本发明涉及LB80380药物的中间体化合物及其制备方法和用途。
背景技术：
核苷膦酸酯类衍生物LB80380(如式A所示)是由韩国LG生命科学公司开发的具有明显抗病毒活性(尤其是抗乙型肝炎病毒)的新药。临床试验表明，该衍生物(1)抑制HBV活性是阿德福韦酯的100倍，而且具有良好的安全性，无明显的不良反应。
关于该化合物的制备，目前已公开了三种合成路线：
路线一(专利文献CN1487949A)：
该路线中，由起始原料化合物(2)合成化合物(6)的过程中，采用的羟基保护试剂为叔丁基(二苯基)甲硅烷基氯(TBDPSCl)，该试剂价格昂贵，致使成本较高；另外，由化合物(7)制备化合物(8)的过程中，同时会生成副产物化合物(17)和化合物(18)，造成后续纯化困难，操作繁琐，试剂、时间和人工成本较高。
路线二(专利文献CN101061128B)：
该路线中，由起始原料化合物(2)合成化合物(6)的过程中，采用了另一种羟基保护试剂三苯甲基氯(TrCl)，由化合物(6)到LB80380(式A)的合成步骤与路线一相同。该路线采用的羟基保护试剂成本仍然较高，且同样地，由化合物(7)制备化合物(8)时也会同时生成副产物化合物(17)和化合物(18)，纯化困难。
路线三(专利文献WO2005058926A1)：
该路线中，化合物(7)通过合成嘌呤环途径制备式(8)化合物，从而避免了路线一和路线二中生成副产物化合物(17)和化合物(18)的问题。但是，该路线由化合物(7)合成化合物(14)的步骤需要用到极易爆炸的试剂叠氮钠(NaN3)，叠氮化合物(14)为易爆试剂，具有潜在的危险性，给制备过程、后处理及将来的工业化生产带来严重的安全隐患。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种新的LB80380药物的中间体化合物(式Ⅰ)，采用该化合物作为中间体用于合成LB80380化合物(式A)时，能够克服现有的LB80380化合物合成路线中存在的上述问题。本发明的新方法排除了易爆危险性及其给制备过程、后处理及将来的工业化生产带来严重的安全隐患。同时降低整个合成的成本，提高了产品的纯度，降低纯化难度，简化合成路线，这些优点在工业生产上亟待解决的，并且有非常重要的药物大规模生产意义。
本发明的第二目的在于提供制备LB80380中间体化合物(式I)的方法。
本发明的第三目的在于提供式LB80380中间体化合物(式I)用于制备LB80380化合物的用途。
本发明的第四目的在于提供LB80380化合物的新的合成路线。
根据本发明的一个方面，本发明提供一种新的LB80380中间体化合物(式Ⅰ)：
其中，R1、R2、R3、R4各自独立地选自直链或支链烷基、被1个或5个R5取代的苄基或R5CO。
所述R1、R2、R3、R4相同或不同。
R5选自氢、取代或未取代的C1-C4烷氧基、C3-C7烯基烷氧基或取代或未取代的苄氧基。
进一步地，R1、R2各自独立地选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基或异丁基，所述R1、R2相同或不同；
R3、R4各自独立地选自苄基、叔丁氧羰基、对甲氧基苄基或苄氧羰基，所述R3、R4相同或不同。
根据本发明优选的实施方式，所述LB80380中间体化合物的具体实例包含但不限于化合物Ⅰ-1～Ⅰ-42：
更优选地，所述LB80380中间体化合物的具体实例选自化合物Ⅰ-1～Ⅰ-30：
上述化合物Ⅰ-1～Ⅰ-30中，Bn代表苄基，Boc代表叔丁氧羰基，Cbz代表苄氧羰基，PMB代表对甲氧基苄基。
根据本发明的另一方面，还提供LB80380中间体化合物(式Ⅰ)的制备方法，包括在碱性试剂存在下，使式Ⅱ化合物与式Ⅲ化合物反应得 到：
其中，R1、R2、R3、R4各自独立地选自直链或支链烷基、被1个或5个R5取代的苄基或R5CO。
所述R1、R2、R3、R4相同或不同。
R5选自氢、取代或未取代的C1-C4烷氧基、C3-C7烯基烷氧基或取代或未取代的苄氧基。
所述X1代表氟、氯、溴、碘或对甲苯磺酰氧基。
优选地，R1、R2各自独立地选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基或异丁基，R3、R4选自苄基、叔丁氧羰基、对甲氧基苄基或苄氧羰基；
所述R1、R2相同或不同，R3、R4相同或不同。
优选地，所述碱性试剂选自碳酸钠、碳酸钾、叔丁醇钾、叔丁醇锂、三乙胺或氢化钠，更优选为叔丁醇锂或碳酸钾。
所述反应在溶剂中进行。
优选地，所述溶剂选自N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺或四氢呋喃。
优选地，所述反应在40-140℃，优选60-120℃下进行。
优选地，所述反应在惰性气体保护下进行。
更优选地，所述反应在氮气或氩气保护下进行。
其中，所述式Ⅱ化合物和式III化合物均可通过商购获得。
根据本发明的一种实施方式，所述式Ⅱ化合物通过如下方法制备得到：在催化剂存在下，使式IV化合物与乙基格式试剂反应得到式Ⅱ化合物：
其中，R3、R4选自苄基、叔丁氧羰基、对甲氧基苄基或苄氧羰基；X2代表氯、溴或碘。
所述R3、R4可以相同或不同
优选地，所述催化剂为钛酸四异丙酯。
优选地，该反应在溶剂中进行，优选所述溶剂选自四氢呋喃、甲基四氢呋喃、二氧六环、乙醚，更优选为四氢呋喃。
优选地，该反应在0-35℃，优选0-20℃下进行。
优选地，该反应在惰性气体保护下进行。
更优选地，所述反应在氮气或氩气保护下进行。
所述式Ⅳ化合物和乙基格式试剂均可以通过市售商购得到。
在本发明的一种实施方式中，所述式Ⅳ化合物可通过如下方法制备：在催化剂存在下，使式Ⅴ化合物与式Ⅵ化合物反应得到式Ⅳ化合物：
其中，R3、R4选自苄基、叔丁氧羰基、对甲氧基苄基或苄氧羰基；X3代表氟、氯、溴或碘。
R3、R4相同或不同。
所述反应在溶剂中进行。优选地，所述溶剂选自二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、四氢呋喃，优选为二氯甲烷。
优选地，所述反应在0-40℃，优选20-30℃下进行。
优选地，所述反应在惰性气体保护下进行。
