%次 氯酸钠溶液浸泡15min进行灭菌，超纯水冲洗干净，然后放置于25°C条件下适宜浓度的IAA 溶液中低氧诱导培养3天，诱导出胚芽鞘； 3) 胚芽鞘接种带毒灰飞虱后暗培养：将胚芽鞘用超纯水洗净，放入铺有吸水棉的试管 中，每个试管一个种子，定量接种带毒灰飞虱，用透气纱布封闭试管后平置，传毒24h，将传 毒后胚芽鞘用超纯水冲洗，然后放置于25°C条件下浸润了适宜浓度的ABA溶液的吸水棉上 暗培养； 4) 荧光定量PCR获得各水稻品种周期时间点的RBSDV病毒S7与内参基因的相对表达 量（RQ值）：按照周期时间点采集待测水稻和鉴定标尺特定位置的胚芽鞘40-60g，每个品种 每个取材时间点取材2-3重复，-70°C保存，提取RNA并纯化，取1yL上述病毒RNA提取液， 加入荧光定量PCR反应体系，利用引物RBSDV-F:5'-AGAGCTCTTCTAGITAITGCG-3'和 RBSDV-R:5'-TCAGCAAAAGGTAAAGGAACG-3'按照荧光定量PCR扩增程序扩增RBSDV病 毒S7片段，扩增完毕，进入结果分析界面，以GAPDH为内参，与对照组相比，获得每个品种每 个取样时间点重复的RBSDV病毒S7与内参基因的相对表达量（RQ值）； 5) 绘制RBSDV增殖指数趋势线：利用多重复的RQ值统计每个待测品种和鉴定标尺饲毒 后每个取样时间点的RQ值均值，以RQ值均值为纵坐标、饲毒后周期取样时间点为横坐标， 对数据进行统计分析，获得RBSDV增殖指数趋势线y=Aekx; 6) 根据RBSDV增殖指数趋势线公式评价待测水稻品种对水稻黑条矮缩病的抗性水平 和抗性等级：根据每个品种RBSDV增殖指数趋势线公式y=Aekx评价待测水稻品种的抗性水 平，即公式中k值大的品种比k值小的品种对RBSDV抗性低，待测品种k值小于等于高抗标 尺的为尚抗品种，待测品种k值大于尚抗标尺且小于等于中抗标尺的为中抗品种，待测品 种k值大于中抗标尺且小于等于感病标尺的为感病品种，待测品种k值大于感病标尺的为 超感品种。
[0012] 所述步骤1)和6)中的高抗鉴定标尺为室内接毒鉴定中抗病表现在当地水稻品种 资源中排名为7%-9%冲抗鉴定标尺排名为18%-22%;感病鉴定标尺排名为47%-53%。
[0013] 所述步骤2)中的适宜浓度的IAA溶液浓度为1. 5-2. 5ymol/L;所述的低氧诱导 方法为种子置于液面下5-lOcm处培养。
[0014] 所述步骤3)中的带毒灰飞虱的获取步骤为： 3. 1)RBSDV毒源获取：从水稻黑条矮缩病重病区田间采集表现为水稻黑条矮缩病症状 的分蘖盛期水稻病株，-70°C保存； 3. 2)传毒介体继代繁殖：大田采集并纯化灰飞虱高龄若虫，用水稻幼苗饲养并传代； 3. 3)介体饲毒：饲毒时从_70°C冰箱中取出水稻黑条矮缩病病株，常温放置3_5h使病 株自然展开，然后用吸水棉布包裹病株根部后用塑料袋紧密包扎，确保水不会流出，然后将 其移入保鲜盒内，将室内人工饲养的1. 5-2. 5龄期灰飞虱若虫转入保鲜盒内的RBSDV毒源 水稻上，25°C饲毒48h后移除毒源，将灰飞虱转移到幼嫩水稻秧苗上饲养度过循回期即为 带毒灰飞虱。
[0015] 所述步骤3)中的适宜浓度的ABA溶液浓度控制为40-60ymol/L;所述的定量接 种带毒灰飞虱控制为5-8虫/个胚芽鞘。
[0016] 所述步骤4)中的周期取样时间点为RBSDV传毒后4-10天内每隔1. 5-2. 0天均匀 分布的3-4个时间点；特定位置的胚芽鞘为胚芽鞘长度的正中间部位。
[0017] 所述步骤4)中的提取RNA的方法为：取适量叶片加液氮于研钵中迅速磨碎，按 比例加入TRI-Reagent到1. 5ml离心管中，样品体积不应超过TRI-Reagent体积10%， 4°C12000Xg低温离心1.5min，然后小心转移上清到新的离心管中。
