剂替换为TWEEN20， 得到试剂A22。
[0073] 对比例2
[0074] 按照与试剂Al相同的方法制备试剂A，不同的是，将稳定剂A替换为聚乙二醇，得 到试剂A23。
[0075] 实施例2
[0076] 按照表2列出的组分含量制备试剂B，分别得到试剂B1-21。
[0077] 制备方法为：按照缓冲液、表面活性剂B、稳定剂B、还原型辅酶I、3a-HSD的顺 序，依次混合，得到均匀的稳定相。
[0078] 表 2
[0079]
[0080] 试剂B1-24中，各组分的具体选择如下：
[0081] 试剂B1-21中，缓冲液B为pH8. 5的N-三（羟甲基）-3-氨基丙烷磺酸缓冲液，稳 定剂B为腺苷-3'，5'-环单磷酸钠盐；表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚（EMULGEN109P)。
[0082] 试剂B22中，缓冲液B为3-(环己胺）-1-丙磺酸（CAPS)，稳定剂B为腺 苷-3'，5' -环单磷酸钠盐；表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚（EMULGEN109P)。
[0083] 试剂B23中，缓冲液BpH8. 5的N-三（羟甲基）-3-氨基丙烷磺酸，稳定剂B为鸟 苷-3'，5' -环单磷酸钠盐，表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚（EMULGEN109P)。
[0084] 试剂B24中，缓冲液B为pH8. 5的N-三（羟甲基）-3-氨基丙烷磺酸缓冲液，稳 定剂B为腺苷-3'，5' -环单磷酸钠盐；表面活性剂为聚乙二醇对异辛基苯基醚（曲拉通 TX-100)〇
[0085] 对比例3
[0086] 按照与试剂B1相同的方法制备试剂B，不同的是，将缓冲液B替换为三（羟甲基） 氨基甲烷（Tris)，得到试剂B25。
[0087] 对比例4
[0088] 按照与试剂B1相同的方法制备试剂B，不同的是，将表面活性剂替换为TWEEN80， 得到试剂B26。
[0089] 对比例5
[0090] 按照与试剂B1相同的方法制备试剂B，不同的是，将稳定剂B替换为EDTA. 2Na， 得到试剂B27。
[0091] 实施例3
[0092] 实施例3用于说明校准品的制备，将纯品甘氨胆酸钠和稳定剂甘露醇溶于基质 2-N-吗啡乙磺酸缓冲液和牛血清白蛋白中，混合均匀获得校准品，其中，甘氨胆酸钠的浓 度为50ymol/L，甘露醇的浓度为20g/L，牛血清白蛋白的浓度按质量体积百分含量计为 10%，2-N-吗啡乙磺酸缓冲液的浓度为100mmol/L。
[0093] 测试例 1-10
[0094] 测试例用于说明本发明制备的总胆汁酸测定试剂盒的稳定性。选取实施例1、2和 对比例1-5中制备获得的试剂A、试剂B和实施例3中制备的校准品组装成试剂盒1-10。
[0095] 稳定性评价方法：试剂8°C开盖使用状态下，30天之内，每天测定质控品；计算每 天测定结果与第一天测定结果的相对偏差，相对偏差小于±15%判定为稳定。试剂8°C度 密闭避光存储过程中，在15个月的保存期内，每月测定；计算每月测定结果与第一个月测 定结果的相对偏差，相对偏差小于± 15 %判定为稳定。
[0096] 检测方法：采用具有双试剂功能的自动生化分析仪（光径1cm、测试温度37°C、主 波长405nm、副波长660nm)，按照样本：试剂A:试剂B= 3yL:210yL:70yL的方式加样， 加入试剂B60秒后，读取2-4分钟的吸光度值；使用纯化水和校准品进行线性校准；按公 式：总胆汁酸的浓度(>111〇1/1)=(：标准*(八厶/111；[11样本-八厶/111；[11空白）/(八厶/111；[11标准-八八/ minse )，计算样本中总胆汁酸的浓度。每个试剂盒中试剂A和试剂B分组及测定结果列于 表30
[0097] 表 3
[0098]
[0099] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1. 一种总胆汁酸测定试剂盒，所述试剂盒包括：试剂A和试剂B，其中，试剂A的组成成 分包括：Thi〇-NAD、缓冲液A、表面活性剂和稳定剂A ;试剂B的组成成分包括：3 a -HSD、还 原型辅酶I、表面活性剂、缓冲液B和稳定剂B ; 其中，所述缓冲液A选自由磷酸盐缓冲液、焦磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲 液、碳酸盐缓冲液、醋酸缓冲液、2-N-吗啡乙磺酸缓冲液、咪唑缓冲液所组成的组中的一 种； 所述缓冲液B选自由2-(环己胺）乙磺酸缓冲液、3-(环己胺）-1-丙磺酸缓冲液、 3-(环己胺）-2-羟基-1-丙磺酸缓冲液、N-三（羟甲基）-3-氨基丙烷磺酸缓冲液、3-三 羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸缓冲液和三乙醇胺缓冲液所组成的组中的一种。