因的核小体芯中的组蛋白的脱乙酰基酶，由此导致组蛋白的脱乙酰基化 的净增加，其又激活所述基因的转录。通过利用这两种互补的机制，所述联合治疗可以更有 效地并且理想地以协同的方式恢复基因转录。具有协同效应的联合治疗应该需要比单独使 用时更少量的每种抑制剂，从而减少与系统给予高剂量抑制剂有关的可能的副作用并且改 善治疗指数。许多抗癌药通过触发涉及由这些肿瘤抑制基因编码的蛋白质的信号转导级联发 挥其抗癌作用。由于这些基因在癌细胞中的不充分表达，可以剧烈地降低或完全地消灭这 些抗肿瘤药的抗癌作用。通过由DNA甲基化和组蛋白脱乙酰基酶外遗传沉默的这些基因的 再活化或再表达，身体固有的防卫机制被调动起来，通过响应于由给予的抗癌药发送的信号恢复对癌细胞的肿瘤抑制功能来对抗疾病。身体固有的肿瘤抑制功能的这种刺激应该引 起对抗癌药的剂量需求降低，从而产生较高的药物治疗指数(即，更大的效力和更低的毒 性)。HDAC的抑制剂包括但不限于以下结构类别1)异羟肟酸、2)环肽类、3)苯甲酰胺 类、和4)短链脂肪酸类。异羟肟酸类和异羟肟酸衍生物的实例包括但不限于曲古抑菌素A(TSA)、软木 酰基苯胺异羟肟酸(SAHA)、0Xamflatin、软木酸双异羟肟酸(SBHA)、间羧基肉桂酸双异 羟肟酸(CBHA)、和pyroxamide。TSA作为抗真菌抗生素分离得到(Tsuji等人(1976) J. Antibiot (Tokyo) 29 :1_6)并且发现是哺乳动物HDAC的有效的抑制剂(Yoshida等人 (1990) J. Biol. Chem. 265 :17174_17179)。TSA耐受性细胞系具有改变的HDAC的发现证明 了这种酶是TSA的重要靶标。其它基于异羟肟酸的HDAC抑制剂、SAHA、SBHAjP CBHA是能 够在体外或体内以微摩尔浓度或更低浓度抑制HDAC的合成的化合物。Glick等人(1999) Cancer Res. 59 :4392_4399。这些基于异羟肟酸的HDAC抑制剂全部具有一个必要的结构特 征通过疏水性亚甲基间隔基(例如，6个碳长度)连接于另一个极性位置的极性的羟肟酸 末端，所述另一个极性位置连接于末端的疏水性基团(例如，苯环)。开发的具有这种基本 特征的化合物也落入可以用作HDAC抑制剂的异羟肟酸类的范围内。用作HDAC抑制剂的环肽类主要是环状的四肽。环肽的实例包括但不限于 trapoxin A、apicidin 和 FR901228。Trapoxin A 是包含一个 2-氨基-8-氧代-9，10-环 氧-癸酰基(AOE)部分的环状的四肽。Kijima等人(1993) J. Biol. Chem. 268 :22429_22435。 Apicidin是一种真菌代谢物，其表现出有力的、广谱的抗原生动物活性并且在纳摩尔 级浓度抑制 HDAC 活性。Darkin-Rattray 等人(1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 ； 13143-13147。FR901228 是从青紫色素杆菌(Chromobacterium violaceum)分离的一种缩 酚酸肽，并且已经表现出在微摩尔级浓度抑制HDAC活性。苯甲酰胺类的实例包括但不限于MS-27-275。Saito等人(1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96 :4592-45970短链脂肪酸类的实例包括但不限于丁酸类(例如，丁酸、精氨酸 丁酸酯和丁酸苯酯(PB)) ο Newmark 等人(1994)Cancer Lett. 78 :1_5 ；和 Carducci 等人 (1997)Anticancer Res. 17 :3972_3973。另外，已经表现出在微摩尔级浓度抑制HDAC的 d印udecin (Kwon 等人(1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95 :3356_3361)也落入本发明的组 蛋白脱乙酰基酶抑制剂的范围内。本发明的化合物或药物制剂还可以用于与其它治疗性组分联合，所述其它治疗性 组分包括但不限于抗肿瘤药、烷化剂、作为维甲酸类超家族成员的药物、抗生素药、激素药、 植物来源的药物、生物学药、白细胞介素、干扰素、细胞因子、免疫调节剂、和单克隆抗体。在一个实施方案中，将烷化剂用于与本发明的化合物/制剂组合使用和/或为本 发明的化合物/制剂添加烷化剂。烷化剂的实例包括但不限于双氯乙基胺类(氮芥类， 例如，苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、双氯乙基甲胺、美法仑、乌拉莫司汀)、氮丙啶类 (例如，塞替派)、烷基酮磺酸酯类(例如，白消安)、亚硝基脲类(例如，卡莫司汀、洛莫司 汀、链佐星)、非经典的烷化剂(六甲密胺、达卡巴嗪、和丙卡巴胼)、钼化合物(卡钼和顺 钼)。在另一个实施方案中，将顺钼、卡钼或环磷酰胺用于与本发明的化合物/制剂组合使用和/或为本发明的化合物/制剂添加顺钼、卡钼或环磷酰胺。在另一个实施方案中，将维甲酸类超家族的成员用于与本发明的化合物/制剂组 合使用和/或为本发明的化合物/制剂添加维甲酸类超家族的成员。维甲酸类是在结构上 和功能上相关的分子家族，其来源于维生素A (全反式视黄醇)或与其有关。维甲酸类的实 例包括但不限于全反式视黄醇、全反式视黄酸(维甲酸)、13-顺式视黄酸(异维甲酸)和 9-顺式视黄酸。在又一个实施方案中，将激素药用于与本发明的化合物/制剂组合使用和/或为 本发明的化合物/制剂添加激素药。这种激素药的实例为合成的雌激素(例如，己烯雌酚)、 抗雌激素药(例如，他莫昔芬、托瑞米芬、氟氢甲睾酮和雷洛昔芬)、抗雄激素(比卡鲁胺、尼 鲁米特、氟他胺)、芳香酶抑制剂(例如，氨鲁米特、阿那曲唑和四唑)、酮康唑、醋酸性瑞林、 醋酸亮丙瑞林、醋酸甲地孕酮和米非司酮。在又一个实施方案中，将植物_起源的药物用于与本发明的化合物/制剂组合使 用和/或为本发明的化合物/制剂添加植物_起源的药物。植物来源的药物的实例包括但 不限于长春花生物碱(例如，长春新碱、长春碱、长春地辛、长春利定和长春瑞滨)、喜树碱 (20 (S)-喜树碱、9-硝基-20 (S)-喜树碱、和9-氨基-20 (S)-喜树碱)、鬼臼毒素(例如，依 托泊苷(VP-16)和替尼泊苷(VM-26))、和紫杉烷类(例如，紫杉醇和多西他赛)。在又一个实施方案中，将生物学药剂用于与本发明的化合物/制剂组合和/或为 本发明的化合物/制剂添加生物学药剂，所述生物学药剂例如免疫调节蛋白，例如细胞因 子、对抗肿瘤抗原的单克隆抗体、肿瘤抑制基因、和癌症疫苗。可以用于与本发明的化合物/制剂组合使用和/或添加到本发明的化合物/制 剂中的白细胞介素的实例包括但不限于白细胞介素2 (IL-2)、和白细胞介素4 (IL-4)、白细 胞介素12(IL-12)。可以用于与地西他滨-甘油制剂组合使用的干扰素的实例包括但不 限于干扰素α、干扰素β (纤维母细胞干扰素)和干扰素Y (纤维母细胞干扰素)。这 种细胞因子的实例包括但不限于红细胞生成素(印oietin)、粒细胞-CSF(非格司亭)、和 粒细胞、巨噬细胞-CSF(沙格司亭)。不同于细胞因子的免疫调节药包括但不限于卡介苗 (baci 1 IusCalmette-Guerin)、左旋咪唑、和奥曲肽。可以用于与本发明的制剂组合使用的对抗肿瘤抗原的单克隆抗体的实例包括但 不限于 HERCEPTIN (Trastruzumab)、RITUXAN (利妥西单抗)、MYLOTARG (抗-CD33 抗体)、和CAMPATH (抗-CD52抗体)。在又一个实施方案中，将激酶抑制剂用于与本发明的化合物/制剂组合和/或添 加到本发明的化合物制剂中，用于治疗与激酶活性异常有关的疾病。在一个变体中，所述酪氨酸激酶抑制剂为甲磺酸伊马替尼(例如，Gleevec )0 甲磺酸伊马替尼是一种蛋白质酪氨酸激酶抑制剂，其抑制在CML中由费城染色体异常产生 的Bcr-Abl酪氨酸激酶。甲磺酸伊马替尼通过结合于Bcr-Abl酪氨酸激酶的三磷腺苷结合 部位而实现这种抑制结果，预防底物的磷酸化作用和相关的恶性转化。通过抑制这种激酶， 认为甲磺酸伊马替尼抑制细胞增殖和诱导凋亡。Τ. Schindler等人(2000) Science 289 1938-1942。在另一个变体中，所述激酶为一种丝氨酸_苏氨酸激酶，例如Raf激酶；并且所述 激酶抑制剂为BAY 43-9006。
在又一个变体中，激酶为蛋白激酶例如Raf-促分裂原活化蛋白激酶(MEK)和蛋白 激酶B (Akt)激酶。在又一个变体中，所述激酶为胞外信号调节激酶(ERK)。ERK抑制剂的实例包括但 不限于 PD98059、PD184352、和 U0126。在又一个变体中，所述激酶为磷脂酰肌醇3'-激酶(PI3K)。PI3K的抑制剂的实 例包括但不限于LY294002。在特定的变体中，所述激酶为酪氨酸激酶。所述酪氨酸激酶可以是受体酪氨酸激 酶和非受体酪氨酸激酶。受体酪氨酸激酶的实例包括但不限于表皮生长因子受体家族(EGFR)、血小板衍生 生长因子受体(PDGFR)家族、血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)家族、神经生长因子受 体(NGFR)家族、成纤维细胞生长因子受体家族(FGFR)、胰岛素受体家族、ephrin受体家族、 Met家族、和Ror家族。表皮生长因子受体家族的实例包括但不限于HER1、HER2/neu、HER3、和HER4。表皮生长因子受体家族的抑制剂的实例包括但不限于HERCEPTIN⑧、 ZD1839 (IRESSA )、PD168393、CI1033、IMC-C225、EKB-569、和共价结合于受体酪氨酸激酶 的Cys残基的抑制剂。与表皮生长因子受体家族的活性异常有关的疾病的实例包括但不限于上皮细胞 的瘤、恶性肿瘤、上呼吸道-消化道(upperaerodigestive tract)的癌、肺癌、和非小细胞肺癌。血管内皮细胞生长因子受体家族的实例包括但不限于VEGFRl、VEGFR2、和 VEGFR3。血管内皮细胞生长因子受体家族的抑制剂的实例包括但不限于SU6668。与血管内皮细胞生长因子受体家族的活性异常有关的疾病的实例包括但不限于 实体瘤和有转移倾向的肿瘤。神经生长因子受体家族的实例包括但不限于trk、trkB和trkC。神经生长因子受体家族的抑制剂的实例包括但不限于CEP-701、CEP-751、和 indocarbazole U^filJ0与神经生长因子受体家族的活性异常有关的疾病的实例包括但不限于前列腺癌、 结肠癌、乳头状癌和甲状腺癌、神经瘤和骨母细胞瘤。Met 家族的实例包括但不限于 Met、TPR-Met, Ron、c_Sea、和 v_Sea。与来自Met家族的受体酪氨酸激酶的活性有关的疾病的实例包括但不限于侵染 性向内生长的肿瘤、恶性肿瘤、甲状腺的乳头状癌、结肠癌、肾癌、胰腺癌、卵巢癌、头部和颈 部的鳞状细胞癌。非受体酪氨酸激酶的实例包括但不限于包括但不限于c-kit家族、Src家族、Fes 家族、JAK家族、Fak家族、Btk家族、Syk/ZAP-70家族、和Abl家族。来自Src家族的非受体酪氨酸激酶的实例包括但不限于Src、c_Src、v_Src、Yes、 c-Yes> v-Yes> Fyn> Lyn> Lck、Blk、Hck、Fgr> c_Fgr、v_Fgr、p561ck、Tkl、Csk、禾口 Ctk0来自Src家族的非受体酪氨酸激酶的抑制剂的实例包括但不限于SUlOl和CGP 57418B。
与来自Src家族的非受体酪氨酸激酶的活性有关的疾病的实例包括但不限于乳 腺癌、恶性肿瘤、骨髓瘤、白血病、和神经母细胞瘤。来自Fes家族的非受体酪氨酸激酶的实例包括但不限于c-fes/fps、v-fps/fes, p94-c-fes-相关蛋白质、和Fer。与来自Fes家族的非受体酪氨酸激酶的活性有关的疾病的实例包括但不限于间 质来源的肿瘤和生血来源的肿瘤。来自JAK家族的非受体酪氨酸激酶的实例包括但不限于Jakl、Jak2、Tyk2、和 Jak30来自JAK家族的非受体酪氨酸激酶的抑制剂的实例包括但不限于酪氨酸磷酸化 抑制剂(tyrphostin)、CIS/SOCS/Jab家族的成员、合成的组分AG490、二甲氧基喹唑啉化 合物、4-(苯基)-氨基-6，7- 二甲氧基喹唑啉、4- (4 ‘-羟基苯基)-氨基-6，7- 二甲氧基 喹唑啉、4-(3 ‘-溴-4'-羟基苯基)_氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉、和4-(3 ‘ ,5' -二 溴-4'-羟基苯基)_氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉。与来自JAK家族的非受体酪氨酸激酶的活性有关的疾病的实例包括但不限于间 质来源的肿瘤和生血来源的肿瘤。来自Fak家族的非受体酪氨酸激酶的实例包括但不限于Fak和CAKi3/Pyk2/ RAFTK0来自Fak家族的非受体酪氨酸激酶的抑制剂的实例包括但不限于显性失活突 变体S1034-FRNK ；来自Isaria sinclarii的代谢物FTY720，和FAK反义寡核苷酸ISIS 15421。与来自Fak家族的非受体酪氨酸激酶的活性异常有关的疾病的实例包括但不限 于人类的恶性肿瘤、有转移倾向的肿瘤、和生血来源的肿瘤。来自Btk家族的非受体酪氨酸激酶的实例包括但不限于Btk/Atk、Itk/Emt/Tsk、 Bmx/Etk、禾口 Itk、Tec、Bmx、禾口 Rlk。来自Btk家族的非受体酪氨酸激酶的抑制剂的实例包括但不限于α-氰 基-β-羟基-β-甲基-Ν-(2，5-二溴苯基)丙烯酰胺。与来自Btk家族的非受体酪氨酸激酶的活性异常有关的疾病的实例包括但不限 于B谱系白血病和淋巴瘤。来自Syk/ZAP-70家族的非受体酪氨酸激酶的实例包括但不限于Syk和ZAP-70。来自Syk/ZAP-70家族的非受体酪氨酸激酶的抑制剂的实例包括但不 限于piCeatarm0l、3，4- 二甲基-10-(3-氨基丙基)-9_吖啶酮草酸盐、吖啶 酮相关化合物、Lys-Leu-Ile-Leu-Phe-Leu-Leu-Leu[SEQID NO 1)肽、和包含 Lys-Leu-11 e-Leu-Phe-Leu-Leu-Leu 基序的妝。与来自Syk/ZAP-70家族的非受体酪氨酸激酶的的活性异常有关的疾病的实例包 括但不限于良性的乳腺癌、乳腺癌、和间质来源的肿瘤。5.本发明的化合物或药物组合物的适应症本发明的药物制剂可以用于治疗各种疾病，优选用于治疗与异常的DNA甲基化有 关的那些疾病。可以使用本发明的药物制剂治疗的优选的适应症包括经常涉及不期望或不受控制的细胞增殖的那些。这种适应症包括良性肿瘤；各种类型的癌症，例如原发肿瘤和肿瘤转 移；再狭窄(例如，冠状动脉、颈动脉、和脑损害)；血液学病症；内皮细胞的异常刺激(动脉 粥样硬化)；由于手术而对身体造成的损害；异常的伤口愈合；异常的血管生成；产生组织 纤维化的疾病；重复性运动病症；非高度血管化的组织的病症；和与器官移植有关的增殖 性反应。通常，良性肿瘤中的细胞保持其分化特征并且不是以完全不受控制的方式分裂。 良性肿瘤通常是局部化的和非转移性的。可以使用本发明治疗的良性肿瘤的具体类型包括 血管瘤、肝细胞性腺瘤、多孔性血管瘤、局灶性结节性增生症、听神经瘤、纤维神经瘤、胆管 腺瘤、胆管cystanoma、纤维瘤、脂肪瘤、平滑肌瘤、间皮瘤、畸胎瘤、粘液瘤、小节再生性过度 增生、颗粒性结膜炎和脓性肉芽肿。恶性肿瘤细胞变为未分化的，对身体的生长控制信号没有响应，并且以不受控制 的方式增殖。恶性肿瘤是侵入性的并且能够扩散到远的位置(转移)。恶性肿瘤通常分为 二类原发的和继发的。原发肿瘤直接地出现在其中发现它们的组织中。继发瘤或转移瘤 是来源于身体的其它地方但是现在扩散到远的器官的肿瘤。转移的常见途径是直接生长到 相邻的结构中，通过血管的或淋巴系统扩散，并且轨迹沿着组织平面和身体的间隙(腹膜 液、脑脊液等)。可以使用本发明治疗的原发或继发的癌症或恶性肿瘤的具体类型包括乳腺癌、 皮肤癌、骨癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、脑癌、喉癌、胆囊癌、胰腺癌、直肠癌、 甲状旁腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、神经组织癌、头和颈癌、结肠癌、胃癌、支气管癌、和肾 癌、基底细胞癌、溃疡型和乳头型鳞状细胞癌、转移性皮肤癌、骨肉瘤、尤因肉瘤、非霍奇 金氏淋巴瘤(veticulum cell sarcoma)、骨髓瘤、巨细胞瘤、小细胞肺肿瘤、胆结石、胰岛 细胞瘤、原发性脑肿瘤、急性和慢性淋巴细胞瘤和粒细胞瘤、毛细胞瘤、腺瘤、过度增生、 髓样癌、嗜铬细胞瘤、黏膜神经瘤(mucosal neuronms)、肠道神经节细胞瘤(intestinal ganglioneuromas)、增生性角膜神经瘤、类马凡氏体型(marfanoid habitus)月中瘤、Wilm，s 瘤、精原细胞瘤、卵巢肿瘤、平滑肌瘤、子宫颈非典型增生、和原位癌、神经母细胞瘤、视网膜 母细胞瘤、软组织肉瘤、恶性类癌瘤、局部的皮肤病损、蕈样肉芽肿(mycosis fimgoide)、横 纹肌肉瘤、卡波济氏肉瘤、成骨性肉瘤和其它肉瘤、恶性血钙过多、肾细胞肿瘤、真性红细胞 增多症(polycythermia vera)、腺癌、多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforma)、白 血病、淋巴瘤、恶性黑色素瘤、表皮样癌、和其它癌和肉瘤。血液学病症包括可以导致血细胞发育不良变化和血液学恶性肿瘤例如各种白血 病的血细胞异常生长。血液学病症的实例包括但不限于急性骨髓性白血病、急性早幼粒细 胞性白血病、急性淋巴母细胞性白血病、慢性粒性白血病、脊髓发育异常综合征、和镰刀形 红细胞贫血病。急性骨髓性白血病(AML)是在成年人中最常见的急性白血病类型。几种继承的遗 传紊乱和免疫缺陷状态与AML的风险升高有关。这些包括伴有DNA稳定性缺陷的病症，所 述DNA稳定性缺陷导致随机的染色体断裂，例如布卢姆综合征、范科尼贫血、Li-Fraumeni kindreds、共济失调毛细血管扩张、和X-连接的无、球蛋白血症。急性早幼粒细胞性白血病(APML)代表了 AML的不同亚组。这种亚型的特征在于 包含15 ；17染色体易位的早幼粒细胞母细胞。这种易位导致由视黄酸受体和序列PML组成
44的融合转录的生成。急性淋巴母细胞性白血病(ALL)是具有由各种亚型表现出的不同临床特征的异 源性疾病(heterogenerous disease)。已经在ALL中证明了再次发生的细胞遗传异常。最 常见的细胞遗传异常为9 ；22易位。产生的费城染色体代表了患者的差的预后。慢性粒性白血病(CML)是多潜能干细胞的无性系骨髓增生病。CML的特征在于涉 及染色体9和22易位的特定的染色体异常，产生费城染色体。电离辐射与CML的形成有关。脊髓发育异常综合征(MDS)是由于包括骨髓细胞系、红细胞系和巨核细胞系的发 育不良改变在内的一种或多种生血细胞系酸发育不良变化的存在而引起的一组异源性无 性系造血干细胞病症。这些变化导致所述三个谱系中的一种或多种的血细胞减少症。患有 MDS的患者典型地产生与贫血症、嗜中性白细胞减少症(感染)、或血小板减少(出血)有 关的并发症。通常，MDS患者中有约10%到约70%发生急性白血病。由于在手术期间对身体组织的损害引起的异常细胞增殖可能是因为各种手术过 程，包括关节手术、肠手术、和蟹状肿结疤。产生纤维化组织的疾病包括肺气肿。可以使用 本发明治疗的重复性运动病症包括腕管综合征。可以使用本发明治疗的细胞增殖性病症的 实例为骨肿瘤。可以使用本发明治疗的与器官移植有关的增殖性反应包括有助于可能的器官排 斥或相关并发症的增殖性反应。具体地，这种增殖性反应可以发生在心脏、肺、肝脏、肾脏、 和其它身体器官或器官系统的移植过程中。可以使用本发明治疗的异常的血管生成包括伴随以下疾病的那些异常的血管生 成类风湿性关节炎、缺血性再灌注有关的脑水肿和损伤、皮层缺血、卵巢过度增生和血管 过度形成(hypervascularity)、(多囊卵巢综合症)、子宫内膜异位症、牛皮癣、糖尿病性 视网膜病变(diabetic retinopaphy)、和其它的眼的血管生成疾病(例如，早产的视网膜 病(晶状体后的纤维形成))、肌肉变性、角膜移植排斥、neuroscular glaucoma和Oster Webber综合症。与血管生成异常有关的疾病需要或诱导血管的生长。例如，角膜血管生成包括三 个阶段血管前潜伏期、活动的新血管化、和血管的成熟和退化。各种生血管因子的特性和 机制还有待于揭示，包括炎症性应答的因素，例如白细胞、血小板、细胞因子、和类花生酸， 或者未经确认的血浆组分。在另一个实施方案中，本发明的药物制剂可以用于治疗与不期望或异常的血管生 成有关的疾病。所述方法包括对患有不期望或的血管生成的患者给予单独的或与抗肿瘤药 组合的本发明的药物制剂，其中所述抗肿瘤药作为抗肿瘤药的体内活性受到高水平DNA甲 基化的不利影响。抑制血管生成和/或生血管疾病所需的这些药物的具体剂量可以取决于 病况的严重程度、给药途径、和可以由主治医师决定的相关因素。通常，接受的和有效的日 剂量为足以有效抑制血管生成和/或生血管疾病的量。根据这个实施方案，本发明的药物制剂可以用于治疗与不期望的血管生成有关 的各种疾病，例如视网膜/脉络膜的新血管化和角膜的新血管化。视网膜/脉络膜的新 血管化的实例包括但不限于Bests疾病、近视、视窝、Stargarts疾病、佩吉特氏病、静脉闭 塞、动脉闭塞、镰刀形红细胞贫血病、类肉瘤、梅毒、假性弹力性黄色瘤颈动脉阻塞性疾病 (abostructive disease)、慢性葡萄膜炎/玻璃体炎、分枝杆菌感染、莱姆病、系统性红斑狼疮、早产的视网膜病、伊尔斯病、糖尿病性视网膜病、黄斑变性、Bechets疾病、引起视网膜炎 或脉络膜炎的感染、假定的眼组织胞浆菌病、扁平部睫状体炎、慢性视网膜脱离、高粘滞综 合征、弓形体病、创伤和激光后并发症、与潮红(rubesis)有关的疾病(角(angle)的新血 管化)和由维管组织或纤维组织的异常增殖引起的疾病(包括增殖性玻璃体视网膜病变的 所有形式)。角膜新血管化的实例包括但不限于流行性角膜结膜炎、维生素A缺乏症、隐形 眼镜过度使用、异位性角膜炎、高级的边缘性角膜炎、翼状胬肉干燥性角膜炎、Sjogrens^l 斑痤疮、phylectenulosis、糖尿病性视网膜病、早产的视网膜病、角膜移植排斥、莫伦溃疡、 Terrien边缘退化、边缘性角质层分离、多动脉炎、Wegener肉状瘤病、巩膜炎、periphigoid 放射状角膜切开术、新血管性青光眼和晶状体后纤维增生、梅毒、分枝杆菌感染、脂质退化、 化学灼伤、细菌溃疡、真菌溃疡、单纯性疱疹感染、带状疱疹感染、原生动物感染和卡波西肉 瘤。在又一个实施方案中，本发明的药物制剂可以用于治疗与血管生成异常有关的慢 性炎症性疾病。所述方法包括对患有与血管生成异常有关的慢性炎性疾病的患者给予单独 的或与抗肿瘤药组合的本发明的药物制剂，其中所述抗肿瘤药作为抗肿瘤药的体内活性受 到高水平DNA甲基化的不利影响。所述慢性炎症依赖于毛细血管萌芽的连续形成来保持炎 性细胞的内流。炎性细胞的内流和存在产生肉芽瘤，并且由此保持慢性炎症性状态。使用 本发明的药物制剂抑制血管生成可以预防肉芽瘤的形成，从而减轻该疾病。慢性炎性疾病 的实例包括但不限于炎性肠病例如克罗恩病和溃疡性结肠炎、牛皮癣、结节病、和类风湿性 关节炎。炎性肠病例如克罗恩病和溃疡性结肠炎的特征在于在胃肠道的多个位置的慢性 炎症和血管生成。例如，克罗恩病作为慢性的透壁炎性疾病存在，其最通常影响回肠末端和 结肠，但是也可能存在于从口到肛门的胃肠道的任何部分以及肛周区域。克罗恩病患者通 常具有与腹痛、发烧、厌食、体重损失和腹部膨胀有关的慢性腹泻。溃疡性结肠炎也是一种 慢性的、非特异性的、炎症性的和溃疡性的疾病，其出现在结肠粘膜中并且特征在于存在有 血的腹泻。这些炎性肠病通常是由遍及胃肠道的慢性肉芽肿性炎症引起的，包括由炎性细 胞的柱体所围绕的新的毛细血管萌芽。由本发明的药物制剂抑制血管生成应该抑制萌芽的 形成并且预防肉芽瘤的形成。炎性肠病还表现出肠外的表现，例如皮肤损害。这种损害的 特征在于炎症和血管生成，并且可以在胃肠道以外的许多位置发生。由本发明的药物制剂 降低血管生成应该减少炎性细胞的内流并且预防损害形成。作为另一种慢性炎性疾病的结节病的特征在于是一种多系统肉芽肿病症。这种疾 病的肉芽瘤可以形成在身体内任何地方，并且由此，症状取决于肉芽瘤的位置以及疾病是 否为活动的。肉芽瘤由提供炎性细胞的长期供应的血管原的毛细血管萌芽产生。通过使用 本发明的药物制剂来抑制血管生成，可以抑制这种肉芽瘤形成。牛皮癣也是一种慢性的和 复发性的炎性疾病，其特征在于各种大小的丘疹和噬斑。使用本发明的药物制剂进行治疗 应该预防维持特征性病变所需的新血管的形成并且为患者提供症状的缓解。类风湿性关节炎(RA)也是一种慢性的炎性疾病，其特征在于外周关节的非特异 性的炎症。认为关节滑液内层中的血管发生了血管生成。除了形成新的血管网络之外，内 皮细胞释放引起血管翳生长和软骨破坏的因子和活性氧物质。涉及血管生成的因子可以主 动地促进并且帮助保持类风湿性关节炎的慢性炎症状态。使用单独的或与其它抗RA药联合的本发明的药物制剂进行治疗可以预防保持慢性炎症所需的新血管的形成并且为RA患 者提供症状的缓解。在又一个实施方案中，本发明的药物制剂可以用于治疗与血红蛋白合成异常有关 的疾病。所述方法包括对患有与血红蛋白合成异常有关的疾病的患者给予本发明的药物制 剂。由于并入到DNA中的机制涉及DNA低甲基化，包含地西他滨的制剂刺激胎儿血红蛋白 合成。与血红蛋白合成异常有关的疾病的实例包括但不限于镰刀形红细胞贫血病和地 中海贫血。在又一个实施方案中，本发明的药物制剂可以用于控制细胞内的基因表达。所述 方法包括对患有与基因表达水平异常有关的疾病的患者给予本发明的药物制剂。DNA甲基 化与基因表达的控制有关。具体地，促进剂的甲基化或促进剂附近的甲基化抑制转录，而脱 甲基化恢复表达。所述机制的可能的应用的实例包括但不限于治疗性调节的生长抑制、凋 亡的诱导、和细胞分化。由本发明的药物制剂促进的基因活化可以用于治疗目的诱导细胞分化。通过低甲 基化的机制诱导细胞分化。形态和功能的分化的实例包括但不限于分化为形成肌细胞、肌 小管、红细胞和淋巴谱系的细胞。尽管已经描述和叙述了本发明的示例性实施方案，但是对于本领域技术人员显而 易见的是，可以对本文中所述的本发明进行多种的改变、改进、或改造，但是都不脱离本发 明的精神实质。因此，所有这种改变、改进、和改造都被考虑在本发明范围内。
实施例以下实施例是本发明的代表，并且提供了用于制备本发明化合物的详细方法。 在这些实施例中，元素分析在University of Otago, Dunedin, NZ ^ Microchemical Laboratory 进行。在 Electrothermal2300 熔点测定器上测定熔点。在 Bruker Avance-400 光谱仪上以400MHz获得1H NMR光谱和以100MHz得到13C NMR光谱，参考基准为Me4Si。在 VG-70SE质谱仪上测定质谱，使用70eV的电离电位，公称分辨率为1000。根据需要在3000、 5000、或10000的公称分辨率获得高分辨率光谱。除非另有说明，所有的光谱都是通过电子 轰击(EI)使用ΡΠ(作为基准得到。除非另有说明，在硅胶(Merck 230-400目)上进行柱 色谱法。实施例A.1-甲基-4-(3-{[4-(4-喹啉基氨基)苯甲酰基]氨基}苯胺基)吡啶鐺氯化物 (化合物A)的制备
(i)TsGH/180 X ； (ii)H2/Pd/C/MeOH; (iii) 4-硝基笨曱酰氯 / 吡啶 / 二嚙 烷；(iv)DMF/Me()Ts/20r ,然后离子交换；(V)Fe 粉/Et0H/H20; (vi)4-氯喹啉 /MeOH/cat.HCl/回流N-(3-硝基苯基)-4-吡啶胺(A3)。对甲苯磺酸一水合物(17. 4g，0. 126mol)在苯 中的悬浮液共沸10小时。加入苯酚(50g)并且使混合物共沸2小时，然后加入4-吡啶基 吡啶鐺氯化物(26. 6g,0. 138mmol)和3-硝基苯胺(17. 4g,0. 126mmol)并且使混合物共沸3 小时。将苯减压除去并将得到的黑色残余物加热到180°C，维持1小时。将反应混合物冷却 到20°C，并且加入4N NaOH(150mL)。将混合物搅拌30分钟，然后用水(2L)稀释。将这个混 合物在CH2Cl2(IL)中搅拌并将得到的沉淀物过滤并用更多的CH2Cl2洗涤。固体从Me0H/H20 重结晶，得到A3 (11. 9g)，为黄色固体:mp (Me0H/H20) 182_184°C。从CH2Cl2洗液回收另外的 物质，用Na2SO4干燥并且蒸发到干燥。残余物溶解于CH2Cl2 (IOOmL)并且加入己烷(200mL)， 将混合物搅拌16小时。将得到的沉淀物过滤并用乙醚洗涤以除去任何未反应的3-硝基苯 胺，并从MeOHM2O结晶固体，得到另外的A3(3. 2g ；总收率15. 7g,58% ) ；1H NMR [ (CD3) 2S0] δ 9. 28 (s，ΙΗ,ΝΗ) ,8. 31-8. 29 (m，2Η，Η_2，6)，7. 95 (t，J = 2. IHz, 1Η，Η_2' )，7. 82-7. 79 (m, 1Η，Η-4' )，7· 65-7. 57(m，2H，H-5'，Η_6' )，7. 03-7. 02 (m，2Η，Η_3，Η_5)，13CWR [ (CD3) 2S0] δ 150. 5(2XC)，148. 8，148. 6，142. 2，130. 8，124. 8，116. 2，112. 7，110. 2(2XC)；元素分析， C11H9N3O2 :C,61. 4 ；H,4. 2 ；N, 19. 5 ；实测值C，64. 5 ；H,4. 3 ；N. 19. 7%。N1-G-吡啶基)-1，3_ 苯二胺(A4)。将化合物 A3 (7. 26g，33. 7mmol)和 10% Pd/ C在MeOH中的悬浮液氢化2小时，过滤通过硅藻土(Celite)垫，并将溶剂蒸发。残余物 从 Me0H/H20 重结晶，得到 A4，为浅黄色粉末(5. 43g，83%) :mp. (Me0H/H20) 170-171°C。1H NMR[(CD3)2SO] δ 8. 48 (bs, 1H, NH), 8. 14-8. 12(m，2H，Η_2' &6' )，6· 96 (t, J = 7. 9Hz, 1Η, Η-5)，6. 86-6. 84 (m, 2Η, Η_3 ‘ &6 ' )，6. 43 (t，J = 2. OHz, 1Η, Η_2)，6. 32 (dd, J = 7. 8， 1. 3Η, 1Η, Η-6)，6· 26 (dd, J = 7· 8，1. 5Hz, 1Η, Η_4) 5· 07(brs，2H，NH2) ；HRMS (EI+)计算值， C11H11N3 (M+) m/z 185. 0953，实测值 185. 0945 ；元素分析计算值 C11H11N3. 0. 125 H2O =C, 70. 5 ； H, 6. 1 ；N, 22. 5 ；实测值:C,70. 6 ；H, 6. 0 ；N, 22. 7%0N- (4-硝基苯基)-3- (4-吡啶基氨基)苯甲酰胺(A5)。将4_硝基苯甲酸(4. 3g， 16. 36mmol)悬浮在SOCl2 (30mL)中，加入2滴DMF，并将混合物回流1小时(直到得到澄清 的溶液)。将反应混合物冷却到室温并将过量的SOCl2在真空下除去。将得到的残余物溶解 于1，4-二噁烷并且加入到A4 (3. Og, 16. 20mmol)在包含吡啶(8mL)的1，4_ 二噁烷(300mL) 中的悬浮液中。将反应混合物在50°C搅拌16小时，然后将溶剂蒸发。将残余物在稀氨水 中搅拌并将得到的沉淀物过滤和从MeOH结晶，得到A5 (5. 3g，79% ) :mp (MeOH) 219-222°C ； 1H NMRt(CD3)2SO] δ 10. 63 (s, 1H, NH) ,9. 04 (s, 1H, NH) ,8. 37 (d, J = 8·9Ηζ，2Η，ArH), 8. 24-8. 18(m,4H, ArH) , 7. 81 (b s, 1Η, ArH), 7. 45 (d, J = 8. 5Hz, 1Η, ArH) , 7. 34 (t, J =8·0Ηζ，1Η，ArH)，6· 99-6. 95(m，3H，ArH), 13C NMRt(CD3)2SO] δ 166. 9, 164. 0,150. 3,149. 4(2XC) , 149. 1, 140. 5，139. 6，129. 5(2XC)，129. 2，123. 5(2XC)，123. 4, 115. 8， 114. 6，111. 6，109 ；HRMS (FAB+)计算值 C18H15N4O3 (M+1)m/z 335. 1144，实测值 335. 1154。1-甲基-4-{3-[(4_硝基苯胺基)羰基]苯胺基}吡啶鐺氯化物(A6)。向 A5(507mg,1.51mmol)的DMF(2mL)溶液加入对甲苯磺酸甲酯(3mL)，并将反应混合物在室 温搅拌20小时。将溶剂减压除去并将残余物再溶解于MeOH。将这个溶液蒸发到干燥，并 将残余物从MeOH/EtOAc结晶，得到A6，为甲苯磺酸盐(530mg，67%)。如下通过离子交换 将其转化为氯化物盐。将AGkI-X4树脂200-400氯化物形式(7g)用水洗涤并且装柱。甲 苯磺酸盐A6(530mg)在经过预先洗涤的树脂(2g)中搅拌，并将得到的浆状物加载到柱子 上。然后将柱子用水洗脱，并将包含化合物的级分合并并且蒸干。使残余物与MeOH共沸 (3X 20mL，并且最终从MeOH/EtOAc再沉淀，得到A6，为氯化物盐(317mg 54% ) :mp (MeOH/ EtOAc) 295-298 °C。1H 匪R[ (CD3) 2S0] δ 10. 82 (s，1H，NH)，10. 76 (s，1H，NH)，8. 38 (d，J = 8. 9Hz，2H，Ar H)，8. 31 (d, J = 7. 5Hz，2H，ArH), 8. 21 (d, J = 8. 9Hz，2H，ArH), 7. 96 (t, J = 1. 9Hz, 1H, ArH), 7. 64 (dd, J = 8. 7，1. IHz, 1H, ArH), 7. 50 (t, J = 5. 4Hz, 1H, ArH), 7. 22 (d, J = 7. 6Hz，2H，ArH), 7. 11 (dd, J = 7. 9，1. 3Hz, 1H, ArH), 3. 97(s，3H，N+CH3) ；HRMS (FAB+)计 算值 C19H17N4O3 (M+1)m/z 349. 1301，实测值 349. 1303。4-{3_[(4-氨基苯甲酰基)氨基]苯胺基}-l-甲基吡啶鐺二氯化物(A7)。将 A6(1.57g，4. 08mmol)溶解于 5 1 H2O Et0H(62mL)，加入 Fe 粉(1. Ig)，并使得到的悬浮 液在剧烈搅拌下回流5小时。使热的反应混合物过滤通过硅藻土垫，并将硅藻土垫用热的 EtOH洗涤。将合并的EtOH级分蒸发到干燥，并将残余物用温水提取。将这个溶液蒸发到干 燥，并通过与甲醇共沸(3X30mL)干燥残余物。将残余物溶解于MeOH (20mL)，加入盐酸甲 醇(1.25M，5mL)，并将溶液搅拌30分钟。将溶液蒸发到干燥，通过与MeOH(3 X 30mL)共沸干 燥残余物。残余物最后从MeOH/EtOAc结晶，得到A7(913mg，63% )，为白色固体mp (MeOH/ EtOAc) 269-273 "C ；1H 匪R[ (CD3)2SO] δ 10. 76 (s, 1H, NH)，10. 05 (s，1H，NH) ,8. 29 (d, J =
7.4Hz,2H, ArH)，7. 95 (t, J=L 9Hz, 1H, ArH)，7. 78 (d, J = 8. 7Hz,2H, ArH)，7. 60 (dd, J =
8.7，1. IHz, 1Η, ArH)，7. 60 (t, J = 8. IHz, IH ArH)，7. 20 (d, J = 7. 5Ηζ,2Η, Ar H)，7. 00 (dd, J = 7· 9，1. 4Hz, 1Η, ArH), 6. 72 (d, J = 8. 6Ηζ，2Η，ArH), 3. 96(s，3H，N+CH3)没有观察到 NH2 的信号；HRMS (FAB+)计算值 C19H19N4O (M+) m/z 319. 1559，实测值 319. 1562。分析 CRL11720， 计算值 C19H20N4Cl2O :C,58. 3 ；H, 5. 4 ；N, 14. 3 ；实测值=C, 58. 7 ；H, 5. 3 ；N, 14. 5%01-甲基-4-(3-{[4-(4-喹啉基氨基)苯甲酰基]氨基}苯胺基)吡啶鐺氯化物 (化合物A)。向A7(200mg，0. 51mmol)在MeOH(20mL)中的悬浮液加入4-氯喹啉(IOOmg, 0.61mmol)，并将混合物加热回流1小时(直到得到澄清的溶液)。然后加入一滴浓HC1，并 继续回流另外的20小时。将反应混合物蒸发到干燥，并将残余物溶解于MeOH(IOmL)。然后 加入EtOAc (50mL)，并将MeOH沸腾除去。将得到的沉淀物过滤，用EtOAc洗涤，并且从MeOH/ EtOAc 结晶，得到化合物 A(214mg，81% )，为浅黄色固体:mp 253_257°C ；1H NMR[ (CD3)2S0] δ 11. 07(br,1H, NH)，10. 79 (s,1H, NH)，10. 60 (s,1H, NH)，8. 84 (d, J = 13. 5Hz,1H, ArH)， 8. 61 (d, J = 6. 9Hz, 1H, ArH), 8. 31 (d, J = 7. 4Hz，2H，ArH), 8. 18 (d, J = 8. 6Hz，2H，ArH)， 8. 12-8. 04 (m, 2H, ArH), 7. 99 (br s, 1Η, ArH), 7. 84 (t, J = 7. 2Hz, 1Η, ArH), 7. 68 (d, J = 8. 5Hz，2H，Ar H), 7. 49 (t, J = 8. IHz, ΙΗ,Αγ H), 7. 23 (d, J = 7. 5Hz, 2Η, ArH), 7. 10 (br d, J = 7. 8Hz, 1Η, Ar H)，7. 01(d，J = 6. 7Hz, 1Η, ArH), 3. 98(s，3H，N+CH3 ； 13C 匪R [(CD3)2SO]δ 164. 8，154. 6，154. 3，144. 2，142. 8，140. 5，140. 3，138. 3，137. 3，133. 8，132. 5，129. 8， 129. 4(2XC) , 127. 0，124. 4(2XC)，124. 1, 120. 2, 118. 0, 117. 9, 117. 5, 114. 5, 109. 2， 100. 3，44. 6，难以观察到两个碳信号的增强；HRMS (FAB+)计算值C28H24N5O 446. 1981，实测 it 446. 1975 ；元素分析，计算值 C28H25Cl2N5O. 2. 25 H2O =C, 60. 2 ；H, 5. 3 ；N, 12. 5 ；实测值=C, 60. 1 ；H, 5. 3 ；N, 12. 5%0实施例B.1-甲基-4- (4- (4-(喹啉_4_基氨基)苯甲酰氨基)苯基氨基)吡啶鐺氯化物盐 酸盐(化合物B)的制备
