，其中所述突变的metA等 位基因包含编码在MetA中的氨基酸取代的核酸序列，所述在MetA中的氨基酸取代选自在 氨基酸位置27的精氨酸至半胱氨酸的取代、在氨基酸位置64的谷氨酰胺至谷氨酸的取代、 氨基酸位置294的酪氨酸至半胱氨酸的取代、在氨基酸位置296的异亮氨酸至丝氨酸的取 代和在氨基酸位置298的脯氨酸至亮氨酸的取代。在一些实施方案中，所述微生物宿主细 胞是细菌。在其它实施方案中，微生物宿主细胞是大肠杆菌。
[0026] 在一些实施方案中，本发明提供了包含突变的metA等位基因的微生物，其中所述 突变的metA等位基因包含编码MetA中一个以上氨基酸取代的核酸序列。在一些实施方案 中，突变的metA等位基因包含编码MetA氨基酸位置296上异亮氨酸至丝氨酸取代和MetA 氨基酸位置298上脯氨酸至亮氨酸的取代的核酸序列。在一些实施方案中，微生物宿主细 胞是细菌。在其它实施方案中，微生物宿主细胞是大肠杆菌。
[0027] 在一些实施方案中，本发明提供微生物，其中所述微生物包括突变的metA等位基 因，其中所述突变的metA等位基因包含选自SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ IDNO NO: 25和SEQ ID NO :26的核酸序列。在一些实施方案中，微生物宿主细胞是细菌。在其它实 施方案中，微生物宿主细胞是大肠杆菌。
[0028] 本发明提供了微生物（例如，微生物宿主细胞），其中，所述微生物产生甲硫氨酸 至足以防止或减少正亮氨酸错误掺入到由微生物表达的蛋白质中或多肽中的程度或范围。 在一些实施方案中，本发明提供微生物，其中所述微生物是解除甲硫氨酸生产抑制的微生 物。在一些方面，所述解除甲硫氨酸生产抑制的微生物产生于S腺苷甲硫氨酸合成酶的部 分功能损失。在其他实施方案中，本发明提供包含突变的metK等位基因的微生物。在一些 实施方案中，本发明提供包含突变的metK等位基因的微生物，其中所述突变的metK等位基 因包含编码MetK中氨基酸取代的核酸序列，所述MetK中氨基酸取代包括在氨基酸位置185 的缬氨酸至谷氨酸的取代。在其他实施方案中，本发明提供了包含突变的metK等位基因的 微生物，其中所述突变的metK等位基因包含在metK等位基因的核酸残基位置1132上包含 胞嘧啶碱基缺失的核酸序列。在一些实施方案中，微生物宿主细胞是细菌。在其它实施方 案中，微生物宿主细胞是大肠杆菌。
[0029] 在一些实施方案中，本发明提供微生物，其中所述微生物包括突变的metK等位基 因，其中所述突变的metK等位基因包含选自SEQ ID NO :27和SEQ ID NO :28的核酸序列。 在一些实施方案中，微生物宿主细胞是细菌。在其它实施方案中，微生物宿主细胞是大肠杆 菌。
[0030] 本发明还提供了包含突变的metA等位基因和突变的metK等位基因不同组合的微 生物宿主细胞。在一些实施方案中，本发明提供了包含突变的metA等位基因和突变的metK 等位基因的微生物，其中所述突变的metA等位基因包含编码MetA氨基酸取代的核酸序列， 所述MetA氨基酸取代包括在氨基酸位置294的酪氨酸至半胱氨酸的取代，以及其中所述 突变的metK等位基因包含编码MetK氨基酸取代的核酸序列，所述MetK氨基酸取代含有 在氨基酸位置185的缬氨酸至谷氨酸的取代。在其他实施方案中，本发明提供了包含突变 的metA等位基因和突变的metK等位基因的微生物，其中所述突变的metA等位基因包含编 码MetA中的氨基酸取代的核酸序列，所述MetA中的氨基酸取代包括在氨基酸位置294的 酪氨酸至半胱氨酸的取代，并且其中所述突变的metK等位基因包括metK等位基因的核酸 残基1132上的核酸胞嘧啶的缺失。在一些实施方案中，本发明提供微生物，其中所述微生 物包括突变的metA等位基因和突变的metK等位基因，其中所述突变的metA等位基因包含 SEQ ID NO :24的核酸序列，以及其中所述突变的metK等位基因包括SEQ ID NO :27的核酸 序列。在其他实施方案中，本发明提供微生物，其中所述微生物包括突变的metA等位基因 和突变的metK等位基因，其中所述突变的metA等位基因包含SEQ ID NO :24的核酸序列， 以及其中所述突变的metK等位基因包括SEQ ID NO :28的核酸序列。在一些实施方案中， 微生物宿主细胞是细菌。在其它实施方案中，微生物宿主细胞是大肠杆菌。
