专利名称:一种超声波酶解鱼鳔制备抗氧化寡肽的方法
技术领域：
本发明涉及一种鱼鳔酶解制备抗氧化寡肽的方法，特别涉及一种超声波酶解鱼鳔制备抗氧化寡肽的方法。
背景技术：
鱼鳔，又名鱼泡、鱼肚、鱼白、压胞，是鱼体重要的比重调节器官，生活在海水上层和中层的硬骨鱼类，大多数都有鳔，鱼鳔的体积约占身体的5%左右，其形状有卵圆形、圆锥形、心脏形、马蹄形等等。鱼鳔的主要营养成分为高级胶原蛋白、粘多糖、多种维生素及钙、 锌、铁、硒等多种微量元素，其中蛋白质含量一般在80%以上，而脂肪含量较低，是理想的高蛋白低脂肪食品。鱼鳔中含有多种无机元素，尤其微量元素Zn、Cu、Fe、Se含量极为丰富， 这些微量元素对保持健康起着重要作用。
鱼鳔中的营养成分含量因种类不同而变化，以不同鱼鳔的脂肪含量变化最大，蛋白质含量的变化最小。氨基酸的分析结果显示，甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、脯氨酸、精氨酸和天冬氨酸等6种氨基酸构成了鱼鳔蛋白质的优势氨基酸。除了甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸和天冬氨酸4种氨基酸在不同鱼鳔中的含量差异最大外，大多数氨基酸的含量变化不大。现代中医药学认为，鱼鳔味甘性平，有滋阴养血、止血、补肾固精的功能。《本草求原》载鱼鳔可“养精脉，定手战，固精。”鱼鳔还有良好的保健作用，可促进精囊分泌果糖，为精子提供能量；能促进胃肠的消化吸收，提高食欲，防治厌食、消化不良、腹胀、便秘；能增加肌肉组织的韧性和弹力，增强体力，消除疲劳；能滋润皮肤，使皮肤细腻光滑；能增强脑力和神经系统功能，促进生长发育，提高思维和智力，维持腺体正常分泌，并可防止智力减迟，神经传导迟缓，反应迟钝，产后乳汁分泌不足，老年性痴呆，健忘、失眠等，能提高机体抵抗力和免疫力，抗疲劳，抑制肿瘤生长。
鱼鳔现在的加工应用主要有鱼鳔干制品的加工，其方法是从鱼腹内摘下鱼鳔，清洗干净，然后用明矾溶液浸渍后剥膜，石灰水浸泡去脂，清洗，浙水后干燥。这种加工方法生产的鱼鳔附加值低，并且有明显的地域化特点，主要集中在沿海地区，而内地少有食用，这制约了鱼鳔的销售。
申请号 200810091845. 0，申请日 2008. 3. 30，公开号 CN101545001A，
公开日2009. 9. 30，申请人为段振华申请了一项专利，介绍了一种鱼鳔寡肽溶液的制备方法1.将尖鱼肚干品进行清洗破碎处理；2.用尖鱼肚5倍重的饮用水浸泡5-50min后，超声波处理 IO-SOmin ；3.按固液比1 10_1 60补入饮用水，用高速组织捣碎机进行捣碎和打浆处理5min ;4.将制备的浆液进行恒温酶解，酶量比为1 1_1 7，在温度40_60°C、pH值 5. 0-8. 0、酶量为0. 1-0. 9%条件下，酶解3-9h，酶解完毕在80-100°C灭酶处理8-15min ； 5.高速离心酶解液，取上清液过滤后装瓶、封口，高速离心机的转速为4000-20，OOOrpm，离心时间为5-15min ；6.用高压蒸汽灭菌器对瓶装溶液进行灭菌处理，灭菌温度100_135°C， 灭菌时间20-50min，冷却后即制备成鱼鳔寡肽溶液。此方法制备出的是只用于补充氨基酸的普通寡肽。而目前使用鱼鳔酶解制备抗氧化肽的技术还没有见报道，本专利主要通过控制鱼鳔的酶解条件生产出具有抗氧化性的寡肽。
发明内容
本发明提供一种超声波酶解鱼鳔制备抗氧化寡肽的方法，制备的是抗氧化寡肽， 不仅能够用于补充氨基酸，而且还能清除自由基。
本发明所采用的技术方案为，一种超声波酶解鱼鳔制备抗氧化寡肽的方法，包括以下操作步骤
步骤1，
将鱼鳔粉碎为鱼鳔粉末；
步骤2，
向鱼鳔粉末中加入pH值为6.0的磷酸盐缓冲液和胰蛋白酶，搅拌均勻，得到鱼鳔溶液；其中，鱼鳔粉末质量为磷酸盐缓冲液质量的6%，胰蛋白酶质量为鱼鳔粉末质量的 1. 6 2. 0% ；
步骤3，
