醇、甘露醇、蔗糖、海藻糖）、多元醇（例如：乙二醇、丙三醇、丙二醇）中的一 种或多种。
[0029] 可选的，在所述校准品中，纯品的浓度为40-60limol/L，优选为45-55ymoVL;稳 定剂C的浓度为l-100mm〇l/L，优选为10-50mmol/L;当所述基质中含有缓冲液时，缓冲液的 浓度为5-500mmol/L;当所述基质中含有人血清时，人血清的浓度按质量体积百分含量计 为0. 5-90%，优选为10-85% ;当所述基质中含有牛血清时，牛血清的浓度按质量体积百分 含量计为〇. 5-90 %，优选为10-85 % ;当所述基质中含有牛血清白蛋白时，牛血清白蛋白的 浓度按质量体积百分含量计为〇. 5-60%，优选为10-50%。
[0030] 可选的，所述校准品的pH为6. 0-10. 0,优选pH为6. 5-8. 5。
[0031] 其中，所述胆汁酸校准品可根据基质的不同，制成稳定均一的液体或冻干粉。
[0032] 在本发明中，所述缓冲液的终浓度表示将各组分混合分别配制所述试剂A和试剂 B后，试剂中起缓冲作用的有效成分的终浓度，例如，当所述缓冲液为2-N-吗啡乙磺酸时， 缓冲液的终浓度表示配制获得的试剂中2-N-吗啡乙磺酸的浓度。当缓冲液由两种或两种 以上有效成分组成时，缓冲液的终浓度指代几种有效成分的总浓度。
[0033] 其中，所述表面活性剂选自由聚氧乙烯十二烷基醚、聚乙二醇对异辛基苯基醚、聚 乙二醇单月桂酸酯、4-壬基苯基-聚乙二醇、烷基聚烯烃基乙二醇醚和烷基聚乙烯乙二醇 醚所组成的组中的一种或两种；所述稳定剂A选自由NaCl、KCl、MgCl2、EDTA. 2Na或EDTA. 2K 所组成的组中的一种或多种。
[0034] 优选的，为了获得更好的稳定效果，所述表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基和聚乙 二醇对异辛基苯基醚中的至少一种。
[0035]根据本发明的试剂，所述稳定剂A选自由NaCl、KCl、MgCljPEDTA. 2Na或EDTA. 2K 所组成的组中的一种或多种，优选的为了获得最佳的稳定效果，所述稳定剂选自MgCljP EDTA. 2Na中的至少一种。
[0036] 可选的，在所述试剂A中，Thio-NAD的浓度为0.Ol-lOmmol/L、缓冲液A的终浓度 为5-500mmol/L、表面活性剂的浓度为0. 05-20% (w/v)、稳定剂A的浓度为0.l-20g/L。
[0037] 优选的，在所述试剂A中，Thio-NAD的浓度为0. 5-5mmol/L、缓冲液A的终浓度为 10-100mm〇l/L、表面活性剂的浓度为2-10% (w/v)、稳定剂的浓度为l-10g/L。
[0038] 可选的，所述试剂A的pH为3. 0-5. 5,优选的pH为3. 5-4. 5。
[0039] 在本发明的一种优选的实施方式中，所述表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚 (EMULGEN109P)和聚乙二醇对异辛基苯基醚（曲拉通TX-100)中的至少一种，所述稳定剂A 为MgCljPEDTA. 2Na中的至少一种。
[0040] 可选的，所述试剂A还可以包括去干扰剂和防腐剂等，其中，所述去干扰剂可以为 丙酮酸钠、草酸、草酸盐类或草氨酸，干扰剂的浓度为l-5mmol/L。
[0041] 所述稳定剂B选自半胱氨酸、L-还原型谷胱甘肽、L-氧化型谷胱甘肽、L-氧化型 谷胱甘肽二钠盐、巯基乙醇、核苷酸和核苷酸衍生物和牛血清白蛋白所组成的组中的一种。
[0042] 其中，所述核苷酸和所述核苷酸衍生物可以为腺苷酸、鸟苷酸、胞嘧啶核苷酸、尿 嘧啶核苷酸、腺苷5' -二磷酸钠盐、腺苷5' -二磷酸钾盐、腺苷-3'，5' -环单磷酸钠盐、鸟 苷-3'，5' -环单磷酸钠盐、鸟嘌呤核苷-5' -二磷酸二钠、胞嘧啶核苷酸二钠或尿苷二磷酸 二钠。
[0043] 在本发明的一种实施方式中，所述缓冲液B的缓冲容量为0.05-lmol/L。为了获 得更好的稳定效果，缓冲液B优选为N-三（羟甲基）-3-氨基丙烷磺酸（TAPS)缓冲液或 3-(环己胺）-1-丙磺酸（CAPS)缓冲液。
[0044] 可选的，所述试剂B的pH为8. 0-9. 5,优选的，为了获得更好的试剂稳定效果，所述 试剂B的pH为9. 0-9. 5。
[0045] 在本发明中，所述表面活性剂选自由聚氧乙烯十二烷基醚、聚乙二醇对异辛基苯 基醚、聚乙二醇单月桂酸酯、4-壬基苯基-聚乙二醇、烷基聚烯烃基乙二醇醚系列和烷基聚 乙烯乙二醇醚所组成的组中的一种或两种。优选的，所述表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基 醚（EMULGEN109P)和/或聚乙二醇对异辛基苯基醚（曲拉通TX-100)。