(i)TsOH/180 X ； (ii)H2/Pd/C/MeOH; (iii)4-硝基苯甲酰氯 / 吡啶 / 二嚙 烷；(iv)DMF/Me()Ts/20 C，然后离子交换；(V)Fe 粉/EtOH/HzO ； (vi)4-氯喹啉 /MeOH/cat.HCl/回流N-4-硝基苯基)-4-吡啶胺(B 3)。将4_甲苯磺酸(53. 80g, 0. 28mol)溶解于苯 (200mL)并将得到的溶液在Dean-Stark条件下回流大约96小时，直到H2O的产出停止。向 这个溶液加入苯酚(112. 25g，1. 19mol)，并将得到的混合物在Dean-Stark条件下回流大约 1小时，直到H2O的产出停止。此后，加入1-(4-吡啶基)-吡啶鐺氯化物(59. 95g，0. 31mol) (A2)和4-硝基苯胺(Bi)，并将得到的混合物在Dean-Stark条件下回流大约2小时，直到 H2O的产出停止。此后，将苯减压除去，并将得到的黑色残余物加热到180°C，维持2小时。 然后将残余物冷却到室温，并且通过加入4N NaOH水溶液充分碱化。得到的溶液用H2O和 CH2Cl2稀释，并且在室温搅拌2小时。使得到的悬浮液过滤通过硅藻土垫，得到第一批硝基 苯胺B3(0.22g)，为精细的黄色固体。滤液用MeOH稀释，用4N NaOH再碱化，然后用EtOAc 提取(x4)。合并的有机提取物用H2O(Xl)、盐水洗涤，并且用MgSO4干燥。将溶剂减压除去， 得到第二批 B3(55g) ；1H NMR [(CD3)2SO] δ 7. 16 (dd，J = 4. 76，1. 60Hz，2Η，ArH)，7. 33 (ddd， J = 10. 37，5. 32，3. 23Hz, 2H, ArH), 8. 18 (ddd, J = 10. 37，5. 32，3. 23Hz, 2H, ArH), 8. 38 (dd, J = 4. 72,1. 56Hz,2H, ArH) ,9. 71 (br s，Ar-NH-Ar)。LCMS(APCI+) =216(100% ) N1-(4-吡啶基)-l，4_ 苯二胺(B4)。使硝基苯胺 B3 ( 55. OOg, 0. 26mol)在 2 1 EtOH H2O (500mL)中回流，然后加入 Fe 粉(56. 96g，1. 02mmol)和冰醋酸(IOmL)。 使得到的混合物回流30分钟，然后冷却到室温。通过加入NH3水溶液将反应混合物碱化并 且过滤以除去固体。将溶剂减压除去，得到B4，为蓬松的晶态品红色固体(28.49g，54%来 自 Bi) ；1H NMR[(CD3)2SO] δ 4. 99 (br s, 2H, Ar-NH2), 6. 58 (m, 4H, ArH), 6. 86 (ddd, J = 9. 66, 4. 99，3. 04Hz,2H,ArH) ,8. 03(d，J = 6. 28Hz, 2H, ArH), 8. 24 (s，lH，Ar-NH_Ar)。LCMS (APCI+) 186(100% )。N- (4-硝基苯基)-4- (4-吡啶基氨基)苯甲酰胺(B5)。向 B4 (10. 07g, 54. 37mmol)
50在无水吡啶(21. 90mL, 271. 82mmol)中的溶液加入4-硝基苯甲酰氯(10. 09g, 54. 37mmol) 在无水二噁烷(IOOmL)中的溶液，并将得到的混合物在50°C加热2小时。此后，将反应混合 物冷却到室温并且通过加入NH3水溶液碱化。通过过滤收集得到的沉淀物，得到第一批酰胺 B5 (3. 47g，19%),为无定形的橙黄色固体。滤液用EtOAc提取(x4)，并将合并的有机提取物 用盐水洗涤，然后蒸发到干燥，得到B4和B5的混合物(通过1H NMR分析为约1 1)。将这个 混合物再次用4-硝基苯甲酰氯在50°C处理12小时，得到另外的4g B5 ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 6. 86(dd, J = 4. 82，1. 60Hz, 2H, ArH), 7. 21(dt，J = 9. 86，5. 02，3. 00Hz, 2Η, ArH), 7. 76 (d, J = 8. 84, 2Η, ArH) ,8. 18 (m, 4Η, ArH), 8. 37(ddd, J = 9,23,4. 33，2. 34Hz, 2Η, ArH), 8. 73 (s, 1Η, ArNHAr), 10. 52 (s, 1Η, ArC(O)NHAr) LCMS (APCI+) 335(100% ) 1-甲基-4-{4_[(4-硝基苯胺基)羰基]苯胺基}吡啶鐺氯化物(Β6)。向酰胺 B5(5. 62g, 16. 82mmol)的无水 DMF(IlOmL)溶液加入甲苯磺酸甲酯(33. OOmL, 218. 68mmol) 并且将得到的混合物在室温搅拌12小时。此后，将反应混合物过滤通过硅藻土垫，得到 第一批11的甲苯磺酸盐，为无定形的亮黄色固体(7.57g，86% )。将滤液减压浓缩，直到 形成沉淀物，并将其通过过滤通过硅藻土垫收集，得到第二批B6的甲苯磺酸盐(0. 72g， 8% ) ο 1H NMR[(CD3)2SO] δ 2. 29(s,3H, -0(0)2SPhCH3)，3· 96 (s，3H，R2N+-CH3)，7· 10 (m，4H， 0 (0) 2SArHCH3), 7. 35 (d, J = 8. 84Hz，2H，ArH), 7. 47 (d, J = 8. 08Hz，2H，ArH), 7. 91 (d, J = 8. 86，2H，ArH), 8. 20 (dd, J = 6. 94，1. 94，ArH), 8. 26 (d, J = 7. 45Ηζ，2Η，ArH), 8. 39 (m, 2Η, ArH)，10. 42 (s，1Η, ArNHAr)，10. 70 (s, 1Η, ArNHAr)。(APCI+) 349(100% )。向B6的甲苯磺酸盐(8. 30g, 15. 97mmol)在MeOH( 200mL)中的悬浮液加入离子 交换树脂(67g，预先用H2O洗涤)[I-X4, BioRadAG, 200-400氯化物形式]。将得到的悬浮 液加载到更多离子交换树脂(70g，预先用H2O洗涤)的柱子上并将柱子用MeOH洗脱。将溶 剂减压除去，得到B6的氯化物盐(6.47g，91% )，为无定形的黄色固体；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 3. 95(s,3H, R2N+-CH3)，7· 10 (m，2H，ArH), 7. 35 (d, J = 7·93Ηζ，2Η，ArH), 7. 91 (d, J = 8. 52Hz,2H,ArH) ,8. 22 (m, 4Η, ArH), 8. 39(d，J = 8. 76Hz,2H,ArH), 10. 50 (br s, 1H, ArNHAr), 10. 72 (s, 1Η, ArNHAr) LCMS (APCI+) 349(100% ) 4-{4_[(4-氨基苯甲酰基)氨基]苯胺基}-1-甲基吡啶鐺二氯化物(Β7)。向正 在回流的酰胺B6(6. 47g，16. 81mmol)在2 1 EtOH H20(600mL)中的悬浮液顺序地加入 Fe粉(3. 76g，67. 24mmol)和冰醋酸(12mL)。使得到的混合物回流2小时，然后将热的反应 混合物过滤通过硅藻土垫。将溶剂减压除去，并且将残余物再溶解于MeOH，并且再次减压 除去溶剂。这个后面的处理再重复两次，在最后一次再溶解时加入几滴盐酸甲醇( 4M)。 将溶剂减压除去，并使残余物从MeOH EtOAc重结晶，得到胺B8(6.35g)，为土黄绿色-白 色固体，其不经纯化使用。1H NMR[(CD3)2SO] δ 3.94(s，3H，R2N+-CH3),6.85 (d，J = 8.26Hz， 2H, Ar H)，7. 12 (d, J = 7. 12Hz,2h, ArH)，7. 29 (m, 2H, ArH)，7. 83 (d, J = 8. 64Hz,2H, ArH)， 7. 89(m，2H，ArH), 8. 24 (d, J = 7. 42Hz，2H，ArH)，10. 10 (s，1H, ArNHAr，10. 73 (s, 1H, ArH)。 LCMS(APCI+) 319(100% )。1-甲基-4-[4-({4_[(6-硝基-4-喹啉基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基] 吡啶鐺氯化物(化合物B)。将4-氯喹啉(89mg,0. 55mmol)和3滴浓HCl顺序地加入向 胺B7(214mg，0. 55mmol)在无水Me0H(19mL)中的溶液中，然后使得到的混合物回流31小 时。此后，将溶剂减压除去，并且通过两个MeOH-共沸循环将得到的残余物干燥。残余物从MeOH EtOAc结晶两次，然后通过制备性HPLC进一步纯化，得到化合物B，为无定形的 黄色固体(68mg,24% ) ο 1H NMR[ (CD3) 2S0] :3· 96 [s，3H，ArN+CH3]，7· 00 [d，J = 6. 92Hz，1H， ArH]，7. 14 [d，J = 7. 29Hz，2H, ArH]，7. 35 [d，J = 8. 86Hz，2H, ArH]，7. 69 [d，J = 8. 58Hz，2H, ArH], 7. 85[t，J = 15. 42，7. 71Hz, 1H, ArH], 7. 96[d，J = 8. 86, 2H, ArH], 8. 07[t，J = 15. 42， 7. 71Hz，lH，ArH], 8. 13 [d，J = 7. 76Hz，lH，ArH], 8. 20 [d, J = 8. 58Hz，2H，ArH], 8. 26 [d, J =7. 39Hz，2H，ArH]，8. 61 [d，J = 6. 92Hz, lH，ArH]，8. 88 [d, J = 8. 43Hz, lH，ArH]，10. 58 [s， 1H, ArNHAr]，10. 76[s，1H，ArNHAr],11. 16[s，lH，ArC(0)NHAr],14. 81[br s,喹啉-N+H]。 LCMS (APCI+) 447(100% ) HPLC -.99. 7% 0实施例C.4-[4-({3-[(l-甲基_4_吡啶鐺基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基]喹啉鐺二 氯化物(化合物C)的制备 (乙酰基氨基)-N-(4-硝基苯基)苯甲酰胺(C2)。将3_乙酰胺基苯甲酸(Cl) (5. 30g,29. 58mmol)和 CDI (5. 75g，35. 50mmol，1· 2 当量)在 N-甲基吡咯烧酮(20mL)中的 混合物在55-60°C加热2小时。然后加入4-硝基苯胺(6. 13g，44. 37mmol, 1. 5当量)并将 混合物加热到140°C，维持4小时，然后倾倒在水中(400mL)并且搅拌18小时。将得到的 沉淀物过滤并顺序地用水和CH2Cl2洗涤，然后从MeOH结晶，得到C2 (4. 84g;55% ),为黄色 固体；mp (MeOH) 259-261°C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 10. 80 (s，1Η，NH)，10. 15 (s，1H，NH)，8· 29 (m, 2H, H-3' & H-5' )，8· 12(t, J=L 8Hz, 1H, H_2)，7. 84 (br dd, J = 8. 1，1. 2Hz, 1H, H_6)， 7. 65 (t d, J = 7. 8，2. 5Hz, 1H, H_4)，7. 48 (t, J = 7. 9Hz, 1H, H_5)，2. 08 (s, 3H, COCH3)；元素 分析计算值 C15H13N3O4 :C, 60. 2 ；H, 4. 4，N，14. 0 ；实测值 C，60. 4 ；H, 4. 6 ；N, 14. 1%03-氨基-N- (4-硝基苯基)苯甲酰胺(C3)。将化合物C2 (4. 25g，15. 9mmol)悬浮 在1，4-二噁烷(IOOmL)中，加入稀的HCl(15mL浓HCl+85mL H2O)，并且将混合物回流6小时 (直到在6% MeOH CH2Cl2中的TLC显示起始原料完全消耗掉)。然后将反应混合物冷却 到20°C并将溶剂蒸发到干燥。得到的残余物在稀NH3水溶液中搅拌，然后过滤，用水洗涤，烘 箱干燥并且从 MeOH 结晶，得到胺 C3 (2. 75g，67% ) ；mp (MeOH) 229-232°C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 10. 63(s，lH，C0NH)，8. 27-8. 22(m，2H，H-3' &H-5' )，8. 06-8. 02 (m，2H，H_2' &H-6')， 7. 18 (t, J = 7. 7Hz, 1H, H_5)，7. 12-7. 08 (m, 2H, H-2&H-6)，6. 80-6. 78 (m, 1H, H_4)，5. 38 (s, 2H，NH2) ；HRMS (FAB+)计算值 C13H11N3O3 (M+1)m/z 258. 0879，实测值 258. 0875 ；元素分析计算 值 C13H11N3O3 :C,60. 7 ；H,4. 3 ；N, 16. 3 ；实测值:C，60. 7 ；H,4. 4 ；N, 16. 6%0N-(4_硝基苯基)-3-(4_吡啶基氨基)苯甲酰胺(C4)。使对甲苯磺酸(2g，10. 49mmol)与苯(250mL)共沸2小时。然后加入吡啶基吡啶鐺氯化物(3. 3g)，化合物 C3(2. 7g，10. 49mmol)和N-甲基吡咯烷酮(IOmL)并将混合物在130°C共沸2小时。将溶剂 沸腾掉，并将得到的暗褐色混合物在180°C加热1小时，然后冷却到约50°C并用水稀释。将 混合物在室温搅拌2小时，并且将得到的沉淀物过滤并顺序地用水，稀NH3水溶液和CH2Cl2 洗涤。然后使固体从MeOH结晶，过滤并用MeOH和CH2Cl2洗涤，得到C4(l. 92g,55% ) ；1H NMR[(CD3)2SO] δ 10. 79(s，1H，C0NH)，9· 00(s，1H，NH)，8· 29-8. 22(m，4H，H-3'，5' &pyH-2, 6))，8· 08-8. 04(m，2H，H-2'，6' )，7· 76 (t，J = 1. 8Hz, 1H，H_2)，7· 63 (t d, J = 8. 0，1. 3H, Hz, 1H, H-6)，7. 52 (t, J = 7. 8Hz, 1H, H_5)，7. 46-7. 43 (m, 1H, H_4)，6. 98-6. 97 (m, 2H, py H-3&5)。1-甲基-4-{3_[(4-硝基苯胺基)羰基]苯胺基}吡啶鐺4_甲基苯磺酸盐 (C5)。将化合物C4(1.92g，5. 73mmol)悬浮在DMF(IOmL)中，加入对甲苯磺酸甲酯(15mL) 并将混合物在室温搅拌18小时。减压除去溶剂并将残余物溶解于温热的MeOH(IOmL)， 然后用EtOAc稀释。将一些MeOH沸腾掉，然后将溶液冷冻18小时。将得到的沉淀物 过滤，并用EtOAc洗涤，得到基本上纯的C5(2.90g，97% )，其不经进一步纯化使用。1H WR[(CD3)2S0]Sl0.85(s，lH，C0NH)，10.60(s，lH，NH)，8.33-8.27(m，4H，H-3 ‘ ,5 ‘ &py H-2，6)，8. 08-8. 30(m，2H，H-2'，6' )，7. 94-7. 89 (m，2H，H_2〃 4" )，7. 69 (t，J = 7. 9Hz， 1H, H-5 “ )，7. 60-7. 57 (m, 1H, H-6 “ )，7. 48-7. 45 (m, 2H, H_3，5)，7. 22 (d, J = 7. 5Hz,2H, p-tol H-2,6) ,7. 20 (d, J = 8. lHz，2H，p-tolH-3，5)，3. 99(s，3H，N+CH3)，1. 99(s，3H，CH3)。4-{3-[(4-氨基苯胺基)羰基]苯胺基}-l_甲基吡啶鐺氯化物(C6)。将化合物 C5(l. 59g，3. 06mmol)溶解于 6 1 EtOH H2O (46mL)中，加入 Fe 粉(885mg)，并使得到的 悬浮液回流。加入两滴浓HC1，并且继续回流1小时(直到使用n-BuOH H2O CH3CO2HW 5:4: 1混合物的上相进行的TLC显示起始原料完全消耗掉)。反应混合物用EtOH (IOOmL) 稀释并且使其回流。将热的反应混合物过滤通过硅藻土垫并且将硅藻土垫的顶层与更多 的EtOH —起沸腾，并且过滤(这个过程重复三次，以确保从铁残余物中完全地提取产物)。 将合并的EtOH提取液蒸发到干燥并将残余物用热水提取，并且过滤通过硅藻土垫。滤液浓 缩为小的体积，然后在预先洗涤的离子交换树脂(55g)中搅拌。将得到的浆状物加载在用 预先洗涤的离子交换树脂填充的柱子上并用水洗脱。将包含产物的级分合并并且蒸发到干 燥，并将残余物与EtOH共沸几次。将残余物溶解于少量体积的MeOH，加入盐酸甲醇(1. 25M， ImL)，并将溶液搅拌10分钟。溶液用EtOAc稀释，并将得到的沉淀物过滤，然后从MeOH/ EtOAc 结晶，得到 C6(873mg，80% ) ；mp (MeOH/EtOAc) > SOO0C51H NMR[ (CD3) 2S0] δ 10. 77 (br s，lH，NH) ,9. 95 (s, 1H, NH),8. 41(br d, J = 5. 5Hz，2H，Py H-2,6) ,7. 87-7. 84(m,2H, H_2， 4)，7. 61 (t, J = 7. 8Hz, 1H, H-5)，7. 49 (br d, J = 7. 8Hz, 1H, H-6)，7. 37 (d, J = 8. 7Hz,2H, H-2'，6' ),7. 21 (br d, J = 4. 6Hz,2H pyH-3,5) ,6. 55 (d, J = 8. 8Hz,2H, H-3 ‘，5')， 4. 93 (s，2H, NH2)，3. 97 (s, 3H, N+CH3)。4-[4-({3-[(l-甲基-4-吡啶鐺基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基]喹啉鐺 二氯化物(化合物C)。通过加热将化合物C6(100mg，0. 28mmol)溶解于EtOH(IOmL)和 H2O (5mL)。加入4-氯喹啉(60mg,0. 36mmol)和3滴浓HCl，并且使混合物回流18小时(直 到使用η-BuOH H2O CH3CO2H的5 4 1混合物的上相进行的TLC显示起始的胺完全 消耗掉)。反应混合物然后用EtOAc稀释，沸腾几分钟，然后使其冷却到室温。将得到的沉淀物过滤并且从 MeOH/EtOAc 结晶，得到化合物 C(64mg，63% ) ；mp (MeOH, EtOAc) > 300°C ； 1H NMR[(CD3)2SO] δ 14. 49 (br, 1H, N+H)，11. 01 (s，1H，NH), 11. 78 (br, 1H, NH)，10. 64 (s，1H， NH)，8. 77 (d，J = 8. 5Hz，1H, ArH)，8. 57 (d，J = 6. 5Hz，1H, ArH)，8. 32 (d，J = 7. 5Hz，2H, ArH)，8. 06-7. 92 (m, 6H, ArH)，7. 53 (t，J = 7. 7Hz, 1H, ArH)，7. 70-7. 65 (m, 1H, ArH)，7. 48 (d, J = 8. 8Hz，2H，ArH), 7. 29 (d, J = 7. 5Hz，2H，ArH), 6. 79 (d, J = 6. 8Hz, 1H, ArH), 3. 98 (s, 3H, N+CH3)。实施例D.4-[4-({4-[(l-甲基_4_吡啶鐺基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基]喹啉鐺二 氯化物(化合物D)的制备
(i)TsOH/180O;(ii)SOCl2，然后 4-硝基苯胺/吡啶；(i^EDMF/MeOTsOOX，然后离 子交换；(iv)Fe粉/EtOH/痕量HC丨；(v)4_氯喹淋/EtOH/IKO/H+/回流4-(4-吡啶基氨基)苯甲酸(D2)。使对甲苯磺酸(17. 4g，0. 126mol)与苯(300mL) 共沸5小时。然后加入4-吡啶基吡啶鐺氯化物(26.6g，0. 138mol)，4-氨基苯甲酸(Dl) (17. 3g，0. 126mol)和N-甲基吡咯烷酮(40mL)，并将混合物在油浴中在110°C共沸1小 时。在130°C将苯蒸发，然后使温度升高到180°C，保持1. 5小时。然后将反应混合物冷却 到室温并用盐水稀释。将得到的混合物温热，得到沉淀物，将其过滤然后在IlCTC烘箱干 燥。然后将固体提取到沸腾的乙醇中(5X150mL)，并将合并的EtOH提取液蒸发到干燥。 将得到的残余物在稀NH3水溶液中搅拌，并将得到的沉淀物过滤。通过用冰AcOH中和滤 液得到另外的产物并且过滤得到的沉淀物。将各个粗产物批料合并并且从H2O结晶，得到 D2(8. 8g,32% ) :mp (H2O) 333-336°C !1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 12. 05 (br. , 1Η, C00H), 9. 17 (s, 1Η, NH)，8. 28-8. 27 (m, 2Η, ArH)，7. 90-7. 86 (m, 2Η, ArH)，7. 26-7. 23 (m, 2H, ArH)，7. 05-7. 03 (m, 2H, ArH)，13C NMR [ (CD3SO) 2] δ 166. 8，150. 2 (2 X C)，148. 6，145. 0，130. 9(2XC)，123. 4， 117. 32((2XC), 110. 6(2XC) ；LCMS 215+ve。N- (4-硝基苯基)-4- (4-吡啶基氨基)苯甲酰胺(D3)。使化合物D2 (172mg, 0. SOmmol)在包含催化量DMF的SOCl2 (5mL)中回流1小时(直到得到澄清的溶液)。将反 应混合物冷却到室温并将过量的SOCl2在真空下除去。向残余物加入二噁烷(IOmL)，然后 将其真空除去。将残余物在干冰-丙酮浴中冷却，加入对硝基苯胺(112mg，0.81mmOl)和吡 啶(1.3mL)，随后加入Et3N(0. 3mL)并将混合物在室温搅拌20分钟，然后回流1小时。将反 应混合物冷却到室温并用H2O稀释，然后用NH3水溶液碱化并且搅拌30分钟。将得到的沉 淀物过滤，并且顺序地用水，己烷和CH2Cl2洗涤。将粗产物溶解于MeOH，然后吸附到硅胶上，并将得到的吸附物(adsorbate)在硅胶上进行色谱化，用0-10% MeOH CH2Cl2洗脱，得到 D3(85mg,32% ) ；mp 298-302°C (MeOH) ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 10. 64(s,lH, NH), 9. 21 (s, 1H, NH)，8. 30-8. 24 (m, 4Η, ArH)，8. 09-8. 05 (m, 2H, ArH)，8. 00-7. 98 (m, 2H, ArH)，7. 34-7. 31 (m, 2H, Ar H)，7. 07-7. 05(d, m,2H, ArH) ；LCMS 235+ve。1-甲基-4-{4-[(4-硝基苯胺基)羰基]苯胺基}吡啶鐺氯化物(D4)。将化合物 D 3 (80mg, 0. 24mmol)溶解于DMF (0. 8mL)，加入对甲苯磺酸甲酯(0. 5mL)，并将混合物在室 温搅拌18小时。将溶剂减压蒸发，并将残余物溶解于MeOH(ImL)，然后用EtOAc (50mL)稀 释。将在冷却时形成的沉淀物过滤，然后从MeOH/EtOAc结晶，得到D5 (119mg)，为其甲苯磺 酸盐。如下通过离子交换将其转化为氯化物盐。将AGkI-X4树脂200-400氯化物形式(3g) 用水洗涤并且填充到柱子中。将甲苯磺酸盐D5(119mg)在预先洗涤的树脂(Ig)中搅拌， 并将得到的浆状物加载到柱子上。柱子然后用50% MeOH H2O,洗脱并将含有化合物的级 分合并并且蒸发到干燥。残余物与MeOH共沸(3 X 20mL)，并且最终从MeOH/EtOAc再沉淀， 得到 D4，为氯化物盐(82mg,88% ) ；mp (MeOH/EtOAc) ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 11. 00 (s, ΙΗ,ΝΗ), 10. 87 (s, 1Η, NH) ,8. 37 (d, J = 7. 3Ηζ，2Η ArH), 8. 30-8. 26 (m, 2Η, ArH) ,8. 15-8. 08(m,4H, ArH), 7. 52 (d, J = 8. 6Ηζ，2Η，ArH), 7. 33 (d, J = 7. 2Ηζ，2Η，ArH), 4. 01(s，3H，N+CH3) ；LCMS 349+ve。4-{4_[(4-氨基苯胺基)羰基]苯胺基}-1-甲基吡啶氯化物(D5)。将化合物 D4(295mg，0. 77mmol)溶解于 5 1 EtOH H2O (12mL)，并且加入 Fe 粉(209mg)。将混合 物剧烈搅拌并且回流4小时，然后热过滤通过硅藻土垫。将硅藻土用沸腾的EtOH洗涤，将 EtOH级分合并并且蒸发到干燥。将残余物提取到热水中，并且过滤通过硅藻土，然后蒸发到 干燥。残余物与MeOH共沸(3X20mL)，然后溶解于MeOH(IOmL)中。加入盐酸甲醇(1. 25M， 5mL)，并将溶液搅拌10分钟。减压除去溶剂并将残余物从MeOH/EtOAc结晶，得到D5 (218mg, 80% ) ；mp (MeOH/EtOAc) ；1H NMR[ (CD3)2S0] δ 11. 13 (s, 1H, NH), 10. 44 (s, 1H, NH) ,9. 88 (br, 2H, NH2), 8. 36 (d, J = 7. 5Ηζ，2Η，ArH), 8. 12 (d, J = 8. 6Ηζ，2Η，ArH), 7. 86 (d, J = 8. 8Ηζ, 2Η, ArH)，7. 50 (d, J = 8. 8Ηζ,2Η, ArH)，7. 32 (d, J = 8. 6Ηζ,2Η, ArH)，7. 32 (d, J = 7. 5Ηζ, 2Η, ArH) ,7. 30 (d, J = 8. 7Ηζ,2Η, ArH) ,4. 00(s,3H, N+CH3) ；LCMS 319+ve4-[4-({4-[(1-甲基_4_吡啶基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基]喹啉二氯化 物(化合物D)。通过加热将化合物D5(100mg，0. 28mmol)溶解于EtOH(IOmL)和H2O (5mL)。 加入4-氯喹啉(60mg，0. 36mmol)和浓HCl (3滴)，并将反应混合物回流18小时(直到使用 η-BuOH H2O CH3CO2H的5 4 1混合物的上相的TLC显示起始的胺完全消耗掉)。反应 混合物用EtOAc稀释，回流几分钟，然后使其冷却。将得到的沉淀物过滤并且从MeOH/EtOAc 结晶，得到化合物 D(88mg，63% ) ；mp (MeOH，EtOAc) > SOO0C51H NMR[ (CD3) 2S0] δ 14. 38 (br, 1H, N+H)，11. 04 (s，1H, NH)，10. 84 (br, 1H, NH)，10. 53 (s, 1H, NH)，8. 76 (d, J = 8. 6Hz, 1H, ArH)，8. 58 (d，J = 6. 7Hz，1H, ArH)，8. 37 (d，J = 7. 5Hz，2H, ArH)，8. 14 (d，J = 8. 7Hz，2H, ArH)，8. 06-8. 01 (m, 4H, ArH)，7. 83-7. 79 (m 1H, ArH)，7. 53-7. 48 (m, 4H, ArH)，7. 33 (d, J = 7. 6Hz，2H，Ar H)，6· 79 (d, J = 6. 9Hz, 1H, ArH), 4. 00(s，3H，N+CH3)。实施例Ε.N- (4- (2-氨基-6-甲基嘧啶_4_基氨基)苯基)_4_ (喹啉_4_基氨基)苯甲酰胺 盐酸盐(化合物Ε)的制备
6-甲基-N4-(4-硝基苯基)嘧啶-2,4- 二胺(E2)。将4_硝基苯胺(Bi) [9. 22g， 0. 07mol]和2-氨基-4-氯-6-甲基嘧啶(El) (9. 30g,0. 07mol)溶解于2-乙氧基乙醇 (330mL)。向得到的溶液加入几滴的浓HC1，并使得到的混合物回流30分钟，然后使其冷 却到室温过夜。此后，将反应混合物过滤，并通过加入氨水溶液将得到的固体碱化，然后 从氏0 EtOH结晶，得到胺E2，为无定形的亮黄色固体(7. 33g)。将滤液浓缩，随后如前 所述进行碱化和再沉淀，得到另外的量(0.78g，总收率51% )。1H NMR[(CD3)2SO] 2. 14[s, 3H, ArCH3]，6. 00 [s，1H，ArNHAr], 6. 37[s,2H, ArNH2]，8. 00 [ddd，J = 10. 24,5. 05,2. 96Hz, 2H, ArH], 8. 12[ddd, J = 10. 24，4. 95，2. 90Hz，2H，ArH]，9. 75 [s，1H，ArH]。LCMS (APCI+) 246(100% )。N4- (4-氨基苯基)-6-甲基嘧啶-2，4- 二胺(E3)。向在回流的胺E2 (5. 46g， 0.02mol)在 2 1 EtOH H2O(IOOmL)中的悬浮液顺序地加入 Fe 粉(4. 97g，0. Otool) 和AcOH (2mL，2% ν/ν)并将得到的棕黑色悬浮液回流 14小时。此后，将热的反应混合 物过滤通过硅藻土垫并将溶剂减压除去。得到的残余物用热水提取，并将得到的水性悬 浮液过滤通过硅藻土垫。将溶剂减压除去，并将残余物再次用热水提取。将得到的含水 悬浮液过滤通过硅藻土垫。除去溶剂，得到胺Ε3，为棕色-白色结晶固体(4.85g，定量收 率)。1H NMR[CD3)2S0] 2. 01[s,3H, ArCH3], 5. 68[s,lH, ArNHAr], 5. 88 [br s,2H, ArNH2], 6. 51 [ddd, J = 9. 67,4. 85,2. 94Ηζ,2Η, ArH], 7. 14 [d，J = 8. 52Ηζ，2Η，ArH], 8. 35[s,lH, ArH] ο LCMS(APCI+) 216(100% ) N- [4- (2-氨基-6-甲基嘧啶_4_基氨基)苯基]~4~硝基苯甲酰胺(Ε4)。将4_硝 基苯甲酰氯(11. 00g, 0. 06mol)和无水吡啶(9. 08mL,0. llmol)顺序地加入到胺E3 (4. 85g， 0. 02mol)的无水二噁烷(200mL)溶液中，并且将得到的溶液在 50°C加热5天。此后，将 反应混合物冷却到室温，然后通过添加氨水溶液碱化。将得到的悬浮液过滤通过硅藻土垫， 得到酰胺 E4，为无定形的黄色固体(3. 40g,41% )0 1HNMR[(CD3)2SO] :2.09[s，3H，ArCH3], 5. 87 [s, 1Η, ArNHAr], 6. 08 [br s,6. 08, ArNH2] ,7. 68[m,4H, ArH] ,8. 18 [d, J = 8. 80Hz, 2Η, ArH], 8. 36[d, J = 8. 80Ηζ，2Η，ArH], 8. 95[s, 1Η, ArH]，10. 45[s, 1Η, ArC(0)NHAr]。 LCMS(APCI+) 365(100% )。4-氨基-N-[4-(2-氨基-6-甲基嘧啶_4_基氨基)苯基]苯甲酰胺盐酸盐(E5)。 向在回流的酰胺E4(2. 10g，5. 77mmol)在2 IEtOH H2O(IOOmL)中的悬浮液顺序地加入Fe粉(1. 29g，23. 09mol)和浓HCl (l_2mL)，并且将得到的混合物回流24小时。此后，将热 的反应混合物过滤通过硅藻土垫，并将溶剂减压除去。得到的残余物从MeOH EtOAc结 晶，得到胺E5(为两个批料)，为奶油色无定形固体(1.94g，90% )。1H NMR [ (CD3) 2S0]) 2. 27 [s，3H，ArCH3], 6. 16 [brs, 2H, ArNH2], 6. 75[d, J = 8. 36Hz, 2H, ArNH2], 7. 74[m，8H，ArH]， 9. 90 [br s, IH ArH], 10. 55 [br s, 1H, ArNHAr], 12. 58 [br s, 1Η, ArC (0) NH] LCMS (APCI+) 335(100% )。N-(4-(2-氨基-6-甲基嘧啶-4-基氨基)苯基)_4_ (喹啉_4_基氨基)苯甲酰 胺盐酸盐(化合物 Ε)。向胺 E5(267mg，0. 720mmo 1)在 1 1 IMeOH EtOH H2O 中 的溶液中顺序地加入4-氯喹啉(1. 06g，6. 48mmol)和3滴浓HCl，并且将得到的混合物回 流 24小时。此后，将溶剂减压除去并通过两个MeOH-共沸循环将得到的残余物干燥。残 余物从MeOH/EtOAc再沉淀，然后通过制备性HPLC进一步纯化，得到化合物E，为无定形的黄 色固体(16mg,4% )。1H NMR[(CD3)2S0] 1. 91 [s，3H，ArCH3]，6. 11 [s, 1H, ArH], 7. 02 [d, J = 6. 77Hz, 1H, ArH] ,7. 65 [d, J = 8. 55Hz,2H, ArH] ,7. 71 [br s, 2H, ArNH2]，7. 84 [m, 4H, ArH]， 8. 04[m，2H，ArH], 8. 15 [d，J = 8. 55Hz，2H，ArH], 8. 63 [d, J = 6. 77Hz, 1H, ArH], 8. 70 [d, J =8. 50Hz, 1H, ArH], 10. 38 [s, 2H, ArNHAr & ArH]，10. 77 [br s，1H，ArNHAr]，13. 10 [ν ν br s，2H，ArC(0)NHAr& 喹啉-N+H]。LCMS(APCI+) =463(100% ) HPLC :95. 7%0实施例F.1-甲基-4- (3- {[4- (6_硝基_4_喹啉基氨基)苯甲酰基]氨基}苯胺基)吡啶氯 化物(化合物F)的制备
(i)MeOH/cat.HCl/回流如上所述使A7 与 4-氯-6-硝基喹啉(Fl) [Simpson & Wright，J. Chem. Soc.， 1948,1707]偶联，得到化合物 F，97% 收率mp 273-277 °C ；1H NMR [ (CD3) 2S0] δ 11. 33 (br, 1H, NH), 10. 70 (s, 1H, NH)，10. 60 (s，1H，NH)，8. 72-8. 69 (m，2H，ArH), 8. 31 (d, J = 7. 4Hz, 2H, ArH) ,8. 24 (d, J = 9. 3Hz, 1H, ArH) ,8. 18 (d, J = 8. 5Hz,2H, ArH) ,7,98 (br s，lH， ArH)，7. 68-7. 65 (m, 3H, ArH)，7. 49 (t，J = 8. IHz，1H, ArH)，7. 21 (d，J = 7. 5Hz,2H, ArH)， 7. 12-7. 01 (m, 2H, ArH), 4. 02 (s, 3H, N+CH3) ；HRMS (FAB)计算值 C28H23N6O3 (M+) m/z491. 1832，实 测值 491. 1822。实施例G.1-甲基-4- (4- (4- (6_硝基喹啉_4_基氨基)苯甲酰氨基)苯基氨基)吡啶氯化 物盐酸盐(化合物G)的制备