先将鱼鳔溶液在50°C恒温水浴中酶解5 lOmin，再将鱼鳔溶液超声处理进行酶解，控制超声功率110 220W，超声时间1 9min，超声温度30 65°C，超声处理后继续在 50°C的恒温水浴中酶解30 90min ；酶解结束后，灭酶、冷却、过滤得到上清液；
步骤4，
将上清液用IOOOODa超滤膜超滤，超滤后的溶液经冷冻干燥，得到鱼鳔抗氧化寡肽。
其中，磷酸盐缓冲液由摩尔浓度为0. 2mol/L的磷酸二氢钠水溶液和摩尔浓度为 0. 2mol/L的磷酸氢二钠水溶液混合而成，磷酸二氢钠水溶液与磷酸氢二钠水溶液的体积比为 87.7 12. 3。
本发明的有益效果是，应用超声波酶解鱼鳔蛋白质，提高了酶解效率，提高了酶解过程中肽的释放量，缩短了酶解过程中所需要的时间，操作简单，生产周期短，并且本发明制备的抗氧化寡肽对人体的自由基有很好的清除作用，能起到防止衰老，炎症，以及动脉硬化而引发的心脑血管疾病，也可以作为一种营养添加剂应用于食品中。
具体实施方式
实施例1
将鱼鳔剪成小块，放入粉碎机粉碎成60目的鱼鳔粉末；称取24g鱼鳔粉末，向鱼鳔粉末中加入400ml G00g)pH值为6. O的磷酸盐缓冲液(其中，磷酸盐缓冲液由350. 8ml摩尔浓度为0. 2mol/L的磷酸二氢钠水溶液和49. 2ml摩尔浓度为0. 2mol/L的磷酸氢二钠水溶液混合而成)和0. 384g胰蛋白酶，搅拌均勻，得到鱼鳔溶液；将鱼鳔溶液在50°C恒温水浴中酶解5min，再将鱼鳔溶液超声处理进行酶解，控制超声功率220W，超声时间5min，超声温度40°C，超声处理后继续在50°C的恒温水浴中酶解45min ；酶解结束后，将水浴温度升高到100°C进行灭酶，灭酶后冷却至室温，过滤得到上清液，用微量凯式定氮法测得上清液的蛋白质含量为6. 02mg/ml ；最后将上清液用IOOOODa超滤膜超滤，超滤后的溶液经在_20°C， 0. 43bar条件下冷冻干燥得到鱼鳔抗氧化寡肽。
4[0020] 上述胰蛋白酶由无锡杰能科生物有限公司生产。
测得产物清除DPPH自由基的能力为74. 11 %，清除羟自由基的能力是76. 58%，清除ABTS溶液的能力为77. 54%。
实施例2
将鱼鳔剪成小块，放入粉碎机粉碎成60目的鱼鳔粉末；称取24g鱼鳔粉末，向鱼鳔粉末中加入400ml (400g)的pH值为6. 0的磷酸盐缓冲液(其中，磷酸盐缓冲液由350. 8ml 摩尔浓度为0. 2mol/L的磷酸二氢钠水溶液和49. 2ml摩尔浓度为0. 2mol/L的磷酸氢二钠水溶液混合而成)和0. 384g胰蛋白酶，搅拌均勻，得到鱼鳔溶液；将鱼鳔溶液在50°C恒温水浴中酶解lOmin，再将鱼鳔溶液超声处理进行酶解，控制超声功率220W，超声时间9min， 超声温度30°C，超声处理后继续在50°C的恒温水浴中酶解45min ；酶解结束后，将水浴温度升高到100°C进行灭酶，灭酶后冷却至室温，过滤得到上清液，用微量凯式定氮法测得上清液的蛋白质含量为6. 13mg/ml ；最后将上清液用IOOOODa超滤膜超滤，超滤后的溶液经在-20°C，0. 43bar条件下冷冻干燥得到鱼鳔抗氧化寡肽。
上述胰蛋白酶由无锡杰能科生物有限公司生产。
测得产物清除DPPH自由基的能力为71.13%，清除羟自由基的能力是72. 36%，清除ABTS溶液的能力为72. 61%。
实施例3
将鱼鳔剪成小块，放入粉碎机粉碎成60目的鱼鳔粉末；称取24g鱼鳔粉末，向鱼鳔粉末中加入400ml (400g)的pH值为6. O的磷酸盐缓冲液(其中，磷酸盐缓冲液由350. 8ml 摩尔浓度为0. 2mol/L的磷酸二氢钠水溶液和49. 2ml摩尔浓度为0. 2mol/L的磷酸氢二钠水溶液混合而成)和0. 48g胰蛋白酶，搅拌均勻，得到鱼鳔溶液；将鱼鳔溶液在50°C恒温水浴中酶解lOmin，再将鱼鳔溶液超声处理进行酶解，控制超声功率220W，超声时间7min， 超声温度45°C，超声处理后继续在50°C的恒温水浴中酶解30min ；酶解结束后，将水浴温度升高到100°C进行灭酶，灭酶后冷却至室温，过滤得到上清液，用微量凯式定氮法测得上清液的蛋白质含量为6. Omg/ml ；最后将上清液用IOOOODa超滤膜超滤，超滤后的溶液经在-20°C，0. 43bar条件下冷冻干燥得到鱼鳔抗氧化寡肽。