[0031] 本发明还提供了用于本发明方法中的分离的核酸分子。在一些方面，本发明提供 了分离的metA核酸分子（即，编码MetA的分离的核酸分子）。在一些实施方案中，本发明 提供了分尚的metA核酸分子，其中所述metA核酸分子包含编码MetA中的氨基酸取代的核 酸序列，所述MetA中的氨基酸取代选自在氨基酸位置27的精氨酸至半胱氨酸的替代、在氨 基酸位置64的谷氨酰胺至谷氨酸的取代、在氨基酸位置294的酪氨酸至半胱氨酸的取代、 在氨基酸位置296的异亮氨酸至丝氨酸的取代和在氨基酸位置298的脯氨酸至亮氨酸的取 代。在其他实施方案中，通过本发明提供的分离的metA核酸分子包含选自SEQ ID NO :23、 SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :25和SEQ ID NO :26的核酸序列。特别是本发明在此提供了这 些分离的metA核酸分子和其序列用于生产微生物的用途，其中所述微生物用于防止或减 少正亮氨酸错误地掺入到蛋白质中或多肽中。
[0032] 本发明还提供了分尚的metK核酸分子（即，编码MetK的分尚的核酸分子）。在一 些实施方案中，本发明提供了 metK核酸分子，其中所述metK核酸分子包含编码在MetK中 的氨基酸取代的核酸序列，所述MetK中的氨基酸取代包括在氨基酸位置185的缬氨酸至谷 氨酸的取代。在其他实施方案，本发明提供了 metK核酸分子，其中所述metK核酸分子包含 在metK等位基因的核酸残基1132上的核酸胞嘧啶的缺失。在其他实施方案中，由本发明 提供的metK核酸分子包含选自SEQ ID NO :27和SEQ ID NO :28的核酸序列。特别是本发 明在此提供了这些分离的metK核酸分子和其序列用于生产微生物的用途，所述微生物用 于防止或减少正亮氨酸错误地掺入到蛋白质中或多肽中。
[0033] 本发明提供了包含核酸的微生物，所述核酸包含突变的metA等位基因，其中该微 生物进一步包含编码抗VEGF抗体或抗VEGF抗体片段的核酸。在一些实施方案中，本发明 提供包含核酸的微生物，所述核酸包含突变的metA等位基因，其中该微生物进一步包含编 码氨基酸序列SEQ ID NO :46的核酸和编码氨基酸序列SEQ ID NO :47的核酸。在一些实 施方案中，编码氨基酸序列SEQ ID NO :46的核酸是SEQ ID NO :33的核酸序列。在一些实 施方案中，编码氨基酸序列SEQ ID NO :47的核酸是SEQ ID NO :34的核酸序列。在一些实 施方案中，本发明提供了包含核酸的微生物，所述核酸包含突变的metA等位基因，其中该 微生物进一步包含具有对应于SEQ ID NO :33的核酸序列的核酸和具有对应于SEQ ID NO: 34的核酸序列的核酸。在一些实施方案中，突变的metA等位基因包含选自SEQ ID NO :23、 SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25和SEQ ID N0:26的核酸序列。在一些方面中，所述微生物是 细菌，例如，大肠杆菌。
[0034] 本发明提供了包含核酸的微生物，所述核酸包含突变的metK等位基因，其中该微 生物进一步包含编码抗VEGF抗体或抗VEGF抗体片段的核酸。在一些实施方案中，本发明 提供包含核酸的微生物，所述核酸包含突变的metK等位基因，其中该微生物进一步包含编 码氨基酸序列SEQ ID NO :46的核酸和编码氨基酸序列SEQ ID NO :47的核酸。在一些实 施方案中，编码氨基酸序列SEQ ID NO :46的核酸是SEQ ID NO :33的核酸序列。在一些实 施方案中，编码氨基酸序列SEQ ID NO :47的核酸序列是SEQ ID NO :34的核酸序列。在一 些实施方案中，本发明提供了包含核酸的微生物，所述核酸包含突变的metK等位基因，其 中该微生物进一步包含具有对应于SEQ ID NO :33的核酸序列的核酸和具有对应于SEQ ID NO :34的核酸序列的核酸。在一些实施方案中，突变的metK等位基因包含选自SEQ ID NO: 27和SEQ ID NO :28的核酸序列。在一些方面中，所述微生物是细菌，例如，大肠杆菌。
[0035] 本发明提供了包含核酸的微生物，所述核酸包含突变的metA等位基因和突变的 metK等位基因，其中该微生物进一步包含编码抗VEGF抗体或抗VEGF抗体片段的核酸。在 一些实施方案中，本发明提供包含核酸的微生物，所述核酸包括突变的metA等位基因和突 变的metK等位基因，其中该微生物进一步包含编码氨基酸序列SEQ ID NO :46的核酸和编 码氨基酸序列SEQ ID NO :47的核酸。在一些实施方案中，编码氨基酸序列SEQ ID NO :46 的核酸是SEQ ID NO :33的核酸序列。在一些实施方案中，编码氨基酸序列SEQ ID NO :47 的核酸序列是SEQ ID NO :34的核酸序列。在一些实施方案中，本发明提供包含核酸的微生 物，所述核酸包含突变的metA等位基因和突变的metK等位基因，其中该微生物进一步包含 具有对应于SEQ ID NO :33的核酸序列的核酸和具有对应于SEQ ID NO :34的核酸序列的核 酸。在一些实施方案中，突变的metA等位基因包含选自SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID NO :25和SEQ ID NO :26的核酸，以及突变的metK等位基因包括选自SEQ ID NO :27和 SEQ ID NO :28的核酸序列。在一些方面中，所述微生物是细菌，例如，大肠杆菌。