(i)MeOH/cat.HCl/回流向酰胺B7 (2. 09g, 5. 32mmol)在无水MeOH (IOOmL)中的悬浮液顺序地加入 4-氯-6-硝基喹啉(Fl) [1. Ilg, 5. 32mmol]和几滴的浓HCl，并使得到的混合物回流12小 时。此后，减压除去溶剂，并将残余物再悬浮于1 IMeOH EtOAc中。加热这个混合物以 除去MeOH，然后冷却，并通过过滤收集得到的沉淀物。使这个固体从MeOH EtOH重结晶，得 到硝基喹啉化合物G(2.48g，89% )，为无定形的黄色固体；1H NMR[CD3)2S0] δ 3. 96(s,3H, R2N+-CH3)，7. 12 (m, 3H, ArH)，7. 35 (d, J = 8. 81Hz,2H, ArH)，7. 68 (d, J = 8. 51Hz,2H, ArH)， 7. 96 (d, J = 8. 81Hz，2H ArH), 8. 24 (m, 5H, ArH), 8. 72 (m, 2H, ArH), 9. 83 (d, J = 1. 69Hz, 1H, ArH), 10. 56 (s, 1H, ArNHAr), 10. 67 (s, 1Η, ArNHAr), 11. 48 (br s, 1Η, ArNHAr) LCMS (APCI+) 492(20% )。实施例H.N- (4- (2-氨基-6-甲基嘧啶_4_基氨基)苯基)_4_ (6_硝基喹啉_4_基氨基)苯 甲酰胺盐酸盐(化合物H)的制备 N- [4- (2-氨基-6-甲基嘧啶_4_基氨基)苯基]_4_ (6_硝基喹啉_4_基氨基)苯 甲酰胺盐酸盐(化合物H)。向胺E5(304mg，0.82mmol)在无水MeOH (30mL)中的溶液顺序地 加入4-氯-6-硝基喹啉(Fl) (171mg，0. 82mmol)和浓HCl (c. HCl) (1-2滴)并将得到的混 合物回流 12小时。之后的MS和TLC分析显示在反应混合物中仍有一些Fl存在，因此在 12小时和24小时加入另外等分的E5 (171mg, 0. 82mmol)和浓HCl (1-2滴)。然后将溶剂从 反应混合物中除去，并将得到的残余物溶解于MeOH，然后再次减压浓缩。残余物经过另一 个MeOH共沸循环，然后将得到的残余物从MeOH Et2O再沉淀，得到化合物H，为无定形的 黄色固体(383mg,86% ) 1H NMR (400MHz, DMS0) 2. 28 [s, 3Η, ArCH3], 6. 18 [br s,lH,ArH],
7.11 [d, J = 6. 59Hz，lH，ArH]，7. 65Hz[d, J = 8. 52Hz, 2H, ArH], 7. 81 [m, 5H, ArH & ArNH2],
8.17 [d, J = 8. 52Hz,2H, ArH]，8. 25 [d, J = 9. 30Hz, 1H, ArH]，8. 69 [m, 2H, ArH]，9. 77 [s, 1H, ArH],10. 42[s,1H, ArH],10. 62[br s，1Η，ArNHAr]，11. 20[ν br s，1Η，ArNHAr]，12. 63[ν br s，1Η，ArC(O)NH]。LCMS(APCI+) 508(100% ) HPLC 98. 5%0实施例I.(E)-N-[4-{1-( [二氨基甲叉基]亚胼基)乙基}苯基]-4-(6-硝基喹啉-4-基氨 基)苯甲酰胺盐酸盐(化合物I)的制备 (E)-N-[4-(l-{ 二氨基甲叉基}亚胼基)乙基]_4_硝基苯盐酸盐(13)。将4_硝 基苯乙酮(Il) (49. 95g，0. 30mol)、氨基胍硫酸盐(12) (51. 77g,0. 20mol)、和浓 HCl (IOmL, 0. 33mol)合并在MeOH(600mL)中，并将得到的混合物回流1小时，然后使其冷却到室温过 夜。此后，减压除去溶剂，并通过过滤收集残余物。将得到的固体顺序地用MeOH和己烷洗 涤，得到二胺I 3，为无定形的白色固体(88. 19g，定量收率)，其不经进一步纯化使用。1H 匪R[CD3)2S0) :2· 36[s，3HArC(CH3) = N-], 7. 72 [br s，4H，= C (NH2) 2], 8. 23 [m. 5H, ArH], 10. 42[ν br s，1· 5H]。LCMS(APCI+) 222(100% ) (E)-N-[4-(l-{ 二氨基甲叉基}亚胼基)乙基]_4_苯胺二盐酸盐(14)。将Fe粉 (35. OOg,0. 62mol)和浓 HCl(4mL)顺序地加入到在回流的二胺 13(40. OOg,0. 16mmol)在 2 1 EtOH H20(200mL)中的悬浮液中，并将得到的黄色悬浮液回流14小时。此后，将热 的反应混合物过滤通过硅藻土垫，并将溶剂减压除去，得到三胺14，为深褐色树脂样玻璃状 物(34. 93g,85% )。这个物质不经进一步纯化使用。1H NMR[CD3)2S0) 2. 20[s，3H ArC(CH3) =N-], 5. 48 [br s, 2H, ArNH2], 5. 54[d,J = 7. 98Hz,2H,Ar H], 7. 58 [ν br s，4Η，= C (NH2) 2]，
7.63[d，J = 7.98Hz，ArH]，10. 83[br s，1Η，= N+(H)-N = ]。LCMS(APCI+) 192(100% ) (E)-N-[4-(l-{ [二氨基甲叉基]亚胼基}乙基)苯基]_4_硝基苯甲酰胺盐酸盐 (15)。将4-硝基苯甲酰氯(16. Olg, 86. 26mmol)加入到三胺14(8. 59g，32. 51mmol)和无水 吡啶(13. 09mL，162. 53mmol)在无水二噁烷(300mL)中的溶液中，并使得到的悬浮液回流2 小时，然后使其冷却到室温过夜。此后，将反应混合物过滤，得到固体，使其从MeOH-EtOAc 结晶，得到三个批料的酰胺15，为无定形的奶油色_浅黄色固体(合计3. 50g, 29% )0 1H 匪R[CD3)2S0) 2. 34 [s,3H, ArC (CH3) = N-], 7. 73 [br s，4H，= C (NH2) 2]，7· 87 [d，J = 8. 89Hz， 2H, ArH], 8. 01 [d, J = 8. 89Hz，2H，ArH]，8. 22 [ddd，J = 2. 28，4. 27，9. 19Hz，2H，ArH],
8.38[ddd, J = 2. 28,4. 27,9. 19Hz，2H，ArH]，10. 73[s，1H，= N+(H)-N = ]，11. 02[s，1H， ArC(0)NHAr] LCMS(APCI+) =341(100% ) (E)-N-[4-(l-{ [二氨基甲叉基]亚胼基}乙基)苯基]_4_氨基苯甲酰胺二盐酸 盐(16)。将 Fe 粉(0. 06g，1.05mmol)加入到在回流的酰胺 15(0. 10g，0. 26mmol)在 2 1 Et0H/H20(IOOmL)中的悬浮液中，并将得到的黑色悬浮液回流1. 5小时。此后，将热的反应 混合物过滤通过硅藻土垫，并将溶剂减压除去。残余物通过两个MeOH-共沸循环干燥，然后 再溶解于MeOH。将这个溶液用几滴的甲醇中的盐酸酸化，然后用EtOAc稀释。将得到的悬 浮液过滤，得到无定形的棕褐色固体，将其再溶解于MeOH中。减压除去溶剂，并将残余物再溶解于热的H20。将得到的悬浮液过滤通过硅藻土垫(使用少量体积的冷MeOH)，并将溶剂 减压除去。残余物从MeOH-EtOAc再沉淀，得到胺16，为无定形的黄色固体(0. 36g，定量收 率)。1H NMR[CD3)2S0) 2. 25[s,3H, ArC(CH3) = N-], 5. 74[s,2H, ArNH2], 6. 40 {ν br s，4H， =C (NH2)2], 6. 60 [d, J = 8. 66Ηζ，2Η，ArH], 7. 77[m，6H，ArH], 9. 81 [s，1Η, ArC (0) NHAr]。(E)-N-[4-{1-( [二氨基甲叉基]亚胼基)乙基}苯基]_4_ (6_硝基喹啉_4_基 氨基)苯甲酰胺盐酸盐(化合物I)。向胺16( lOOmg，基于15计算， 0. 26mmol)在 无水EtOH (60mL)中的悬浮液顺序地加入4-氯-6-硝基喹啉(220mg, 1. 04mmol)和浓 HCl (3滴)，并将得到的混合物回流64小时。此后，将反应混合物过滤，得到黄色固体， 将其从MeOH-HCl EtOAc结晶，得到化合物I，为无定形的亮黄色固体(113mg，84 % )。 1H 匪R[CD3)2S0) 2. 36[s,3H, ArC(CH3) = N-], 7. 09[d, J = 6·95Ηζ，1Η ArH], 7. 69[d, J =8. 62Hz, ArH], 7. 77 [br s，4H，= C (NH2)2], 7. 91 [d, J = 8. 92Ηζ，2Η，ArH], 8. 00 [d, J = 8. 92Ηζ，2Η，ArH], 8. 21 [d, J = 8. 62Ηζ，2Η，ArH], 8. 31 [d, J = 9. 32Ηζ，2Η，ArH], 8. 70 [d, J =6. 95Ηζ，1Η，ArH], 8. 74 [dd, J = 9. 32，2. 29Ηζ，1Η，ArH], 9. 86[s，lH，ArH], 10. 55[s，lH， ArNHAr]，11· 41 [s，1Η，ArC(O)NHAr]，11.60[br s, 1Η, 1Η, = N+(H)-N = ]。LCMS(APCI+) 484(100% )。HPLC :97· 1%。实施例J.4-[4-({3-[(1-甲基-4-吡啶基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基]_6_硝基喹啉
二氯化物(化合物J)的制备 通过加热将化合物C6 (lOOmg，0. 28mmol)溶解于 EtOH(IOmL) *H20(5mL)。加入 4_氯-6-硝基喹啉(Fl) (75mg,0. 36mmol)和浓HCl (3滴)，并将反应混合物回流18小时(直 到使用n-BuOH H2O AcOH的5 4 1混合物的上相的TLC显示起始的胺完全消耗掉)。 反应混合物用EtOAc稀释，回流几分钟，并使其冷却。将得到的沉淀物过滤并且从MeOH/ EtOAc 结晶，得到化合物 J(148mg，94% ) ； mp (MeOH，EtOAc) > 300 °C ；1H NMR [ (CD3) 2S0] δ 14. 90 (br 1H, N+H)，11. 36 (br，1H，NH)，10. 93 (s，1H，NH)，10. 65 (s，1H，NH), 9. 81 (d, J =
2.2Hz, 1H, Η-5)，8· 71 (dd, J = 9. 3,2. 3Hz, 1Η, Η_7)，8· 60 (d, J = 7. OHz, 1Η, Η_8)，8· 33 (d, J = 7. 5Ηζ，2Η，py Η_2，6)，8· 22 (d, J = 9. 5Hz, 1Η, Η_2)，8· 02 (d, J = 8. 9Ηζ，2Η，ArH)， 7. 81-7. 92 (m, 2Η, ArH)，7. 68 (t, J = 7. 8Hz, 1Η, ArH)，7. 58 (dd, J = 8· 6，1. 3Hz, 1Η, ArH)， 7. 50 (d, J = 7. OHz，2Η，ArH), 7. 28 (d, J = 7. 5Ηζ，2Η，ArH), 6. 91 (d, J = 7. OHz，1Η, Ar H)，
3.98(s，3H，N+CH3)。实施例K.4-[3-({4-[(6-氨基-4-喹啉基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基]甲基吡啶
二氯化物(化合物K)的制备 向化合物F(200mg，0. 41mmol)在 6 1 EtOH H2O(6mL)中的悬浮液加入 Fe粉(200mg)，并使得到的悬浮液回流3小时。将热的反应混合物过滤通过硅藻土垫， 并将硅藻土垫用热的EtOH洗涤。将EtOH提取液合并并且蒸发到干燥，并将残余物提取 到水中。将溶液过滤通过硅藻土，然后蒸发到干燥。残余物与甲醇共沸(3X30mL)，然后 溶解于Me0H(20mL)中。加入甲醇中的盐酸(1. 25M，ImL)，并将溶液搅拌30分钟。将溶 液蒸发到干燥，并使残余物从MeOH/EtOAc结晶，得到化合物K(160mg，80% ) :mp，(MeOH/ EtOAc) 270-274 "C ；1HNMR[ (CD3) 2S0] δ 14. 50 (br, 1H, N+H)，10. 80 (s，1H，NH)，10，57 (s，1H， NH), 10. 36(s，lH，NH)，8. 31(d，J = 7. 5Hz, 3H, ArH), 8. 15 (d, J = 8. 6Hz，2H，Ar H), 7. 99 (t, J=L 9Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 85(d, J = 9. IHz，ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 68 (br d, J = 9. 2Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 62 (d, J = 8. 6Hz,2H, ArH)，7. 51-7. 12 (m, 3H, Ar H)，7. 23 (d, J = 7. 6Hz,2H, ArH)，7. 09 (dd, J = 7. 9,2. 8Hz, 1H, ArH), 6. 95 (d, J = 6. 7Hz, 1H, ArH), 3. 96(s，3H，N+CH3)，没有观察到 NH2 的 信号。HRMS(FAB+)计算值 C28H25N6O(M+1)m/z 461. 2090，实测值 461. 2108 ；元素分析，计算值 C28H27N6Cl3O. 0. 25 H2O :C，58，6 ；H,4. 8 ；N, 14. 6 ；实测值:C，58. 5 ；H,4. 8，N, 14. 5%0实施例L.4-[4-({4-[(6-氨基-4-喹啉基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基]甲基吡啶 二氯化物(化合物L)的制备 向在回流的化合物G(150mg，0. 28mmol)在2 1 EtOH H20(50mL)中的悬浮液 加入Fe粉(60mg，l. 13mmol)，并将得到的混合物回流过夜。此后，将热的反应混合物过滤 通过硅藻土垫，并将溶剂再次减压除去。将残余物再溶解于MeOH，并将溶剂减压除去。这 个后者的处理再重复两次，然后使残余物从HCl-MeOH Et2O重结晶，得到化合物L(33mg， 22% )，为无定形的黄色-褐色固体。1H NMR[(CD3)2SO] δ 3. 95 (s，3H，R2N+-CH3)，6. 94 (d，J =6. 67Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 13 (d，J = 7. 36Hz, 2Η,ArH), 7. 34 (d, J = 8. 85Hz, 2Η,ArH), 7. 43 (dd, J = 9. 06，2. 17Hz,1Η, ArH)，7. 45(d, J=L 97Hz,1Η, ArH)，7. 62(d, J = 8. 61Ηζ,2Η, Ar H)，7· 85 (d, J = 9. 06Hz, 1Η, ArH), 7. 95 (d, J = 8. 86Hz, 1Η, ArH), 8. 15 (d, J = 8. 59Ηζ，2Η， ArH), 8. 26 (d, J = 7. 39Hz，2H，Ar H) ,8. 32 (t, J = 6. 11Hz, 1Η，ArH)，10. 35 (s, 1H，ArNHAr)， 10. 51 (s，1H, ArNHAr)，10. 69 (s, 1H, ArNHAr)，14. 49 (br s, 1H,喹啉酮-N+-H)[没有观察到 NH2 信号]。LCMS(APCI+) 462(100% ) HPLC :97%。实施例M.6-氨基-4-[4-({3-[(l-甲基-4-吡啶鐺基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基] 喹啉鐺二氯化物(化合物M)的制备

(i)Fe 粉/Et0H/H20/cat.HCl/回流向剧烈搅拌的化合物J(80mg，0. 15mmo 1)在5 1 Et0H/H20(5mL)中的悬浮液加 入Fe粉(43mg)，并将混合物回流。然后加入两滴的浓HC1，并且继续回流2小时(直到使 用n-BuOH H2O AcOH的5 4 1混合物的顶相的TLC显示起始原料完全消耗掉)。 反应混合物用EtOH(IOOmL)稀释并使其回流，将热的混合物过滤通过硅藻土垫。将硅藻土 垫的顶层残余物用热的EtOH提取另外三次，以确保胺被完全提取出来。将EtOH级分合并 并且蒸发到干燥，并将残余物用热水提取。将溶液蒸发到干燥，并将其与EtOH共沸几次。 得到的残余物溶解于少量的MeOH中，加入甲醇中的盐酸(1. 25M，ImL)，并将溶液搅拌10 分钟。然后将溶液用EtOAc稀释，然后将一些MeOH蒸发掉。将得到的沉淀物过滤并且从 MeOH/EtOAc 结晶，得到化合物 M(56mg，70 % ) ；mp > 3100C0 1H NMR[ (CD3)2S0] δ 14. 5(br, 1H，N+H)，11. 22 (s, 1H，NH)，10. 59 (s, ΙΗ,ΝΗ)，9. 55 (br, ΙΗ,ΝΗ)，8. 32(d, J = 7. 2Hz,2H,ArH)， 8. 18 (d, J = 6. IHz, 1Η, ArH), 7. 95-7. 91 (m, 4Η, ArH), 7. 76 (d, J = 8. 8Hz, 1Η, ArH), 7. 66 (t, J = 5. 6Ηζ，1Η, ArH)，8. 07 (d，J = 8. 4Ηζ，1Η, ArH)，7. 40-7. 37 (m, 3H, ArH)，7. 33-7. 29 (m, 3H, ArH), 6. 71 (d, J = 6. 2Hz, 1H, ArH), 5. 75 (br S，2H，NH2)，3. 98 (s，3H，N+CH3)。实施例N.4-[4-({4-[(6-氨基-4-喹啉基)氨基]苯胺基}羰基)苯胺基]甲基吡啶鐺
氯化物(化合物N)的制备 1-甲基-4-[4-({4-[(6-硝基-4-喹啉基)氨基]苯胺基}羰基)苯胺基]吡啶 鐺氯化物(Ni)。向4-氯-6-硝基喹啉(70mg，0. 33mmol)在MeOH(IOmL)中的悬浮液加入 化合物D5(100mg，0. 28mmol)，并且将混合物在20°C搅拌1小时(直到得到澄清的溶液)。 然后加入一滴浓HC1，并且继续回流另外的20小时。TLC分析(用n-BuOH H2O AcOH 的5 4 1混合物的上相洗脱)显示有一些D5剩余，因此加入更多的4-氯-6-硝基喹 啉(35mg，0. 16mmol)并且继续回流另外的4小时。然后反应混合物用EtOAc稀释并将得 到的沉淀物过滤并顺序地用EtOAc，CH2Cl2和二异丙基醚洗涤，并且最后从MeOH/EtOAc结 晶，得到化合物 Nl(lllmg，75% )，mp (MeOH/EtOAc) > SOO0C51H NMR[ (CD3)2S0] δ 14. 50 (br, 1H，N+H) ；11，42，(br s, ΙΗ,ΝΗ), 11. 10 (s，1Η，NH)，10. 58 (s，1Η，NH)，9. 82 (d，J = 2. 1Ηζ，1Η， ArH), 8. 72 (dd, J = 9. 3,2. 2Hz, 1H, ArH), 8. 60 (d, J = . 0Hz, 1H, ArH), 8. 42 (d, J = 7. 4Hz, 2H, ArH), 8. 24 (d, J = 8. 6Hz, 1H, ArH), 8. 15 (d, J = 8. 6Hz，2H，ArH), 8. 04 (d, J = 8. 8Hz,2H, ArH), 7. 51 (t, J = 8. 3Hz，4H，ArH), 7. 34 (d, J = 7. 5Hz，2H，ArH), 6. 91 (d, J = 7. OHz, 1Η, ArH), 4.01 (s,3H, N+CH3) ； LCMS 489+ve。4-[4-({4-[(6-氨基-4-喹啉基)氨基]苯胺基}羰基)苯胺基]甲基吡啶鐺 氯化物(化合物N)。向化合物Nl(102mg，0. 19mmol)在 5 1 EtOH H2O (3mL)中的溶 液加入Fe粉(53mg)和一滴AcOH，并将得到的悬浮液剧烈搅拌并且回流3小时。将热的反 应混合物过滤通过硅藻土，并将硅藻土垫用更多的热EtOH洗涤。将EtOH级分合并并且蒸 发到干燥，并将残余物提取到热水中。将这个溶液过滤通过硅藻土，然后蒸发到干燥。残余 物与MeOH共沸(3 X 20mL)，然后溶解于MeOH(IOmL)。加入甲醇中的盐酸(1. 25M，2mL)，并将 溶液搅拌10分钟。蒸发溶剂到干燥，并将残余物用MeOH/EtOAc结晶，得到化合物N(92mg， 96 % )mp (MeOH/EtOAc) 1H NMR(CD3)2SO] δ 14. 17 (d, J = 5·8Ηζ，1Η NH), 11. ll(s，lH，NH)， 10. 52 (s, 1Η, ΝΗ)，10· 21(s，lH，NH), 8. 37 (d, J = 7. 5Ηζ，2Η，ArH), 8. 22 (t, J = 6. 6Ηζ，1Η， ArH)，8. 14 (d，J = 8. 6Ηζ，2Η, ArH)，7. 98 (d，J = 8. 9Ηζ，2Η, ArH)，7. 79 (d，J = 9. IHz，1H, ArH)，7. 52-7. 59 (m, 3H, ArH)，7. 44-7. 40 (m, 3H, ArH)，7. 43 (d, J = 7. 6Hz,2H, ArH)，6. 67 (d, J = 6. 8Hz, 1H, ArH), 4. 01 (s，3H，N+CH3)观察到的部分 N+H3 信号。LCMS 461+ve。实施例0.4-[4-({4-[(6-二甲氨基-4-喹啉基)氨基]苯甲酰基}氨基)_苯胺基]-1-甲 基吡啶鐺二氯化物(化合物0)的制备 向 6-氨基-4-喹啉酮(01) (112mg，0. 71mmol)和甲醛水溶液(40 % w/v, 1. 6mL,21. 2mmol)在 EtOH(IOmL)中的溶液顺序地加入 NaBH3CN(335mg，5. 67mmol)和 IN HCl (2. 8mL, 2. 8mmol)，并将得到的亮黄色悬浮液在室温搅拌15分钟。此后，减压除去溶剂， 然后通过两个MeOH共沸循环干燥残余物。将残余物再悬浮于MeOH中并且过滤通过硅藻土， 减压除去溶剂。残余物从MeOH EtOAc结晶，得到6-二甲基氨基-4-喹啉酮(02) (80mg， 60% )，为无定形的棕褐色固体；1HNMR [(CD3)2SO] δ 2. 93[s，6H，ArN(CH3)2], 5. 90 [d, J = 7. OOHz，1H, ArH] ,7. 13 [br s，ArOH]，7. 24 [m, 2H, ArH]，7. 45 [dd，J = 7. 41，2. 29Hz，1H, ArH]， 7. 74[d，J = 7. OOHz，1H，ArH]。LCmS(APCI+) 189 (100% )。Rf = 0. 48 (10% MeOH CH2Cl2)。将喹啉酮02(80mg，0. 43mmol)在POCl3(IOmL)中回流1小时。此后，减压除去过量 的POCl3并将残余物溶解于CH2C12，冷却到0°C，并且用氨水处理。得到的混合物用CH2C12 提取(x3)。合并的有机提取物顺序地用H2O(Xl)和盐水(xl)洗涤，然后用MgSO4干燥。将溶 剂减压除去，得到6-二甲基氨基-4-氯喹啉(03) (70mg, 80%),为亮黄色油状物[Riegel等 人，J.Am· Chem. Soc.，1946，68，1264] · 1H 匪 R[(CD3)2S0] δ 3. 10 [s, 6Η, ArN(CH3) 2], 6. 96 [d, J =2. 85Hz，lH，ArH], 7. 74 [dd, J = 9. 36，2. 85Ηζ，1Η，ArH], 7. 57 [d, J = 4. 69Ηζ，1Η，ArH],7. 90 [d，J = 9. 36Hz，1H, ArH]，8. 46Hz [d, J = 4. 69Hz，1H, ArH]。LCMS (APCI+) 207(100% ), 209(40% ) ο Rf = 0. 73(10% MeOH CH2Cl2)。向溶解于1 2 EtOH H2O (6mL)的胺B7 (260mg，0. 65mmol)的溶液顺序地加入浓 HCl (0. 19mL, 6. 34mmol)和 03 (140mg, 0. 70mmol)。使得到的混合物回流 72 小时(通过 TLC 跟踪反应进展，用n-BuOH H2O AcOH的5 4 1混合物的上相洗脱；Rf = 0. 30-0. 40， 在365nm显示亮黄色斑点)。此后，将溶剂减压除去。将残余再溶解于MeOH并且将溶剂再 次减压除去。这个后面的处理再重复一次，并且使残余物从MeOH EtOAc两次结晶，得到 化合物 0(163mg，45% )，为无定形的黄色固体。1H NMR[ (CD3)2S0] δ 3. 06 (s，6H，Ar (CH3)2)， 3. 93 (s，3H，R2N+-CH3)，7. 07(d, J = 6. 58Hz, 2H, ArH), 7. 12(d, J = 4. 98Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 22 (d, J = 2. 43Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 30(d, J = 8. 70Hz, 2H,ArH), 7. 42 (m, 3H,ArH), 7. 78(d, J = 9. 28Hz, ArH), 7. 92 (d, J = 10. 75Hz，2H，ArH), 8. 01 (d, J = 8. 64Hz, 1H, ArH), 8. 19 (d, J = 6. 93Hz, 2H, ArH)，8. 32 (d, J = 4. 90Hz, 1H, ArH)，8. 50 (br s, 1H, -NH-)，8. 91 (s，1H, -NH-)，10. 28 (s, 1H, -NH-)，10. 80 (ν br s, 1Η, _ΝΗ_)。LCMS (APCI+) 490 (100% )。HPLC 95%0实施例P.N- [4- (2-氨基-6-甲基嘧啶_4_基氨基)苯基]_4_ (6_ ( 二甲基氨基)喹啉_4_基 氨基)苯甲酰胺盐酸盐(化合物P)的制备 向酰胺E5(228mg，0. 62mmol)在1 2 EtOH H20(20mL)中的溶液顺序地加入浓 HCl (0. 17mL, 5. 61mmol)和 4-氯-6- 二 甲基氨基喹啉(03) (140mg, 0. 68mmol)，并且将得到 的混合物回流 12小时。之后的MS和TLC分析(用n-BuOH H2O AcOH 5 4 1混 合物的上相洗脱)显示在反应混合物中存在有一些起始原料，因此加入更多的03(140mg， 0.68mmol)。在回流几小时之后，TLC显示反应完成，由此，减压除去溶剂。残余物从 MeOH EtOAc结晶，得到化合物P，为(非常细的)无定形的黄色固体(170mg，51 % )。1H 匪R[ (CD3)2SO] δ 2. 28[s，3H]，3· 15[s，6H，ArN (CH3) 2], 6. 21 [br s，lH，ArH], 6. 89 [d, J = 6·71Ηζ，1Η，ArH], 7. 65 [m, 5Η, ArH], 7. 82 [m, 4Η, ArH & ArNH2], 7. 96 [d, J = 9·39Ηζ，1Η， ArH], 8. 18 [d，J = 8. 57Hz, 2Η, ArH], 8. 35 [t, J = 12. 38，6. 19Hz, 1Η, ArH], 10. 44 [br s, 1Η, ArH]，10. 65[br s, 1Η, ArNHAr]，10. 71[s，1Η, ArNHAr]，12. 75[brs, 1H, ArC(0)NH]，14. 56[d, J = 4· 10Ηζ，1Η，喹啉基 N"H]。LCMS (APCI+) 506(100% ) HPLC 97. 6%0实施例Q.6-( 二甲基氨基)-4-[4-({3-[(1-甲基-4-吡啶鐺基)氨基]苯胺基}羰基)苯 胺基]喹啉鐺二氯化物(化合物Q)的制备 通过加热将胺A7(100mg，0. 28mmol)溶解于 EtOH(20mL)和 H2O(IOmL)中。然后 加入4-氯-6- 二甲基氨基喹啉(03) (70mg, 0. 33mmol)和浓HCl (3滴)，并将混合物回流3 天(直到使用n-BuOH H2O AcOH的5 4 1混合物的上相的TLC显示起始的胺被 完全消耗掉)。将反应混合物蒸发到干燥，并将残余物与EtOH共沸。将残余物溶解于少量 体积的MeOH，然后将其用EtOAc稀释。将得到的沉淀物过滤并且从MeOH/EtOAc结晶，得到 163mg粗产物，将其通过制备性HPLC纯化，得到化合物Q (70mg, 45% ) ；mp (MeOH/EtOAc)，> 3000C ；1H NMR[(CD3)2SO] δ 14. 38 (br, 1H, N+H), 10. 71 (s，1H，NH)，10. 56 (s，1H，NH)，10. 52 (s, 1Η，ΝΗ)，8· 36 (d, J = 6. 7Hz, 1H, ArH), 8. 31 (d, J = 7. 3Hz, 2H, ArH), 8. 18 (d, J = 8. 6Hz，2H， ArH), 7. 99(brs, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 92 (d, J = 9. 4Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 69-7. 64 (m, 4H, ArH), 7. 54 (d, J = 2. 3Hz, 1Η, Ar H)，7. 49 (t, J = 8. IHz, 1Η, ArH)，7. 21 (d, J = 7. 4Ηζ,2Η, ArH)，7. 08 (d, J = 7. 9Hz，lH，ArH)，6. 91(d，J = 6. 7Hz, 1H, Ar H)，3. 98 (s，3H，N+CH3)，3. 14 [s，6H，N(CH3)2]。实施例R.1-甲基-4-[3-({4-[(7-硝基-4-喹啉基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基]吡 啶鐺氯化物(化合物R)的制备 使A7 与 4-氯-7-硝基喹啉(Ruchelman 等人 Biorg. Med. Chem. 2004，12，3731) 偶联，以 89% 收率得到化合物 R ;mp (MeOH/EtOAC)，302-306 °C (dec) ；1H NMR[ (CD3)2S0] δ 11. 50(br,1H, NH)，10. 74 (s，1H, NH)，10. 58 (s，1H, NH),9. 04(d, J = 9. 3Hz,1Η, ArH)， 8. 90 (d, J = 2. 3Ηζ，1Η，ArH), 8. 77 (d, J = 6. 7Ηζ，1Η，ArH), 8. 51 (dd, J = 9. 3,4. 5Ηζ，1Η， ArH), 8. 31 (d, J = 7. 4Ηζ，2Η，ArH), 8. 18 (d, J = 8. 6Ηζ，2Η，ArH), 7. 98 (t, J= 1·9Ηζ，1Η， ArH)，7. 70 (d, J = 8. 6Ηζ,3Η, ArH) ,7. 49 (t, J = 8. IHz，1Η, Ar H)，7. 22 (d, J = 7. 6Ηζ,2Η, ArH)，7. 15 (d, J = 6. 7Hz, 1Η, ArH)，7. 09 (br d, J = 7. 8Hz, 1Η, ArH)，3. 96 (s, 3Η, N+CH3)； HRMS (FAB+)计算值 C28H24N6O3 (M+1)m/z491· I832，实测值似1· 1拟5。实施例S.1-甲基-4-[4-(4-{7-硝基喹啉-4-基氨基}苯甲酰氨基)-苯基氨基]吡啶鐺二 氯化物(化合物S)的制备 向胺B7(l. 46g，3. 73mmol)的无水MeOH(20mL)溶液顺序地加入4-氯-7-硝基喹啉 (Si) (0. 78g，3. 73mmol)和两滴的浓HCl并且将得到的混合物回流4小时。此后，使温度降 低到 40°C并且继续加热另外的65小时。此后，减压除去溶剂。将残余物再溶解于MeOH， 并将溶剂再次减压除去。这个后面的处理再重复一次，然后使残余物从MeOH Et2O再沉 淀两次。最后，使如此得到的固体的一部分从MeOH EtOAc再沉淀，得到化合物S，为无定 形的黄色-橙色固体(0. 070g,3% ) ο 1H NMR[(CD3)2SO] :3.96[s，3H，R2N+CH3]，7· 14[m，3H， ArH]，7. 35 [d，J = 8. 85Hz，2H, ArH]，7. 68 [d，J = 8. 57Hz，2H, ArH]，7. 96 [d，J = 8. 85Hz， 2H, ArH]，8. 18 [d, J = 8. 57Hz,2H, ArH]，8. 26 [d, J = 7. 37Hz,2H, ArH]，8. 50 [dd, J = 9. 28，
2.23Hz，1H, ArH]，8. 77 [d，J = 6. 65Hz，1H, ArH]，8. 94 [d，J = 2. 23Hz，1H, ArH]，9. 08 [d，J =9. 28Hz，lH，ArH], 10. 55[s，lH，ArNHAr], 10. 71 [s, 1Η, ArNHAr], 11. 21 [br s, 1Η, ArC (0) NHAr],ll. 21 [ν ν br s, 1Η,喹啉-Ν+Η] ； LCMS (APCI+) 492(100 % ), 493 (30 % ) HPLC 98. 1%。实施例Τ.4-[4-({3-[(1-甲基-4-吡啶鐺基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基]_7_硝基喹 啉鐺二氯化物(化合物Τ)的制备 通过加热将化合物C6(92mg，0. 25mmol)溶解于EtOH(IOmL)和H2O (5mL)中。然后 加入4-氯-7-硝基喹啉(65mg，0. 31mmol)和浓HCl (3滴)并将混合物回流18小时(直 到使用n-BuOH H2O AcOH的5 4 1混合物的上相进行的TLC显示起始的胺被完 全消耗掉)。然后反应混合物用EtOAc稀释，回流几分钟，并使其冷却。将得到的沉淀物 过滤并从 MeOH/EtOAc 结晶两次，得到化合物 T (104mg，71 % ) ；mp (MeOH, EtOAc) > 300 °C ； 1H NMR[(CD3)2SO] δ 14. 80 (br 1H, Ν+Η)，10. 89 (br, 2Η, 2ΧΝΗ)，10. 60 (s, 1H, NH), 8. 96 (d, J =9. 0Hz, 1H, ArH), 8. 84 (bs, 1H, Ar H) ,8. 67 (d, J = 6. 5Hz, 1H, ArH), 8. 32 (d, J = 7. 3Hz, 2H, ArH), 8. 0-7. 91 (m, 4Η, ArH), 7. 68 (t, J = 7. 8Hz, 1Η, ArH), 7. 57 (d, J = 9. 4Hz, 1Η, ArH)， 7. 49 (d, J = 8. 7Ηζ，2Η, ArH)，7. 29 (d，J = 7. 4Ηζ，2Η, ArH)，6. 94 (d，J = 6. 6Hz，1H, Ar H)，
3.99(s，3H，N+CH3)。HRMS (FAB+)计算值 C28H23N6O3 (M+1)m/z 491. 1832，实测值 491. 1830。实施例U.4-[4-({4-[(1-甲基-4-吡啶鐺基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基]_7_硝基喹 啉鐺二氯化物(化合物U)的制备
通过加热将化合物D5(100mg，0. 28mmol)溶解于 EtOH(20mL)和 H2O(IOmL)中。然 后加入4-氯-7-硝基喹啉(70mg，0. 33mmol)和浓HCl (3滴)并将反应混合物回流18小时 (直到使用n-BuOH H2O AcOH的5 4 1混合物的上相进行的TLC显示起始的胺被完 全消耗掉)。然后将反应混合物用EtOAc稀释，回流几分钟，并使其冷却。将得到的沉淀物 过滤并从 MeOH/EtOAc 结晶两次，得到化合物 U(99mg，63% ) ；mp (MeOH/EtOAc) 268°C (dec)； 1H NMR[(CD3)2SO] δ 10. 93 (brs, 2Η, 2ΧΝΗ)，10. 53 (s, 1H, NH), 8. 94 (d, J = 9. 2Hz, 1H, ArH)， 8. 85 (bs, 1H, ArH), 8. 67 (d, J = 6. 7Hz, 1Η, ArH), 8. 49 (d, J = 9. 2Hz, 1Η, ArH), 8. 37 (d, J =7. 5Ηζ，2Η，ArH), 8. 13 (d, J = 8. 6Ηζ，2Η，ArH), 8. 51 (d, J = 8. 8Ηζ，2Η，ArH), 7. 50 (t, J =8. 7Hz，4H，ArH)，7. 31(d，J = 7. 5Hz, 2Η, ArH), 6. 94 (d, J = 6. 8Hz, 1Η, ArH), 4. 02(s，3H， N+CH3)。APCI+ve 461。实施例V.4-[3-({4-[(7-氨基-4-喹啉基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基]甲基吡啶 鐺二氯化物(化合物V)的制备 如上所述进行化合物R的Fe粉还原，以83%收率得到化合物V :mp 281-285°C ； 1H NMR[(CD3)2SO] δ 13. 73 (br, 1H, NH)，10，79 (s, 1H, NH)，10. 56 (s, 1H, NH)，10. 53 (br s, 1H, NH),8. 41 (d, J = 9. 3Hz，lH，ArH),8. 31 (d, J = 7. 4Hz，2H，Ar Η)，8· 24(d, J = 7. OHz, 1Η, ArH), 8. 14 (d, J = 8. 6Ηζ，2Η，Ar H)，7. 98 (t, J=L 9Hz, 1Η, ArH), 7. 67 (br d，J = 9. 2Ηζ, 1Η, ArH), 7. 59 (d, J = 8. 6Ηζ，2Η，ArH), 7. 48 (t, J = 8. IHz, 1Η, ArH), 7. 23 (d, J = 7. 5Ηζ, 2Η, ArH), 7. 10-7. 06 (m, 2Η, ArH), 6. 86 (d, J = 2. IHz，1Η, ArH), 6. 76(brs,2H, NH2), 6. 68 (d, J = 7. OHz, 1Η, ArH), 3. 98(s，3H，N+CH3) ； HRMS (FAB+)计算值 C28H25N6O (M+) m/z 461. 2090，实 测值 461. 2108 ；元素分析计算值 C28H26N6ClO3. 1. 25 H2O =C, 60. 5 ；H, 5. 2 ；N, 15. 1 ；Cl, 12. 8 ； 实测值:C,60. 6 ；H, 5. 2 ；N, 15. 0 ；Cl, 13. 0%o实施例W.1-甲基-4-[4-(4-{7-氨基喹啉-4-基氨基}苯甲酰氨基)-苯基氨基]吡啶鐺二 氯化物(化合物W)的制备
(i) Fe 粉 /Et0H/H20/回流 向在回流的化合物S(40mg，0. 07mmol)在2 1 EtOH H20(50mL)中的悬浮液 加入Fe粉(15mg，0.28mmOl)，并且使得到的混合物回流几小时直到完成。此后，使热的 反应混合物过滤通过硅藻土垫，并将溶剂减压除去。残余物通过三个MeOH循环干燥，并 且最后从HCl-MeOH EtOAc重结晶，得到化合物W(34mg，90 % )，为无定形的黄色固体； mp (MeOH, EtOAc) > 280°C ^H NMR[ (CD3) 2S0] :3· 95 (s，3H，R2N+CH3)，6. 67 (d，J = 7. 00Hz，1H， ArH) ,6. 92 (d, J = 2. 13Hz, 1H, ArH), 7. 07(dd, J = 9. 38,2. 13Hz, 1H, ArH), 7. 18 (br d, J = 6. 45Hz，2H, ArNH2)，7. 34 (d，J = 8. 89Hz，2H, ArH)，7. 60 (d，J = 8. 60Hz，2H, ArH)，7. 97 (d, J = 8. 89Hz, ArH), 8. 16 (d, J = 8. 60Hz，2H ArH), 8. 22 (t, J = 6. 66Hz, 1H, ArH), 8. 27 (d, J = 7. 49Hz，2H，ArH), 8. 51 (d, J = 9. 39Hz，lH，ArH), 10. 58 (s, 1H, ArNHAr)，10. 71 (s，1H， ArNHAr)，11. 00 (s, 1H, ArC (0) NHAr)，14. 08 (d, J = 6. 09Hz, 1H,喹啉-N+-H) ；LCMS (APCI+) 462(100% ) ；HPLC 96. 1%。实施例X.7-氨基-4-[4-({3-[(l-甲基-4-吡啶鐺基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺基] 喹啉鐺二氯化物(化合物X)的制备 向剧烈搅拌的化合物T(107mg，0. 19mmol)在5 1 EtOH H2O(5mL)中的悬浮 夜加入Fe粉(43mg)，并使混合物回流。加入两滴浓HC1，并且继续回流2小时(直到使用 η-BuOH H2O AcOH的5 4 1混合物的上相进行的TLC显示起始原料完全消耗掉)。 反应混合物然后用EtOH(IOOmL)稀释，并且使其回流。将热的混合物过滤通过硅藻土垫，并 将硅藻土垫的顶层用热的EtOH提取三次以确保胺被提取完全。将合并的乙醇提取液蒸发 到干燥，并将残余物用热H2O提取。将溶液蒸发到干燥，并且与EtOH共沸几次。将得到的 残余物溶解于少量体积的MeOH中，加入甲醇中的盐酸(1. 25M，ImL)，并将溶液搅拌10分钟。 溶液用EtOAc稀释，并将一些MeOH蒸发。将得到的沉淀物过滤并且从MeOH/EtOAc结晶，得 到化合物 X(99mg，98% ) ；mp (MeOH/EtOAc > 300°C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 13. 48 (s, 1H, N+H), 10. 98 (s，1Η, NH)，10. 59 (s, 1H, NH)，10. 32 (s, 1H, NH)，8. 36-8. 31 (m, 3H, ArH)，8. 14 (d, J = 7. 0Hz, 1H, ArH), 8. 00-7. 91(m，4H，Ar H)，7. 67 (t, J = 7. 7Hz, 1H, ArH), 7. 57 (d, J = 7. 4H, 1H, ArH), 7. 40 (d, J = 8. 6Hz，2H，ArH), 7. 02 (d, J = 9. 2Hz, 1H, ArH), 6. 82 (bs, 1H, ArH)，6. 66(brs,2H, NH2)，6. 43 (d, J = 6. 9Hz, 1H, ArH), 3. 99(s，3H，N+CH3)。HRMS(FAB+)计算值 C28H25N6O (M+1)m/z 461. 2090,实测值 461. 2085。实施例Y.4-[4-({4-[(7-氨基-4-喹啉基)氨基]苯胺基}羰基)苯胺基]甲基吡啶鐺 氯化物(化合物Y)的制备 向化合物U(101mg，0. 19mmol)在 5 1 EtOH H2O(3mL)中的悬浮液加入 Fe 粉(53mg)，随后加入一滴AcOH。将得到的悬浮液剧烈搅拌并且回流3小时。使热的反应 混合物过滤通过硅藻土，并将硅藻土垫用热的EtOH洗涤。将合并的EtOH提取液蒸发到干 燥并将残余物提取到热水中。将溶液过滤通过硅藻土，然后蒸发到干燥。残余物与MeOH 共沸(3X 20mL)，然后溶解于MeOH(IOmL)。加入甲醇中的盐酸(1. 25M，2mL)，并将溶液搅 拌10分钟。然后将溶液蒸发到干燥，并将残余物从MeOH/EtOAc结晶，得到化合物Y(55mg， 58% )mp (MeOH/EtOAc) 290-295 °C ；1H NMR(CD3)2SO] δ 13. 44 (br, 1Η, N+H)，11. 04(s，1Η，NH)， 10. 50 (S，1H, NH)，10. 31 (s，1H, NH)，8. 38-8. 33 (m, 3H, ArH)，8. 15-8. 11 (m, 3H, ArH)，7. 97 (d, J = 8. 9Hz，2H，Ar H)，7. 51 (d, J = 8. 7Hz, 2H, ArH), 7. 41 (d, J = 9. 9Hz, 2H, ArH), 7. 33 (d, J =7. 5Hz,2H,ArH) ,7. 03(dd，J = 9. 2,2. 1Hz, 1H, ArH), 6. 81 (d, J = 2. 2Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,6. 67 (b s，2H，NH2)，6· 44(d，J = 7. IHz, 1H, ArH), 4. 01 (s, 3H, N+CH3) ；LCMS 461+ve。实施例Ζ.7-( 二甲基氨基)-4-[4-({3-[(1-甲基-4-吡啶鐺基)氨基]苯胺基}羰基)苯 胺基]喹啉鐺 将 4-氯-7- 二 甲基氨基喹啉(Zl) [Konishi 等人，WO 9611187Α1] (70mg, 0. 34mmol)加入到 A7 (lOOmg，0. 28mmol) ^ EtOH(20ml)溶液中，并且加入 H2O (IOmL)，然后 加入浓HCl (0. 25mL, 9eq)，并且回流2天。反应混合物的样品的质谱显示A7仍存在，因此加 入更多的4-氯-7-二甲基氨基喹啉(35mg，0. 17mmol)并且继续回流另外的5天。然后将 反应混合物蒸发到干燥。将残余物溶解于少量体积的MeOH，用EtOAc稀释。将得到的沉淀 物过滤，并从MeOH/EtOAc结晶，得到粗产物(160mg)，将其通过制备性HPLC纯化(将质量 数为489+ve的级分蒸发到干燥，并将残余物溶解于Et0H/H20 2 1 (5mL)，用EtOAc稀释， 并将得到的沉淀物过滤，得到化合物Z (20mg 13% )0通过HPLC分析为90%纯度；MP (MeOHEtOAc) 285-2890C (dec) ；1HNMR[ (CD3) 2S0] δ 13. 47 (br, 1H, N+H) 10, 54 (s, 1H, NH), 10. 51 (s, 1H，NH)，10. 49 (s，1H，NH)，8. 44 (d, J = 9. 7Hz, 1H, ArH), 8. 35-8. 30 (m, 3H, ArH) 8. 13 (d, J = 8. 6Hz,2H, ArH)，7. 98 (t, J=L 9Hz, 1H, ArH)，7. 63-7. 58 (m, 3H, ArH)，7. 49 (t, J = 8. IHz, 1H, ArH)，7. 40 (dd, J = 9. 6，2. 5Hz, 1H, ArH)，7. 18 (d, J = 7. 5Hz,2H, ArH)，7. 09 (dd, J = 7. 7，1. 3Hz，1H，ArH), 6. 81 (d, J = 2. 5Hz，lH，ArH), 6. 71 (d, J = 7. OHz, 1H, ArH), 3. 98 (s, 3H, N+CH3), 3. 16(s,6H, NMe2)；质谱 APCI+ve 489。实施例AA.4-[4-({4-[(7-二甲基氨基)喹啉_4_基氨基)苯甲酰氨基)-苯基氨基)-1-甲 基吡啶鐺二氯化物(化合物AA)的制备
(i) Et0H/H20/cat. HCI/间流向胺B7(311mg，0. 79mmol)溶解于1 2 EtOH H2O(3mL)的溶液顺序地加入浓 HCl (0. 22mL，0. 72mmol)和 4-氯-7- 二 甲基氨基喹啉(Zl) (175mg，0. 85mmol)。将得到的混 合物回流30小时(通过TLC跟踪反应进程，用n-BuOH H2O AcOH 5:4: 1混合物的上 相洗脱；Rf = 0. 30-0.40，在36511111为亮黄色斑点)。此后，减压除去溶剂。将残余物再溶解 于MeOH，并将溶剂再次减压除去。这个后面的处理再重复一次，并且残余物从MeOH EtOAc 结晶两次，得到化合物AA，为无定形的黄色固体(93mg，21% )。1H NMR[⑶3)2S0] 3. 15[s, 6H, ArN (CH3)2], 3. 96[s，3H，ArN+-CH3], 6. 72 [d, J = 7. OOHz，1H, ArH], 6. 91 [d, J = 2. 36Hz, IH ArH]，7. 14 [d，J = 7. 40Hz，2H, ArH]，7. 36 [m, 3H, ArH]，7. 62 [d，J = 8. 53Hz，2H, ArH]，
7.95[d，J = 8. 89Hz，2H,ArH]，8. 16[d，J = 8. 53Hz，2H,ArH]，8. 26[d，J = 7. 40Hz，2H,ArH]，
8.32 [d, J = 7. 00Hz，lH，ArH]，8. 57 [d, J = 9. 59Hz, 1H, ArH], 10. 53 [s，1H，-NH-]，10. 70 [s， 1H，-NH-]，10. 75[s，lH，-NH-]，13. 85[br s，1H，Ar-N+H]。LCMS (APCI+) :490 (100 % )， 491(20% )。HPLC :96. 7%。实施例BB.N- [4- (2-氨基-6-甲基嘧啶_4_基氨基)苯基]_4_ (7_ ( 二甲基氨基)喹啉_4_基 氨基)苯甲酰胺盐酸盐(化合物BB)的制备
(i) Et0H/H20/cat. HCI/回流MezN^^^^N·^向酰胺 E5(306mg，0. 83mmol)的 1 2 EtOH H2O(IOmL)溶液顺序地加入浓 HCl (0. 23mL)和4-氯-7-二甲基氨基喹啉(Zl) (188mg，0. 91mmol)，并将得到的混合物回流 20小时。之后[在反应混合物的MS和TLC分析(5:4:1 n-BuOH H2O CH3CO2H)显示剩余的少量e5正在降解时]，将反应混合物过滤，并且将得到的固体顺序地用etoac和己烷 洗涤，得到化合物bb，为无定形的柠檬-黄色固体(199mg,45%)0 1hnmiucd3)2s0] :2· 28[s, 3h, arch3], 3. 15[s,6h, arn(ch3)2] ,6. 18 [br s, 1h, arh], 6. 70 [d, j = 7. 02hz,lh, arh], 6. 88 [d, j = 2. 46hz，lh，ar h]，7. 38 [dd, j = 9. 62，2. 46hz，1h，arh], 7. 61 [d, j = 8.60， 2h,arh],7. 81[m,5h,arh & arnh2], 8. 14[d, j = 8. 60hz, 2h, arh], 8. 31[d, j = 7. 02hz, 1h, arh], 8. 55 [d, j = 9. 71hz,1h,arh],10. 41[br s,ιη,αγη],10. 65[m,2h,arnhar & arnhar]， 12. 68 [ν br s, 1h, arc (o)nh], 13. 77 [ν br s，1η，喹啉基 ν+η]。lcms (apci+) 506(100% ) hplc :96· 6%。实施例cc.7_( 二甲基氨基)-4-[4-({3-[(1-甲基-4-吡啶鐺基)氨基]苯甲酰基}氨基) 苯胺]喹啉鐺二氯化物(化合物cc)的制备 将4-氯-7-二 甲基氨基喹啉(zl) (71mg，0. 34mmol)和浓 hcl (0. 3ml，9eq)顺序地 加入到c6(104mg，0. 0. 29mmol)在etoh(ioml) _20(5ml)中的溶液中，并且将混合物回流 4天。然后反应混合物用etoac (150ml)稀释，回流，然后冷却到室温。将得到的沉淀物过 滤，然后溶解于少量体积的meoh。溶液用etoac稀释，并将得到的沉淀物过滤，然后通过制 备性 hplc 纯化，得到化合物 cc(13mg，8% ) :mp (meoh/etoac) 188°c (dec) ；1hnmr[ (cd3)2s0] δ 13. 22 (bd, j = 5. 7hz, 1h, n+h)，10. 61 (s, 1h, nh)，10. 51 (s, 1h, nh)，10. 38 (s, 1h, nh)， 8. 42 (d, j = 9. 7hz, 1h, arh), 8. 32 (d, j = 7. 5hz，2h，arh), 8. 23 (t, j = 6. 7hz, 1h, arh)， 7. 96-7. 92(m,3h,arh) ,7. 88(t, j = 1. 8hz, ιη,αγη) ,7. 69(t, j = 7. 9hz, ιη,αγη) ,7. 58 (dd, j = 8. 0，1. 4hz, lh,ar h)，7. 43(d, j = 8. 9hz, 2h,arh), 7. 34(dd, j = 9. 6,2. 6hz, ιη,αγη)， 7. 21 (d, j = 7. 5hz，2h，arh), 6. 77 (d, j = 2. 5hz，lh，arh), 6. 48 (d, j = 7. 1ηζ，1η，arh), 3. 99 (s，3h，n+ch3)，3. 15 [s，6h，n(ch3)2]。质谱 apci+ve 489。实施例dd.7_( 二甲基氨基)-4-[4-({4-[(l-甲基-4-吡啶鐺基)氨基]苯甲酰基}氨基) 苯胺]喹啉鐺二氯化物(化合物dd)的制备 将 4-氯-7-二 甲基氨基喹啉(zl) (140mg,0. 62mmol)和浓 hcl (0. 3ml，9eq)顺 序地加入到d5(110mg，0. 31mmol) ^ etoh(20ml)和h2o(ioml)中的溶液中，并且将混合物回流4天。反应混合物用EtOAc (150mL)稀释，回流，然后冷却到室温。将得到的沉淀物 过滤，然后溶解于少量体积的MeOH，然后将其用EtOAc稀释。将得到的沉淀物过滤，得到 粗产物，将其通过制备性HPLC纯化，得到化合物DD (47mg，27% )HPLC 99.9% ；mp (MeOH/ EtOAc) 198-200 "C ；1HNMR[ (CD3) 2S0] δ 13. 26 (br, 1H, N+H)，10. 71 (s，1H，NH)，10. 46 (s，1H， NH)，10. 37(brs, ΙΗ,ΝΗ) ,8. 43(d, J = 9. 6Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,8. 37(d, J = 7. 4Hz, 2H, ArH), 8. 23 (d, J = 7. OHz, 1H, ArH), 8. 11 (d，J = 8. 6Hz, 2H, ArH), 7. 96 (d, J = 8. 8Hz，2H，Ar H)，7. 50 (d, J =8. 6Hz，2H, ArH)，7. 43 (d，J = 8. 8Hz，2H, ArH)，7. 34 (dd，J = 9. 6，2. 4Hz，1H, ArH)，7. 28 (d, J = 7. 5Hz，2H，Ar H)，6· 78 (d, J = 2. 4Hz, 1H, ArH), 6. 49 (d, J = 7. OHz, 1H, ArH), 4. 01 (s, 3H，N+CH3)，3. 14 [s，6H，N(CH3)2]。质谱 APCI+ve 489。表2.本发明的示例性化合物 对于表2中的条目，R4为Η，Α为ΝΗ，并将X为H。除非另有说明，R6-R9为H。除非 另有说明，G7，G8，D1，并将D2为CH0 *G8 = N ；**D2 = N ；***D1 = N实施例EE.
4-[4-({3-[(2_氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺 基]-6-( 二甲基氨基)喹啉鐺氯化物(化合物EE)的合成
(i)EtOH/无水 HCI/回 Α；(ii) H2/10%Pd/C/MeOH; (iii) NaBH3CN/HCHO/NaOAc/MeOH/HCI/RT; (iv). 2N
HCI/EtOH 回 iiil; 乙Hi^ 乙醉/HCI/回农(viMii^ A6/EDCI/DMAP/DMF/RT.4- [4-(乙酰基氨基)苯胺基]-6-硝基喹啉鐺氯化物(A3)。向N- (4_氨基苯基) 乙酰胺(Al) (933mg，6. 2mmol)的乙醇(30mL)溶液加入含6-硝基-4-氯喹啉(A2) (1. 08g, 5. 18mmol)的乙醇(IOmL)，随后加入含4N HCl的1，4-二噁烷溶液(1. 5mL)。使反应混合物 回流30分钟，这时，TLC(Si02/8% MeOH/DCM)显示反应完成。反应混合物用EtOAc稀释使 其沸腾，然后将其冷却到20°C。将得到的沉淀物过滤，用EtOAc洗涤并且从MeOH重结晶，得 到 A3(l. 79g，96% ) ；mp (MeOH) > 280 °C ^H 匪 R[(CD3)2S0] δ 14. 59 (br, 1H, N+H), 11. 36 (br, 1H，NH)，10. 24 (s, ΙΗ,ΝΗ) ,9. 78 (d, J = 2. 3Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,8. 71(dd, J = 9. 3,2. 3Hz, ΙΗ,ΑγΗ), 8. 57 (d, J = 7. OHz, 1Η, ArH), 8. 21 (d, J = 9. 3Hz, 1Η, ArH), 7. 80 (d, J = 8. 8Ηζ，2Η，ArH)， 7· 42 (d，J = 8. 8Ηζ，2Η, ArH) ,6. 86(d, J = 7. OHz，1Η, ArH)，2. 09 (s，3H, COCH3)，APCI+Ve 323。4-[4_(乙酰基氨基)苯胺基]-6-氨基喹啉鐺氯化物(A4)。向(A3(1.75g， 4. 88mmol)在MeOH(IOmL)中的悬浮液加入10% Pd/C(0. Ig)并且氢化(在40psi压力下)2 小时。将反应混合物过滤并用更多的MeOH洗涤。将滤液浓缩到一半体积，用EtOAc稀释并 将其余的MeOH蒸发掉。得到的沉淀物过滤，用更多的EtOAc洗涤并且干燥，得到基本上纯 的(A4) (1. 255g 78% ) ；mp (MeOH/EtOAc) > 280°C ；1HNMR[ (CD3) 2S0] δ 13. 95 (br, 1H, N+H)， 10. 14(s，lH，NH)，10. 01(s，lH，NH), 8. 10 (d, J = 6. 7Hz，lH，ArH), 7. 74 (d, J = 8. 9Hz，3H， ArH), 7. 43 (d, J = 2. 2Hz, 1H, ArH), 7. 38-7. 32 (m, 3H, ArH), 6. 61 (d, J = 6. 7Hz, 1Η, ArH)， 5· 94(s，2H，NH2)，2· 08(s，3H，COCH3) ；APCI+ve 293。N- (4- {[6- ( 二甲基氨基)-4-喹啉基]氨基}苯基)乙酰胺(A5)。向A4 (1. 237g， 3. 76mmol)的 MeOH (50mL)溶液加入 38 % 甲酸水溶液(8. 4mL，112. 8mmol，30eq)， NaBH3CN(2. 134g，30. 08mmol,8eq)，NaOAc (526mg, 6. 41mmol)和 2 滴的浓 HCl。将反应混合 物在20°C搅拌2小时，这时，TLC(Si02/8% MeOH/DCM/aq NH3)和质谱显示反应完成。然后 将反应混合物用浓HCl酸化，在20°C搅拌1小时。之后，将反应混合物小心地用NH3水溶液 中和。将MeOH减压蒸发并且将含水的残余物与NH3水溶液一起搅拌。将得到的沉淀物过 滤，用水洗涤，得到基本上纯的A5(1.22g，91%)。将其不经进一步纯化使用；mp，(MeOH) >2800C ；1H NMR [(CD3)2SO] δ 9. 95 (s，1Η，NH)，8. 85 (bs，1H，NH)，8. 18 (d, J = 5，5Hz, 1H, ArH), 7. 72 (d, J = 9. 3Hz, 1H, ArH)，7. 65 (d, J = 8. 8Hz,2H, ArH)，7. 41 (dd, J = 9. 3，2. 6Hz, 1H, ArH), 7. 29-7. 26 (m, 3H, ArH) ,6. 67 (d, J = 5. 5Hz，lH，ArH), 3. 06[s,6H, N(CH3)2]，2. 06 (s， 3H, COCH3), ；APCI+ve 321。4- (4-氨基苯胺基)-6- ( 二甲基氨基)喹啉鐺氯化物(Α6)。向Α5在1，4_ 二噁烷 (20mL)中的悬浮液加入1.5M aq HCl (5mL)并使反应混合物回流2小时。然后将反应混合物 用MeOH/EtOAc稀释，使其回流并且将其冷却到20°C。将得到的沉淀物过滤，用EtOAc洗涤 并且干燥，得到基本上纯的A6，为浅黄色固体(1. 20g,100% ) ；mp (MeOH/EtOAc) 152-155 ；1H NMR[ (CD3)2SO] 14. 35 (br, 1H，N+H)，10. 50 (br, 2H, NH2), 8. 27 (d, J = 6. 6Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 92 (d, J = 9. 4Hz, 1H, ArH)，7. 65 (dd, J = 9. 5，2. 6Hz，1H, ArH)，7. 57 (d, J = 2. 4Hz, 1H, ArH)， 7. 54 (d, J = 8. 5Hz，2H，ArH), 7. 41 (d, J = 8. IHz，2H，ArH), 6. 68 (d, J = 6. 7Hz, 1H, ArH)， 3. 12(s,6H, [N(CH3)2] ；APCI+ve 279。3_[ (2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]苯甲酸盐酸盐(A9)。通过加热使3_氨 基苯甲酸(A7) (1. 02g，7. 42mmol)和 2-氨基-6-氯-4-甲基嘧啶(A8) (1. 08g，7. 42mmol) 溶解于2-乙氧基乙醇，然后加入一滴浓HC1，回流1小时并且冷却到20°C。将得到的沉淀 物过滤，用更多的2-乙氧基乙醇洗涤，随后用EtOAc洗涤。固体从MeOH/EtOAc重结晶，得 到 A9(l. 98g，95% )，为灰白色固体；mp > SOOtVH NMR [ (CD3) 2S0] δ 12. 97 (bs 2H，NH，并将 C00H)，10. 81 (s，1H, NH)，8. 22 (bs, 1H, ArH)，8. 03 (s, 1H, ArH)，7. 82 (br, 2H, NH2)，7. 72 (bd, J =7. 7Hz，1H，ArH)，7. 50 (t，J = 7. 9Hz，1H，ArH)，6. 22 (s，1H，ArH) ；APCI+ve 245。4-[4-({3-[(2_氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]苯甲酰基}氨基)苯胺 基]-6-( 二甲基氨基)喹啉鐺氯化物(15)(化合物EE)。将4-(4_氨基苯胺基)-6-( 二甲 基氨基)喹啉鐵氯化物(A6) (102mg,0. 32mmol), A9(lllmg，0. 32mmol)，并将 EDCI (151mg， 0. 64mmol)在DMF(5mL)中的混合物在20°C搅拌5分钟。然后加入DMAP(96mg，0. 64mmol) 并将反应混合物在20°C搅拌72小时。将溶剂减压除去并将残余物用H2O稀释并用NH3水溶 液碱化。将得到的沉淀物过滤，用水洗涤，并且通过在SiO2中的色谱法进行纯化，用0-5% DCM/MeOH和1% NH3水溶液的梯度洗脱，得到102mg 62%。将其样品(98mg,0. 19mmol)溶 解于Me0H(5mL)并且加入含4N HCl的1，4_ 二噁烷(0. 3mL)并且搅拌30分钟。然后将其 用EtOAc稀释并将得到的沉淀物过滤和从MeOH/EtOAc重结晶，得到化合物EE(107mg) ；1H 匪R[ (CD3)2SO] δ (13. 9 br 1H, N+H)，12. 9(br(lH, N+H)，10. 58 (s, 2H, 2 X NH)，10. 40 (s, 1H, NH)，8. 26(d, J = 6. 8Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ,8. 38 (br ΙΗ,ΑγΗ) ,8. 06 (bs, ΙΗ,ΑγΗ) ,8. 00(d, J = 8. 9Hz, 2Η, ArH)，7. 89 (d, J = 9. 4Hz, 1Η, ArH)，7. 75 (bd, J = 7. 6Hz, 1Η, ArH)，7. 56-7. 52 (m, 2Η, ArH), 7. 46 (d, J = 8. 8Ηζ，2Η，ArH), 6. 67 (d, J = 6. 8Hz, 1Η)，6· 19 (s，1Η, ArH), 3. 12[s，6H， (NCH3)2]，2. 28 (s，3Η，CH3)，没有观察到 NH2 的信号，APCI+ve 505。实施例FF.3-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N_[4_(4-喹啉基氨基)苯基]苯甲酰 胺二盐酸盐(化合物FFl)和相关的化合物(化合物FF2)的制备 3-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N-(4_硝基苯基)苯甲酰胺盐酸盐(B2)。 将3-氨基-N- (4-硝基苯基)苯甲酰胺(Bi) (1. Og, 3. 89mmol)和4-氯-6-甲基-2-嘧啶基 胺(A8) (569mg，3. 89mmol)溶解于温热的2-乙氧基乙醇(20mL)。然后向反应混合物加入两 滴浓HCl并且回流1小时。这时，TLC和质谱显示反应完成。反应混合物用乙酸乙酯稀释并 且冷却到20°C。得到的沉淀物过滤，用更多的EtOAc洗涤并且从MeOH/EtOAc/炭/硅藻土 重结晶，得到 B2(l. 531g，98% ) ；m. ρ (MeOH/EtOAc) > 300 °C ；1H 匪 R[(CD3)2S0] δ 12. 86 (br s, 1H，N+H)，10. 90 (s，ΙΗ,ΝΗ)，10. 80 (br s, ΙΗ,ΝΗ)，8· 30-8. 26 (m, 2Η, ArH), 8. 11-8. 08(m，4H， ArH), 7. 80-7. 78 (br m,3H,ArH & NH2), 7. 56 (t, J = 7. 8Hz, 1Η, ArH), 2. 30 (s, 3Η, CH3)；质谱 APCI+365。3-[(2_氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]_Ν_(4_氨基苯基)苯甲酰胺盐酸盐 (Β3)。向化合物 B2(l. 41g，3. 51mmol)在(MeOH) 30 (mL)中的悬浮液加入 10% Pd/C(20mg) 并且在45Hgmm下氢化5小时。将反应混合物过滤通过硅藻土垫并将滤液蒸发到干燥。将 残余物溶解于少量体积的MeOH，然后加入Iml的含1. 25M HCl的MeOH，搅拌10分钟并且 蒸发到干燥。残余物从 MeOH/EtOAc 重结晶，得到 B3(758mg，58% ) ；m. p. (MeOH/EtOAc) ；1H NMR[(CD3)2SO] δ 12. 70 (br, 1H, NH)，10. 83 (br s, 1H, NH)，10. 43 (s, 1H, NH)，9. 70 (v br,2H, NH2) ,8. 05-7. 84 (br m, 2H, Ar H), 7. 85-7. 75(m,4H, ArH & NH2)，7. 55 (t，J = 7. 9Hz，1H，Ar H)，7· 28 (d, J = 8. 7Hz，2H，ArH), 6. 24 (s，1H, ArH), 2. 30(s，3H，CH3)；质谱 APCI+335。3-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N_[4_(4-喹啉基氨基)苯基]苯甲酰 胺二盐酸盐(化合物 FFl)。向化合物 B3(150mg，0. 37mmol)在 EtOH(15mL)和 H2O (7. 5mL) 中的溶液加入4-氯喹啉(73mg，0.45mmol)并且搅拌，直到其溶解，然后加入2滴的浓HCl。 将反应混合物回流20小时，用EtOAc稀释，使其沸腾并且冷却到20°C。将得到的沉淀物 过滤并且从MeOH/EtOAc/炭/硅藻土重结晶，得到化合物FFl (195mg，96 % )，为黄色固 体。M. P (MeOH/EtOAc) > 300 °C ；1H 匪 R[(CD3)2S0] δ 13. 72 (ν br, 2Η, 2ΧΝ+Η), 10. 91 (br s, 1Η, NH)，10. 96 (br s, 1Η, NH)，10. 56 (s, 1Η, ΗΝ), 8. 79 (d, J = 8. 5Hz, 1Η, ArH), 7. 50 (d, J = 6. 9Ηζ，1Η，ArH) ,8. 14-7. 99(m,6H, ArH &ΝΗ2)，7. 83 (m，3Η，ArH)，7. 55 (t，J = 7. 9Ηζ，1Η， ArH), 7. 49 (d, J = 8. 8Hz, 2Η, ArH), 6. 78 (d, J = 6. 9Hz, 1Η, ArH), 6. 24 (s，1Η, ArH), 2. 30 (s, 3Η, ArH)，质谱 APCI+476。
3-[(2，6_ 二氨基-4-嘧啶基)氨基]-N-(4_硝基苯基)苯甲酰胺盐酸盐(B5)。将 3_氨基-N-(4-硝基苯基)苯甲酰胺(Bi) (1. QlgA. 14mmol)和4-氯_2，6_二氨基嘧啶(B4) (569mg，3. 89mmol)溶解于温热的2-乙氧基乙醇(20mL)。然后向反应混合物加入两滴浓HCl 并且回流20小时，这时，TLC和质谱显示反应完成。反应混合物用乙酸乙酯稀释并且冷却 到20°C。将得到的沉淀物过滤，用更多的EtOAc洗涤并且从MeOH/EtOAc/炭/硅藻土重结 晶，得到化合物85(82411^，50%)，1114(]^0!1/^切八(；)> SOO0C51H 匪 R[(CD3)2S0] δ 11. 57 (br, 1H, N+H)，10. 84 (s，1H, NH)，9. 98 (s, 1H, NH)，8. 30-8. 26 (m, 2H, Ar)，8. 10-8. 07 (m, 2H, ArH)， 8. 06 (br s, 2H, NH 2)，7. 70 (d, J = 7. 2Hz, 1H, ArH)，7. 53-7. 49 (m, 3H, ArH)，7. 38 (br s, 2H, NH2)，质谱 APCI+366。N-(4_氨基苯基)-3-[(2，6_ 二氨基-4-嘧啶基)氨基]苯甲酰胺盐酸盐(B6)。 向化合物 B5(567mg，1.41mmol)在(MeOH) (30mL)中的悬浮液加入 10% Pd/C(20mg)并且 在40Hgmm下氢化6小时。将反应混合物过滤通过硅藻土垫并将滤液蒸发到干燥。将残余 物溶解于少量体积的MeOH，然后加入Iml的含1. 25M HCl的MeOH，搅拌IOmin并且蒸发到 干燥。残余物从 MeOH/EtOAc 重结晶，得到 B6(398mg，76% ) ；mp (MeOH/EtOAc) > SOOdCj1H 匪R[(CD3)2SO] δ 10. 37 (s，1Η, NH)，9. 93 (s, 1H, NH)，7. 92-7. 80(m，4H，ArH&NH2), 7. 68 (d, J =7. 7Hz,lH,ArH),7. 61(br s, 2H, NH2), 7. 49-7. 45 (m, 3H, ArH), 7. 24 (br d, J = 8. 7Hz，2H， ArH)，5. 45 (s，1H，ArH)，质谱 APCI+336。3-[(2，6- 二氨基-4-嘧啶基)氨基]-N_[4_(4-喹啉基氨基)苯基]苯甲酰胺二 盐酸盐(化合物 FF2)。向化合物 B6(150mg，0. 37mmol)在 EtOH(15mL)和 H2O (7. 5mL)中的 溶液加入4-氯喹啉(73mg，0. 45mmol)并且搅拌，直到其溶解，然后加入2滴的浓HCl。将反 应混合物回流20小时，用EtOAc稀释，使其沸腾并且冷却到20°C。将得到的沉淀物过滤并 在NH3水溶液(20ml)中搅拌，以转化为游离碱。将这个新的沉淀物过滤并且色谱纯化(中 性Al2O3，0-7% DCM/MeOH)，得到产物的纯的游离碱。然后使用含1. 25M HCl的MeOH将其转 化为 HCl 盐，得到化合物 FF2(139mg，70% ) ；m. ρ (MeOH/EtOAc) > 300°C。1H 匪 R[(CD3)2S0] δ 14. 25 (br, 1Η, N+H)，12. 00 (br, 1Η, N+H)，10. 95 (s，1H, NH)，10. 53 (s，1H, NH), 9. 93 (s，1Η, NH) ,9. 05 (d, J = 8·5Ηζ，1Η，ArH), 7. 51 (d, J = 7. OHz, 1Η, ArH), 8. 06-8. 00 (m, 5Η, ArH), 7. 95-7. 91 (br m, 2Η, NH2)，7. 81 (d d, J = 7. 6，1. 4Hz, 1Η, Ar H)，7. 71 (d, J = 7. 6Hz, 1Η, ArH), 7. 58(s，2H，NH2), 7. 57-7. 47(m，5H，ArH), 6. 78 (d, J = 7. OHz，1Η, Ar H)，6. 78 (d, J = 7. OHz，1Η, ArH), 5. 46 (s, 1Η, ArH) ；HRMS (FAB+)计算值 C26H23N8O(M+1)m/z463. 1995，实测值 463.1992。实施例GG.4-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N-[4-(4-喹啉基氨基)苯基]苯甲酰 胺二盐酸盐(化合物GGl)和相关化合物(化合物GG2，化合物GG3，化合物GG4，化合物GG5)
的制备
81
(i)2-乙氧基乙醇/H+/回流；(ii)H210%Pd/C/MeC)H; (iii)取代的 4_氯喹淋/Et0H/H20/回流4- [ (2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N- (4_硝基苯基)苯甲酰胺(5)。将4_氨 基-N-(4-硝基苯基)苯甲酰胺(Cl) (730mg,2. 84mmol)和4-氯-6-甲基_2_嘧啶基胺(A8) (416mg,2. 84mmol)溶解于温热的2-乙氧基乙醇(20mL)中，然后向反应混合物加入两滴浓 HC1，回流40分钟。这时TLC和MS显示反应完成。反应混合物用乙酸乙酯稀释并且冷却到 20°C。将得到的沉淀物过滤并用更多的EtOAc洗涤，得到固体产物。将其悬浮在MeOH中并 用NH3水溶液碱化并用水稀释。将得到的沉淀物过滤并且干燥，得到C2(671mg)。将滤液浓 缩，得到另外的 276mg 的 C2(合计 92% ) :mp (MeOH) > SOO0C51H NMR [ (CD3) 2S0] δ 10. 59 (s, 1H, NH)，9. 37 (s，1H, NH)，8. 27-8. 24 (m, 2H, ArH)，8. 09-8. 06 (m, 2H, ArH)，8. 05-7. 90 (m, 4H, ArH), 6. 25(s，2H，NH2)，5. 96 (s, 1H, ArH), 2. 16(s，3H，CH3)；质谱 APCI+365。4-[(2_氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]_N_(4_氨基苯基)苯甲酰胺(C3)。将 C2 (671mg, 1. 84mmol)在 Me0H(50mL)中的悬浮液在 40Hgmm 氢化(10% Pd/C 50mg)3 小时。 产物沉淀出来，为白色固体。将反应混合物在(Me0H/HCl/H20) (IOOmLAmIVSOmL)中搅拌并 且过滤以除去Pd/C残余物。将滤液蒸发到干燥并且从MeOH/EtOAc结晶，得到C3(740mg， 99 % ) ；Μ. P. (MeOH/EtOAc) > 300 "C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 10. 96 (bs, 1H, NH), 10. 38 (s, IH NH)，8. 02-7. 97 (m, 4Η, ArH) ,7. 86 (d, J = 8. 8Ηζ，2Η, ArH) ,7. 30 (d, J = 8. 8Ηζ，2Η, ArH)， 6. 30 (d, J = 0.6Hz，lH，ArH)，2. 33 (s，3H，CH3)。2XNH2 基团的信号没有观察到；质谱 APCI+335。4-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N_[4_(4-喹啉基氨基)苯基]苯甲酰胺 二盐酸盐(化合物GGl)。向C3(218mg，0. 54mmol)在Et0H(20mL)和H2O (IOmL)中的溶液加入 4_氯喹啉(96mg，0. 59mmol)并且搅拌，直到其溶解，然后加入2滴的浓HCl。将反应混合物 回流3小时，用EtOAc稀释，使其沸腾并且冷却到20°C。将得到的沉淀物过滤并且从MeOH/ EtOAc/炭/硅藻土重结晶，得到化合物GGl (259mg98% )，为黄色固体。M. P(MeOH/EtOAc) > 300 "C ；1H 匪R[ (CD3)2SO] δ 13. 75 (br. 2H，2XN+H)，11. 07 (s, 1H, NH)，10. 99 (s, 1H, NH)， 10. 52 (s，1H, NH)，8. 83 (d, J = 8. 4Hz, 1H, ArH)，8. 50 (d, J = 7. OHz，1H, ArH)，8. 11-7. 99 (m,10H, ArH & NH2)，7. 80 (dt, J = 8. 0，1. 1Hz, 1H, ArH), 7. 48 (d, J = 8. 9Hz, 2H, ArH), 6, 78 (d, J = 7. OHz, 1H, ArH), 6. 35 (s, 1H, ArH), 2. 31 (s, 3H, CH3) ； 13C 匪R[ (CD3)2SO] δ 164. 8,161. 6, 155. 9，155. 0，153. 3，142. 5，141. 4，138. 4，138. 1, 133. 7，132. 1，129. 6，128. 5(2XC)， 126. 8，125. 8 (2XC)，123. 5，121. 4(2XC)，120. 2，120. 1，116. 9,99. 6,94. 3，18. 4，有一个季 碳难以观察到；HRMS FAB+ 计算值 C27H25N7O (M+1)m/z，462，2042 实测值 462. 2047。4- [ (2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N- {4_ [ (6_硝基_4_喹啉基)氨基]苯 基}苯甲酰胺二盐酸盐(化合物GG4)。向化合物C3(200mg，0. 49mmol)在EtOH(20mL)和 H2O(IOmL)中的溶液加入4-氯-6-硝基喹啉(113mg，0. 54mmol)并且搅拌直到其溶解，然后 加入2滴的浓HCl。将反应混合物回流3小时，用EtOAc稀释，使其沸腾并且冷却到20°C。将 得到的沉淀物过滤并且从MeOH/EtOAc/炭/硅藻土重结晶，得到化合物GG4 (247mg 87%), 为黄色固体。M. P (MeOH/EtOAc) 295-300 "C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 13. 50 (br，2Η，2ΧΝ+Η)，
11.32 (br, 1H, NH), 11. 00 (brs, 1H, NH)，10. 51(s，lH，NH) ,9. 81 (d, J = 2. 2Hz，lH，ArH), 8. 69 (dd, J = 9. 3,2. 2Hz, 1H, ArH), 8. 59 (d, J = 6. 9Hz, 1H, ArH), 8. 24 (d, J = 9. 3Hz, 1H, ArH)，8. 06-7. 98 (m, 7H, ArH & NH2)，7. 48 (d，J = 8. 9Hz，2H, ArH)，6. 90 (d，J = 6. 9Hz，1H, ArH)，6. 32 (s, 1H, ArH)，2. 32 (d, J = O. 4Hz,3H, CH3) ；HRMS (FAB+)计算值 C27H23N8O3 (M+1)m/z 507. 1893，实测值 507. 1896。4- [ (2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N- {4_ [ (6_氨基_4_喹啉基)氨基]苯 基}苯甲酰胺二盐酸盐(化合物GG3)。向化合物GG4(140mg，0. 24mmol)在(MeOH) 30 (mL)中 的悬浮液加入10% Pd/C并且在45Hg mm下氢化1小时。将反应混合物过滤通过硅藻土垫 并将滤液蒸发到干燥。将残余物溶解于少量体积的MeOH，然后加入Iml的含1. 25M HCl的 MeOH,搅拌IOmin并且蒸发到干燥。残余物从MeOH/EtOAc重结晶，得到化合物GG3 (107mg, 81 % ) ；m. p. (MeOH/EtOAc) > 300 "C 1H 匪R[ (CD3)2SO] δ 14. 13 (d, J = 5·6Ηζ，1Η，N+H),
12.95 (s，1Η, N+H)，10. 97 (s, 1Η, NH)，10. 44，(s, 1Η, NH)，10. 20 (s, 1H, NH)，8. 22 (t, J =
6.5Hz, 1H, ArH), 8. 05-7. 96 (m, 7H, Ar H)，7. 79 (d, J = 9. IHz，1H, ArH), 7. 49 (d, J = 1. 9Hz, 1H, ArH)，7. 43-7. 38 (m, 3H, ArH)，6. 66 (d, J = 6. 8Hz, ArH)，6. 30 (s, 1H, ArH)，2. 24 (d, J = 0. 6Hz，3H，CH3) ；HRMS (FAB+)计算值 C27H25N8O (M+1)m/z 477. 2151，实测值 477. 2153。4- [ (2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N- {4_ [ (7_硝基_4_喹啉基)氨基]苯 基}苯甲酰胺二盐酸盐(化合物 GG5)。向 C3(235mg，0. 58mmol)在 Et0H(20mL)和 H2O (IOmL) 中的溶液加入4-氯-7-硝基喹啉(132mg，0.63mmOl)并且搅拌直到其溶解，然后加入2滴 的浓HC1。将反应混合物回流5小时，用EtOAc稀释，使其沸腾并且冷却到20°C。将得到 的沉淀物过滤并且从MeOH/EtOAc/炭/硅藻土重结晶，得到化合物GG5 (317mg 94% )，为 黄色固体。m. ρ (MeOH/EtOAc) > 300°C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 12. 9(br, 1H, N+H), 10. 81 (brs, 2Η，2ΧΝΗ)，10. 44(s，lH，NH), 8. 93 (d, J = 9. 3Ηζ，1Η，ArH), 8. 81 (d, J= 1.9Ηζ，1Η，ArH), 8. 66 (d, J = 6. 6Ηζ，1Η, ArH)，8. 46 (d，J = 8. 9Ηζ，1Η, ArH)，8. 05-7. 98 (m, 8H, ArH & NH2)，
7.47 (d, J = 8. 8Hz, 1H, ArH), 6. 94 (d, J = 6. 6Hz, 1H, ArH), 6. 26 (s, 1H, ArH), 2. 32(s，3H， CH3) ；HRMS (FAB+)计算值 C27H23N8O3 (M+1)m/z 507. 1893，实测值 507. 1885。4- [ (2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N- {4_ [ (7_氨基_4_喹啉基)氨基]苯 基}苯甲酰胺二盐酸盐(化合物GG2)。向化合物GG5 (150mg, 0. 25mmol)在(MeOH) 30 (mL) 中的悬浮液加入10% Pd/C(20mg)并且在45Hg mm下氢化1小时。将反应混合物过滤通过硅藻土垫并将滤液蒸发到干燥。将残余物溶解于少量体积的MeOH，然后加入Iml的含 1. 25MHC1的MeOH，搅拌IOmin并且蒸发到干燥。残余物从MeOH/EtOAc重结晶，得到化合 物 GG2(141mg, 100 % )，m. ρ (MeOH/EtOAc) 257-262 °C。1H 匪R[(CD3)2SO] δ 13. 45(br,2H, 2 X N+H)，10. 33(s, 1H, NH)，10. 30(s, 1H, NH)，10. 00 (br, 1H, NH), 8. 33 (d, J = 9. 4Hz, 1H, ArH) ,8. 14 (d, J = 7. OHz，1Η, ArH)，3. 19-7. 92 (m, 6H, ArH)，7. 39 (d，J = 8. 9Hz，2H, ArH)， 7. 04-7. 01(br m，3H，Ar H)，6· 86 (d, J = 2. 2Hz, 1H, ArH), 6. 67 (br s，2H，NH2)，6· 43 (d, J = 7. ΟΗζ,ΙΗ,ΑγΗ & NH2))，6· 13(s，lH，ArH)，2· 22(s，3H，CH3) ；HRMS(FAB+)计算值C27H25N8O(Μ+1) m/z 477. 2151，实测值 477. 2153。实施例HH.4-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N-(4-{[6-( 二甲基氨基)-4-喹啉基] 氨基}苯基)苯甲酰胺二盐酸盐(化合物HH)的制备4-[(2_氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]苯甲酸盐酸盐(D2)。将对氨基苯甲酸 (Dl) (1.48g, 10. 8mmol)和 4-氯-6-甲基-2-嘧啶胺(A8) (1. 60g, 11. 9mmol)溶解于温热的 2-乙氧基乙醇(20mL)，然后加入两滴浓HCl并且回流1小时。将反应混合物冷却到20°C 并将得到的沉淀物过滤，用更多的2-乙氧基乙醇和EtOAc洗涤。使固体在MeOH中沸腾，冷 却并且过滤，用更多的MeOH洗涤并且干燥，得到D2 (2. 89g，95% ) ；m. p. (MeOH) > SOO0C51H NMR[(CD3)2SO] δ 12. 93 (br, 1H, N+H 或 C00H)，12. 80 (br, 1H, N+H 或 C00H)，10. 87 (s, 1H, NH)，
7.92(s，6H，ArH &NH2)), 6. 27 (s, 1H, ArH), 2. 32(s，3H，CH3)；质谱 APCI+245。4-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]_N_ (4_ {[6_ ( 二甲基氨基)_4_喹啉基] 氨基}苯基)苯甲酰胺二盐酸盐(化合物HH)。将化合物D2(lllmg，0. 4mmol), EDCI (155mg, 0. 72mmol)和 DMAP(174mg, 1. 44mmol)在 N-甲基吡咯烷酮(5mL)中在 20°C搅拌 5min。然后 加入N4- (4-氨基苯基)-N6，N6- 二甲基-4，6-喹啉二胺(100mg，0. 36mmol)并将反应混合物 在20°C搅拌20小时。反应混合物用水稀释并且搅拌。将得到的沉淀物过滤，用水洗涤并且 空气干燥。将这个固体溶解于热的MeOH，与炭一起沸腾并且过滤通过硅藻土垫。将滤液蒸 发到干燥并将得到的残余物溶解于MeOH(IOmL)，加入含1. 25M HCl的MeOH(ImL)并且搅拌 10分钟。将溶剂蒸发并将残余物从MeOH/EtOAc重结晶，得到化合物HH(135mg，65% )，为黄 色固体；m. p. (MeOH/EtOAc) > SOO0C51H NMR[ (CD3) 2S0] δ 14. 10 (br, 1H, N+H), 12. 75 (br, 1Η, N+H)，10. 85 (br, 1Η, NH)，10. 45 (s, 1H, NH)，10. 40 (s, 1H, NH)，8. 27 (d, J = 6. 8Hz, 1H, ArH)，
8.08-7. 99(m，6H，ArH), 7. 88 (d, J = 9. 4Hz, 1H, ArH), 7. 65 (dd, J = 9. 4,2. 5Hz, 1H, ArH)， 7. 54 (d，J = 2. 4Hz，1H, ArH)，7. 45 (d，J = 8. 9Hz，2H, ArH)，6. 67 (d，J = 6. 8Hz，1H, ArH)， 6. 27 (s, 1H, ArH) ,3. 12[s，6H，N (CH3)2], 2. 32(s，3H，CH3)；质谱 APCI+505。实施例II. N-[3-(2-氨基-6-甲基嘧啶_4_基氨基)苯基]_4_ (喹啉_4_基氨基)苯甲酰胺 盐酸盐(化合物II)的制备
乙乙醇/cHcl/回潞(H)Fe 粉/(2:1)Ε 0Η/Η20>2% ν/ν HCI/回脔(Hi)^g甲Bfc&A比^/EtOH/回沈(iv)2:l Et0H/H20/cHC卿流6-甲基-N4-(3-硝基苯基)嘧啶_2，4-二胺(El)。向2_氨基_4_氯_6_甲基-嘧 啶(A8) [10. 04g，69. 93mmol]和 3-硝基苯胺 99. 95g，72. 02mmol)在 2-乙氧基乙醇(300mL) 中的悬浮液加入浓HCl (30mL)，并使得到的溶液回流 16小时。此后，使反应混合物冷却 到室温，然后用盐水和H2O稀释。将得到的悬浮液过滤通过硅藻土垫，然后将如此收集的固 体物质再溶解于MeOH，并过滤通过硅藻土垫。将溶剂减压除去，得到二胺E1，为无定形的米 色固体，其不经进一步纯化使用=1H NMR(400MHz, DMS0) δ 12. 97 (br s, 1H，嘧啶基-N+-H)， 11. 03 (s，1H, ArNHAr) ,8. 52 (s, ΙΗ,ΑγΗ) ,8. 31(d，J = 7. 83Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 97(ddd, J = 8. 20， 2. 19，0. 72Hz, 1Η, ArH), 7. 83 (ν br s，2H，ArNH2), 7. 66 (t, J = 8. 21Hz, 1Η, Ar H)，6· 25 (s, ΙΗ,ΑγΗ), 2. 31 (s, 3Η, ArCH3) ； LCMS (APCI+) 246(100% ) N4-(3-氨基苯基)-6-甲基嘧啶-2，4-二胺(Ε2)。向在回流的二胺El在2 1 EtOH H20(500mL)中的悬浮液顺序地加入Fe粉(15. 6g，相对于1为4摩尔当量)和浓 HCl (IOmL)，并将得到的混合物回流过夜。此后，将热的反应混合物过滤通过硅藻土垫，并将 溶剂减压除去。将残余物再溶解于热的H2O,并使得到的悬浮液过滤通过硅藻土垫。将溶剂 减压除去，并将残余物通过三个MeOH-共沸循环干燥。得到的残余物从酸化的MeOH EtOAc 再沉淀，得到二胺E2(5. 36g，30%来自A8)，为无定形的棕褐色固体；1H NMR(400MHz,DMS0) δ 12. 90 (ν ν br s，1H，嘧啶基-N+-H)，11. 00 (br s, 1H, Ar H) ,9. 75 (ν ν br s，2H，ArNH2), 8. 20-7. 50(m，4H，ArH & ArNH2), 7. 37 (t, J = 8. 05Hz, 1H, ArH), 6. 98 (d, J = 7. 82Hz, ArH, 1H)，6· 26 (s，1H, ArH), 2. 29(s，3H，ArCH3) ；LCMS (APCI+) 216(100% ) ,217(40% )。N-[3_(2-氨基-6-甲基嘧啶_4_基氨基)苯基]_4_硝基苯甲酰胺(E3)。向二胺 E2(5. 25g,20. 85mmol)和无水吡啶(8. 40mL, 104. 26mmol)在无水二噁烷(200mL)中的悬浮 液加入4-硝基苯甲酰氯(10. 79g，58. 13mmol)，并将得到的溶液回流 14小时。此后，将反 应混合物冷却到室温，然后通过添加氨水溶液碱化。得到的溶液用H2O稀释，并通过过滤收 集得到的沉淀物，得到酰胺E3，为无定形的黄色-褐色固体(7. 89g，94% )[将少量的这个
85物质从酸化的MeOH EtOAc再沉淀用于表征，并将主要部分的物质不经进一步纯化使用]； 1H NMR(400MHz, DMS0) δ 12. 99 (br s, 1H,嘧啶基-N+-H)，10. 82 (s, 1H, ArNHAr)，10. 76 (br s, 1H, ArC (0) NHAr), 8. 35 (dd, J = 6. 92，1. 99Hz，2H，ArH), 8. 27 (d, J = 6. 92，1. 99Hz，2H， ArH), 7. 90 (ν ν ν br s, 2Η, ArNH2), 8. 20-7. 50 (m, 4Η, ArH & ArNH2), 7. 45-7. 10 (m，2Η，ArH)， 6. 25 (s, 1Η, ArH), 2. 28 (s, 3Η, ArCH3) ；LCMS (APCI+) 365(100% ) 4-氨基-N-[3-(2-氨基-6-甲基嘧啶-4-基氨基)苯基]苯甲酰胺(Ε4)。向在回 流的酰胺Ε3 (7. 89g，20. OOmmol)在2 1 EtOH H20(500mL)中的悬浮液顺序地加入Fe粉 (4. 40g,79mmol)和浓HCl (2% v/v, IOmL)，并且将得到的混合物回流 14小时。此后，将热 的反应混合物过滤通过硅藻土垫，并将溶剂减压除去。将残余物再溶解于热H2O,并使得到 的悬浮液过滤通过硅藻土垫。将溶剂减压除去，并将残余物通过三个MeOH-共沸循环干燥。 得到的残余物从酸化的MeOH EtOAc再沉淀，得到胺Ε4，为无定形的棕褐色固体(0.95g， 12% ) ；1H NMR(400MHz, DMS0) δ 12. 71 (br s，1H，嘧啶基-N+-H)，10. 55 (br s, 1H, ArC(O) NHAr)，9. 95 (s, 1H, ArNHAr)，8. 10-7. 40 (m, 7H, ArH & ArNH2)，7. 32 (m, 1H, ArH)，6. 77 (d, J = 8. 30Hz，2H，ArH), 6. 18 (s，1H, ArH), 2. 28(s，3H，ArCH3) ； LCMS (APCI+) 335(100% )。N-[3-(2-氨基-6-甲基嘧啶-4-基氨基)苯基]_4_ (喹啉_4_基氨基)苯甲酰 胺盐酸盐(化合物II)。向胺E4(0.26g，0.63mmol)在1 2Et0H H20(30mL)中的溶液 顺序地加入4-氯喹啉(0. 62g，3. 78mmol)和浓HCl (0. 17mL, 5. 67mmol)，并将得到的混合物 回流3小时(通TLC跟踪反应进程，用n-BuOH H2O 乙酸的5 4 1混合物的上相洗 脱；产物Rf = 0. 43，在用KMNO4染色之后为黄色斑点)。此后，将溶剂减压除去，并将残余 物通过三个MeOH-共沸循环干燥。残余物从MeOH EtOAc再沉淀，得到化合物II，为无定 形的柠檬色-黄色固体(0. 27g，79% ) ；mp 251_255°C (粉末_胶状物)；1H NMR(400MHz, DMS0) δ 14. 78 (ν brs，1Η，喹啉基-Ν+-Η)，12. 79 (ν br s，1H，嘧啶基-N+-H)，11. 14 (s，1H， ArNHAr), 10. 64 (br s, 1H, ArC(O)NHAr), 10. 52 (s, 1H, ArNHAr), 8. 87 (d, J = 8.44Hz，lH， ArH), 8. 61 (d，J = 6. 94Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,8. 30-7. 45 (m, 12H,ArH & ArNH2)，7. 38 (t, J = 8. 07Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 00 (d, J = 6. 94Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,6. 22 (s, IH ArH), 2. 29 (s, 3H, ArCH3) ；LCMS (APCI+) 463(100% ) ；HPLC :95· 4%。实施例JJ.(E)-N-[3-(l-{( 二氨基甲叉基)亚胼基}乙基)苯基]_4-[6_( 二甲基氨基)喹 啉-4-基氨基]苯甲酰胺二盐酸盐(化合物JJl)和相关化合物(化合物JJ2)的合成 (E)-N-[4-(l-{ 二氨基甲叉基}亚胼基)乙基]_3_硝基苯盐酸盐(F2)。向氨基 胍硫酸盐(21. 25g，80. 41mmol)和 3-硝基苯乙酮(Fl) (13. 53g，81. 93mmol)在Me0H(400mL) 中的溶液加入浓HCl(2.44mL，80.42mmol)并将得到的混合物回流 14小时。从得到 的白色悬浮液除去溶剂，得到二胺F2，为无定形的白色固体，其不经进一步纯化使用；1H NMR(400MHz, DMS0) δ 11. 00 (ν ν br s，1H，腙基-N+-H), 8. 59 (t, J= 1. 94Hz, 1H, ArH)， 8. 39 (d, J = 7. 87Hz, 1H, ArH), 8. 19(ddd, J = 8. 14，2. 18，0. 82Hz, 1H, ArH), 7. 83 (br s, 4H, = C(NH2)2) ,7. 66 (t, J = 8·05Ηζ，1Η，ArH), 2. 40(s,3H, Ar (CH3) = N-) ；LCMS (APCI+) 222(100% )。(E)-N-[4-(l-{二氨基甲叉基}亚胼基)乙基]_3_苯胺二盐酸盐(F 3)。向在回流 的二胺F2在2 1 EtOH H2O (500mL)中的悬浮液顺序地加入Fe粉(17. 87g，320. OOmmol， 4摩尔当量)和浓HCl (IOmL)，并将得到的混合物回流14小时。此后，使热的反应混合物过 滤通过硅藻土垫，并将溶剂减压除去。将残余物再溶解于热H2O,并使得到的悬浮液过滤通 过硅藻土垫。将溶剂减压除去，并将残余物通过三个MeOH-共沸循环干燥。得到的残余物从 酸化的MeOH/EtOAc再沉淀，得到三胺F3 (10. 78g，经两个步骤51 % )，为无定形的白色固体； 1HNMR(400MHz, DMS0) δ 11. 35 (s, 1H,腙基 I-N+-H)，9. 40 (ν ν brs, 3H, ArNH3+)，7. 84 (br m, 5H,ArH & = C (NH2) 2)，7. 75 (s, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 43(t, J = 7. 91Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 27(d, J = 8. 27Hz, 1Η, ArH) ,2. 34(s,3H, Ar(CH3) =N-) ；LCMS(APCI+) 192(100% ) (E)-N-[3-(l-{( 二氨基甲叉基)亚胼基}乙基)苯基]_4_硝基苯甲酰胺二盐 酸盐(F4)。向三胺 F3(5. 15g，19. 49mmol)和无水吡啶(7. 85mL，97. 45mmol)在无水二噁 烷(300mL)中的悬浮液加入4-硝基苯甲酰氯(10.52g，56.69mmOl)，并将得到的混合物回 流17小时。此后，将反应混合物冷却到室温，然后通过添加氨水溶液碱化。得到的溶液用 H2O稀释，并通过过滤收集得到的沉淀物，得到酰胺F4(4.21g,51%),为无定形的奶油状的 黄色固体；1H NMR(400MHz, DMS0) δ 11. 09 (s, 1H，腙基-N+-H)，10. 68 (s, 1H, ArC (0) NHAr)， 8. 39 (d, J = 9. 22Hz，1H, ArH)，8. 29 (m, 3H, Ar H)，7. 89 (d，J = 8. 07Hz，1H, ArH)，7. 82 (d，J =7. 89Hz，1H，ArH) ,7. 73 (br s，4H，= C (NH2) 2)，7. 44 (t，J = 7. 98Hz，1H，ArH)，2. 34 (s，3H， Ar (CH3) =N-) ；LCMS(APCI+) 341(100% ) (E)-4-氨基-N-[3-(l-{(二氨基甲叉基)亚胼基}乙基)苯基]苯甲酰胺二盐酸盐(F5)。向在回流的酰胺F4(2. 02g，5. 36mmol)在2 IEtOH H2O(IOOmL)中的悬浮液 顺序地加入Fe粉(1. 20g, 21. 44mmol)和浓HCl (2mL)，并使得到的悬浮液回流14小时。此 后，将热的反应混合物过滤通过硅藻土垫，并将溶剂减压除去。将残余物再溶解于热H2O, 并使得到的悬浮液过滤通过硅藻土垫。将溶剂减压除去，并将残余物通过三个MeOH-共沸 循环干燥。得到的残余物从酸化的MeOH再沉淀，得到三胺F5 (2. 18g，定量收率)，为无定 形的奶油色固体；1HNMR(400MHz, DMS0) δ 11. 30 (s, 1H,腙基-N+-H)，10. 05 (s, 1H, ArC(0) NHAr)，8. 21 (s，1H，ArH)，8. 20-7. 55 (m, 8H, ArH & = C (NH2) 2)，7. 36 (t，J = 7. 90Hz, 1H, Ar H)，6. 91(d，J = 7. 96Hz, 1H, ArH), 5. 30 (vbr s，3H，ArNH3+)，2· 35 (s，3H，Ar (CH3) = N-)； LCMS(APCI+) 311(100% )。(E)-N-[3-(l-{( 二氨基甲叉基)亚胼基}乙基)苯基]_4-[6-( 二甲基氨基) 喹啉-4-基氨基]苯甲酰胺二盐酸盐(化合物JJl)。向三胺F5(0. 22g，0. 59mmol)l 2 EtOH H20(60mL)中的溶液顺序地加入6-二甲基氨基-4-氯喹啉(0. 13g，0. 64mmol)和 浓HCl (0. 16mL，5. 32mmol)，并将得到的溶液回流20小时(通过TLC跟踪反应进程，用 n-BuOH H2O 乙酸的5 4 1混合物的上相洗脱)。此后，将溶剂减压除去，并将残余 物通过两个MeOH-共沸循环干燥。残余物从MeOH EtOAc再沉淀，得到化合物JJl (61mg, 19% )，为无定形的暗褐色固体；mp239-243°C (粉末一胶状物)，278_282°C (胶状物一液 体)；1H NMR(400MHz, DMS0) δ 14. 44 (s, 1H,喹啉基-N+-H)，11. 20 (s, 1H,亚胼基-N+-H)，
10.58 (s，1H, ArC (0) NHAr)，10. 46 (s, 1H, ArNHAr), 8. 35 (d, J = 6. 71Hz, 1H, ArH), 8. 26 (t, J=L 73Hz, 1H, ArH), 8. 22 (d, J = 8. 61Hz，3H，ArH), 7. 95 (m, 2Η, Ar H)，7. 79 (m, 5H, ArH & = C(NH2)2)，7. 69 (d, J = 2. 52Hz, 1H, ArH), 7. 66 (d, J = 8. 61Hz，2H，ArH), 7. 58 (d, J = 2. 43Hz, 1H, ArH)，7. 43 (t，J = 7. 98Hz, 1H, ArH)，6. 95 (d, J = 6. 71Hz, 1H, ArH)，3. 15 (s,6H, ArN(CH3)2)，2. 37 (s，3H，Ar(CH3) =N-) ；LCMS (APCI+) 482(100% ) ；HPLC:95.8%。(E)-N-[3-(l-{(二氨基甲叉基)亚胼基}乙基)苯基]-4-(喹啉-4-基氨基)苯甲 酰胺二盐酸盐(化合物JJ2)。向三胺F5(0. 35g，0. 91mmol)在1 2 EtOH H20(30mL)中的 溶液顺序地加入4-氯喹啉(0. 64g，3. 90mmol)和浓HCl (0. 25mL, 8. 24mmol)，并将得到的溶 液回流20小时(通过TLC跟踪反应进程，用n-BuOH H2O 乙酸的5 4 1混合物的上 相洗脱；产物Rf = 0. 51，在用KMNO4染色之后为黄色斑点)。此后，将溶剂减压除去，并将残 余物通过两个MeOH-共沸循环干燥。残余物从MeOH EtOAc再沉淀，得到化合物JJ2 (91mg, 20% )，为浅黄色无定形固体；mp 240-2440C (粉末一胶状物)，264-268°C (胶状物一液 体)；1H NMR(400MHz, DMS0) δ 14. 67 (br s, 1H,喹啉基-N+-H), 11. 19 (s, 1H,亚胼基-N+-H)，
11.07 (s, 1H, ArC(O)NHAr)，10. 48 (s，1H，ArNHAr), 8. 72 (d, J = 8. 52Hz，lH，ArH), 8. 61 (d, J = 6. 90Hz，1H, ArH)，8. 24 (m, 3H, ArH)，8. 08 (m, 2H, Ar H)，7. 95 (d，J = 8. IOHz，1H, ArH)， 7. 82(m，6H，ArH & = C(NH2)2)，7. 68 (d, J = 8. 38Hz，2H，ArH), 7. 43 (t, J = 7. 97Hz, 1H, Ar H) ,7. 01(d, J = 6. 90Hz, 1H, ArH), 2. 37(s,3H, Ar(CH3)2 = N-) ；LCMS (APCI+) 438(100% )； HPLC :96· 4%。实施例KK.N-[4-(2-氨基-6-甲基嘧啶-4-基氨基)苯基]-4-(6，7，8_三氟喹啉_4_基氨 基)苯甲酰胺二盐酸盐(化合物KK)的合成 6，7，8-三氟-4-氧代-1，4-二氢喹啉-3-羧酸(G2)。三氟喹啉酮酯Gl (3. 82g， 14. 09mmol)的溶液在IM NaOH中回流14小时，然后冷却到室温。将溶液用IM NaOH酸化，并 将得到的悬浮液过滤，得到三氟喹啉酮酸G2(3.31g，97% )，为无定形的白色固体，其不经 进一步纯化使用；mp 264-2680C ；1H NMR(400MHz, DMS0) δ 14. 20 (ν br s，2H，喹啉基-N+-H & ArC02H)，8.71(s，lH，ArH)，8.08(ddd，JH_F= 10. 17,7. 77,2. 23Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ；LCMS(APCI+) 244(100% )。6,7,8-三氟喹啉-4 (IH)-酮(G3)。将三氟喹啉酮酸G2 (1. 32g，5. 43mmol)的溶液 在二苯基醚(IOOmL)中回流30分钟。此后，将热的反应混合物小心地倾倒在己烷中，并使 得到的悬浮液冷却到室温。将悬浮液过滤，得到三氟喹啉酮G3(两个批料，合计1. 32g，定量 收率)，为非常细的无定形的灰白色固体，其不经进一步纯化使用；1H NMR(400MHz, DMS0) δ 12. 14 (s，1Η, ArOH), 7. 91 (dd, J = 6. 73，6. 36Hz, 1H, ArH), 7. 80(ddd, JH_F = 10. 46，8. 11， 2. 14Hz, 1H, ArH) ,6. 10 (d, J = 7. 43Hz, 1H, ArH) ； LCMS (APCI+) 200(100% ) 4-氯-6，7，8-三氟喹啉(G4)。将喹啉酮G3 (1. 30g, 6. 53mmol)的溶液在 POCl3 (50mL)中回流1. 3小时，然后将过量的POCl3减压除去。将残余物再溶解于CH2Cl2，并 通过添加氨水溶液将得到的溶液碱化。得到的溶液用CH2Cl2提取，并将合并的有机提取物 顺序地用H2O和盐水洗涤，并且用MgSO4干燥。将溶剂减压除去，并将残余物硅胶上的快速 色谱法纯化，用 100% CH2Cl2 — 1 % MeOH CH2Cl2 — 10% MeOH CH2Cl2 洗脱)，得到三氟 喹啉 G4(0. 76g，54% )，为白色结晶固体；mp 119-121°0 ；1H NMR (400MHz，DMS0) δ 8. 93 (d, J = 4. 73Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ,8. 08(ddd，JH_F = 10. 23，7. 92，2. 30Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 95 (d, J = 4. 73Hz, 1H, ArH) ；LCMS(APCI+) 218(100% ) ,220(100% ) N-[4-(2-氨基-6-甲基嘧啶-4-基氨基)苯基]-4-(6，7，8_三氟喹啉_4_基氨 基)苯甲酰胺二盐酸盐(化合物KK)。向胺G5(0. 19g，0. 46mmol)在无水MeOH(20mL)中 的溶液顺序地加入三氟喹啉G4(0. 22g，1. 03mmol)和浓HCl ( 3滴)，并将得到的溶液回 流24小时(通过TLC跟踪反应进程，用n-BuOH H2O 乙酸的5 4 1混合物的上 相洗脱；产物Rf = 0. 56，在用KMNO4染色之后为黄色斑点。其具有与G5相同的Rf，然而， 通过LCMS分析证实G5的消耗)。此后，将溶剂减压除去，并将残余物通过三个MeOH-共 沸循环干燥。残余物顺序地与MeOH，EtOAc和己烷研磨，然后在高真空下干燥，得到化合 物KK(两个批料，合计214mg，79% )，为无定形的苍白色/柠檬-黄色固体；mp > 280°C ； 1H NMR(400MHz, DMS0) δ 12. 70 (br s, 1H,嘧啶基-N-H+)，10. 77 (br s, 1H, ArC(0)NHAr)，10. 66 (s，1H, ArNHAr)，10. 39 (s, 1H, ArNHAr), 8. 84 (m, 1H, ArH), 8. 59 (d, J = 6. 35Hz, 1H, Ar H) ,8. 14 (d, J = 8. 62Hz,2H,ArH) ,8. 06-7. 64(m,6H,ArH & ArNH2), 7. 61 (d, J = 8. 62Hz，2H， ArH), 7. 11 (d, J = 6. 35Hz, 1H, ArH), 6. 19 (s，1H, ArH), 2. 28(s，3H，ArCH3)[喹啉基-N+-H 不 可见]；LCMS(APCI+) 517(100% ) ,518(40% ) ；HPLC 98. 9% 实施例LL.N- [4- (2-氨基-6-甲基嘧啶_4_基氨基)苯基]_4_ (6_氯喹啉_4_基氨基)苯甲 酰胺(化合物LL)的合成 4，6- 二氯喹啉(H2)。6_ 氯 ~4~ 喹啉酮(HI) (1. 48g, 8. 22mmol)的 POCl3 (50mL)溶 液回流3. 5小时，然后将过量的POCl3减压除去。将残余物再溶解于CH2Cl2，并通过添加氨水 溶液将得到的溶液碱化。得到的溶液用CH2Cl2提取，并将合并的有机提取物顺序地用H2O和 盐水洗涤，并且用MgSO4干燥。将溶剂减压除去，得到二氯喹啉H2 (1. 54g，95%),为无定形 的奶油状白色固体；mp 101-103°C ;Rf = 0. 83(5% MeOH CH2Cl2) ；1H NMR(400MHz, DMS0) δ 8. 88 (d, J = 4. 73Hz，lH，ArH), 8. 21 (d, J = 2. 33Hz，lH，ArH), 8. 14 (d, J = 8. 99Ηζ，1Η， ArH), 7. 9 l(dd, J = 8. 99，2. 33Hz，1Η，ArH), 7. 84 (d, J = 4. 73Ηζ，1Η，ArH) ； LCMS (APCI+) 198(100% ) ,200(80% )。N- [4- (2-氨基-6-甲基嘧啶_4_基氨基)苯基]_4_ (6_氯喹啉_4_基氨基)苯甲 酰胺(化合物LL)。向胺G5 (0. 18g，0. 44mmol)在无水MeOH (40mL)中的溶液顺序地加入二 氯喹啉H2 (0. 17g，0. 88mmol)和浓HCl (几滴)，并将得到的混合物回流2小时。之后的TLC 分析(用n-BuOH H2O 乙酸的5 4 1混合物的上相洗脱)显示H2已经消耗掉但是 有一些E4剩余，因此在3小时加入另一个部分的H2(0. 17g，0. 88mmol)。将得到的混合物回 流14小时，通过TLC分析没有观察到变化，将溶剂减压除去并将残余物通过三个MeOH-共 沸循环干燥。残余物与MeOH研磨，然后在高真空下干燥，得到化合物LL (2个批料，合计 0. 21g,83% )，为无定形的黄色固体；mp 250_254°C ；1H NMR(400MHz, DMS0) δ 14. 80 (ν br s, 1H,嘧啶基-N-H+)，12. 62 (br s, 1H,喹啉基-N+-H)，11. 07 (s, 1H, ArC (0) NHAr)，10. 62 (s, 1H, ArNHAr), 10. 44 (s, 1H, ArNHAr)，9. 01 (d，J = 1·50Ηζ，1Η，ArH) ,8. 63 (d, J = 6. 90Hz, 1H, ArH) ,8. 13(m,4H, ArH) ,8. 05-7. 45(m,8H, ArH & ArNH2), 7. 04 (d, J = 6·90Ηζ，1Η， ArH), 6. 18 (s, 1Η, Ar H), 2. 28(s,3H, ArCH3) ；LCMS (APCI+) 497(100% ) ,499(60% ) ；HPLC 99. 7%。实施例MM.N-[4-(吡啶-4-基氨基)苯基]-4-(喹啉-4-基氨基)苯甲酰胺二盐酸盐(化合 物MM)的合成


(1)4-氯喹淋/<:.11(丨，1:10 MeOH:EtOH,回流N-[4-(吡啶-4-基氨基)苯基]-4-(喹啉-4-基氨基)苯甲酰胺二盐酸盐(化合物 匪)。向胺11(0. 45g，l. 18mmol)在1 10 MeOH EtOH中的悬浮液顺序地加入4-氯喹啉 (0. 97g，5. 91mmol)、浓HCl (3mL)、和H2O(IOmL)，并将得到的混合物回流 14小时(通TLC 跟踪反应进程，用n-BuOH H2O 乙酸的5 4 1混合物的上相洗脱；产物Rf = 0. 30， 在用KMnO4染色之后为黄色斑点)。之后，将溶剂减压除去，并将残余物通过三个MeOH-共 沸循环干燥。残余物从MeOH EtOAc再沉淀，并通过制备性HPLC进一步纯化，得到化合 物匪(0. 14g，32%brsm)，为无定形的柠檬色-黄色固体；mp 148-151 °C (粉末一胶状物)， 171-174°C (胶状物一液体)；1H NMR(400MHz, DMS0) δ 13. 97 (brs，2H，吡啶基-N+-H& 喹 啉基-N+-H)，10. 83 (br s, 1H, ArC (0) NHAr)，10. 49 (s, 1H, ArNHAr)，10. 44 (s, 1H, ArNHAr)， 8. 71(d，J = 8. 47Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ,8. 63(d, J = 6. 81Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,8. 27(d, J = 7. 14Hz,2H,ArH)， 8. 17 (d, J = 8. 51Hz，2H，ArH), 8. 05 (m, 2H, ArH), 7. 94 (d, J = 8. 82Hz，2H，ArH), 7. 85(ddd, J = 8. 32,5. 64,2. 51Hz, 1H, ArH), 7. 67 (d, J = 8. 51Hz，2H，ArH), 7. 36 (d, J = 8. 80Hz, 2H, ArH) ,7. 08 (d, J = 7. 27Hz,2H, ArH) ,7. 03 (d, J = 6. 81Hz, 1H, ArH) ；LCMS (APCI+) 431(50% ),433(100% ) ；HPLC : 100%。实施例NN.(E)-N-(4-(l-(( 二氨基甲叉基)亚胼基)乙基)苯基)_4_ (6_ ( 二甲基氨基)喹 啉-4-基氨基)苯甲酰胺二盐酸盐(化合物NN)的合成 (E)-N-(4-(l-(( 二氨基甲叉基)亚胼基)乙基)苯基)-4-(6_( 二甲基氨基) 喹啉-4-基氨基)苯甲酰胺二盐酸盐(化合物NN)。向胺J1(0. 22g，0. 56mmol)在1 2 EtOH H20(20mL)中顺序地加入6-( 二甲基氨基)-4-氯喹啉(0. 13g，0. 61mmol)在1 2 EtOH H2O(IOmL)中的溶液和浓HCl (0. 17mL，5. 5mmol)。将得到的混合物回流几小时，然后 使其回温到室温过夜。之后(16小时)，TLC分析(用n-BuOH H2O CH3CO2H的5 4 1 混合物的上相洗脱)显示在反应混合物中有一些6剩余，因此加入另一当量的Jl (0. 22g，
(i)6- ( 二曱基^JO -4-氯喹啉/1:2 EtOH=H2O, c.HCl,回流，32 小时0. 56mmol)，并将混合物回流另外的16小时。此后，TLC分析显示喹啉几乎完全消耗掉，因 此将溶剂减压除去，并将残余物通过三个MeOH共沸循环干燥。残余物从MeOH(用1.25甲 醇中的盐酸酸化的)=EtOAc再沉淀，并通过制备性HPLC进一步纯化，得到化合物NN，为 无定形的黄色-棕色固体(18mg,6% ) ；mp (MeOH EtOAc) > 280 V ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 2. 33 [s，3Η, ArC (CH3) = N-]，3. 11 [s，6Η，ArN(CH3) 2]，7. 00 (s, 1H, ArH]，7. 41 [s，1H, ArH]， 7. 57-7. 90[m,8H,ArH & = C(NH2)2]，7. 99[d, J = 8. 45Hz, 2H,ArH],8. 12[d, J = 7. 01Hz，2H， ArH], 8. 35[br s,lH,ArH],9. 86[br s,ΙΗ,ΑγΗ],10. 40[s,ΙΗ,ΑγΗ],10. 86[br s,1Η,ArNHAr] {其余三个可交换的H信号不可见} ；LCMS (APCI+) =482(100% ) ；HPLC 98. 7%0实施例00.6_( 二甲基氨基)-4-[4-({3-[(1_甲基-4-吡啶鐺基)氨基]苯甲酰基}氨基) 苯胺基]-喹啉鐺二氯化物(化合物001)和相关化合物(化合物002)的合成 6_( 二甲基氨基)-4-[4-({3-[(1_甲基-4-吡啶鐺基)氨基]苯甲酰基}氨基) 苯胺基]-喹啉鐺二氯化物Sg EPG 133(化合物001)。向胺Kl (151mg，0. 43mmol)在乙醇 (28mL)和水(14mL)中的溶液加入在乙醇(5mL)中的6-( 二甲基氨基)-4-氯喹啉(107mg, 0. 52mmol)以及两滴浓HCl。将反应混合物回流3天，用EtOAc (150mL)稀释，使其沸腾并 且使其冷却到20°C。将得到的沉淀物过滤，用更多的EtOAc洗涤并且干燥，得到黄色固 体194mg，将其通过制备性HPLC纯化(TFA/CH3CN)然后从MeOH/EtOAC重结晶，得到化合物 001(80mg,33%) ；mp (MeOH/EtOAc) 17_173°C (dec) ；1H 匪 R[(CD3)3S0] δ 13. 88 (bs，1H，N+H)， 10. 64 (s，1H，NH)，10. 53 (s, 1H，NH)，10. 25 (bs, ΙΗ,ΝΗ)，8. 32 (d, J = d, J = 7. 5Hz,2H,ArH)，
8.27 (d, J = 6. 5Hz，1H, ArH)，7. 98 (d，J = 8. 9Hz，2H, ArH)，7. 94 (d，J = 8. OHz，1H, ArH)， 7. 90 (bs, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 84 (d, J = 9. 4Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 69 (t, J = 7. 9Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 64(dd, J =
9.4，2. 6Hz, 1Η, ArH)，7. 58 (dd, J = 8· 0，1. 3Hz, 1Η, ArH)，7. 48-7. 45 (m, 3Η, ArH)，7. 22 (d, J =7. 5Hz，2H，ArH)，6· 68 (s, ΙΗ,ΑγΗ) ,3. 99 (s，3Η，N+CH3)，3· 12[s，6H，N(CH3)2] ；APCI ve+489。6_( 二甲基氨基)-4-[4-({4-[(l-甲基_4_吡啶鐺基)氨基]苯甲酰基}氨 基)-苯胺基]喹啉鐺二氯化物SG EPG 134 (化合物002)。向胺K2 (162mg, 0. 46mmol)在 乙醇(28mL)和水(14mL)中的溶液加入在乙醇(5mL)中的6_( 二甲基氨基)_4_氯喹啉(114mg,0. 55mmol)以及两滴的浓HC1。将反应混合物回流2天，用EtOAc (150mL)稀释，使 其沸腾并使其冷却到20°C。将得到的沉淀物过滤，用更多的EtOAc洗涤并且干燥，得到黄色 固体161mg，将其通过制备性HPLC纯化(TFA/CH3CN)，然后从MeOH/EtOAC重结晶，得到(化 合物 002) (80mg，31 % ) ；mp (MeOH/EtOAc) 156 °C (dec) ；1H NMR[ (CD3)2S0] δ 13. 90 (bs, 1H, N+H)，10. 73 (s，1H, NH)，10. 48 (s, 1H, NH)，10. 29 (bs, 1H, NH)，8. 36 (d, J = 7. 5Hz，2H，ArH)， 8. 28 (d，J = 6. 7Hz, 1Η, Ar H)，8. 11 (d，J = 8. 6Hz，2H, ArH)，8. 00 (d，J = 8. 8Hz，2H, ArH)， 7. 84 (d, J = 9. 4Hz, 1H, ArH), 7. 65 (dd, J = 9. 4,2. 2Hz, 1Η, ArH), 7. 52-7. 45 (m, 5Η, ArH)， 7. 28 (d, J = 7. 5Ηζ，2Η，ArH), 6. 68 (d, J = 6. 8Hz, 1Η, ArH), 4. 01(s，3H，N+CH3)，3. 12[s，6H， N(CH3)2IAPCI ve+489。实施例PP.4-[(IE)-N-(二氨基甲叉基)乙烷亚胼基]_N-(4-{[6_(二甲基氨基)_4_喹啉基] 氨基}苯基)苯甲酰胺二盐酸盐(化合物PP)的制备 4-[(IE)-N-(二氨基甲叉基)乙烷亚胼基]苯甲酸盐酸盐(L2)。将4_乙酰基苯 甲酸(Li) (1.041g，6. 34mmol)，氨基胍碳酸氢盐(1. 12g，8. 2mmol，1.3eq)和浓 HCl (0. 7ml，
7.Ommo 1)在MeOH(30mL)回流1小时。反应混合物用EtOAc稀释，冷却到20°C并将得到的 沉淀物过滤并且从 MeOH/EtOAc 重结晶，得到 L2(887mg，55% )，mp (MeOH/EtOAc) > 300°C ； 1H 匪R([(CD3)2SO] δ 7. 97-7. 89(m,4H, ArH) ,6. 75 (br, 4H, 2 XNH2), 2. 25(s,3H, CH3)，质谱 APCI+221。4-[(IE)-N-(二氨基甲叉基)乙烷亚胼基]-N-(4-{[6-(二甲基氨基)-4-喹啉基] 氨基}苯基)苯甲酰胺二盐酸盐(化合物PP)。将在DMF (IOmL)中的N4-(4-氨基苯基)-N6， N6- 二甲基-4，6-喹啉二 胺(A6) (108mg, 0. 34mmol)，L2 (107mg, 0. 34mmol)，EDCI (160mg, 0. 68mmol)和DMAP (lOlmg，0. 68mmol)在20°C搅拌72小时。将溶剂在55°C减压蒸发。残余 物用水稀释并用NH3水溶液碱化。将得到的沉淀物过滤，用水洗涤，空气干燥并且色谱纯化 (Si02/DCM/Me0H/aq NH30-7% 2% NH3)。将包含正确质量的级分合并并且蒸发到干燥，得到 120mg黄色固体。如下将其转化为HCl盐向在MeOH中的悬浮液几滴含4N HCl的1，4_ 二 噁烷，然后将溶剂蒸发到干燥。得到的残余物从MeOH/EtOAc重结晶，得到粗产物(107mg)， 通过HPLC分析显示包含两个主要化合物。将其通过制备性HPLC纯化(HCOO-N+H4)，得到 化合物 PP(52mg，27% ) ；m. ρ (MeOH/EtOAc) > 300 °C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 14. 09 (br s, 1H, N+H)，11. 21 (s，1H, NH)，10. 56 (s, 1H, NH)，10. 40 (s, 1H, NH)，8. 27 (d, J = 6. 8Hz, 1H, Ar H)，
8.13(d, J = 8. 6Hz,2H,ArH) ,8. 06-8. 01 (m, 4H, ArH), 7. 88(d, J = 9. 4Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 83 (br, 4H, 2 X NH2) ,7. 65 (dd, J = 9. 4,2. 3Hz, 1H, ArH), 7. 53 (d, J = 2. 3Hz, 1H, ArH), 7. 47 (d, J = 8. 9Hz,2H, Ar H) ,6. 67 (d, J = 6. 8Hz, 1H, ArH), 3. 13[s，6H，[N(CH3)2]，2. 41 (s，3H，CH3)；质谱 APCI+481。实施例QQ.4-[4-({3-[(1Ε)-Ν-(二氨基甲叉基)乙烷亚胼基]_苯甲酰基}氨基)苯胺 基]-6-( 二甲基氨基)喹啉鐺氯化物(化合物QQ)的制备 4-{4-[(3-乙酰基苯甲酰基)氨基]苯胺基}-6-( 二甲基氨基)喹啉鐺氯化物 (M2)。在 20°C下，搅拌 N4- (4-氨基苯基)-N6, N6- 二甲基 _4，6-喹啉二胺(181mg，0. 58mmol)、 3-乙酰苯甲酸(Ml) (97mg，0. 58mmol)和 EDCI (220mg，0· 1. 16mmol)在 DMF(5mL)中的混合物 5分钟。然后加入DMAP(140mg，l. 16mmol)并在20°C下搅拌所述反应混合物24个小时。将 溶剂减压除去并将残余物在NaHCO3水溶液中搅拌1小时。将得到的沉淀物过滤并通过SiO2 中的色谱法纯化，用(0-7.5% )的MeOH/DCM的梯度洗脱，得到M2(113mg，42% ) ；mp (DCM/ MeOH) > 2800C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 14. 02 (br, 1H, N+H), 10. 66 (s, 1H, NH), 10. 31 (s, 1Η, NH), 8. 53 (t, J=L 6Hz, 1Η, ArH), 8. 28 (d, J = 6. 7Hz, 1Η, ArH), 8. 24 (td, J = 8· 1，1. 5Hz, 1Η, ArH), 8. 19(td, J = 7. 8,2. 8Hz, 1Η, ArH), 8. 00 (d, J = 6. 8Hz, 2Η, ArH), 7. 87 (d, J = 9. 4Ηζ, 1Η, ArH), 7. 78 (t, J = 7. 8Ηζ，1Η，ArH), 7. 64 (dd, J = 9. 4，2. 6Hz，1Η，ArH), 7. 51 (d, J = 2. 5Hz, 1Η, ArH), 7. 47 (d, J = 8. 8Ηζ，2Η，ArH), 6. 69 (d, J = 6. 7Hz, 1Η, ArH), 3. 09[s，6H， (NCH3) 2]，2· 68 (s，3Η，COCH3) ；APCI+Ve 425。4-[4-({3-[(1Ε)_Ν-(二氨基甲叉基)乙烷亚胼基]苯甲酰基}氨基)苯胺 基]-6- ( 二甲基氨基)喹啉鐺氯化物(化合物QQ)。将Μ2 (94mg，0. 20mmol)，氨基胍碳酸氢 盐(42mg，0. 3mmol)和浓 HCl (0. 02mL，0. 022mmol)在 MeOH(IOmL)中的混合物回流 2 小时， 用EtOAc稀释，将一些MeOH沸腾掉并冷却到20°C。将得到的沉淀物过滤，用更多的EtOAc 洗涤并且从MeOH/EtOAc重结晶，得到化合物QQ (109mg 100 % )，为黄色固体；mp (MeOH/ EtOAC) > 280 0C ；1H NMR [ (CD3) 2S0] δ 14. 13 (brlH，N+H)，11. 25 (s，1H，NH)，10. 67 (s，1H，NH)， 10. 42 (s，1H, NH), 8. 48 (t, J=L 5Hz, 1H, ArH), 8. 27 (d, J = 6. 8Hz, 1H, ArH), 8. 22 (t, d, J =7. 9，1. 4Hz, 1H, ArH) ,8. 05-8. 01(m，3H，ArH), 7. 89 (d, J = 9. 6Hz, 1H, ArH), 7. 85(br,4H, 2 X NH2)，7. 66-7. 59 (m, 2H, ArH)，7. 54 (d，J = 2. 3Hz，1H, ArH)，7. 47 (d，J = 8. 8Hz，2H, ArH)， 6. 67 (d, J = 6. 8Hz, 1H, ArH), 3. 13[s,3,6H, (NCH3) 2]，2. 45 (s，3H，CH3) ；APCI+ve 481。实施例RR.3-[(2，6_ 二氨基-4-嘧啶基)氨基]-N_{4_[ (6_硝基_4_喹啉基)氨基]苯基} 苯甲酰胺二盐酸盐(化合物RRl)和相关化合物(化合物RR2和化合物RR 3)的制备
(i)4-氯喹啉/Et0H/H20/h+/回流；(ii)H2/Pd/C/MeOH3-[(2，6_ 二氨基-4-嘧啶基)氨基]-N_{4_[ (6_硝基_4_喹啉基)氨基]苯基} 苯甲酰胺二盐酸盐(化合物RRl)。向胺B6(204mg，0. 55mmol)在Et0H(20mL)和H2O (IOmL)中 的溶液加入4-氯-6-硝基喹啉(126mg，0.61mmOl)并且搅拌直到其溶解，然后加入2滴的浓 HCl。将反应混合物回流4小时，用EtOAc稀释，使其沸腾并且冷却到20°C。将得到的沉淀物 过滤并且从MeOH/EtOAc 重结晶，得到化合物 RRl (224mg70%) ；m. p. (MeOH/EtOAc) > 300°C ； 1H NMR[(CD3)2SO] δ 14. 75 (br, 1H, N+H)，11. 50 (br, 1H, N+H)，11. 10 (br, 1H, NH)，10. 50 (s, 1H, NH)，9. 88 (s，1H, NH)，9. 77 (s, 1H, NH)，9. 76 (s, 1H, ArH), 8. 66 (d, J = 9. 3Hz, 1H, ArH)， 8. 60 (d，J = 6. 8Hz，1H, ArH)，8. 19 (d，J = 9. 3Hz，1H，ArH)，8. 25 (d，J = 8. 8Hz，2H, Ar H)，
7.94 (br s 2H, NH2), 7. 71 (d, J = 7. 6Hz, 1H, ArH), 7. 56-7. 42 (m, 6H, NH2 MXArH)，6. 91 (d， J = 6. 8Hz, 1H, ArH)，5. 44 (s, 1H, ArH)。HRMS (FAB+)计算值 C26H22N9O3 (M+1)m/z 508. 1846，实 测值 508. 1841。3-[(2_氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]_N_{4_[ (6_硝基_4_喹啉基)氨基] 苯基}苯甲酰胺二盐酸盐(化合物RR2)。向胺B 3(205mg，0. 55mmol)在Et0H(20mL)和 H2O(IOmL)中的溶液加入4-氯-6-硝基喹啉(135mg，0. 64mmol)并且搅拌直到溶解，然后加 入2滴的浓HCl。将反应混合物回流5小时，用EtOAc稀释，使其沸腾并且冷却到20°C。将 得到的沉淀物过滤并且从MeOH/EtOAc重结晶，得到化合物RR2(217mg 68% ) ；m. p. (MeOH/ EtOAc) > SOO0C51H NMR[(CD3)2SO] δ 13. 00 (br, 2Η, 2 XN+H), 10. 99 (br, ΙΗ,ΝΗ), 10. 75 (br s, 1Η, NH)，10. 53 (s，1Η, NH), 9. 75 (d, J=L 9Hz, 1Η, ArH), 8. 64 (br d, J = 7. 4Hz, 1Η, ArH)，
8.60 (d, J = 6. 7Hz, 1Η, ArH), 8. 17 (d, J = 9. 3Hz, 1Η, ArH), 8. 15 (br, 1Η, NH), 8. 07 (br s, ΙΗ,ΝΗ), 7. 99 (d, J = 8. 8Hz, 2Η, ArH), 7. 79 (br d, J = 7. 5Hz, 3Η, ArH), 7. 57(t, J = 7. 9Ηζ, 1Η, ArH), 7. 48 (d, J = 8. 8Ηζ，2Η，ArH), 6. 91 (d, J = 6. 7Hz, 1Η, ArH), 6. 22 (d, J = O. 6Ηζ, 1Η, ArH)，2· 30 (s，3 小时。CH3) ；HRMS (FAB+)计算值 C27H23N8O3 (M+1) m/z 507. 1893，实测值 507.1888。3-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]_N_{4_[ (6_氨基_4_喹啉基)氨基] 苯基}苯甲酰胺二盐酸盐(化合物RR3)。将化合物RR2(146mg，146mg,0. 25mmol)溶解于 MeOH(30ml)并与10% Pd/C(20mg) —起在30Hg mm氢化3小时。将反应混合物过滤通过 硅藻土垫。将滤液蒸发到干燥。将得到的残余物溶解于MeOH(IOmL)，与含1.25M HCl的 MeOH(0. 5mL) 一起搅拌，然后通过加入EtOAc进行沉淀，过滤并且干燥，得到120mg化合物 RR3。其通过HPLC分析为90%纯度。然后通过在NH3水溶液中搅拌将其转化为游离碱， 过滤，空气干燥并且在中性氧化铝上色谱纯化，用包含NH3水溶液的(0-10% )Me0H/DCM的梯度洗脱，得到83mg的纯的游离碱。然后通过将其溶解于MeOH并且加入含1. 25M HCl的MeOH将其转化为HCl盐。蒸发到干燥并将残余物从MeOH/EtOAc重结晶，得到化合 物 RR3 (88mg,64% )，mp (MeOH/EtOAc) 280-284°C ；1H NMR [ (CD3) 2S0] δ 14. 0(d, J = 5. 4Hz, 1H, N+H)，12. 78 (br s, 1H, N+H)，10. 79 (br s, 1H, NH)，10. 50 (s, 1H, NH)，10. 19 (s, 1H, NH)， 8. 22 (t, J = 6. 4Hz，2H，ArH)，8· 16-8. 07 (br, 2H, NH2) 7. 96 (d, J = 8. 9Hz, 2H, ArH), 7. 80 (br s, 1H, ArH)，7. 78 (d, J = 9. OHz, 2H, ArH)，7. 56 (t，J = 8. OHz，1H, ArH)，7. 47 (br d, J = 2. 1Hz, 1H, ArH), 7. 43 (d, J = 8. 7Hz，2H，ArH), 7. 39 (dd, J = 9. 0,2. 2Hz, 1H, ArH), 6. 67 (d, J = 6. 8Hz, 1H, ArH)，6. 23 (s, 1H, ArH)，5. 9 (v. br, 2H, NH2)，2· 31 (s，3H, CH3)。实施例SS.4-[ (2，6-二氨基-4-嘧啶基)氨基]_N_ (4_ {[6_ ( 二甲基氨基)_4_喹啉基]氨 基}苯基)苯甲酰胺二盐酸盐(化合物SS)的制备
(i)乙醇/H+/回流；(ii)A3/EDCI/DMAP/N-曱基吡咯烷酮4-[(2，6-二氨基-4-嘧啶基)氨基]苯甲酸(01)。将4_氨基苯甲酸(Dl) (2. 0g， 14. 55mmol)、以及2，6- 二氨基~4~氯嘧啶(B4) (2. 013g，14. 55mmol)溶解于2-乙氧基乙醇 (20mL)。向这个混合物加入2滴的浓HCl并且回流20小时。将反应混合物冷却到20°C并 将得到的沉淀物过滤并且从MeOH/EtOAc重结晶，得到化合物01 (3. 12g，56%), mp (MeOH/ EtOAc) "C ；1H 匪R[(CD3)2SO] δ 12. 65 (br, 1H, C00H 或 N+H), 11. 84 (br s, 1H, N+H 或 C00H)， 10. 07 (s，ΙΗ,ΝΗ) ,7. 86(brd, J = 8. 7Hz, 2H, ArH), 7. 75 (v. br d, J = 7. 8，2H，ArH)，7· 64 (br, 2H, NH2) ,7. 51 (br, 2H, NH2)，5. 50 (s, 1H, ArH)。4-[ (2，6-二氨基-4-嘧啶基)氨基]_N_ (4_ {[6_ ( 二甲基氨基)_4_喹啉基]氨 基}苯基)苯甲酰胺二盐酸盐(化合物SS)。将在N-甲基吡咯烷酮(5mL)中的化合物 01(101. 4mg，0. 36mmol)，EDCI (138mg,0. 72mmol)和 DMAP(88mg，0. 36mmol)在 20 °C 搅拌 5 分钟。然后加入N4-(4-氨基苯基)-N6，N6-二甲基-4，6-喹啉二胺(100mg,0. 36mmol)和 Et3N(0. 2mL, 1. 44mmol)并且搅拌 20 小时。小样品的 TLC(Al203/DCM/Me0H 5 % 禾口 /NH3 水 溶液)显示仍有N4-(4-氨基苯基)-N6，N6-二甲基-4，6-喹啉二胺存在，因此加入更多的 EDCI (138mg，0. 72mmol)并且搅拌72小时。然后反应混合物用H2O稀释并且搅拌1小时。 将得到的沉淀物过滤，用水洗涤，空气干燥并且在中性氧化铝上色谱纯化，用0-5% DCM/ MeOH的梯度洗脱，以除去未反应的N4-(4-氨基苯基)-N6，N6- 二甲基-4,6-喹啉二胺的杂 质，然后加入1 %的NH3水溶液，以洗脱产物化合物SS。将包含产物的级分蒸发，得到化合 物SS(75mg)。将其溶解于少量的MeOH并与含1. 25M HCl的MeOH(0. 5mL)搅拌，将溶剂蒸 发并将残余物从MeOH/重结晶，得到化合物SS (84mg, 40 % ), mp (MeOH/EtOAc) 283-287°C ； 1H 匪 R[(CD3)2S0] δ 14. 14 (d, J = 4. 7Hz, . 1H, N+H)，11. 81 (br, 1H, N+H)，10. 42 (s, 1H, NH)， 10. 39 (s，1H, NH)，10. 09 (s, 1H, NH) ,8. 26 (t, J = 6. 4Hz 1H, ArH)，8. 02-7. 98 (m, 4H, ArH)，7.89 (d, J = 8. 7Hz, 1H, ArH)，7. 80 (br d, 2H, ArH)，7. 68 (br, 2H, NH 2)，7. 64 (dd, J = 9. 4， 2. 5Hz, 1H，ArH)，7. 53 (dd, J = 9. 3，2. 5Hz，1H，ArH)，7. 52 (br s, 2H, NH2)，7. 45 (d, J = 8. 9Hz, 2H, ArH), 6. 66 (d, J = 6. 8Hz, 1Η, ArH), 5. 51 (s, 1Η, ArH), 3. 12[s，6H，N(CH3)3]。实施例ΤΤ·4-[(2，6- 二氨基-4-嘧啶基)氨基]_Ν-[4-(4_喹啉基氨基)苯基]苯甲酰胺二 盐酸盐(化合物TT)的制备
(i)MeOH/HCI/回流；(ii)Hz/Pd/C/MeOH;(iii)4-氯喹啉/2:1 Et0H/H20/H+回流4-[(2，6_ 二氨基-4-嘧啶基)氨基]-N-(4_硝基苯基)苯甲酰胺盐酸盐(P2)。通 过加热将胺 Pl(1.0g，3. 89mmol)和氯嘧啶 B4(l. 12g，7. 78mmol)溶解于 Me0H(200mL)，然后 加入浓HCl (3滴)并且回流5天。将反应混合物冷却到20°C并将沉淀物过滤，用更多的MeOH 洗涤并且干燥，得到基本上纯的化合物P2(814mg 52% )/H NMR [ (CD3) 2S0] δ 11.84(s,lH, N+H)，10. 75 (s，1H, NH)，10. 12 (s，1H, NH), 8. 28-8. 24 (m, 2H, ArH), 8. 11-8. 07 (m, 2Η, ArH)，
8.24 (br d, J = 8. 7Ηζ，2Η，ArH), 7. 83(br,2H, ArH), 7. 68(br,2H, NH2), 7. 54(br,2H, NH2)，
5.51 (s，1Η, ArH)。HRMS (FAB+)计算值 C15H16N7O3 (M+1)m/z366. 1315，实测值 366. 1306。N-(4_氨基苯基)-4-[(2，6_ 二氨基-4-嘧啶基)氨基]苯甲酰胺二盐酸盐(P3)。 将化合物 P2(811mg，2. Olmmol)在 MeOH 100 (mL)中的悬浮液与 10% Pd/C(IOOmg) 一起在 40Hg mm H2压力下氢化20小时。将得到的新的悬浮液与含1. 25M HCl的Me0H(5mL) —起 搅拌以便溶解产物，然后将其过滤通过硅藻土垫以除去Pd残余物。将滤液蒸发到干燥并将 残余物从 MeOH/EtOAc 重结晶，得到化合物 P3(785mg，100% )/H NMR[ (CD3)2S0] δ 10. 02 (s, 1Η，ΝΗ)，9. 88(s，lH，ΝΗ)，7. 91(d，J = 8. 7Ηζ,2Η, Ar H), 7. 74 (d, J = 8. 5Ηζ,2Η, ArH), 7. 62(br,2H, NH2), 7. 68 (br s，2H，NH2), 7. 47 (d, J = 8. 8Ηζ，2Η，ArH), 6. 71 (d, J = 8. 7Ηζ, 2Η, ArH), 5. 45 (s, 1Η, ArH)。4-[(2，6_ 二氨基-4-嘧啶基)氨基]_Ν-[4-(4_喹啉基氨基)苯基]苯甲酰胺 二盐酸盐(化合物 TT)。向化合物 P3(128mg，0. 34mmol)在 EtOH(20mL)和 H2O(IOmL)中的 溶液加入4-氯喹啉(127mg，0.51mmOl)并且搅拌直到其溶解，然后加入2滴的浓HCl。将 反应混合物回流4小时，用EtOAc稀释，使其沸腾并且冷却到20°C。得到的沉淀物过滤并 且从 MeOH/EtOAc 重结晶，得到化合物 TT(151mg，83% ) ；m. p. (MeOH/EtOAc) 263-267°C ；1H NMR[(CD3)2SO] δ 14. 10 (br, 1H，N+H)，11. 90 (br, 1H，N+H)，10. 89 (s, 1H，NH)，10. 40 (s, ΙΗ,ΝΗ)， 10. 04 (S，1Η, NH)，8. 77 (d, J = 8. 7Hz, 1H, ArH)，8. 51 (d，J = 7. OHz, 1Η, ArH)，8. 06-7. 98 (m, 6Η, ArH)，7. 83-7. 79 (m, 3H, AriffiNH2)，7. 61 (br, 2H, NH2)，7. 47 (d, J = 8. 9Hz, m, 2H, ArH)，
6.78 (d, J = 7. 0Hz, 1H, ArH)，5. 45 (s, 1H, ArH)。实施例UU.N-{4-[(6-氨基-4-喹啉基)氨基]苯基} _3_[ (2，6_ 二氨基_4_嘧啶基)氨基]苯甲酰胺二盐酸盐(化合物UU)的制备 N-{4-[(6-氨基-4-喹啉基)氨基]苯基} _3_[ (2，6_ 二氨基_4_嘧啶基)氨基] 苯甲酰胺二盐酸盐(化合物UU)。将3-[(2，6_ 二氨基-4-嘧啶基)氨基]-N-{4-[(6-硝 基-4-喹啉基)氨基]苯基}苯甲酰胺二盐酸盐(化合物RRl) (148mg，0. 25mmol)溶解 于Me0H(30ml)并与10% Pd/C(20mg)在30Hg mm下氢化20小时。将反应混合物过滤通 过硅藻土垫。将滤液蒸发到干燥。将得到的残余物溶解于MeOH(IOmL)，与含1.25M HCl 的MeOH(0. 5mL) 一起搅拌，然后通过加入EtOAc进行沉淀，过滤并且干燥，得到90mg化合 物UU。其通过HPLC分析为78%纯度。然后通过将其在NH3水溶液中搅拌将其转化为游离 碱，过滤，空气干燥并且在中性氧化铝上色谱纯化，用包含1. 5% NH3水溶液的MeOH/DCM的 (0-7% )洗脱，得到51mg的化合物UU的纯的游离碱(51mg，43% )。然后通过将其溶解于 MeOH并且加入含1.25M HCl的MeOH将其转化为HC 1盐。蒸发到干燥并将残余物从MeOH/ EtOAc 重结晶，得到化合物 UU，mp (MeOH/EtOAc) 250-255 °C ；1H 匪R[ (CD3)2SO] δ 14. 15 (d, J = 6. IHz, 1Η, N+H), 11. 70(br 1Η，Ν+Η)，10. 48 (s，1Η，NH)，10. 46 (s，1Η，ΝΗ，10. 21 (S，1Η， NH)，8. 22 (t, J = 6. 5Hz, 1H, ArH), 8. 05-7. 89(m，4H，ArH), 7. 79 (d, J = 9. IHz，1H, Ar H)， 7. 71(brd, J = 7. 5Hz，lH，ArH), 7. 59(br,2H, NH2), 7. 53-7. 38(m，8H，ArH & NH2), 6. 67 (d, J =6. 7Hz，1H，ArH)，5. 45 (s，1H，ArH)。HPLC 纯度 ％。HRMS (FAB+)，计算值 C26H23N9O (M+1) m/z 478. 2104，实测值，478. 2103。实施例VV.(2，6-二氨基-4-嘧啶基)氨基]-N-{4-[(6-硝基-4-喹啉基)氨基]苯基}苯 甲酰胺二盐酸盐(化合物VVl)和相关化合物(化合物VV2)的制备 4-[(2，6_ 二氨基-4-嘧啶基)氨基]-N_{4_[ (6_硝基_4_喹啉基)氨基]苯 基}苯甲酰胺二盐酸盐(化合物Wl)。向化合物P3(288mg，0. 76mmol)在EtOH(20mL)禾口 H2O(IOmL)中的溶液加入4-氯-6-硝基喹啉(196mg，0. 94mmol)并且搅拌直到其溶解，然后 加入2滴的浓HCl。将反应混合物回流4小时，用EtOAc稀释，使其沸腾并且冷却到20°C。将 得到的沉淀物过滤并且从MeOH/EtOAc重结晶，得到化合物VVl(445mg 99% ) ；m. p. (MeOH/ EtOAc) 260-265°C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 11. 38 (br s，1H，N+H)，10. 43 (s，1H，NH)，10. 10 (s, 1H, NH), 9. 81 (d, J = 2. 1Ηζ，1Η，NH)，8. 78 (dd, J = 9. 3,2. 2Hz，lH，ArH), 8. 84 (d, J = 7. 2Hz, 1H, ArH), 8. 24 (d, J = 9. 3Hz, 1H, NH)，8. 04-7. 98(m，4H，ArH), 7. 81 (br d, J = 7. 4Hz，2H， Ar H) ,7. 68(brs,2H, NH2)，7. 53 (br s，2H，NH2)，7. 48 (d, J = 8. 9Hz，2H，ArH), 6. 90 (d, J = 7. OHz，1H, Ar H)，5. 52 (s, 1H, ArH)。HPLC 纯度 100% ；HRMS (FAB+)计算值 C26H21N9O3 (M+1)m/ ζ 508. 1846，实测值 508. 1844 ；元素分析计算值 C26H23Cl2N9O3. 4H20 :C，47. 9 ；H, 4. 2 ；N, 19. 3 ； Cl, 10. 9 ；实测值 C,48. 0 ；H,4. 4 ；N, 19. 2 ；Cl, 11. IV0o