[0046] 其中，在本发明的一种实施方式中，所述烷基聚烯烃基乙二醇醚系列指代脂肪醇 环氧乙烷-环氧丙烷的加成物，如PR0PETAL100。
[0047] 优选的，为了获得最佳的稳定效果，所述稳定剂B选自腺苷-3'，5' -环单磷酸钠 盐、鸟苷-3'，5' -环单磷酸钠盐、半胱氨酸中的至少一种。
[0048] 可选的，在所述试剂B中，3a-HSD的浓度为0.5-100KU/L，优选为5-20KU/L;还原 型辅酶I的浓度为〇. 〇l-l〇g/L，优选为0. 5-6g/L;缓冲液B的终浓度为5-500mmol/L，优选 为10-100_〇1/1;表面活性剂的浓度以质量体积百分含量计为0.05-20%，优选为1-15%; 稳定剂B的浓度为l-20g/L，优选为3-15g/L。
[0049] 在本发明的一种优选的实施方式中，所述缓冲液B为N-三（羟甲基）-3-氨基丙 烷磺酸（TAPS)缓冲液，所述稳定剂B为腺苷-3'，5' -环单磷酸钠盐、鸟苷-3'，5' -环单 磷酸钠盐、半胱氨酸中的至少一种，表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚（EMULGEN109P)和 聚乙二醇对异辛基苯基醚（曲拉通TX-100)中的至少一种。
[0050] 可选的，所述试剂B还包括防腐剂NaNjPPr〇clin300,所述防腐剂的浓度可以为 0.l-2g/L;所述防腐剂可以为NaN3，当所述防腐剂为似队时，其浓度为0.l-2g/L。
[0051] 本发明还提供了所述总胆汁酸测定试剂的制备方法：
[0052] 其中，本发明对于试剂A的制备过程中各成分的混合顺序没有特别要求，可以直 接将所述原料混合物中的各组分进行同时、分批或分步混合，只要能得到均匀的稳定相即 可，优选通过搅拌使混合更加均匀。
[0053] 其中，试剂B的配制是按照缓冲液、表面活性剂、稳定剂、还原型辅酶I、3a-HSD的 顺序，依次混合，得到均匀的稳定相。优选通过搅拌使混合更加均匀。所述制备过程可以在 室温的条件下进行。
[0054] 其中，本发明所提供的总胆汁酸测定试剂在制备后在2_8°C开盖使用状态，稳定时 间可以达到20-30天，在2-8°C度密闭避光存储条件下，稳定时间可以达到10-15个月。
[0055] 本发明还提供了所述总胆汁酸测定试剂的检测方法，包括，将待测样本、试剂A、试 剂B按照3yL:210yL:70yL的体积比（可根据试剂中主要成分的浓度和检测仪器的不 同，按比例进行用量的调整）混匀后静置60-120秒，在测试温度37°C、主波长405nm、副波 长660nm下，使用纯化水和校准品进行线性校准，测量样本中总胆汁酸的浓度。
[0056] 其中，所述待测样本为血清、血浆、其他体液或组织液、质控品及其他含有胆汁酸 的溶液。优选的，按照待测样本、试剂A、试剂B的用量为3yL、210yL、70yL的方式混合获 得混合物。
[0057] 优选的，将混合物静置60秒，然后置于检测仪器中测量2-3分钟吸光度值（A);计 算每分钟吸光度变化率（AA/min)，在本发明的一种优选的实时方式中，所述检测仪器为 具有双试剂功能的生化分析仪，测量所使用的光径优选为lcm。
[0058] 其中，试剂使用纯化水和校准品进行线性校准。按公式：总胆汁酸的浓度（ymol/ L) =C标准*(AA/min样本-AA/min空白）/(AA/min标准-AA/min空白）计算样本中总胆 汁酸的浓度。
[0059] 下面通过实施例对本发明进行进一步说明。
[0060] 实施例1
[0061]按照表1列出的组分含量分别制备试剂A，将各组分混合，得到均匀的稳定相，分 别得到试剂AI-21。
[0062]表I
[0065] 试剂A1-21中，各组分的具体选择如下：
[0066] 试剂A1-17和21中，表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚（EMULGEN109P)，缓冲液A 为2-N-吗啡乙磺酸缓冲液，稳定剂A为MgCljPEDTA. 2Na按照质量比1:1混合制成。
[0067] 试剂A18中，表面活性剂为聚乙二醇对异辛基苯基醚（曲拉通TX-100)，缓冲液A 为2-N-吗啡乙磺酸缓冲液，稳定剂A为MgCljPEDTA. 2Na按照质量比1:1混合制成。
[0068] 试剂A19中，表面活性剂为聚乙二醇对异辛基苯基醚（曲拉通TX-100)，缓冲液A 为甘氨酸缓冲液，稳定剂A为MgCljPEDTA. 2Na按照质量比1:1混合制成。
[0069] 试剂A20中，表面活性剂为聚乙二醇对异辛基苯基醚（曲拉通TX-100)，缓冲液A 为2-N-吗啡乙磺酸，稳定剂A为EDTA. 2K。
[0070] 试剂A1-20中，去干扰剂为草氨酸钠。
[0071] 对比例1
[0072] 按照与试剂Al相同的方法制备试剂A，不同的是，将表面活性