更优选地，所述反应在氮气或氩气保护下进行。
所述式Ⅴ化合物和式Ⅵ化合物均可通过商购获得。
根据本发明的一种实施方式，所述式Ⅳ化合物还可通过如下方法制 备：使甘氨酸乙酯与卤代苄、Boc酸酐、对甲氧基苄氯或氯甲酸苄酯中的至少一种或任意两种反应得到：
其中R3、R4为苄基、叔丁氧羰基、对甲氧基苄基或苄氧羰基；X代表氯、溴或碘。
需要说明的是，所述甘氨酸乙酯可以与卤代苄、Boc酸酐、对甲氧基苄氯或氯甲酸苄酯中的任一种反应，得到R3、R4为相同取代基的式Ⅳ化合物。
或者，所述甘氨酸乙酯也可以与卤代苄、Boc酸酐、对甲氧基苄氯或氯甲酸苄酯中的一种以上进行反应，得到R3、R4为不同取代基的式Ⅳ化合物。
根据本发明优选的实施方式，所述甘氨酸乙酯可以与卤代苄、Boc酸酐、对甲氧基苄氯或氯甲酸苄酯中的任一种反应。
上述反应在溶剂中进行。优选地，所述溶剂选自二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、四氢呋喃，更优选为二氯甲烷。
所述反应在碱性条件下进行。优选地，所述碱性试剂选自碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、三乙胺或二异丙胺，更优选为碳酸钾或碳酸钠。
优选地，所述反应在0-40℃，优选20-30℃下进行。
根据本发明的再一方面，还提供了LB80380中间体化合物(式I)用于制备LB80380(式A)的用途。
根据本发明的又一方面，还提供由LB80380中间体化合物(式I)制备LB80380化合物(式A)的方法，包括如下步骤：
1)在催化剂存在下，使式I化合物脱除R3和R4基团，生成式VII化合物
其中，R1、R2各自独立地选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基或异丁基；R3、R4为氨基保护基；
2)在碱性条件下，使式VII化合物与2,5-二氨基-4,6二氯嘧啶反应，生成式VIII化合物
3)在酸性条件下，使式VIII化合物与缩醛类化合物反应，生成式IX化合物
4)使式IX化合物经催化氢化反应，生成式X化合物
5)使式X化合物与三甲基溴硅烷(TMSBr)反应，生成式XI化合物
6)使式XI化合物与缚酸剂和特戊酸氯甲酯(POM-Cl)反应，生成 LB80380化合物(式A)
其中，上述步骤1)中，R1、R2各自独立地选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基或异丁基；R3、R4各自独立地代表苄基、叔丁氧羰基、对甲氧基苄基或苄氧羰基。
其中，当R3、R4各自独立地为苄基、叔丁氧羰基、对甲氧基苄基或苄氧羰基时：
优选地，所述催化剂选自氢氧化钯、钯碳、醋酸钯或雷尼镍。反应压力为0.01-1MPa,反应温度为20-45℃。
所述反应在溶剂中进行。优选地，所述溶剂选自四氢呋喃、甲基四氢呋喃、甲醇、乙醇或其任意混合物。
当R3、R4为叔丁氧羰基时：
优选地，所述催化剂选自盐酸、三氟乙酸、对甲苯磺酸等有机酸或无机酸。
所述反应在溶剂中进行。优选地，所选溶剂选自二氯甲烷、二氧六环、乙酸乙酯、四氢呋喃或甲醇。
根据本发明的一种优选的实施方式，步骤1)中所述式Ⅰ化合物采用上文所述的制备方法制备得到。
步骤2)中，所述碱性条件由碱性试剂提供。优选地，所述碱性试剂选自氢化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、三乙胺、二异丙胺中的至少一种。
步骤3)中，所述缩醛类化合物选自原甲酸酯类或其等价物中的至少一种。优选地，所述缩醛类化合物选自原甲酸三甲酯、原甲酸三乙酯或二乙氧基甲基醋酸酯；所述酸性条件由酸性试剂提供，优选地，所述酸性试剂选自盐酸、对甲苯磺酸、甲酸或乙酸；反应温度为30-100℃。
步骤4)中，采用的催化剂优选选自氢氧化钯、钯碳、醋酸钯或雷尼镍，更优选为钯碳、醋酸钯；反应压力为0.01-1MPa，反应温度为20-45℃。
优选地，所用溶剂为甲醇、乙醇、乙酸、四氢呋喃或其任意混合物。
步骤5)中，所用溶剂优选为二氯甲烷、乙酸乙酯。
步骤6)中，所述缚酸剂选自氢化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、三乙胺、二异丙胺中的至少一种。
根据本发明另一种实施方式，还提供了另一种由LB80380中间体化合物(式I)制备LB80380的方法，包括如下步骤：
a)在催化剂存在下，使式I化合物脱除R3和R4基团，生成式VII化合物
其中，R1、R2各自独立地选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基或异丁基；R3、R4为氨基保护基；
b)在碱性条件下，使式VII化合物与2,5-二氨基-4,6二氯嘧啶反应，生成式VIII化合物
c)使式VIII化合物经催化氢化反应生成式XII化合物
d)酸性条件下，使式XII化合物与缩醛类化合物经环合反应生成式X化合物，
e)使式X化合物与三甲基溴硅烷反应，生成式XI化合物
f)使式XI化合物与缚酸剂和特戊酸氯甲酯反应，生成式A所示的LB80380化合物
其中，上述步骤a)中，R1、R2各自独立地选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基或异丁基；R3、R4各自独立地代表苄基、叔丁氧羰基、对甲氧基苄基或苄氧羰基。
其中，当R3、R4各自独立地为苄基或苄氧羰基时：
优选地，所述催化剂选自氢氧化钯、钯碳、醋酸钯或雷尼镍。
所述反应在溶剂中进行。优选地，所述溶剂选自四氢呋喃、甲基四氢呋喃、甲醇、乙醇或其任意混合物。
当R3、R4为叔丁氧羰基时：
所述反应在催化剂存在下进行。优选地，所述催化剂选自盐酸、三氟乙酸、对甲苯磺酸等有机酸或无机酸。
所述反应在溶剂中进行。优选地，所选溶剂选自二氯甲烷、二氧六环、乙酸乙酯、四氢呋喃或甲醇。
根据本发明的一种优选的实施方式，步骤a)中所述式Ⅰ化合物采用上文所述的制备方法制备得到。
步骤b)中，所述碱性条件由碱性试剂提供。优选地，所述碱性试剂选自氢化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、三乙胺、二异丙胺中的至少一种。
步骤c)中，采用的催化剂优选选自氢氧化钯、钯碳、醋酸钯或雷尼镍。更优选地，采用的催化剂为钯碳、醋酸钯。
步骤c)中，所述反应在溶剂中进行。所述溶剂优选为甲醇、乙醇、乙酸或四氢呋喃。
步骤c)中，所述反应的温度为10-50℃，优选20-45℃。
步骤c)中，所述缩醛类化合物优选选自原甲酸酯类或等价物。
更优选地，所述缩醛类化合物选自原甲酸三甲酯、原甲酸三乙酯、二乙氧基甲基醋酸酯中的至少一种。
步骤d)中，所述反应的温度为30-120℃，优选为30-100℃。
步骤d)在酸性条件下进行。优选地，所述酸性试剂选自盐酸、对甲苯磺酸、甲酸或乙酸。
步骤e)中，所用溶剂优选为二氯甲烷、乙酸乙酯。
步骤f)中，所述缚酸剂选自氢化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、三乙胺、二异丙胺中的至少一种。
优选地，本发明提供了一种制备LB80380化合物的具体方法，包括如下步骤：
1)在催化剂存在下，使1-(二苄氨基甲基)环丙基氧甲基膦酸二乙酯脱除苄基生成1-(氨基甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯
2)在碱性条件下，使1-(氨基甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯与2,5-二氨基-4,6二氯嘧啶反应生成(1-(2,5-二氨基-6-氯嘧啶-4-氨基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯
3)在酸性条件下，使(1-(2,5-二氨基-6-氯嘧啶-4-氨基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯与原甲酸三乙酯反应生成(1-(2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯
4)使(1-(2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯经催化氢化反应，生成(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯
5)使(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯与三甲基溴硅烷(TMSBr)反应，生成(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸
6)(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸与三乙胺、特戊酸氯甲酯反应，生成3-[({1-[(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基]环丙基}氧基)甲基]-8,8-二甲基-3,7-二氧代-2,4,6-三氧杂-3λ5-磷杂壬-1-基-新戊酸酯
其中，上述步骤1)中，所述催化剂选自氢氧化钯、钯碳、醋酸钯或雷尼镍。所述反应在溶剂中进行。优选地，所述溶剂选自四氢呋喃、甲基四氢呋喃、甲醇、乙醇或其任意混合物。
根据本发明的一种实施方式，步骤1)所述催化剂为钯碳，所述溶剂为甲醇。
步骤2)中，所述碱性条件由碱性试剂提供。所述碱性试剂选自钠氢、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、三乙胺、二异丙胺中的至少一种，更优选为碳酸钠。
步骤3)中，所述酸性条件由酸性试剂提供。所述酸性试剂优选选自盐酸、对甲苯磺酸、甲酸或乙酸，更优选为盐酸。
步骤4)中，采用的催化剂优选选自氢氧化钯、钯碳、醋酸钯或雷尼镍，更优选为钯碳、醋酸钯。
优选地，所用溶剂为甲醇、乙醇、乙酸、四氢呋喃或其任意混合物。
根据本发明的一种实施方式，步骤4)采用的催化剂为钯碳，溶剂为四氢呋喃。
步骤5)中，所用溶剂优选为二氯甲烷、乙酸乙酯，更优选为二氯甲烷。
根据本发明的一种实施方式，步骤6)中，所述反应在N-甲基吡咯烷酮溶剂中进行，反应温度为30-120℃。
优选地，本发明还提供了另一种制备LB80380化合物的具体方法，包括如下步骤：
a)在催化剂存在下，使1-(二苄氨基甲基)环丙基氧甲基膦酸二乙酯脱除苄基生成1-(氨基甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯
b)在碱性条件下，使1-(氨基甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯与2,5-二氨基-4,6二氯嘧啶反应生成(1-(2,5-二氨基-6-氯嘧啶-4-氨基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯
c)(1-(2,5-二氨基-6-氯嘧啶-4-氨基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯经催化氢化反应生成(1-(2,5-二氨基嘧啶-4氨基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯
d)酸性条件下，(1-(2,5-二氨基嘧啶-4-氨基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯与原甲酸三乙酯反应生成(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯
e)使(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯与三甲基溴硅烷(TMSBr)反应，生成(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸
f)(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸与三乙胺、特戊酸氯甲酯反应，生成3-[({1-[(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基]环丙基}氧基) 甲基]-8,8-二甲基-3,7-二氧代-2,4,6-三氧杂-3λ5-磷杂壬-1-基-新戊酸酯