N-{4-[(6-氨基-4-喹啉基)氨基]苯基} _4_[ (2，6_ 二氨基_4_嘧啶基)氨基] 苯甲酰胺二盐酸盐(化合物W2)。将化合物VVl(211mg，0. 36mmo 1)溶解于MeOH(30ml) 并且与10% Pd/C(20mg) 一起在30Hg mm氢化5小时。将反应混合物过滤通过硅藻土垫。 将滤液蒸发到干燥。得到的残余物溶解于MeOH(IOmL)，与含1. 25M HCl的MeOH(0. 5mL) 一 起搅拌，然后将MeOH蒸发到干燥。将残余物再溶解于MeOH并且蒸发到干燥，然后从MeOH/ EtOAc重结晶，得到178mg产物；其通过HPLC分析只有93%纯。然后如下将其转化为游离 碱在NHyK溶液中搅拌，过滤，空气干燥并且在中性氧化铝上色谱纯化，用包含1. 5% NH3 水溶液的(0-7.5%)的MeOH/DCM梯度洗脱，得到纯的化合物VV2的游离碱。然后如下将 其转化为HCl盐将其溶解于MeOH并且加入含1. 25MHC1的MeOH。将其蒸发到干燥并将残 余物从 MeOH/EtOAc 重结晶，得到化合物 VV2 (138mg, 70% ), mp (MeOH/EtOAc) 262-266°C ；1H NMR[(CD3)2SO] δ 14. 11 (br s, 1H, N+H), 11. 81 (br, 1H, N+H)，10. 36 (s，1H，NH), 10. 19 (s, 1H, NH)，10. 08 (s，1H, NH), 8. 21 (t, J = 6. OHz，1H, ArH)，8. 00-7. 96 (m, 4H, ArH)，7. 79 (br s, 2H, NH2) ,7. 78(d, J = 9. IHz, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 67 (br s，2Η，NH2)，7. 53 (br s，2H，NH2)，7. 48 (br s, 1H, ArH)，7. 42-7. 38 (m, 3H, ArH)，6. 66 (d，J = 6. 7Hz，1H，ArH) ,6. 00 (v. br,2H, NH2)，5. 51 (s，1H， ArH) ο HPLC 纯度 99. 7% ;HRMS (FAB+)计算值 C26H24N9O (M+1)m/z 478. 2104 实测值 478. 2107。实施例Wff.N-甲基-N- [4-(吡啶-4-基氨基)苯基]~4~ (喹啉_4_基氨基)苯甲酰胺盐酸盐 (化合物Wff)的制备 N-甲基-4-硝基-N-[4_(卩比啶-4-基氨基)苯基]苯甲酰胺盐酸盐(3)。向胺 1(0. 82g，4. IOmmol)的无水二噁烷(70mL)溶液顺序地加入无水吡啶(1. 65mL，20. 50mmol) 和酰氯2 (2. 08g，11. 19mmol)，并将得到的混合物回流 60小时。此后，将反应混合物冷却 到室温，并通过过滤收集得到的固体。通过加入NH3水溶液将滤液碱化，并且通过过滤收集 得到的第二批固体。将固体的批料合并，得到酰胺3，为无定形的黄色固体(3.46g)，将其 通过1H NMR和MS进行分析，并不经进一步纯化使用。1H NMR :8. 88 (dd，J = 6. 32，1.32Hz， 4H, ArC (O)N(CH3)Ar & ArNHAr), 8. 32 (ddd, J, = 9. 17,4. 31,2. 27Hz,4H, ArH), 8. 17(ddd, J = 9. 17,4. 31,2. 28) ,7. 98 (dd, J = 7. 59,6. 50Ηζ，4Η，ArH)[吡啶基-N+-H 不可见]; LCMS(APCI+) 349(100% )。4-氨基-N-甲基-Ν-[4_(卩比啶-4-基氨基)苯基]苯甲酰胺盐酸盐(4)。向酰 胺3(3. 46g，8. 99mmol)的MeOH( 40mL)溶液加入一刮铲头的10 % Pd/C，并将得到的 悬浮液在40psi氢化16小时。此后，将反应混合物过滤通过硅藻土垫，并将溶剂减压除 去。残余物从MeOH-EtOAc再沉淀，得到胺4，为无定形的奶油色固体(0.25g，15%来自1)； mp 235-2380C (粉末-焦油状物)，245-249°C (放出气体)；1HNMR 13. 85 (v br s，lH，吡 啶-N+-H)，10. 75 (s，1H, ArNHAr), 8. 28 (d, J = 7. 23Hz，2H，ArH), 7. 25(s，4H，ArH), 7. 16 (d, J = 8. 44Hz,2H, ArH) ,7. 07 (d, J = 7. 03Hz,2H, Ar H) ,6. 73 (d, J = 7. 79Hz,2H, ArH), 3. 36 (s, ArC (O)N(CH3) Ar) [ArN+H3 不可见]；HRMS (EI)计算值 C19H18N40m/z 318. 1481，实测值 318.1481。N-甲基-N-[4-(吡啶-4-基氨基)苯基]-4-(喹啉_4_基氨基)苯甲酰胺盐酸 盐化合物WW。向胺4(0. 23g，0. 58mmol)在20% EtOH水溶液(40mL)中的溶液顺序地加 入喹啉5 (0. 22g, 1. 36mmol)和浓HCl (0. 17mL, 5. 60mmol)，并将得到的混合物回流 16小 时。此后，将溶剂减压除去，并将残余物从MeOH EtOAc再沉淀，得到化合物WW，为浅黄 色无定形固体(0. 27g，91% )，mp 287-292°C (焦油状物-液体)；1H NMR 14. 6 (v br s， 1H,喹啉基-N+-H)，13. 84 (v br s, 1H,吡啶基-N+-H, 1H)，11. 02 (s, 1H, ArNHAr)，10. 95 (s, 1H, ArNHAr)，8. 80 (d，J = 8. 49Hz，1H, ArH)，8. 58 (d，J = 6. 95Hz，1H, ArH)，8. 28 (d，J = 7. 28Hz，2H，ArH), 8. 06 (m, 2H, ArH), 7. 79 (ddd, J = 8. 31，6. 80，1. 30Hz, 1Η, ArH), 7. 49 (d, J=8. 50Hz, 1H, ArH)，7. 40 (d, J = 8. 53Hz, 1H, ArH)，7. 36 (d, J = 8. 78Hz, 1H, ArH)，7. 31 (m, 4H)，7· 13(d, J = 7. IOHz，2Η，ArH)，6· 76 (d, J = 6. 94Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ,3. 44 (s，3Η，ArC (ο) N(CH3) Ar) ；HRMS (FAB+)计算值 C28H24N5O(MH+)m/z 446. 1981，实测值 446. 1985 ；HPLC 96. 3%。实施例XX.N- {4- [ (2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]苯基} _5_ (4_喹啉基氨基)_2_吡啶 甲酰胺二盐酸盐(化合物XX)的制备 N-{4-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]苯基}乙酰胺盐酸盐(16)向4_氨 基乙酰苯胺 14(3. 55g,23. 64mmol)和 2-氨基-4-氯-6-甲基嘧啶 15(3. 73g,26mmol)在 乙醇(50mL)中的混合物加入浓HCl (2滴)。反应混合物在回流条件下搅拌2小时，冷却 到20°C并且过滤产物，用更多的乙醇洗涤并且干燥，得到基本上纯的16(6.38g，92% )； mp (EtOH) 203-207 °C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 12. 60 (br, 1H, N+H), 10. 50 (br 1H, NH), 10. 02 (s, ΙΗ,ΝΗ) ,7. 60-7. 58 (br m, 6Η, NH2 & ArH)，6. 13 (s，1Η，Η_5 〃)，2. 26 (s，3Η，CH3)，2. 04 (s，3Η， CH3) ；HRMS (FAB+)，计算值 C13H16N5O (Μ+1) m/z 258. 1355，实测值 258. 1346。N4-(4-氨基苯基)-6-甲基-2，4-嘧啶二胺盐酸盐(17)向 16 (6. Og，20mmol) 的悬浮液加入2N HCl (40mL)并将混合物回流20小时。将溶剂蒸发到干燥，使残余物在 MeOH中沸腾并用EtOAc稀释。将得到的沉淀物过滤并用EtOAc洗涤并且干燥，得到基本 上纯的 17(5.0g，97 % ) ；mp (MeOH/EtOAc) 275-280 "C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 12. 50 (br, 1H, N+H)，10. 75 (br s, 1H, NH)，9. 75 (br s, 2H, NH2)，7. 85 (br s,4H, NH2 & ArH))，7. 34 (d, J = 8. 6Hz,2H, ArH)，6. 24 (br s, 1H, ArH)，2. 79 (s, 3H, CH3)，HRMS (FAB+)计算值 C11H14N5 (M+1)m/ ζ216· 1249，实测值 216. 1247。Ν-{4_[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]苯基}_5_硝基_2_吡啶甲酰胺 20。使5-硝基吡啶-2-羧酸18(1.06g，6.31mmol)在P0C13 (IOmL)中回流1小时(得 到澄清的溶液)，冷却到20°C并将过量的POCl3在真空下除去。得到的残余物溶解于1， 4-二噁烷((20mL)并且缓慢加入到17(1.44g，5. 72mmol)和N，N-二乙基苯胺(2. OmL, 12. 62mmol)在1，4-二噁烷(20mL)中的悬浮液中。将反应混合物在20°C搅拌3天。将得到的白色沉淀过滤并用更多的1，4-二噁烷洗涤。将固体在NH3水溶液(20mL)中搅拌并将 得到的红色沉淀过滤，用水洗涤并且从MeOH重结晶，得到20 (708mg，31% ) ；mp (MeOH) > 2900C ；1H NMR([(CD3)2SO] δ 10. 74 (1Η, NH)，9· 43 (dd, J = 2. 6,0. 5Hz, 1H, Η_6)，8· 96 (s, 1H, NH)，8. 81(dd，J = 8. 6,2. 6Hz，lH，H_4)，8. 38 (dd, J = 8. 6,0. 6Hz，lH，H_3)，7. 81(d，J = 9. 0Hz,2H, H-2' H-6 ' ), 7. 70 (d, J = 9. 1Ηζ,2Η, H-3 ' ,5' )，6. 09 (s，2H，NH2)，5. 87 (s， 1H, H-5 “ )，2· 09(s，3H，CH3) ；HRMS (FAB+)计算值 C17H16N7O3 (M+1) m/z 366. 1315，实测值 366. 1314 ；元素分析计算值 C17H15N7O3. 0. 25Me0H :C，55. 5 ；H, 4. 4 :N，26. 3 ；实测值=C, 55. 7 ； H, 4. 5 ；N, 26. 2%。
5-氨基-N-{4-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]苯基}_2_吡啶甲酰胺(21) 向 20(523mg，1.43mmol)悬浮在 1 lMeOH/THF (IOOml)中的悬浮液加入 10% Pd/C (IOOmg) 并且在55Hg mm氢化5小时。将反应混合物过滤并且蒸发到干燥并且从DCM/石油醚 (Pet. ether)重结晶，得到 21 (649mg，96% ) ；mp(DCM/石油醚)> 290 °C ；1H NMR [ (CD3) 2S0] δ 10. 05 (s，1Η, NH), 8. 85 (s, 1H, NH), 8. 25 (d, J = 2. 5Hz, 1Η, Η_6)，7. 82 (d, J = 8. 6Hz, 1Η, Η-3), 7. 73 (d, J = 9. OHz, 2Η, Η-2‘，6' )，7. 60 (d，J = 9. 0Hz，2Η，Η_3‘，5' ), 7. 03 (dd, J = 8. 5，2. 7Ηζ，1Η，Η_4)，6. 04 (brs，2Η，NH2)，6. 03 (brs，2Η，NH2)，5. 85 (s，1Η，Η_5 “)， 2.08(s，3H，CH3)；元素分析计算值 C17H17N7)。0. 25H20 C，60. 1 ;H，5. 2 ;N，28. 9 ；实测值C， 60. 0 ；Η，5· 2 ；N, 28. 7%0N- {4- [ (2-氨基-6-甲基_4_嘧啶基)氨基]苯基} _5_ (4_喹啉基氨基)_2_吡啶 甲酰胺二盐酸盐(22)(化合物 XX)。向 21 (270mg，0. 81mmol)在 EtOH(30mL)和 H20(15mL) 中的溶液加入几滴的浓HCl，随后加入4-氯喹啉(264mg，1. 62mmol,2eq)并且在20°C搅拌， 直到溶解。将反应混合物回流2小时，然后加入更多的4-氯喹啉(264mg，1. 62mmol)并且 回流20小时。反应混合物用EtOAc稀释，沸腾并且冷却到20°C。将得到的沉淀物过滤，得 到浅黄色固体(通过HPLC分析为95%纯)。将这个固体在NHyK溶液中搅拌。将得到的沉 淀物过滤，用水洗涤，干燥并且从MeOH重结晶，得到产物的游离碱(300mg)。(其通过HPLC 分析为98%纯度)。然后如下将游离碱转化为HCl盐加入含1. 25M HCl的MeOH(2. 5mL)， 搅拌30分钟，并且蒸发到干燥。残余物从MeOH/EtOAc重结晶，得到22(化合物XX) (297mg 69 % ) ；HPLC99. 2 % ；mp (MeOH/EtOAc) > 290 "C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 15. 00 (br, 1H, N+H),
12.50 (br, 1H, N+H)，11. 23(brs, 1H, NH)，10. 74 (s，1H, NH)，10. 65(brs, 1H, NH), 8. 92 (d, J = 2. 3Ηζ，1Η，ArH), 8. 89 (d, J = 8. 5Ηζ，1Η，ArH), 8. 66 (d, J = 6. 8Ηζ，1Η，ArH), 8. 31 (d, J = 8. 5Hz, 1Η, ArH), 8. 22 (dd, J = 8. 4,2. 5Hz, 1Η, ArH), 8. 15 (d, J = 7. 9Hz, 1Η, ArH), 8. 08 (t, J = 7. 9Hz, 1Η, ArH)，7. 96 (d, J = 8. 9Ηζ,2Η, ArH)，7. 87 (t, J = 7. 6Hz, 1Η, ArH)，7. 77 (br, 3Η, ArH & NH2)，7. 13 (d, J = 6. 8Hz, 1Η, ArH), 6. 18 (s，1Η, ArH), 2. 28(s，3H，CH3)有一个芳 香族CH信号没有观察到；元素分析计算值C26H24Cl2N8O. 0. 5H20 :C，57. 4 ；H, 4. 6 ；N, 20. 6 ；Cl,
13.0 ；实测值:C,57. 3 ；H, 4. 8 ；N, 20. 7 ；Cl, 12. 7%0实施例YY.N- {6- [ (2-氨基-6-甲基_4_嘧啶基)氨基]_3_吡啶基} _4_ (4_喹啉基氨基)苯 甲酰胺二盐酸盐(化合物YY)的制备 6-甲基-N4- (5-硝基-2-吡啶基)-2，4-嘧啶二胺(9)。向2_氨基_5_硝基吡啶 1(1. 23g,8. 84mmol)和 2-氨基-4-氯-6-甲基嘧啶(L40，g，9· 72mmol)的乙醇(30mL)溶液 加入几滴的浓HC1。将反应混合物回流2天，冷却到20°C并将乙醇蒸发到干燥。将得到的棕 色胶状物在MeOH中搅拌，得到可过滤的沉淀物。将其过滤并用更多的MeOH洗涤，得到产物， 为盐酸盐。1H NMR分析显示其不是完全纯的。通过将其在NH3水溶液中搅拌、过滤并且重结 晶转化为游离碱，得到 9(682mg，31% ) ；mp (MeO) > SOO0C51H NMR[ (CD3) 2S0] δ 10. 47(s,lH, NH), 9. 10(dd, J = 2. 8，0. 4Ηζ，1Η，Η-6' )，8.39(dd，J = 9. 4,2. 8Ηζ, 1Η,Η-4' ) ,8. 28 (dd, J = 9. 3,0. 3Ηζ, 1Η，Η-3' )，6· 63 (s, 1Η，Η_5)，6· 39 (s，2Η，NH2)，2· 18(s，3H，CH3) ；HRMS (EI+) 计算值 CiqHiqN6O2 (M+) m/z 246. 0865，实测值 246. 0866 ；元素分析计算值 CiqHiqN6O 2 =C, 48. 8 ； H, 4. 1 ；N, 34. 1 ；实测值 C, 48. 7 ；H, 4. 2 ；N, 34. 1 %。 N4- (5-氨基-2-吡啶基)-6-甲基-2，4-嘧啶二胺(10)。将化合物 9 (634mg，246mmo 1)在Me0H(50mL)中氢化，使用10% Pd/C(IOOmg)在45Hg mm下氢化20小时。将反应混 合物过滤并且蒸发到干燥，得到 10(550mg，99% ) ；mp (MeOH) 230-233 °C ；1H NMR [ (CD3) 2S0] δ 8. 96 (s, 1H, NH), 7. 70 (d, J = 8. 7Hz, 1H, H-3 ' )，7. 65 (d，J = 2. 5Hz，1H，H_6 ')， 6. 95 (dd, J = 8. 8,2. 9Hz, H_4 ' ) ,6. 30 (s, 1H, H_5)，5. 94(s，2H，NH2)，4. 84(s，2H，NH2)， 2. 07(s，3H，CH3) ；HRMS (FAB+)计算值 CltlH13N6 (M+1)m/z 217. 1202，实测值 217. 1202 ；元素分 析计算值 CltlH12N6 ；C, 55. 5 ；H, 5. 6 ；N, 38. 9 ；实测值 C，55. 3 ；H, 5. 7 ；N, 38. 6 %。
N-{6-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]_3_吡啶基} _4_硝基苯甲酰胺(11)。 在 0°C 向 10(500mg,2. 31mmol)和 N，N_ 二乙基苯胺(lml, 1. 5eq)在 1，4_ 二噁烧(20ml)中 的悬浮液滴加对硝基苯甲酰氯(429mg，12. 31mmol)的溶液。将反应混合物在20°C搅拌2小 时。TLC和质谱显示仍有10存在。因此加入更多的对硝基苯甲酰氯(43mg，0. Ieq)并且搅拌 20小时。将得到的沉淀物过滤并用更多的1，4_ 二噁烷洗涤。将收集的固体在NH3水溶液 中搅拌，过滤，用水洗涤并且干燥，得到基本上纯的ll(821mg，97% ) ；mp (MeOH) > SOO0C51H NMR[(CD3)2SO] δ 10. 58 (s, ΙΗ,ΝΗ) ,9. 56 (s, ΙΗ,ΝΗ) ,8. 65(d, J = 2. 5Hz, 1H，H_2' ) ,8. 38 (d, J = 8. 9Hz，2H，H-3,5),8. 20 (d, J = 9. 2Hz，2H，H_2，6)，8. 17(d, J = 9. IHz,1H, H_5 ')，8. 02 (dd, J = 9. 0,2. 6Hz, 1H, H_4 ' )，6. 45 (s, 1H, H_5 “ )，6. 15(s，2H，NH2)，2. 12(s，3H， CH3) ；HRMS (FAB+) (M+1)m/z 计算值 C17H16N7O3 (M+1)m/z，366. 1315，实测值 366. 1314 ；元素分析 计算值 C17H15N7O3 :C,55. 9 ；Η，4· 1，N, 26. 8，实测值 C，55. 6 ；Η，4· 2 ；N, 26. 8% 4-氨基-N-{6-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]_3_吡啶基}苯甲酰胺12。 向 ll(790mg，2. 16mmo 1)在 1 lMeOH/THF(IOOml)中的悬浮液加入 10 % Pd/C(IOOmg) 并且在45Hg mm下氢化20小时。将反应混合物过滤并且蒸发到干燥并且从DCM/石油醚 重结晶，得至 IJ 12(695mg,96% ) ；mp(DCM/石油醚)> 300 °C ；1H NMR [ (CD3) 2S0] δ 9. 78 (s, 1H, NH), 9. 45 (s，1Η, NH), 8. 63 (dd, J = 2. 4,0. 3Hz, 1Η, Η_2 ' ) ,8. 09 (d, J = 9. OHz, 1Η, Η-5' )，7. 98 (dd, J = 9. 0,2. 6Hz, 1Η, Η-4' )，7. 72 (d, J = 8. 7Ηζ，2Η，Η_2，6)，6. 61 (d, J =8. 7Ηζ，2Η，Η-3,5) ,6. 43 (s, 1Η, Η_5 “ )，6· 13(s，2H，NH2), 5. 73(s，2H，NH2), 2. 12(s，3H， CH3) ；HRMS(FAB+)计算值 C17H18N7O(M+1)m/z336. 1573，实测值 336. 1578 ；元素分析计算值 C17H17N7O. 0. 25H20 :C, 60. 1 ；H, 5. 2 ；N, 28. 9 ；C, 60. 2 ；N, 5. 3 ；N, 29. 0%oN-{6-[(2-氨基-6-甲基_4_嘧啶基)氨基]_3_吡啶基} _4_ (4_喹啉基氨基)苯 甲酰胺二盐酸盐(13)(化合物 YY)。向 12 (250mg，0. 75mmol)在 EtOH (40mL)和 H20(20mL) 中的溶液加入几滴的浓HC1，随后加入4-氯喹啉(159mg，0.98mmOl，1.3eq)并且在20°C搅 拌，直到溶解。将反应混合物回流4小时，然后加入更多的4-氯喹啉(IOOmg)并且回流20 小时。反应混合物用EtOAc稀释，沸腾并且冷却到20°C。将得到的沉淀物过滤，得到浅黄色 固体(通过HPLC分析为75%纯度)。将这个固体在NHyK溶液中搅拌。将得到的沉淀物过 滤，用水洗涤并且干燥，得到产物的游离碱。其通过HPLC分析为96%纯度，然后如下将游离 碱转化为HCl盐加入含1. 25M HCl的MeOH(2. 5mL)，搅拌30分钟，并且蒸发到干燥。残余 物在MeOH(IOmL)中搅拌，过滤并且干燥，得到13 (化合物YY) (365mg 91% ) ；HPLC 98. 9%； mp (MeOH) > 290 °C ；1HNMR [ (CD3) 2SO] δ 14. 70 (br 1H, N+H)，12. 98 (br, 1H, N+H)，11. 12 (s，1H, NH)，11. 01 (s，1H, NH)，10. 68 (s, 1H, NH)，8. 88 (d, J = 3. OHz, 1H, ArH), 8. 84 (d, J = 8. 6Hz, 1H, ArH), 8. 62 (d, J = 6. 9Hz, 1H, ArH), 8. 26 (dd, J = 9. 0,2. 6Hz, 1H, ArH), 8. 22 (d, J = 8. 6Hz，2H，ArH), 8. 15-8. 05 (m, 2H, ArH), 7. 86 (ddd, J = 7. 6,6. 8，1. 5Hz, 1Η, ArH), 7. 70 (d, J = 8. 6Ηζ,2Η, ArH)，7. 01 (d, J = 6. 9Hz, 1Η, ArH)，7. 02 (v. br, 1Η, ArH)，2. 32 (s, 3Η, CH3)， NH2的信号和一个芳香族的信号没有观察到；HRMS (FAB+)计算值C26H23N8O (M+1)m/z463. 1995， 实测值 463. 1996 ；元素分析计算值 C26H24N8Cl2O. HCl. 0. 25H20 ，C，54. 2 ；H, 4. 5 ；N, 19. 4 ；Cl, 18. 5 ；实测值 C, 54. 2 ；H, 4. 5 ；N, 19. 3 ；Cl, 17. 7%0实施例ZZ.N-{5-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]_2_吡啶基} _4_ (4_喹啉基氨基)苯 甲酰胺二盐酸盐(化合物ZZ)的制备 N-{5-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]-2-吡啶基}乙酰胺4。向N_(5_氨 基-2-吡啶基)乙酰胺2 (1. 04g, 6. 88mmol)和2-氨基-4-氯-6-甲基嘧啶(1. 09g, 7. 57mmol)的Et0H(30mL)溶液加入2滴浓HCl。将反应混合物回流2小时，冷却到20°C。将得 到的沉淀物过滤，用更多的乙醇洗涤并且干燥，得到(1.85g)，通过母液浓缩分离得到另外 的物质(165mg)。总收率 499. 3% · mp (MeOH/EtOAc) > 3000C0 1HNMR[ (CD3)2S0] δ 12. 77 (br, 1H, NH)，10. 72 (br, 1H, NH)，10. 44 (s, 1H, NH)，8. 63 (br s, 1H, ArH)，8. 13-8. 06 (m, 2H, ArH)， 7. 79 (v. br,2H, NH2) ,6. 18 (s，1H, ArH), 2. 30(s，3H，COCH3), 2. 09(s，3H，CH3) ；HRMS (FAB+) 计算值 C12H15N6O(M+1)m/z 259. 1307，实测值 259. 1304 ；元素分析计算值 C12H15clN6O. H2O =C, 46. 1 ；H, 5. 5 ；N, 26. 9 ；Cl, 11. 3 ；实测值 C，45. 9 ；H, 5. 5 ；N, 26. 4 ；Cl，11. 45%。N4-(6-氨基-3-吡啶基)-6-甲基-2，4-嘧啶二胺 5。将 4 (1. 53g，5. 19mmo 1)在 1，4-二噁烷/]^0!1(1 l，100mL)和 2N HCl [IOmL, H2OmL+浓 HCl 2mL)]中的悬浮液回流 24 小时。将溶剂蒸发到干燥并将残余物用NH3水溶液碱化。得到的溶液用EtOAc (10 X 50mL) 提取，干燥(Na2SO4)并且蒸发溶剂，得到5(1. llg,99%)0小的样品从DCM/石油醚重结晶； mp(DCM/石油醚)183-186 °C ；1H NMR [ (CD3) 2S0] δ8. 41(s，lH，NH), 8. 01 (d, J = 2. 5Ηζ，1Η， H-2' )，7. 56(dd，J = 8. 7，' )，6. 42 (d，2. 6Hz，1H，H_4 J = 8. 8Hz，1H，H_5' ), 5. 90 (s, 2H, NH2), 5. 67 (s，1H，H_5)，5. 59 (s, 2H, NH2H, CH), 2. 03(s,3s) HRMS (EI+)计算值 CltlH12N6 (M+)m/ ζ 216. 1123，实测值 216. 1124 ；元素分析计算值 C10H12N6- 0. 25H20 :C，54. 4 ；H, 5. 7 ；N, 38. 1 ； 实测值:C, 54. 4 ；H, 5. 7 ；N, 37.9%。N- {5- [ (2-氨基-6-甲基_4_嘧啶基)氨基]_2_吡啶基} _4_硝基苯甲酰胺)6。在 0°C 向 5(830mg，3. 84mmol)和 N，N_ 二乙基苯胺(1. OmL, 5. 76mmol)在 1，4_ 二噁烷(20mL)中 的悬浮液滴加4-硝基苯甲酰氯(720mg，3. 88mmol)的1，4_二噁烷(20mL)溶液。在加入完成 之后，将反应混合物在20°C搅拌1小时，然后将二噁烷在真空下除去。残余物在H20(50mL) 中搅拌并且将得到的沉淀物过滤，用NH3水溶液、H20、和石油醚洗涤。残余物在MeOH中 沸腾并收集不溶解的红色固体。这个处理再重复三次，得到基本上纯的6(903mg，65% )， [如果重复，应该将产物从二噁烷过滤出来，以避免额外的步骤]；mp (MeOH) 294-297°C ；1H NMR[ (CD3)2SO] 10. 99 (s，1H，NH)，9. 14(s，lH，NH) ,8. 68 (d, J = 2·5Ηζ，1Η，Η-6' ) ,8. 32 (d,J = 8. 9Hz，2H，H-3&5), 8. 27 (dd, J = 9. 0,2. 7Hz, 1H, H_4 ' ) ,8. 23 (d, J = 8. 9Hz，2H， H-2&H-6) ,8. 08 (d, J = 9. OHz, 1H, H-3' )，6. 18(s，2H，NH2)，5. 88 (s，1H，H_5〃)，2. ll(s， 3H, CH3) ；HRMS (FAB+)，计算值 C17H16N7O3 (M+1)m/z 366. 1315，实测值 366. 1312 ；元素分析计算 值 C17H15N7O3. CH3OH :C,54. 4 ；H, 4. 8 ；N, 24. 7 ；实测值 C，54. 5 ；H, 4. 8 ；N, 24. 7%04-氨基-N-{5-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]_2_吡啶基}苯甲酰胺7。 向 6(802mg，2. 19mmol)在 1 1 MeOH/THF (IOOml)中的悬浮液加入 10 % Pd/C (IOOmg)并 且在45Hg mm下氢化20小时。将反应混合物过滤并且蒸发到干燥并且从DCM/石油醚重 结晶，得到 7(697mg，95% ) ；mp (DCM/石油醚)157-161 °C ；1H NMR[ (CD3)2S0] δ 9. 98 (s, 1H, NH), 9. 03 (s, ΙΗ,ΝΗ) ,8. 59(d, J = 2. 4Ηζ, 1Η,Η-6' )，8· 16(dd, J = 9. 0,2. 7Ηζ, 1Η,Η-4')， 8. 04(d, J = 8. 9Ηζ, 1Η，Η_3' )，7. 77 (d, J = 8. 7Hz，2Η，Η_2，6)，6. 57(d, J = 8. 7Ηζ，2Η，Η_3， 5)，6. 13 (s，2Η, NH2)，5. 13 (s, 1Η, Η_5 “ )，5· 74 (s, 2Η, NH2)，2. 10 (s, 3Η, CH3) ；HRMS (FAB+) 计算值 C17H18N7O(M+1)m/z 336. 1573，实测值 366. 1574 ；元素分析计算值 C17H17N7O. 2H20 :C， 55. 0 ；H，5，7 ；N, 26. 4 ；实测值 C，55. 2 ；H, 5. 7 ；N, 26. 3%0 N-{5-[(2-氨基-6-甲基-4-嘧啶基)氨基]_2_吡啶基}_4_(4_喹啉基氨基)苯甲 酰胺二盐酸盐 8 (化合物 ZZ)。向 7(241mg，0. 72mmol)在 Et0H(20mL) *H20(10mL)中的溶液 加入4-氯喹啉(153mg，0. 94mmol, 1. 3eq)并且在20°C搅拌，直到溶解。然后滴加几滴浓HCl 并且回流24小时。反应混合物用EtOAc稀释，沸腾并且冷却到20°C。将得到的沉淀物过滤， 得到浅黄色固体，将其从MeOH/EtOAc重结晶，得到350mg的产物，其通过HPLC分析为84% 纯度。将这个固体在NH3水溶液中搅拌以便转化为产物的游离碱，将沉淀物过滤，用水洗涤 并且干燥，得到204mg。其通过HPLC分析为98%纯度。如下将游离碱转化为HCl盐加入含 1. 25M HCl的MeOH(ImL)，搅拌30分钟，过滤并且干燥，得到8 (化合物ZZ) (224mg 58% )； HPLC 100 % ；mp (MeOH) > 295 "C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 14. 75 (br, 1H, N+H)，12. 89 (bs，1H， N+H)，11. 14 (s，1H, NH)，10. 99 (bs, 1H, NH)，10. 94 (s，1H, NH), 8. 87 (d, J = 8. 5Hz, 1H, ArH)， 8. 77 (br 1H, ArH), 8. 61 (d, J = 6. 9Hz, 1Η, ArH), 8. 31 (br, 1Η, ArH), 8. 23 (d, J = 8. 6Ηζ，2Η， ArH), 8. 13 (dd, J = 8. 0,0. 9Hz, 1Η, ArH), 8. 07 (td, J = 7. 7,0. 9Hz, 1Η, ArH), 7. 85 (td, J = 7. 7，1. 2Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ,7. 67(d, J = 8. 6Hz, 2Η, ArH), 7. 02(d, J = 6. 9Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) ,6. 26 (s, 1Η, ArH), 2. 31(s,3H, CH3) ；HRMS (FAB+)，计算值 C26H23N8O (M+1)m/z4631995，实测值 463. 1994 ；元 素分析计算值 C26H24C12N80. HCl. H2O :C，% 2. 9 ；H,4. 6 ；N, 19. 0 ；Cl, 18. 0 ；实测值 C. 53. 1 ； H,4. 6 ；N, 19. 2 ；Cl, 17. 9% 实施例AAA 4-(吡啶-4-基硫基)苯胺(3)。向4-氨基苯硫醇[1] (5. IOg, 40. 74mmol) 的无水DMF (90mL)溶液顺序地加入4-氯吡啶盐酸盐[2] (6. 41g，42. 68mmol)和无水 K2CO3(14. 70g, 106. 34mmol)，并使得到的悬浮液在室温剧烈搅拌 3小时。此后，反应混 合物用EtOAc(IOOmL)和H2O(IOOmL)稀释，并将有机层分离。水层进一步用EtOAc提取 (IOOmL χ 2)，然后将有机提取物合并，用盐水洗涤，并最后用无水MgSO4干燥。减压除 去溶剂，并用1 1 Et2O 己烷(300mL)洗涤得到的残余物，得到胺3，为细的灰白色结 晶固体(4.64g，56 % )，mp (MeOH EtOAc) 171-173 "C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 5. 64(s,2H, NH2), 6. 67(ddd, J = 9. 40，4. 78，2. 81Hz，2H，ArH), 6. 90 (dd, J = 4. 61，1. 59Hz，2H，ArH)， 7. 20(ddd, J = 9. 40，4. 78，2. 81Hz, 2H, ArH), 8. 29(dd, J = 4. 61，1. 59Hz,2H,ArH) ；HRMS 计 算值 C11H11N2S (M+) 203. 0643，实测值 203. 0641。4-硝基-N-[4-(吡啶-4-基硫基)苯基]苯甲酰胺(5)。向胺3 (2. 03g, 10. 06mmol) 的无水二噁烷(70mL)溶液顺序地加入无水吡啶(4.05mL，50. 28mmol)和4-硝基苯甲酰氯 (4) (3. 19g，17. 18mmol，为在30mL无水二噁烷中的溶液)，并将得到的混合物在 50°C搅拌 14小时。此后，通过过滤分离得到的黄色固体，并将其顺序地用二噁烷、EtOAc、和己烷洗涤。 将得到的固体再溶解于MeOH( 5L)，并将这个溶液过滤通过硅藻土以除去未溶解的杂质， 然后减压浓缩为更小的体积。通过过滤收集得到的固体，然后再悬浮并且顺序地用EtOH、 MeOH、和EtOAc洗涤，并且最后通过过滤再收集。得到的物质用己烷洗涤并且高真空干燥， 得到酰胺5，为无定形的黄色粉末状固体，mp295-298°C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 7. 38 (d，J = 6. 15Hz,2H, ArH)，7. 55 (ddd, J = 9. 42,4. 45, 2. 59Hz,2H, ArH)，8. 07 (m, 2H, ArH)，8. 24 (ddd, J = 9. 21，4. 32，2. 31Hz,2H,ArH) ,8. 39(dd, J = 6. 92，1. 97Hz, 2H, ArH), 8. 53(d, J = 6. 6Hz, 2H, ArH)，10. 97 (s，1H, -C (0) NH-) ；HRMS 计算值 C18H14N3O3S (M+) 352. 0756，实测值 352. 0755。4-氨基-N-[(4_(吡啶-4-基硫基)苯基]苯甲酰胺(6)。向回流的硝基化合 物 5(0. 54g，l. 53mmol)的 2 1 EtOH H2O (IOOmL)溶液中顺序地加入 Fe 粉(0. 54g， 9. 72mmol)和浓HCl (2mL)，并使得到的悬浮液回流1小时。此后，将热的反应混合物过滤通 过硅藻土垫，并将溶剂减压除去。将残余物再溶解于MeOH，并将得到的溶液与硅藻土一起 搅拌过夜。将得到的悬浮液过滤通过硅藻土垫，并将滤液用1.25M甲醇中的盐酸酸化。将 溶液减压浓缩为更小的体积，并借助过滤通过硅藻土垫除去得到的固体。将滤液再次酸化， 并且如前所述处理(两次)，最后得到无定形的黄褐色固体(0. 38g，77% )，其不经进一步纯 化使用；1H NMR[(CD3)2SO] δ 5. 79 (s，2Η，-NH2)，6. 62 (d, J = 8. 58Hz, 2H, ArH), 6. 98 (d, J = 5. 96Hz，2H，ArH), 7. 53 (d, J = 8. 61Ηζ，2Η，ArH), 7. 74 (d, J = 8. 58Ηζ，2Η，ArH), 7. 96 (d, J=8. 61Hz，2H，ArH), 8. 34 (d, J = 5. 35Hz，2H，ArH)，10. 02 (s, 1H, -C (O) NH-) ；LCMS (APCI+) 322(100% )。N- [4-(吡啶-4-基硫基)苯基]-4-(喹啉_4_基氨基)苯甲酰胺盐酸盐(化合物 AAA)。向胺5 (0. 31g，0. 97mmol)在20 % EtOH水溶液(IOOmL)中的溶液顺序地加入4-氯 喹啉[7] (0. 33g，2. 02mmol)和浓HCl (0. 20mL，8. 71mmol)，并使得到的悬浮液回流15小时。 此后，将溶剂减压除去，并且通过两个MeOH-共沸循环干燥残余物。得到的固体通过硅胶上 的柱色谱法(两次)纯化，用10%- 20% MeOH CH2Cl2洗脱，得到固体残余物，将 其从MeOH 甲醇中的盐酸EtOAc再沉淀，得到化合物AAA，为无定形的黄色固体(0. 15g， 29%), mp(EtOAc MeOH) 306-310°C ； 1H NMR[ (CD3)2S0] δ 7. 01 (d, J = 6. 94Hz, 1H, ArH), 7. 45 (d, J = 6. 77Ηζ，2Η，ArH), 7. 70(m，4H)，7. 86(m，lH)，8. ll(m，4H)，8. 22 (dd, J = 6. 82， 1. 79Ηζ，2Η，ArH), 8. 55 (d, J = 6. 77Ηζ，2Η，ArH), 8. 62 (d, J = 6. 94Hz, 1Η, ArH), 8. 89 (d, J = 8. 35Hz, 1Η, ArH)，10. 78 (s, 1Η, ArNHAr)，11. 19 (s，1Η, -C(O)NH-)，14. 72(brs, 1H，吡啶 鐺-N+-H)[喹啉鐺 N+-H 不可见]；HRMS 计算值 C27H21N4OS (M+) 449. 1436，实测值 449. 1441 ； HPLC :99· 3%。实施例BBB 4-(4-氨基苯基硫基)吡啶-2-胺(9)。向4_氨基苯硫醇(1) (9. 49g，75. 77mmol) 的无水DMF(54mL)溶液顺序地加入4-氯-2-氨基吡啶(8) (3. 70g,28. 80mmol)和无水 K2CO3(10. 70g, 107. 97mmol)，并将得到的黄色悬浮液在 120°C (浴温)搅拌 45分钟。 此后，将得到的褐黑色悬浮液冷却到室温，然后用H2O和EtOAc稀释。得到的混合物用 EtOAc (x2)提取，将有机级分合并并用盐水洗涤，然后用MgSO4干燥。将溶剂减压除去，然 后将残余物再溶解于少量体积的MeOH中，并且过滤通过硅胶垫。将溶剂减压除去，得到胺 9(5. 66g，90% )，为无定形的奶油状紫色固体，mp 141-143°C ^H NMR [ (CD3) 2S0] δ 5. 56 (br s，2H，NH2)，5. 76 (br s，2H，NH2)，5. 94 (d, J = 1. 22Hz, ΙΗ,ΑγΗ) ,6. 10(dd, J = 5. 46，1. 68Hz, 1H, ArH), 6. 64(ddd, J = 9. 37，4. 78，2. 79Hz，2H，ArH), 7. 17(ddd, J = 9. 38，4. 74，2. 79Hz, 2H, ArH), 7. 65 (d, J = 5. 44Hz, 1H, ArH) ；HRMS 计算值 C11H12N3S (MH+) m/z218. 0753，实测值 218.0750。N-[4_(2-氨基吡啶-4-基硫基)苯基]_4_硝基苯甲酰胺(10)。向胺9(1.09g， 5. Olmmol)的无水二噁烷(30mL)溶液顺序地加入无水吡啶(2. 08mL，25. 04mmol)和4-硝 基苯甲酰氯(4) (1. 60g，8. 60mmol ；作为20mL无水DMF中的溶液加入)，并将得到的混合物 在55-60°C (浴温)搅拌 4小时。此后，通过过滤收集得到的固体，并将顺序地用二噁烷、EtOAc、和己烷洗涤。粗产物从MeOH 甲醇中的盐酸EtOAc再沉淀，得到硝基化合物 10，为无定形的黄色固体(1. 19g，64% )，mp > 300°C ；屯 NMR[ (CD3)2S0] δ 13. 35 (br s, 1H,喹啉-N+-H)，10. 97 (s，1H, ArC (0) NHAr), 8. 39(ddd, J = 9. 25,4. 40,2. 37Hz，2H，ArH)， 8. 23(ddd, J = 9. 20，4. 34，2. 31HZ，2H，ArH), 8. 06(ddd, J = 9. 43，4. 53，2. 62Hz，2H，ArH)， 7. 81(m，3H，ArH & ArNH2)，7. 66 (ddd，J = 9. 41，4. 52，2. 61Hz，2H，ArH) ,6. 65 (dd, J =
6.87，1. 91Hz, 1H, ArH), 6. 29 (d, J=L 73Hz, 1H, ArH) ；HRMS 计算值 C18H15N4O3S (MH+) m/z 367. 0865，实测值 367. 0865。4-氨基-N-[4-(2-氨基吡啶-4-基硫基)苯基]苯甲酰胺盐酸盐(11)。将硝基 化合物10(0. 83g，2. 07mmol)悬浮在2 1 EtOH H2O(IOOmL)中并且将得到的悬浮液回 流。向这个混合物顺序地加入Fe粉(0. 54g，9. 59mmol)和浓HCl (2mL)，并将得到的暗橙色 悬浮液回流1小时。此后，将得到的黄色悬浮液趁热过滤通过硅藻土垫，并将溶剂减压除 去。将残余物再悬浮在H2O上，向其中加入大量硅藻土，并将得到的悬浮液搅拌过夜。此后， 将该悬浮液过滤通过硅藻土垫，并将溶剂减压除去，得到粗的胺11，为无定形的灰白色固体 (0. 65g，93% )，其不经进一步纯化使用。1H NMR[(CD3)2SO] 5 9. 98(s,lH, ArC(O)NHAr),
7.91 (ddd, J = 9. 40，4. 48，2. 58Hz，2H，ArH), 7. 72 (m, 3Η, ArH), 7. 48 (ddd, J = 9. 37，4. 39， 2. 55Ηζ,2Η, ArH), 6. 61 (d, J = 7. 85Ηζ,2Η, ArH) ,6. 18 (dd, J = 5. 46,1. 68Hz, 1Η, ArH), 5. 82 (d，J= 1.36Ηζ,1Η, ArH),6. 01(br s, 2Η, ArNH2), 5. 82 (br s,2H, ArNH2) ； HRMS 计算值 C18H17N4OS (MH+) m/z 337. 1123，实测值 337. 1126。N-[4-(2-氨基吡啶-4-基硫基)苯基]-4-(喹啉_4_基氨基)苯甲酰胺盐酸盐 (化合物 BBB)。将 4-氯喹啉(7) (0. 66g，4. Olmmol)和浓 HCl (0. 52mL, 17. 13mmol)顺序地 加入到胺11 (0. 63g，1. 88mmol)在20% EtOH水溶液(IOOmL)中的溶液中并且将得到的混合 物回流3小时。此后，将溶剂减压除去，并将残余物通过两个MeOH-共沸循环干燥。然后使 残余物从MeOH 甲醇中的盐酸EtOAc再沉淀两次，得到化合物BBB (0. 55g，54% )，为无 定形的黄色固体，mp 225-239°C ；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 14. 10 (ν ν br s，2H，喹啉基-N+-H& 吡啶基-N+H)，11. 14(s, 1H, ArNHAr)，10. 75 (s, 1H, ArC (0) NHAr), 8. 87 (d, J = 8. 48Hz, 1H, Ar H) ,8. 62 (d, J = 6. 92Hz, 1H, ArH) ,8. 20 (d, J = 8. 6IHz, 2H, ArH), 8. 09 (m, 4H, ArH), 7. 82 (m, 4H, ArH & ArNH 2), 7. 68(m,4H, ArH), 7. 01 (d, J = 6. 91Hz,lH, ArH), 6. 66 (dd, J =6. 88，1. 87Hz, 1H, ArH), 6. 31 (d, J=L 74Hz, 1H, ArH) ；HRMS 计算值 C27H22N5OS (MH+) m/z 464. 1541，实测值 464. 1541 ；HPLC :97· 4% 实施例CCC 4-(4-氨基苯基硫基)吡啶-2-醇(13)。向4_氨基苯硫醇[1] (3. 68g，29. 40mmol) 的无水DMF(54mL)溶液顺序地加入4-氯-2-羟基吡啶(12) (0. 49g, 3. 81mmol)和无水 K2CO3 (10. 70g, 107. 97mmol)，并将得到的黄色悬浮液在 120°C (浴温)搅拌 1小时。之 后，反应混合物的LCMS分析显示仍有许多12存在，因此加入更多量的1 (1. 28g，10. 22mmol) (作为在IOmL无水DMF中的溶液加入)。在1小时之后，LCMS和TLC分析显示反应完成， 因此将反应混合物冷却到室温，用H2O稀释，并用EtOAc提取(x3)。合并的有机提取物用盐 水洗涤，用无水MgSO4干燥，并将溶剂减压除去。残余物通过硅胶上的柱色谱法纯化，用
-10% MeOH CH2Cl2洗脱，得到胺13，为无定形的灰白色固体(0.47g，56%)，其不经进一 步纯化使用；1H NMR [(CD3)2SO] δ 11. 20 (br s, 1H, ArOH), 7. 18(m,3H, ArH) ,6. 66(ddd, J = 9. 38，4. 76，2. 80Hz，2H，ArH), 5. 89 (dd, J = 6. 95，1. 92Hz)，5. 64 (br s，2H，ArNH2), 5. 55 (d, J=L 79Hz, 1H, ArH) ；HRMS 计算值 C11H11N2OS (MH+) m/z219. 0592，实测值 219. 0591。
N-[4-(2-羟基吡啶-4-基硫基)苯基]_4_硝基苯甲酰胺(14)。向胺13(0.47g， 2. 13mmol)的无水二噁烷(120mL)溶液顺序地加入无水吡啶(0. 86mL，10. 65mmol)和4-硝 基苯甲酰氯(4) (0. 70g，3. 76mmol，作为20mL无水DMF中的溶液加入)，并将得到的混合 物在搅拌 50°C (浴温)过夜。此后，将反应混合物冷却到室温，然后与大量二氧化硅 合并。将溶剂减压除去，并将得到的二氧化硅吸附物通过硅胶上的柱色谱法纯化，用
-20% MeOH CH2Cl2(含0. 5% NH3水溶液)洗脱，得到更纯的14。这个物质用MeOH洗 涤，并将未溶解的固体过滤掉并且干燥，得到第一批硝基化合物14(0. 27g)。将滤液减压浓 缩，并将残余物用少量体积的MeOH洗涤，然后干燥得到另外的量的14(0. 30g，合计68% )， mp 255-2600C (深色粉末一焦油状物)；1H NMR[ (CD3) 2S0] δ 10. 86 (s, 1H, ArC(O)NHAr), 8. 38(ddd, J = 9. 22，4. 34，2. 33Hz, 2HArH), 8. 22(ddd, J = 9. 24，4. 32，2. 31Hz，2H，ArH)， 7. 98(ddd, J = 9. 40，4. 48，2. 57Hz，2H ArH), 7. 61(ddd, J = 9. 33，4. 46，2. 56Hz，2H，ArH)， 7. 38 (d, J = 6. 95Hz, 1H, Ar H)，6. 05(dd, J = 6. 94，1. 93Hz, 1H, ArH), 5. 73 (d, J = 1. 78Hz, ΙΗ,ΑγΗ) [-0H 信号在约 5. 6ppm 处，非常宽]；HRMS 计算值 C18H14N3O4S (MH+) m/z 368. 0705，实 测值 368. 0711。4-氨基-N-[4_(2-羟基吡啶-4-基硫基]苯基)苯甲酰胺(15)。将硝基化合 物14(0. 48g，l. 18mmol)悬浮在2 1 EtOH H2O(IOOmL)中并且将得到的悬浮液回流。 向这个混合物顺序地加入Fe粉(0. 30g，9. 59mmol)和浓HCl (2mL)，并使得到的悬浮液回 流15分钟。这时，TLC和LCMS分析显示反应不完全，因此加入另外的量的Fe粉(0. 80g， 14. 29mmol)和浓HCl (IOmL)，并将混合物回流另外的50分钟。此后，反应完成，由此，将反 应混合物热过滤通过硅藻土垫，并将溶剂减压除去。残余物通过两个MeOH-共沸循环干燥， 然后再溶解于MeOH中并与硅藻土和活性炭一起搅拌过夜。使得到的浆状物过滤通过硅藻 土垫，并将溶剂减压除去。将残余物再溶解于MeOH并且吸附到大量硅胶上，并将得到的二 氧化硅吸附物通过硅胶上的柱色谱法纯化，用1 20% MeOH CH2Cl2 (含0. 5% NH3水 溶液)洗脱，得到粗的15。这个物质进一步通过从MeOH 甲醇中的盐酸EtOAc再沉淀 来纯化，得到胺15，为无定形的奶油色固体(15mg，3% -可能由于吸附于活性炭导致许多 材料损失，将活性炭提取几次，没有得到什么)；1H NMR[(CD3)2SO] δ 11. 40 (ν ν br s, 1H, 喹啉基-N+-H)，10. 08 (s，1H, ArH), 7. 94(ddd, J = 9. 40,4. 51,2. 59Hz，2H，ArH), 7. 78 (d, J =8. 67Ηζ，2Η，ArH), 7. 52(ddd, J = 9. 40，4. 49，2. 61Ηζ，2Η，ArH), 7. 27 (d, J = 6. 95Hz, 1Η,ArH), 6. 71 (d, J = 8. 52Hz, 2H, ArH), 5. 96(dd，J = 6. 96,1. 93Ηζ, ΙΗ,ΑγΗ) [ArOH & ArNH2 不 可见]；LCMS (APCI+) 338 (100% ), 423 (60% ), 169 (40% ) N-[4-(2-羟基吡啶-4-基硫基)苯基]_4_(喹啉_4_基氨基)苯甲酰胺盐酸盐 (化合物 CCC)。将 4-氯喹啉(7) (12mg, 0. 07mmol)和浓 HCl (30 μ L, 17. 13mmol)顺序地加 入到胺15(13mg，0. 032mmol)在20% EtOH水溶液(6mL)中的溶液中，并将得到的混合物回 流18小时。此后，将溶剂减压除去，并将残余物通过两个MeOH-共沸循环干燥。将得到的物 质再溶解于MeOH并且吸附到大量硅胶上，并将得到的二氧化硅吸附物通过硅胶上的柱色 谱法纯化，用10% MeOH CH2Cl2 (含0.5% NH3水溶液)洗脱，得到更纯的物质。将 这个物质进一步通过从MeOH 甲醇中的盐酸EtOAc再沉淀来纯化，得到化合物CCC，为无 定形的黄色固体(7mg，41% )，mp 209-214°0；^ NMR[ (CD3)2S0] δ 14. 42 (br s，1H，1H，喹啉 基-N+-H), 11. 34 (br s, 1H，吡啶基-N+-H)，10. 99 (s，1H, ArNHAr)，10. 61 (s，1H，ArC (O)NHAr)， 8. 77 (d，J = 8. 60Hz，1H, ArH)，8. 62 (d，J = 6. 90Hz，1H, ArH)，8. 19 (d，J = 8. 60Hz，2H, ArH)， 8. 07(m，2H)，8· 00 (dd, J = 6. 88，1. 83Hz，2H，ArH), 7. 87 (七重峰，J = 11. 29，8. 36，5. 40， 2. 76Hz, 1H, ArH)，7. 69 (d, J = 8. 55Hz,2H, ArH)，7. 60 (d, J = 8. 60Hz,2H, ArH)，7. 27 (d, J =6. 97Hz, 1H, ArH)，7. 06 (d, J = 6. 94Hz, 1H, ArH)，5. 97 (d, J = 6. 96，1. 88Hz)，1H, ArH)， 5. 63 (d，J= 1. 76Hz,lH, ArH) [ArOH 不可见]；HRMS 计算值 C27H21N4O2S (MH+)m/z 465.1385， 实测值 465. 1389 ；HPLC 93. 5%。实施例DDD本发明化合物的牛物活件如Ghoshal 等人[Mol. Cell Biol. 2005，11，4727-41]所述，使用对抗所有三种酶 的高度特异性的抗体进行由4-苯胺基喹啉使DNMTl选择性消耗的试验。对于DNMT1，使用 得自Sant aCruz或NewEngland Biolabs的市售的抗体。以高滴定度对抗DNMT3a和3b的 抗体是新制备的，所述抗体在蛋白质印迹或免疫沉淀分析中不会彼此交叉反应。从已经用 浓度为5、10和100 μ M的4-苯胺基喹啉处理的HCTl 16细胞(以比较高的水平表达所有三 种DNMT的结肠癌细胞)分离蛋白质提取物(相当于lOOyg)。如表3中所示，在筛选的化 合物中，有九个化合物在100 μ M、有十三个化合物在10μM、和有^^一个化合物在5μ M能 够诱导大于60%的DNMTl降解(DNMT1水平低于40% )。四个化合物(化合物Ε，化合物 ΕΕΕ2，化合物II，和化合物FFl)能够在10 μ M诱导大于94%的DNMTl降解(DNMT1水平低 于6% )，表现出由地西他滨实现的级别的效力水平。在基于细胞的GFP (绿色荧光蛋白)试验中试验非-双季铵的4-苯胺基喹啉的脱 甲基活性。这个试验具有由CMV启动子调节的GFP基因并且对启动子内的CpG位置的甲 基化敏感。由于暴露于甲基化抑制剂引起的甲基化减少导致GFP表达，并且容易地进行评 价。具体地，通过流细胞计数法使用包含外遗传沉默的GFP转基因的CMV-EE210细胞系试 验GFP表达的再活化。通过用pTR-UF/UFl/UF2质粒(Zolotuhin等人，1996)转染NIH 3Τ3 细胞制备CMV-EE210，所述pTR-UF/UFl/UF2质粒由包含巨细胞病毒(CMV)启动子的pBS(+) (Stratagene, Inc.)组成，所述巨细胞病毒启动子引发适合于在哺乳动物细胞中表达的人 源化GFP基因。在转染之后，最初通过FACS分析选择表达高水平GFP的细胞并且使用MoFlo 细胞计数器(Cytomation，Inc.)分选。将哺乳动物DNMTl的有效抑制剂地西他滨用作阳性 对照。为了筛选用于CMV-EE210的再活化，向完全培养基(补充有10%胎牛血清(Hyclone)
111的不含酚酞红的DMEM(Gibco，Life Technologies))加入地西他滨(1 μ Μ)或试验化合物 (浓度为30-50 μ Μ)。然后将细胞在包含试验化合物的96孔板中接种为30%汇合( 5000 细胞/孔)并且在5% CO2中在37°C生长三天。将板在荧光显微镜下检查，使用450-490激 发滤光器(13 filter cube, Leica，Deerfield IL)。如果10%的活细胞表达GFP，则将孔 评价为gl阳性；如果30%的活细胞表达GFP，则将孔评价为g 2阳性；和如果75%的活细 胞表达GFP，则将孔评价为g3。GFP IC50为使GFP表达水平从g3到gl/2的剂量时的抑制剂 浓度(如同IC5tl)。如表3中所示，在试验的化合物中，六个化合物(化合物0，化合物BB，化 合物P，化合物Q，化合物Z，和化合物CC)以大于75%的水平恢复GFP基因的转录。另外， 它们的毒性小于地西他滨的一半。表3
关于选择的本发明化合物的脱甲基化活性和诱导DNMTl降解的概括 ND-未检测到活性；TD5tl- > 50%细胞存活的剂量；TBT-有待试验基因表达的RT-PCR试验将RKO和HCT-116细胞用不同浓度的化合物AAA，化合物BBB，和化合物CCC处 理。在四十八小时的培养之后，收获细胞用于使用Qiagen RNeasy Mini试剂盒进行RNA 分离。RNA使用分光光度计进行量化，并将Iyg的RNA用于使用Bio-Rad iScript cDNA Synthesis 试剂盒进行的 cDNA 合成。使用用于 iCycIer 的 SYBER GreenER qPCRSuperMix, 根据生产商的规程进行RTPCR。使用的引物序列如下pl65’ -atgtcctgccttttaacgta-3’ 和 5， -gtgctcactccagaaaactc-3，， MLH-15， _tgaggaagggaacctgattg_3， 和5’ -tcttcgtcccaattcacctc-3', ρ 15 5 ' -caccatgaagcgaaacacag-3' 和 5 ' -tccatcggaagattcgtagc-3', GAPDH 5 ' -attgccctcaacgaccactt-3' 和 5， -ggtccaccaccctgttgc-3‘, 和 B_actin 5， _ctggaacggtgaaggtgaca_3， 和5，-aagggacttcctgtaacaacgca-3，。将样品在得自 Bio-Rad 的 iQ5 Multicolor 实时 PCR 检 测系统上进行分析。使用iQ5 Optical系统软件版本2. O进行数据分析，并且从这个软件 测定阈周期(Threshold Cycle, CT)和CT平均值。对于每个样品，至少进行四个反应，两个 用于P16，另两个用于GAPDH管家对照。从每个相应的pl6样品CT减去得自GAPDH反应的 平均CT值，得到称为ACT的数值。然后，从所有经过处理的ACT值减去得自未经处理的 P16样品的ACT，得到称为Δ ACT的另一个数值。相对表达式值等于负Δ ACT值2的幂 次方(=2~_Δ ACT)。将复本样品一起取平均，得到每个处理的平均的相对表达式，并且计 算标准差。使用相同的方法计算P15和MLH-I的相对表达式值。如图1中所示，化合物AAA，化合物BBB，和化合物CCC能够增加pl6的RNA表达水 平。浓度为0.1 μΜ的化合物AAA引起优于未经处理的最大的P16再表达。因为更高水平 的P16似乎是在引起pl6再表达方面具有较小的作用，所以在试验的较高浓度可能有关于 药物溶解度或毒性的一些问题。基于细胞的牛长试骑基于细胞培养的试验可用于评价本发明化合物抑制一种或多种细胞活性(例如， 癌细胞生长和/或存活)的能力。许多癌细胞系可以得自美国模式培养物保藏所(American Type Culture Collection,ATCC)和其它来源。简而言之，将细胞接种在经过组织培养物处 理的不透明的白色96孔板(Thermo Electron, Vantaa, Finland)中的100 μ 1适当的生长 培养基(由ATCC确定的)中，取决于细胞增殖的速度，每孔为5000-10000个细胞。然后使 细胞暴露于适当浓度的药物或等量的DMSO (药物稀释剂)并且允许在适当浓度的药物或等 量的DMSO的存在下生长96小时。此后，向每个孔添加100 μ 1的Cell-Titer-Glo (CTG)试 剂(Promega，Inc.，Madison, WI)。然后将板在室温下摇动2分钟以允许细胞溶解，并且在 室温下温育10分钟以使荧光信号稳定化。与得自Promega的Kinase-Glo试验试剂相似， 这种试剂同时包含荧光素酶及其底物荧光素。由细胞溶胞产物中的ATP激活的荧光素酶催 化荧光素到氧荧光素的转化，这是一个产生光的反应。产生的光的量与细胞溶胞产物中ATP 的量成正比，所述ATP的量本身与细胞数成正比并且给出细胞增殖的指标。代表性化合物 的C5tl值提供在以下表4中。表4 尽管已经参考某些实施方案和实施例描述了本发明，但是应该理解，可以对实施 方案和实施例进行进一步的修饰和改变而不脱离本发明的精神实质或范围。
权利要求
式(I)的化合物或其生理可接受的盐或磷酸酯前体药物、或羧酸酯或氨基酸酯前体药物，其中G1、G2、G3、和G4各自独立地为C、N、或N+(在R6-R9连接于N时)；G5和G6各自独立地为CH或N；G7和G8各自独立地为CH、C(在R2连接于C时)、N、或N+(在R2连接于N时)，D1和D2各自分别为CH、C(在R3连接于C时)、N、或N+(在R3连接于N时)，R6、R7、R8、和R9各自分别为H、卤素、CF3、OCF3、CN、CONHR4、CONR4R5、SO2Me、SO2NHR4、SO2NR4R5、NHCOR4、NHR4、NR4R5、OR4、NO2、或CH2R4，其中R4和R5各自独立地为H、低级C1-C6烷基或环烷基，所述低级C1-C6烷基或环烷基任选地被氨基、羟基、甲氧基、-CN、-COOH或-SO2NH2基团取代，或具有一个或多个氧、硫或氮原子作为环烷基结构的一部分，所述环烷基结构可以表示吗啉、吡咯烷、哌啶、吡咯烷、硫代吗啉、咪唑或4-甲基哌嗪或可以是由-N＝取代-CH＝环碳，R2和R3各自独立地为H、NHR4、NR4R5、OR4、NO2或CH2R4，其中R4和R5如上述定义的，X可以是H或C1-C6烷基，所述C1-C6烷基任选地被氨基、羟基或甲氧基基团取代，或具有一个或多个氧原子或氮原子作为环烷基结构的一部分，其可以表示氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、或吗啉；Y可以是CONR4、NR4CO、O、S(O)n[n＝0-2]、(CH2)k[k＝1-6]、-CH＝CH-、NR4，或者是两个芳香环之间的直接的连接(即，两个芳香环之间的C-C键)，其中R4和R5如上述定义的；o、m和p表示基团Z的连接位置；Z可以是式(II)所示的基团Q1-Q43之一；其中A是S(O)w[w＝0至2]，G9-G13各自独立地为C、N、或N+(在R10-R13连接于N时)；但是G9-G13中的至少三个为C；和R10、R11、R12、R13、和R14各自分别为H、卤素、烷基、CF3、OCF3、CN、CONHR4、CONR4R5、SO2Me、SO2NHR4、SO2NR4R5、NHCOR4、NHR4、NR4R5、OR4、NO2或CH2R4，其中R4和R5如上述定义的。FPA00001153334600011.tif,FPA00001153334600021.tif,FPA00001153334600031.tif,FPA00001153334600041.tif
2.式(III)化合物， 或其可药用盐、磷酸酯前体药物、或羧酸酯或氨基酸酯前体药物，其中 R6、R7、R8、禾口 R9 各自分别为 H、卤素、CF3、0CF3、CN、CONHR4、C0NR4R5、S02Me、S02NHR4、 S02NR4R5、NHCOR4、NHR4、NR4R5、OR4、N02 或 CH2R4，其中 R4 和 R5 各自独立地为 H、C「C6 烷基、或 环烷基，所述烷基或环烷基任选地被一个或多个氨基、羟基、甲氧基、-CN、-C00H或-S02NH2 基团取代；X为H，或Q-C；烷基，所述Q-C；烷基任选被一个或多个氨基、羟基或甲氧基取代； Y 为 C0NR4、NR4C0、0、S(0)n(n = 0 至 2)、(CH2) k (k = 1 至 6)、_CH = CH-或 NR4，其中 R4 和R5如上所定义；G7和G8各自独立地为CH或N， 和D2各自独立地为CH或N， 0、m和p代表基团Z的连接位置； Z为上式(II)中表示的基团Q1-Q43之一，其中 A 为 0、S(0)w[w = 0 至 2]；G9-G13各自独立地为C、N或N+ (其中R10-R13与N相连)，但G9-G13中至少三个为C， R10、R11、R12、R13 和 R14 各自分别为 H、卤素、烷基、CF3、0CF3、CN、CONHR4、C0NR4R5、S02Me、 S02NHR4、S02NR4R5、NHCOR4、NHR4、NR4R5、OR4、N02 或 CH2R4，且其中 R4 和 R5 如上所定义。
3.根据权利要求1或2的化合物的盐，其中所述盐是与以下的酸形成的盐酸、氢溴 酸、硫酸、磷酸、羧酸、磺酸、硫代酸或膦酸、乙酸、丙酸、羟基乙酸、琥珀酸、马来酸、羟基马来 酸、甲基马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、乳酸、草酸、葡糖酸、葡糖二酸、葡糖醛酸、柠檬酸、 苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、扑 酸、烟酸、异烟酸、氨基酸、谷氨酸、天冬氨酸、苯基乙酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羟基乙烷磺酸、 乙烷-1，2- 二磺酸、苯磺酸、4-甲基苯磺酸、萘-2-磺酸、萘-1，5- 二磺酸、2-或3-磷酸甘油酸、葡糖-6-磷酸、N-环己基氨基磺酸、和抗坏血酸。
4.根据权利要求1或2的化合物的盐，其中所述盐为钠盐、钙盐、锂盐、钾盐、铵盐或三烷基铵盐。
5.根据权利要求1或2的化合物，其中Z为Q9、Q39或Q42。
6.根据权利要求1或2的化合物，其中R6、R7、R8和R9各自为H;X为H ;Y为C0NH或 NHC0 ；Z为Q9、Q39或Q42 ;A为S ;w为0 ；且Z连接在m或p位上。
7.根据权利要求1或2的化合物，其中R6、R7、R8和R9各自为H;X为H ;Y为C0NH ；Z为 Q9 ;A为S 为0 ；且Z连接在p位上。
8.根据权利要求1或2的化合物，其中R6、R7、R8和R9各自为H;X为H ;Y为C0NH ；Z为 Q39 ；A为S 为0 ；且Z连接在p位上。
9.根据权利要求1或2的化合物，其中R6、R7、R8和R9各自为H;X为H ;Y为C0NH ；Z为 Q42 ；A为S 为0 ；且Z连接在p位上。
10.式(I)化合物，或其生理学上可接受的盐或磷酸酯前体药物，或羧酸酯或氨基酸酯 其中&、G2、G3和G4各自独立地为C、N或N+ (其中R6-R9与N相连);G5和G6各自独立 地为CH或N ;G7和G8各自独立地为CH、C(其中R2与C相连)、N或N+(其中R2与N相连)， 和D2各自分别为CH、C (其R3与C相连)、N或N+ (其中R3与N相连)， R6、R7、R8 和 R9 各自分别为 H、卤素、CF3、0CF3、CN、CONHR4、C0NR4R5、S02Me、S02NHR4、 S02NR4R5、NHC0R4、NHR4、NR4R5、0R4、N02 或 CH2R4，其中 R4 和 R5 各自独立地为 H、低级 Q-Q 烷基 或环烷基，所述低级Q-C；烷基或环烷基任选被氨基、羟基、甲氧基、-CN、-C00H或-S02NH2基 团取代，或具有一个或多个氧、硫或氮原子作为环烷基结构的一部分，所述环烷基结构可以 表示吗啉、吡咯烷、哌啶、吡咯烷、硫代吗啉、咪唑或4-甲基哌嗪，或可以是由-N =取代-CH =环碳，R2和R3各自独立地为H、NHR4、NR4R5、OR4、N02或CH2R4，其中R4和R5如上所定义， X可以是H或Ci-C；烷基，所述烷基任选被氨基、羟基或甲氧基取代，或具有一个或多 个氧或氮原子作为环烷基结构的一部分，所述环烷基结构可以代表氮杂环丁烷、吡咯烷、哌 啶、哌嗪或吗啉；Y 可以是 C0NR4、NR4C0、0、S(0)n[n = 0 至 2]、(CH2)k[k = 1 至 6]、-CH = CH_、NR4 或两 个芳香环之间的直接键(即，在两个芳香环之间的C-C键)，其中R4和R5如上所定义； 0、m和p代表组成部分Z的连接位置； Z可以为式(II)中表示的基团Q1-Q43之一；前体药物， 其中A是0、S (0)w[w = 0至2]或NR4，其中R4如上所定义；G9-G13各自独立地为C、N或N+(其中R10-R13与N相连)；但G9-G13中至少三个是C ；并R10、R11、R12、R13 和 R14 各自分别为 H、卤素、烷基、CF3, 0CF3、CN、CONHR4、C0NR4R5、S02Me、S02NHR4、S02NR4R5、NHCOR4、NHR4、NR4R5、OR4、N02 或 CH2R4，其中 R4 和 R5 如上所定义。
11.式(III)化合物 或其药学可接受的盐、磷酸酯前体药物、或羧酸酯或氨基酸酯前体药物，其中 R6、R7、R8 和 R9 各自分别为 H、卤素、CF3、0CF3、CN、CONHR4、C0NR4R5、S02Me、S02NHR4、 S02NR4R5、NHCOR4、NHR4、NR4R5、OR4、N02 或 CH2R4，其中 R4 和 R5 各自独立地为 H^rQ 烷基、或环 烷基，所述Q-C；烷基或环烷基任选被一个或多个氨基、羟基、甲氧基、-CN、-C00H或-S02NH2 基团取代；X为H或Ci-C；烷基，所述Ci-C；烷基任选被一个或多个氨基、羟基或甲氧基取代； Y 为 C0NR4、NR4C0、0、S(0)n(n = 0 至 2)、(CH2) k (k = 1 至 6)、_CH = CH-或 NR4，其中 R4 和R5如上所定义；G7和G8各自独立地为CH或N， 和D2各自独立地为CH或N， 0、m和p代表基团Z的连接位置； Z为上式(II)中表示的基团Q1-Q43之一，其中 A为0、S (0) W[w = 0至2]或NR4，其中R4如上所定义；G9_G13各自独立地为C、N或N+(其中R10-R13与N相连)，但G9_G13中至少三个为C， R10、R11、R12、R13 和 R14 各自分别为 H、卤素、烷基、CF3、0CF3、CN、CONHR4、C0NR4R5、S02Me、 S02NHR4、S02NR4R5、NHCOR4、NHR4、NR4R5、OR4、N02 或 CH2R4，且其中 R4 和 R5 如上所定义。
12.药物组合物，其包括根据权利要求1、2、10或11的化合物、盐或前体药物，和药学可 接受的载体。
13.根据权利要求12的药物组合物，其中所述化合物、盐或前体药物为固体形式。
14.根据权利要求12的药物组合物，其中所述药物组合物为口服剂型、可注射剂型或 局部用剂型。
15.根据权利要求1、2、10或11的化合物、盐或前体药物用作治疗物质的用途。
16.根据权利要求1、2、10或11的化合物、盐或前体药物，其用于抑制细胞中DNA甲基化。
17.根据权利要求1、2、10或11的化合物用于制备抑制DNA甲基化的药物的用途。
18.—种抑制细胞中DNA甲基化的方法，包括使所述细胞接触根据权利要求1、2、10或 11的化合物、盐或前体药物，使得所述细胞的DNA甲基化活性被抑制。
19.一种抑制细胞中DNA甲基化的方法，包括使所述细胞接触根据权利要求1、2、10或 11的化合物、盐或前体药物，使得所述细胞中DNA甲基转移酶的活性被抑制。
20.根据权利要求19的方法，其中通过降解DNA甲基转移酶DNMT1来抑制DNA甲基转移酶的活性。
21.根据权利要求19的方法，其中所述接触步骤包括使所述细胞与生物上有效量的根 据权利要求1、2、10或11的化合物、盐或前体药物接触，使得所述细胞中DNA甲基转移酶 DNMT1活性的至少50%被抑制。
22.根据权利要求19的方法，其中接触步骤包括使所述细胞与生物上有效量的根据权 利要求1、2、10或11的化合物、盐或前体药物接触，使得所述细胞中DNA甲基转移酶DNMT1 活性的至少25%被抑制。
23.一种恢复细胞中DNA甲基化-抑制基因的活性的方法，包括使细胞与生物上有效 量的根据权利要求1、2、10或11的化合物、盐或前体药物接触，使得DNA甲基化-抑制基因 的活性相对于所述化合物、盐或前体药物不存在下的活性提高至少25%。
24.根据权利要求23的方法，其中所述接触步骤包括使所述细胞与生物上有效量的 根据权利要求1、2、10或11的化合物、盐或前体药物接触，使得DNA甲基化_抑制基因的转 录活性或转录水平提高至少25%。
25.权利要求23的方法，其中所述DNA甲基化抑制基因选自以下的组14-3-3Sigma， ABL1 (PI)、AB0、APC、AR(雄激素受体)、BLT1 (白细胞三烯B4受体)、BRCA1、CALCA(降钙素)、 CASP8(半胱天冬酶8)、小窝蛋白1、CD44、CFTR、C0X2、CSPG2(多能聚糖)、CX26(连接蛋白 26)、Cyclin A1、DBCCR1、ECAD (上皮细胞钙粘蛋白)、内皮缩血管肽受体B、EPHA3、EP0(红细 胞生成素)、ER(雌激素受体)、FHIT, GPC3 (磷脂酰肌醇聚糖3)、GST-pi、H19、H-钙粘着蛋 白(CDH13)、？-球蛋白、111(1、11]\0^1、11( 六5、IGF2(胰岛素样生长因子 II)、IGFBP7、IRF7、 LKB1、LRP-2(巨蛋白)、MDGI (乳房来源的生长抑制因子)、MDR1、MDR3 (PGY3)、MGMT (06甲 基鸟嘌呤甲基转移酶)、MUC2、MY0D1、N33、NEP(中性肽链内切酶24. 1)/CALLA、NIS (碘化钠 同向转运基因)、P14/ARF、P15(CDKN2B)、P16(CDKN2A)、P27KIPl、p57KIP2、PAX6、PgR(孕酮 受体)、RAR- 0 2、RASSFURB1 (视网膜母细胞瘤)、TERT、TESTIN、TGFBRI、THBS1 (凝血酶敏 感蛋白-1)、TIMP3、TLS3(T-网素)、尿激酶(uPA)、VHL(希普尔基因)、WT1、和Z02(闭锁小 带2)。
26.用于治疗患有与异常的DNA甲基化有关的疾病的患者的方法，包括对所述患者给 予药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的权利要求1、2、10或11的化合物、盐、或 前体药物，和药学可接受的载体。
27.权利要求26的方法，其中所述药物组合物通过以下的途径给药口服给药、非肠道 给药、局部给药、腹膜内给药、静脉内给药、动脉内给药、透皮给药、舌下给药、肌肉内给药、 直肠给药、经口含化给药、鼻内给药、脂质体给药、通过吸入给药、阴道给药、眼内给药、通过 局部递送给药、皮下给药、脂肪内给药、关节内给药、或鞘内给药。
28.权利要求26的方法，其中所述药物组合物口服给药。
29.权利要求26的方法，其另外包括对所述患者给予与所述药物组合物联合的第二治疗剂。
30.权利要求29的方法，其中所述第二治疗剂为地西他滨或阿扎胞苷。
31.权利要求29的方法，其中所述第二治疗剂选自组蛋白脱酰基酶抑制剂、抗生素药、 烷化剂、维甲酸类、激素药、植物来源的药物、生物学药、白细胞介素、干扰素、细胞因子、免 疫调节剂、和单克隆抗体。
32.权利要求31的方法，其中所述组蛋白脱酰基酶抑制剂选自曲古抑菌素A、软木酰 基苯胺异羟肟酸、oxamf latin、软木酸双异羟肟酸、间羧酸肉桂酸双异羟肟酸、pyroxamide、 trapoxin A、apicidin、缩酚酸肽、N_(2_氨基苯基)-4_[N_(卩比啶-3-基甲氧基羰基)氨基 甲基]苯甲酰胺、丁酸、丁酸苯酯和精氨酸丁酸酯。
33.权利要求26的方法，其中所述与异常的DNA甲基化有关的疾病选自血液学病症、良 性肿瘤和癌症。
34.权利要求33的方法，其中所述血液学病症选自急性骨髓性白血病、急性早幼粒细 胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、脊髓增生异常综合征、和镰 状细胞性贫血病。
35.权利要求33的方法，其中所述癌症选自以下的组乳腺癌、皮肤癌、骨癌、前列腺 癌、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、脑癌、喉癌、胆囊癌、胰腺癌、直肠癌、甲状旁腺癌、甲状腺癌、 肾上腺癌、神经组织癌、头和颈癌、结肠癌、胃癌、支气管癌、和肾癌、基底细胞癌、溃疡型和 乳头型鳞状细胞癌、转移性皮肤癌、骨肉瘤、尤因肉瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(veticulum cell sarcoma)、骨髓瘤、巨细胞瘤、小细胞肺肿瘤、胆结石、胰岛细胞瘤、原发性脑肿瘤、急性和 慢性淋巴细胞瘤和粒细胞瘤、毛细胞瘤、腺瘤、超常增生、髓样癌、嗜铬细胞瘤、黏膜神经瘤 (mucosal neuronms)、肠道神经节瘤(intestinalganglloneuromas)、±曾生性角月莫神经瘤、 类马凡氏体型肿瘤(marfanoidhabitus瘤)、Wilm’ s瘤、精原细胞瘤、卵巢肿瘤、平滑肌瘤、 子宫颈非典型增生、和原位癌、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、软组织肉瘤、恶性类癌瘤、 局部的皮肤病损、蕈样肉芽肿(mycosis fungoide)、横纹肌肉瘤、卡波济氏肉瘤、骨源性肉 瘤、恶性血钙过多、肾细胞肿瘤、真性红细胞增多症(polycythermia vera)、腺癌、多样性胶 质母细胞瘤(glioblastoma multiforma)、白血病、淋巴瘤、恶性黑色素瘤、和表皮样癌。
全文摘要
提供喹啉衍生物、特别是4-苯胺喹啉衍生物。所述喹啉衍生物可用于调节DNA甲基化，诸如有效抑制胞嘧啶在C-5位的甲基化，例如通过选择性抑制DNA甲基转移酶DNMT1。提供合成多种4-苯胺喹啉衍生物的方法和调节DNA甲基化的方法。还提供制备和施用这些化合物或组合物以治疗病症诸如癌症和血液障碍的方法。
文档编号C07D401/12GK101889008SQ200880119829
公开日2010年11月17日 申请日期2008年10月10日 优先权日2007年10月12日
发明者D·J·拜尔斯, D·布鲁克, H·范卡亚拉帕蒂, P·菲亚斯冯格萨, S·G·里德卡尔, S·加马吉, W·丹尼 申请人:休普基因公司