2. 根据权利要求1所述的总胆汁酸测定试剂盒，其中，所述表面活性剂选自由聚氧乙 烯十二烷基醚、聚乙二醇对异辛基苯基醚、聚乙二醇单月桂酸酯、4-壬基苯基-聚乙二醇、 烷基聚烯烃基乙二醇醚和烷基聚乙烯乙二醇醚所组成的组中的一种或两种；所述稳定剂A 选自由NaCl、KC1、MgCl 2、EDTA. 2Na和EDTA. 2K所组成的组中的一种或多种。3. 根据权利要求1所述的总胆汁酸测定试剂盒，其中，所述稳定剂B选自半胱氨酸、 L-还原型谷胱甘肽、L-氧化型谷胱甘肽、L-氧化型谷胱甘肽二钠盐、巯基乙醇、腺苷酸、 鸟苷酸、胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、腺苷5 ' -二磷酸钠盐、腺苷5 ' -二磷酸钾盐、腺 苷-3'，5' -环单磷酸钠盐、鸟苷-3'，5' -环单磷酸钠盐、鸟嘌呤核苷-5' -二磷酸二钠、胞嘧 啶核苷酸二钠、尿苷二磷酸二钠和牛血清白蛋白所组成的组中的一种或多种。4. 根据权利要求1-3中任意一项所述的总胆汁酸测定试剂盒，其中，在所述试剂A中， Thio-NAD的浓度为0.0 l-lOmmol/L ;缓冲液A的终浓度为5-500mmol/L ;表面活性剂的浓度 按质量体积百分含量计为〇. 05-20% ;稳定剂A的浓度为0. l-20g/L。5. 根据权利要求4所述的总胆汁酸测定试剂盒，其中，在所述试剂B中，3 a -HSD的浓 度为0. 5-100KU/L ;还原型辅酶I的浓度为0. 01-10g/L ;缓冲液B的终浓度为5-500mmol/ L ;表面活性剂的浓度以质量体积百分含量计为0. 05-20% ;稳定剂B的浓度为l-20g/L。6. 根据权利要求1或5所述的总胆汁酸测定试剂盒，其特征在于，还包括校准品，所 述校准品的组成成分包括基质、纯品及稳定剂C ;其中，所述基质为缓冲液A、缓冲液B、人 血清、牛血清、牛血清白蛋白中的一种或多种；所述纯品为胆酸钠、脱氧胆酸钠、鹅脱氧胆酸 钠、甘氨胆酸钠、甘氨脱氧胆酸钠、甘氨鹅脱氧胆酸钠、牛黄胆酸钠、牛黄脱氧胆酸钠和牛黄 鹅脱氧胆酸钠中的一种或多种；所述稳定剂C为MgCl 2、NaCl、KCl、CaCl2、螯合剂EDTA类、 聚乙二醇类、二糖类和多元醇中的一种或多种。7. 根据权利要求6所述的总胆汁酸测定试剂盒，其特征在于，在所述校准品中纯品的 浓度为40-60 y mol/L ;稳定剂C的浓度为1-lOOmmol/L ;当所述基质中含有缓冲液时，缓 冲液的浓度为5-500mmol/L ;当所述基质中含有人血清时，人血清的浓度按质量体积百分 含量计为〇. 5-90% ;当所述基质中含有牛血清时，牛血清的浓度按质量体积百分含量计为 0. 5-90 % ;当所述基质中含有牛血清白蛋白时，牛血清白蛋白的浓度按质量体积百分含量 计为 0. 5-60%。8. 根据权利要求1-3、5和7中任意一项所述的总胆汁酸测定试剂盒，其特征在于，所述 试剂A的pH为3. 0-5. 5,试剂B的pH为8. 5-10. 0。9. 根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，缓冲液A为甘氨酸缓冲液和2-N-吗 啡乙磺酸中的至少一种；表面活性剂为聚氧乙烯十二烷基醚和聚乙二醇对异辛基苯基醚中 的至少一种；稳定剂A为MgCljP EDTA. 2Na中的至少一种；所述缓冲液B为N-三（羟甲 基）-3-氨基丙烷磺酸或3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸，所述稳定剂B为腺苷-3'，5环 单磷酸钠盐、鸟苷-3'，5' -环单磷酸钠盐、半胱氨酸中的至少一种。10.权利要求1-9中任意一项所述的试剂盒在总胆汁酸测定中的应用，包括，将待测样 本、试剂A、试剂B按照3 y L :210 y L :70 y L的体积比混匀后静置60-120秒，在测试温度 37°C、主波长405nm、副波长660nm，使用纯化水和校准品进行线性校准，测量待测样本中总 胆汁酸的浓度。
【专利摘要】本发明提供了一种总胆汁酸测定试剂盒，所述试剂盒包括：试剂A和试剂B，其中，试剂A的组成成分包括：Thio-NAD、缓冲液A、表面活性剂和稳定剂A；试剂B的组成成分包括：3α-HSD、还原型辅酶Ⅰ、表面活性剂、缓冲液B和稳定剂B；通过上述技术方案，本发明所提供的总胆汁酸测定试剂盒2-8℃开盖使用状态，稳定时间可以达到20-30天，在2-8℃密闭避光存储过程中的稳定时间可以达到10-15个月。
【IPC分类】C12Q1/32, G01N21/31
【公开号】CN105002264
【申请号】CN201510451151
【发明人】岳彩琴
【申请人】中生北控生物科技股份有限公司
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2015年7月28日