[0036] 本发明提供了包含核酸的微生物，所述核酸包含突变的metA等位基因，其中该微 生物进一步包含编码抗因子D抗体或抗因子D抗体片段的核酸。在一些实施方案中，本发 明提供包含核酸的微生物，所述核酸包括突变的metA等位基因，其中该微生物进一步包含 编码氨基酸序列SEQ ID NO :48的核酸和编码氨基酸序列SEQ ID NO :49核酸。在一些实 施方案中，突变的metA等位基因包含选自SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25和 SEQ ID NO :26的核酸。在一些方面中，所述微生物是细菌，例如，大肠杆菌。
[0037] 本发明提供了包含核酸的微生物，所述核酸包含突变的metK等位基因，其中该微 生物进一步包含编码抗因子D抗体或抗因子D抗体片段的核酸。在一些实施方案中，本发 明提供包含核酸的微生物，所述核酸包括突变的metK等位基因，其中该微生物进一步包含 编码氨基酸序列SEQ ID NO :48的核酸和编码氨基酸序列SEQ ID NO :49的核酸。在一些 实施方案中，突变的metK等位基因包含选自SEQ ID NO :27和SEQ ID NO :28的核酸序列。 在一些方面中，所述微生物是细菌，例如，大肠杆菌。
[0038] 本发明提供了包含核酸的微生物，所述核酸包含突变的metA等位基因和突变的 metK等位基因，其中该微生物进一步包含编码抗因子D抗体或抗因子D抗体片段的核酸。 在一些实施方案中，本发明提供包含核酸的微生物，所述核酸包括突变的metA等位基因和 突变的metK等位基因，其中该微生物进一步包含编码氨基酸序列SEQ ID NO :48的核酸和 编码氨基酸序列SEQ ID NO :49的核酸。在一些实施方案中，突变的metA等位基因包含选 自 SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25 和 SEQ ID NO: 26 的核酸序列，以及突变的 metK等位基因包含选自SEQ ID NO :27和SEQ ID NO :28的核酸序列。在一些方面中，所述 微生物是细菌，例如，大肠杆菌。
[0039] 本发明提供了包含核酸的微生物，所述核酸包含突变的metA等位基因，其中该微 生物进一步包含编码抗MET抗体或抗MET抗体片段的核酸。在一些实施方案中，本发明提供 包含核酸的微生物，所述核酸包括突变的metA等位基因，其中该微生物进一步包含编码氨 基酸序列SEQ ID NO :50的核酸、编码氨基酸序列SEQ ID NO :51的核酸和编码氨基酸序列 SEQ ID NO :52的核酸。在一些实施方案中，突变的metA等位基因包含选自SEQ ID NO: 23、 SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26的核酸序列。在一些方面中，所述微生物是 细菌，例如，大肠杆菌。
[0040] 本发明提供了包含核酸的微生物，所述核酸包含突变的metK等位基因，其中该微 生物进一步包含编码抗MET抗体或抗MET抗体片段的核酸。在一些实施方案中，本发明提供 包含核酸的微生物，所述核酸包括突变的metK等位基因，其中该微生物进一步包含编码氨 基酸序列SEQ ID NO :50的核酸、编码氨基酸序列SEQ ID NO :51的核酸和编码氨基酸序列 SEQ ID N0:52的核酸。在一些实施方案中，突变的metK等位基因包含选自SEQ ID N0:27 和SEQ ID N0:28的核酸序列。在一些方面中，所述微生物是细菌，例如，大肠杆菌。
[0041] 本发明提供了包含核酸的微生物，所述核酸包含突变的metA等位基因和突变的 metK等位基因，其中该微生物进一步包含编码抗MET抗体或抗MET抗体片段的核酸。在一 些实施方案中，本发明提供包含核酸的微生物，所述核酸包括突变的metA等位基因和突变 的metK等位基因，其中该微生物进一步包含编码氨基酸序列SEQ ID NO :50的核酸、编码氨 基酸序列SEQ ID NO :51的核酸和编码氨基酸序列SEQ ID NO :52