其中，上述步骤a)中，所述催化剂选自氢氧化钯、钯碳、醋酸钯或雷尼镍。所述反应在溶剂中进行。优选地，所述溶剂选自四氢呋喃、甲基四氢呋喃、甲醇、乙醇或其任意混合物。
根据本发明的一种实施方式，步骤a)所述催化剂为钯碳，所述溶剂为甲醇。
步骤b)中，所述碱性条件由碱性试剂提供。所述碱性试剂选自氢化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、三乙胺、二异丙胺中的至少一种，更优选为碳酸钠。
步骤c)中，采用的催化剂优选选自氢氧化钯、钯碳、醋酸钯或雷尼镍。更优选地，采用的催化剂为钯碳、醋酸钯。
步骤c)中，所述反应在溶剂中进行。所述溶剂优选为甲醇、乙醇、乙酸或四氢呋喃。
步骤c)中，所述反应的温度优选为10-50℃。
根据本发明的一种实施方式，步骤c)中，采用的催化剂为钯碳，溶剂为甲醇，反应温度为20-45℃。
根据本发明的一种实施方式，步骤d)中反应温度为30-100℃。
该步骤d)需要在酸性条件下反应。优选地，所述酸性试剂选自盐酸、对甲苯磺酸、甲酸或乙酸。
步骤e)中，所用溶剂优选为二氯甲烷、乙酸乙酯，更优选为二氯甲烷。
根据本发明的一种实施方式，步骤f)中，所述反应在N-甲基吡咯烷酮溶剂中进行，反应温度为30-120℃。
与LB80380化合物(式A)现有的合成路线相比，本发明具有如下技术 效果：
本发明采用式I化合物作为重要中间体合成LB80380化合物(式A)，从技术层面上避免了“路线一”中的杂质化合物(17)、(18)的生成，有利于后续化合物的纯化。
同时，本发明方法避免了背景技术部分“路线三”涉及的生产安全问题。
并且，本申请的第二路线a)-f)中的步骤b)-d)中，由于钝化基团氯原子的去除，生成相对活性较高的化合物XII，使得步骤b)-d)三步总收率(64.3％)大于本申请第一路线1)-6)的报道方法步骤2)-4)总收率(47.2％)。
此外，本发明制备LB80380化合物的上述两条反应路线采用的原料、中间物料皆廉价易得，成本优势十分明显，适合工业化生产。
具体实施方式
以下通过实施例的方式对本发明的具体实施方式做出示例性说明，但这些实施例并不对本发明构成任何限制。
实施例1：中间体化合物I-1的制备
步骤1.2-(二苄氨基)乙酸乙酯(IV-1)的制备
将二苄胺(VI-1)(4.7g，23.9mmol)溶于二氯甲烷中(10ml)，于25℃搅拌下加入溴乙酸乙酯(V-1)(2.0g，12mmol)，加毕，有白色固体析出。继续搅拌约16h，TLC监测反应完毕，过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，滤液减压浓缩得到固体粗品，经石油醚/乙酸乙酯(100:1)重结晶得到白色固体3.3g，收率为97.3％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.26-7.42(m,10H),4.17(q,2H),3.83(s,4H),3.30(s,2H),1.28(t,3H)。
步骤2.1-(二苄氨基)甲基环丙醇(II-1)的制备
氮气保护下，将2-(二苄氨基)乙酸乙酯(IV-1)(2.0g，7.0mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中，加入钛酸四异丙酯(0.5g,1.7mmol)，于10℃下加入1M的乙基溴化镁四氢呋喃溶液(21ml，21.0mmol)，加毕，继续搅拌。TLC监测反应结束，饱和氯化铵溶液淬灭，有固体析出。过滤，滤饼用乙酸乙酯(50ml×2)洗涤，合并有机层用饱和碳酸氢钠溶液(50ml)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得粗品，经快速柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得油状物，共1.59g，收率为84.3％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.37-7.48(m,10H),3.84(s,4H),3.51(brs,1H),2.75(s,2H),0.91(dd,2H),0.50(dd,2H)。
步骤3.1-(二苄氨基)甲基环丙基氧甲基膦酸二乙酯(I-1)的制备
氮气保护下，将1-(二苄氨基)甲基环丙醇(II-1)(1.15g，4.3mmol)溶于四氢呋喃中(10ml)，加入叔丁醇锂(0.5g,6.2mmol)和对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯(III-1)(2.0g，6.2mmol)，升温至60℃反应。TLC监测反应结束，降至室温后加入饱和氯化铵溶液(10ml)淬灭，有固体析出。过滤，滤饼用乙酸乙酯(10ml×2)洗涤，合并有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得粗品，经快速柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)，得油状物，共1.57g，收率为87.5％；
HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.23-7.42(m,10H),4.13-4.20(m,4H),3.77(d,2H),3.68(s,4H),2.63(s,2H),1.35(t,6H),0.89(dd,2H),0.49(dd,2H)。
实施例2：LB80380化合物的制备
步骤1.1-(氨基甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(VII-1)的制备
将1-(二苄氨基)甲基环丙基氧甲基膦酸二乙酯(I-1)(80.0g，0.2mol)和甲醇(1.2L)加入到高压釜中，加入5％Pd/C(8.0g)，置换气体后催化氢化(压力为0.3MPa，温度为25℃)。反应经TLC监测反应完毕，过滤，滤液减压浓缩后经快速柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝5:1)得油状物，共41.36g，收率为91％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.10-4.17(m,4H),3.78(d,2H),2.78(s,2H),2.70(brs,2H),1.31(t,6H),0.88(t,2H),0.53(t,2H)。
步骤2.(1-(2,5-二氨基-6-氯嘧啶-4-氨基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(VIII-1)的制备
将1-(氨基甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(VII-1)(4.0g，0.017mol)、2,5-二氨基-4,6-二氯嘧啶(3.0g，0.017mol)和碳酸钠(3.6g，0.034mol)加入到正丁醇中(40ml)，加热回流。TLC监测反应结束，过滤，滤液减压浓缩，残留物用二氯甲烷溶解(50ml)，用水洗涤(50ml)，有机层减压浓缩蒸出溶剂，得化合物VIII-1的粗品，无需纯化直接进行下一步反应。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ6.46(brs，1H)，4.47(brs，2H)，4.15-4.22(m,4H),3.87(d,2H),3.66(s，2H)，3.20(brs,2H),1.34(t,6H),0.94(t,2H),0.74(t, 2H)。
步骤3.((1-(2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(IX-1)的制备
将步骤2得到的化合物VIII-1的粗品和原甲酸三乙酯(50ml)加入到反应瓶中，加入浓盐酸(0.5ml)后加热，使得温度为35℃。TLC监测反应完毕，降温后加入饱和碳酸氢钠溶液(100ml)，搅拌1h，加入乙酸乙酯萃取(30ml×2)，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用甲基叔丁基醚重结晶得到白色固体3.3g，步骤2与步骤3两步的总收率为50.2％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.13(s,1H),5.23(s,2H),4.24(s,2H),4.08-4.15(m,4H),3.91(d,2H),1.32(t,6H),1.05(t,2H),0.88(t,2H)。
步骤4.(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(X-1)的制备
将((1-(2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(10.0g，0.026mol)溶于四氢呋喃中(30ml)，加入5％Pd/C(1.0g)催化氢化(压力为0.3MPa,温度为25℃)。TLC监测反应完毕，过滤，滤液减压浓缩，残留物用二氯甲烷溶解，用饱和碳酸氢钠洗涤，有机层干燥后减压浓缩，残留物用甲基叔丁基醚重结晶得到固体8.57g，收率为94％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.67(s,1H),8.09(s,1H),5.29(s,2H),4.23(s,2H),4.07-4.11(m,4H),3.90(d,2H),1.26(t,6H),1.05(t,2H),0.87(t,2H)。
步骤5.(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸(XI-1)的制备
将(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(X-1)(0.51g，0.0014mol)溶于二氯甲烷中(10ml)，加入三甲基溴硅烷(1.1g，0.0072mol)后加热回流。TLC监测反应完毕，将反应液减压浓缩至干，用15％氢氧化钠溶液调pH 8-11，用二氯甲烷(20ml)洗涤后，再加入1M的HCl水溶液析晶，过滤，滤饼干燥后得到白色固体0.39g，收率为92％。
HNMR(400MHz，MeOD)δ8.76(s,1H),8.69(s,1H),4.43(s,2H),3.95(d,2H),1.07(t,2H),0.98(t,2H)。
步骤6.3-[({1-[(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基]环丙基}氧基)甲基]-8,8-二甲基-3,7-二氧代-2,4,6-三氧杂-3λ5-磷杂壬-1-基-新戊酸酯(LB80380化合物)的制备
将(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸(XI-1)(0.4g，0.0013mol)溶于N-甲基吡咯烷酮中(10ml)，加入三乙胺(0.41g，0.004mol)和特戊酸氯甲酯(0.4g，0.0026mol)后加热，使得温度为70℃。TLC监测反应完毕，加入水(50ml)后用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，合并有机层后无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，经异丙醚/丙酮重结晶(10:1)得到固体0.44g，收率为65％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.70(s,1H),8.09(s,1H),5.64-5.71(m,4H),5.20(s,2H),4.25(s,2H),3.99(d,2H),1.23(s,18H),1.08(t,2H),0.91(t,2H)。
实施例3：中间体化合物I-1的制备
步骤1.2-(二苄氨基)乙酸乙酯(IV-1)的制备
将甘氨酸乙酯(10.3g，0.1mol)溶于二氯甲烷中(50ml)，于25℃条件下加入三乙胺(20.2g,0.2mol),搅拌下加入氯苄(25.32g，0.2mol)，加毕，有白色固体析出。继续搅拌，TLC监测反应完毕，过滤，滤饼用二氯甲烷(20ml)洗涤，合并滤液用水洗涤(100ml)，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到固体，经石油醚/乙酸乙酯(100:1)重结晶得到白色固体27.21g，收率为96.03％。
HNMR与实施例1步骤1中的HNMR相同。
步骤2.1-(二苄氨基)甲基环丙醇(II-1)的制备
参照实施例1的步骤2制备。
步骤3.1-(二苄氨基)甲基环丙基氧甲基膦酸二乙酯(I-1)的制备
氮气保护下，将1-(二苄氨基)甲基环丙醇(II-1)(2.3g，8.6mmol)溶于二甲基甲酰胺中(20ml)，加入碳酸钾(1.18g,8.6mmol)和α-氯代甲基膦酸二乙酯(III-2)(1.68g，9.03mmol)，升温至60℃反应。TLC监测反应结束，将溶剂减压蒸出，加入水(20ml)，用乙酸乙酯(10ml×2)萃取，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得粗品，经快速柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)，得油状物，共3.05g，收率为85％。
HNMR与实施例1步骤3中的HNMR相同。
实施例4：LB80380化合物的制备
步骤1.1-(氨基甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(VII-1)的制备
参照实施例2的步骤1制备。
步骤2.(1-(2,5-二氨基-6-氯嘧啶-4-氨基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(VIII-1)的制备
参照实施例2的步骤2制备。
步骤3.1-(2,5-二氨基嘧啶-4氨基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(XII-1)的制备
将步骤2得到的化合物VIII-1的粗品溶于甲醇中(200ml)，加入5％Pd/C(0.5g)催化氢化(压力为0.3MPa,温度为25℃)。TLC监测反应完毕，过滤，滤液减压浓缩，用甲基叔丁基醚重结晶得到固体4.38g，步骤2与步骤3两步的总收率75.3％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.36(s，1H),6.76(s，1H),5.04(s，2H),4.13-4.20(m,4H),3.88(d,2H),3.68(d,2H),1.34(t，6H)，0.94(t,2H),0.75(t,2H)。
步骤4.(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(X-1)的制备
将(1-(2,5-二氨基嘧啶-4氨基)甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(XII-1)(3.45g,0.01mol)和原甲酸三乙酯(150ml)加入到反应瓶中，加入浓盐酸(1.5ml)后加热，使得温度为35℃。TLC监测反应完毕，降温后加入 饱和碳酸氢钠溶液(150ml)，搅拌1h，加入乙酸乙酯(100ml×2)萃取，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用甲基叔丁基醚重结晶得到白色固体3.03g，收率为85.4％。
HNMR与实施例2步骤4中的HNMR相同。
步骤5.(1-(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)环丙氧甲基膦酸(XI-1)的制备
参照实施例2的步骤5制备。
步骤6.3-[({1-[(2-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基]环丙基}氧基)甲基]-8,8-二甲基-3,7-二氧代-2,4,6-三氧杂-3λ5-磷杂壬-1-基-新戊酸酯(LB80380化合物)的制备
参照实施例2的步骤6制备。
实施例5：中间体化合物I-5的制备
步骤1.2-(二叔丁氧羰基氨基)乙酸乙酯(IV-5)的制备
将二叔丁氧羰基胺(2.49g，12mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，氮气保护，加入氢化钠(0.58g，14.4mmol)于室温下搅拌1h，然后加入溴乙酸乙酯(2.0g，12mmol)，加毕并室温搅拌。TLC监测反应完毕，缓慢加入水(120ml)和乙酸乙酯(30ml)，分出有机层，水层再用乙酸乙酯萃取(30ml*2)，合并有机层用饱和氯化钠溶液洗涤(100ml)，有机层无水硫酸钠干燥后减压浓缩得到固体粗品，经石油醚/乙酸乙酯(100:1)重结晶得到产品3.31g，收率为91％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.80(s,2H),4.17(q,2H),1.38(s,18H),1.28(t,3H)。
步骤2.1-(二叔丁氧羰基氨基)甲基环丙醇(II-5)的制备
氮气保护下,将1-(二叔丁氧羰基氨基)乙酸乙酯(IV-5)(2.1g，7.0mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中，降温至-30℃，加入钛酸四异丙酯(0.5g,1.7mmol)，搅拌下加入1M的乙基溴化镁四氢呋喃溶液(21ml，21.0mmol)，加毕恢复室温继续搅拌。TLC监测反应结束，饱和氯化铵溶液淬灭，有固体析出。过滤，滤饼用乙酸乙酯(50ml×2)洗涤，合并有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤(50ml)，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得粗品，经快速柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得产品共1.24g，收率为62％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ3.59(s,2H),1.38(s,18H),0.91(dd,2H),0.50(dd,2H)。
步骤3.1-(二叔丁氧羰基氨基)甲基环丙基氧甲基膦酸二乙酯(I-5)的制备
氮气保护下，将1-(二叔丁氧羰基氨基)甲基环丙醇(II-5)(1.5g，5.2mmol)溶于四氢呋喃中(10ml)，加入叔丁醇锂(0.5g,6.2mmol)和对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯(1.7g，5.5mmol)，升温至60℃反应。TLC监测反应结束，降至室温后加入饱和氯化铵溶液(10ml)淬灭，有固体析出。过滤，滤饼用乙酸乙酯(10ml×2)洗涤，合并有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得粗品，经快速柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)，得产品共1.65g，收率为72.5％
HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.15-4.20(m,4H),3.77(d,2H),3.59(s,2H),1.38(s,18H),1.35(t,6H),0.89(dd,2H),0.49(dd,2H)。
实施例6：LB80380化合物的制备
步骤1.1-(氨基甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(VII-1)的制备
将1-(二叔丁氧羰基氨基)甲基环丙基氧甲基膦酸二乙酯(I-5)(8.75g，0.02mol)中加入二氯甲烷(50ml)，加入浓盐酸(10ml)，加热回流。TLC监测反应完毕，降温后加入水20ml搅拌并分出水层。水层用1N氢氧化钾溶液调pH至9-10，二氯甲烷萃取(25ml×2)，合并有机层后饱和食盐水(30ml)洗涤，过滤，滤液减压浓缩后经快速柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝5:1)得油状物，共4.42g，收率为93.2％。
HNMR与实施例2步骤1中的HNMR相同。
步骤2至步骤6参照实施例4制备。
实施例7：中间体化合物I-7的制备
步骤1.2-(二苄氧羰基氨基)乙酸乙酯(IV-7)的制备
将甘氨酸乙酯(20.6g，0.2mol)溶于二氯甲烷中(100ml)，加入三乙胺(42.46g,0.42mol),于25℃下加入苄氧羰基氯(68.24g，0.4mol)，加毕有白色固体析出。继续搅拌，TLC监测反应完毕，过滤，滤饼用二氯甲烷(20ml)洗涤，合并滤液用水(200ml)洗涤，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到固体，经石油醚/乙酸乙酯(100:1)重结晶得到产品69.82g，收率为94％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.38-7.47(m,10H),5.10(s,4H),4.78(s,2H),4.17(q,2H),1.28(t,3H)。
步骤2.1-(二苄氧羰基氨基)甲基环丙醇(II-7)的制备
氮气保护下，将2-(二苄氧羰基氨基)乙酸乙酯(IV-7)(3.71g，10.0mmol)溶于四氢呋喃(15ml)中，加入钛酸四异丙酯(0.7g,2.4mmol)，于10℃下加入1M的乙基溴化镁四氢呋喃溶液(30ml，30.0mmol)，加毕，继续搅拌。TLC监测反应结束，饱和氯化铵溶液淬灭，有固体析出。过滤，滤饼用乙酸乙酯(50ml×2)洗涤，合并有机层用饱和碳酸氢钠溶液(50ml)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得粗品，经快速柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得产品共2.89g，收率为81.3％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.37-7.48(m,10H),5.09(s,4H),3.65(brs,1H),3.59(s,2H),0.91(dd,2H),0.50(dd,2H)。
步骤3.1-(二苄氧羰基氨基)甲基环丙基氧甲基膦酸二乙酯(I-7)的制备
氮气保护下，将1-(二苄氧羰基氨基)甲基环丙醇(II-7)(2.84g，8mmol)溶于四氢呋喃中(20ml)，加入叔丁醇锂(0.9g,11.2mmol)和对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯(3.61g，11.2mmol)，升温至60℃反应。TLC监测反应结束，降至室温后加入饱和氯化铵溶液(20ml)淬灭，有固体析出。过滤，滤饼用乙酸乙酯(10ml×2)洗涤，合并有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得粗品，经快速柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)，得产品共3.26g，收率为81％；
HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.37-7.48(m,10H),5.09(s,4H),4.13-4.20(m, 4H),3.77(d,2H),2.63(s,2H),1.35(t,6H),0.89(dd,2H),0.49(dd,2H)。
实施例8：LB80380化合物的制备
步骤1.1-(氨基甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(VII-1)的制备
将1-(二苄氧羰基氨基)甲基环丙基氧甲基膦酸二乙酯(I-7)(10.1g，0.02mol)和甲醇(150mL)加入到高压釜中，加入5％Pd/C(1.0g)，置换气体后催化氢化(压力为0.3MPa,温度为25℃)。反应经TLC监测反应完毕，过滤，滤液减压浓缩后经快速柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝5:1)得油状物，共4.41g，收率为93％。
HNMR与实施例2步骤1中的HNMR相同。
步骤2至步骤6参照实施例4制备。
实施例9：中间体化合物I-17的制备
步骤1.N-叔丁氧羰基-N-苄氧羰基甘氨酸乙酯(IV-17)的制备
将(叔丁基)苄基亚胺二羧酸酯(5.02g，20mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中(20ml)，加入三乙胺(2.22g，22mmol)后于10℃搅拌下加入溴乙酸乙酯(3.33g，20mmol)，搅拌0.5h，恢复室温继续搅拌4h。TLC监测反应完毕，加入200ml水，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机层用饱和食盐水(200ml)洗涤，有机相干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体粗品，经石油醚/乙酸乙酯(100:1)重结晶得到白色固体6.36g，收率为94.2％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.38-7.47(m,5H),5.10(s,2H),4.78(s,2H),4.17(q,2H),1.38(s,9H)，1.28(t,3H)。
步骤2.1-(N-叔丁氧羰基-N-苄氧羰基氨甲基)环丙醇(II-17)的制备
氮气保护下,将N-叔丁氧羰基-N-苄氧羰基甘氨酸乙酯(IV-17)(2.36g，7.0mmol)溶于四氢呋喃(10ml)中，降温-30℃，加入钛酸四异丙酯(0.5g,1.7mmol)，搅拌下加入1M的乙基溴化镁四氢呋喃溶液(21ml，21.0mmol)，加毕恢复室温继续搅拌。TLC监测反应结束，饱和氯化铵溶液淬灭，有固体析出。过滤，滤饼用乙酸乙酯(50ml×2)洗涤，合并有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤(50ml)，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得粗品，经快速柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得产品共1.62g，收率为72％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.37-7.48(m,5H),5.09(s，2H)，3.65(brs,1H),3.59(s,2H),1.38(s,9H),0.91(dd,2H),0.50(dd,2H)。
步骤3.1-(N-叔丁氧羰基-N-苄氧羰基氨甲基)环丙基氧甲基膦酸二乙酯(I-17)的制备
氮气保护下，将1-(N-叔丁氧羰基-N-苄氧羰基氨甲基)环丙醇(II-17)(1.38g，4.3mmol)溶于四氢呋喃中(10ml)，加入叔丁醇锂(0.5g,6.2mmol)和对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯(2.0g，6.2mmol)，升温至60℃反应。TLC监测反应结束，降至室温后加入饱和氯化铵溶液(10ml)淬灭，有固体析出。过滤，滤饼用乙酸乙酯(10ml×2)洗涤，合并有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得粗品，经快速柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)，得产品共1.47g，收率为82％；
HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.38-7.47(m,5H),5.09(s，2H)，4.13-4.20(m, 4H),3.77(d,2H),2.63(s,2H),1.38(s，9H)，1.35(t,6H),0.89(dd,2H),0.49(dd,2H)。
实施例10：LB80380化合物的制备
步骤1.1-(氨基甲基)环丙氧甲基膦酸二乙酯(VII-1)的制备
将1-(N-叔丁氧羰基-N-苄氧羰基氨甲基)环丙基氧甲基膦酸二乙酯(I-17)(9.43g，0.02mol)加入二氯甲烷(50ml)，加入浓盐酸(10ml)，加热回流。TLC显色反应完毕，降温后加入水20ml搅拌并分出水层。水层用1N氢氧化钾溶液调pH至9-10，二氯甲烷(25ml×2)萃取，合并有机层后饱和食盐水(30ml)洗涤，过滤，滤液减压浓缩后经快速柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝5:1)得产品共7.06g，收率为95％。
HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.03(s,1H),7.38-7.47(m,5H),5.09(s，2H)，4.13-4.20(m,4H),3.77(d,2H),2.63(s,2H),1.35(t,6H),0.89(dd,2H),0.49(dd,2H)。所得产品为1-(N-(苄氧羰基)氨甲基)环丙基氧甲基膦酸二乙酯。
将上述所得产品1-(N-(苄氧羰基)氨甲基)环丙基氧甲基膦酸二乙酯(7.43g，0.02mol)和甲醇(140mL)加入到高压釜中，加入5％Pd/C(0.7g)，置换气体后催化氢化(压力为0.3MPa,温度为25℃)。反应经TLC监测反应完毕，过滤，滤液减压浓缩后经快速柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝5:1)得产品共4.37g，收率为92％。
HNMR与实施例2步骤1中的HNMR相同。
步骤2至步骤6参照实施例4制备。