[0018] 所述步骤4)中的纯化RNA的方法为：a)直接添加一体积（95%-100%)酒精到已经 溶解于TRI-Reagent的上清液中，漩涡混匀；b)转移到吸附柱中过滤（吸附柱置于收集管 中），然后12000Xg离心lmin，之后把吸附柱转移到新的收集管中；c)加400y1RNAWash Buffer到离心柱中，12000Xg离心lmin;d)将 80yl配好的DNAaseIcocktailbuffer 直接加到离心柱中，25-37°C水浴加热离心柱15min，12000Xg离心30s;e)添加400y1RNA Prewash到吸附柱中，12000Xg离心lmin，收集过滤的液体，重复此步骤；f)添加700yl RNAWashBuffer到吸附柱中，12000Xg离心lmin，然后从收集管中小心转移吸附柱到一个 新的RNase-free1.5ml离心管中；g)至少添加 25ylDNase/RNase-FreeWater到离心管 基质中，最大速度离心lmin，被洗脱的RNA可以直接利用或保存于-70°C超低温冰箱中。
[0019] 所述步骤4)中的焚光定量反应体系每20yL中含：10yL的2XqPCRmastermix (Promega)、1. 0yL的cDNA模板、8. 2yL的ddH20 以及 0? 8yL的 10剛引物RBSDV-R和RP; 实时荧光定量？〇?扩增程序为：95°0预变性2!^11;951：变性158,601：退火158,721：延伸 20s，共进行40次循环；95°C变性15s，60°C退火lmin，95°C变性15s。
[0020] 所述步骤3. 3)中的灰飞虱饲毒后的循回期为23-27天。
【附图说明】
[0021] 附图为对实施例所选择的鉴定标尺胚芽鞘传毒后周期取材点取材检测RBSDV浓 度变化所获得RBSDV增殖指数趋势图。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例与附图对本发明作进一步的说明。
[0023] -种水稻黑条矮缩病抗性的分子鉴定方法，其特征在于：该鉴定方法包括以下步 骤： 1)选择鉴定标尺：根据人工接毒鉴定中不同品种对水稻黑条矮缩病抗性表现设置高 抗、中抗、感病三个鉴定标尺，选择三个相应水稻品种做为鉴定标尺，其中，高抗鉴定标尺 为室内接毒鉴定中抗病表现在当地水稻品种资源中排名为7%_9%，中抗鉴定标尺排名为 18%-22%，感病鉴定标尺排名为47%-53% ; 2) 低氧诱导待测水稻和鉴定标尺品种的胚芽鞘：每个品种取15-20粒种子，用0. 6%次 氯酸钠溶液浸泡15min进行灭菌，超纯水冲洗干净，然后放置于25°C条件下1. 5-2. 5ymol/ L的IAA溶液液面下5-lOcm处低氧诱导培养3天，诱导出胚芽鞘； 3) 胚芽鞘接种带毒灰飞虱后暗培养： 3. 1)RBSDV毒源获取：从水稻黑条矮缩病重病区田间采集表现为水稻黑条矮缩病症状 的分蘖盛期水稻病株，-70°C保存； 3. 2)传毒介体继代繁殖：大田采集并纯化灰飞虱高龄若虫，用水稻幼苗饲养并传代； 3. 3)介体饲毒：饲毒时从_70°C冰箱中取出水稻黑条矮缩病病株，常温放置3_5h使病 株自然展开，然后用吸水棉布包裹病株根部后用塑料袋紧密包扎，确保水不会流出，然后将 其移入保鲜盒内，将室内人工饲养的1. 5-2. 5龄期灰飞虱若虫转入保鲜盒内的RBSDV毒源 水稻上，25°C饲毒48h后移除毒源，将灰飞虱转移到幼嫩水稻秧苗上饲养度过23-27天的循 回期即为带毒灰飞虱； 3. 4)胚芽鞘接种带毒灰飞虱：将胚芽鞘用超纯水洗净，放入铺有吸水棉的试管中，每个 试管一个种子，按照5-8虫/个胚芽鞘的比例定量接种带毒灰飞虱，用透气纱