上述胰蛋白酶由无锡杰能科生物有限公司生产。
测得产物清除DPPH自由基的能力为68. 36%，清除羟自由基的能力是67. 92%，清除ABTS溶液的能力为69. 01%。
实施例4
将鱼鳔剪成小块，放入粉碎机粉碎成60目的鱼鳔粉末；称取24g鱼鳔粉末，向鱼鳔粉末中加入400ml (400g)的pH值为6. O的磷酸盐缓冲液(其中，磷酸盐缓冲液由350. 8ml 摩尔浓度为0. 2mol/L的磷酸二氢钠水溶液和49. 2ml摩尔浓度为0. 2mol/L的磷酸氢二钠水溶液混合而成)和0. 384g胰蛋白酶，搅拌均勻，得到鱼鳔溶液；将鱼鳔溶液在50°C恒温水浴中酶解8min，再将鱼鳔溶液超声处理进行酶解，控制超声功率110W，超声时间lmin， 超声温度65°C，超声处理后继续在50°C的恒温水浴中酶解90min ；酶解结束后，将水浴温度升高到100°C进行灭酶，灭酶后冷却至室温，过滤得到上清液，用微量凯式定氮法测得上清液的蛋白质含量为5. 96mg/ml ；最后将上清液用IOOOODa超滤膜超滤，超滤后的溶液经在-20°C，0. 43bar条件下冷冻干燥得到鱼鳔抗氧化寡肽。[0032]上述胰蛋白酶由无锡杰能科生物有限公司生产。
测得产物清除DPPH自由基的能力为64. 23%，清除羟自由基的能力是64. 52%，清除ABTS溶液的能力为65. 03%。
本发明将超声波应用于酶解，充分利用了超声波的空化作用使溶液中的微粒剧烈振动，产生猛烈的碰撞使溶液温度升高，起到了很好的搅拌作用，加速了化学反应，提高了酶解效率，提高酶解过程中肽的释放量，缩短了酶解过程所需要的时间。
权利要求
1.一种超声波酶解鱼鳔制备抗氧化寡肽的方法，其特征在于，包括以下操作步骤步骤1，将鱼鳔粉碎为鱼鳔粉末；步骤2，向鱼鳔粉末中加入PH值为6.0的磷酸盐缓冲液和胰蛋白酶，搅拌均勻，得到鱼鳔溶液； 其中，鱼鳔粉末质量为磷酸盐缓冲液质量的6%，胰蛋白酶质量为鱼鳔粉末质量的1.6 2. 0% ；步骤3，先将鱼鳔溶液在50°C恒温水浴中酶解5 lOmin，再将鱼鳔溶液超声处理进行酶解，控制超声功率110 220W，超声时间1 9min，超声温度30 65°C，超声处理后继续在50°C 的恒温水浴中酶解30 90min ；酶解结束后，灭酶、冷却、过滤得到上清液；步骤4，将上清液用IOOOODa超滤膜超滤，超滤后的溶液经冷冻干燥，得到鱼鳔抗氧化寡肽。
2.根据权利要求
1所述制备抗氧化寡肽的方法，其特征在于所述磷酸盐缓冲液由摩尔浓度为0. 2mol/L的磷酸二氢钠水溶液和摩尔浓度为0. 2mol/L的磷酸氢二钠水溶液混合而成，磷酸二氢钠水溶液与磷酸氢二钠水溶液的体积比为87. 7 12.3。
专利摘要
本发明提供一种超声波辅助酶解鱼鳔制备抗氧化寡肽的方法，先将鱼鳔粉碎为鱼鳔粉末；再向鱼鳔粉末中加入pH值为6.0的磷酸盐缓冲液和胰蛋白酶，搅拌均匀，得到鱼鳔溶液；然后将鱼鳔溶液在水浴中酶解，再将鱼鳔溶液进行超声处理进行酶解，超声处理后继续在恒温水浴中酶解；酶解结束后，灭酶、冷却、过滤得到上清液；将上清液用10000Da超滤膜超滤，超滤后的溶液经冷冻干燥，得到鱼鳔抗氧化寡肽。本发明制备的抗氧化寡肽对人体的自由基有很好的清除作用，能起到防止衰老，炎症，以及动脉硬化而引发的心脑血管疾病，也可以作为一种营养添加剂应用于食品中。
文档编号C12P21/06GKCN102363800SQ201110363710
公开日2012年2月29日 申请日期2011年11月16日
发明者常虹, 成长玉, 段振华 申请人:海南大学导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan