，已通过以下方式在技 术上改善光子辐照：通过IMRT(强度-调节的放疗）方法以及通过辐照计划和实施中的成 像方法（三维适形放疗）以尽可能最精确地聚焦。本发明的化合物在现有的癌症治疗和辐 照中实现协同作用和/或恢复现有的癌症治疗和辐照的效力。
[0061] 本发明的再一个实施方案涉及式（I)的至少一种化合物和/或其生理学可接受的 盐、互变异构体和/或立体异构体（包括它们按所有比率的混合物）的用途，其用于使癌 细胞对于抗癌剂和/或电离辐射敏感，条件是所述敏感不在体内对人或动物身体发生。通 过将化合物给药到包含丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的细胞、细胞培养物、组织或器官，该敏感 优选离体或体外发生。特别是，在起源于受到选自癌症、肿瘤或转移的疾病影响的动物有机 体的动物细胞的情况下，使用体外应用。离体处理的细胞可继续保持在培养物中或转移至 动物中以用于随后的研究，其中该动物可为宿主动物或另一动物。本发明的离体敏感对于 测试化合物的特定作用特别有利，以使得体内剂量可随着这些离体数据的评价相应地预调 节。其结果是，治疗效果显著提高。或者，还设计本发明用于体内使用，并且至少一种涉及 式（I)的化合物和/或其生理学可接受的盐、互变异构体和/或立体异构体（包括它们按 所有比率的混合物），其用于使癌细胞对于抗癌剂和/或电离辐射敏感。
[0062] 本发明此外教导用于癌症、肿瘤或转移的预防、治疗和/或过程控制的方法，其中 将有效量的至少一种本发明的化合物和/或其生理学可接受的盐、互变异构体和/或立体 异构体（包括它们按所有比率的混合物）给药到待治疗的受试者。本发明意义上优选的受 试者为人或动物，特别优选人。本领域技术人员为此已知，可对有机体（特别是人类患者） 按各种剂量给药本发明的化合物，其当然还可用作本发明的药物剂。给药的有效量和类型 可由本领域技术人员通过常规实验测定。本发明的先前教导及其实施方案是通用的，并且 可不受限制地应用于该治疗方法，只要其看起来适当。
[0063] 所有所述和其它成分或组分为本领域技术人员熟悉的，并且可在常规实验中经历 关于本发明教导的具体实施方案。在说明书中引用的所有文献预期在此通过引用而全文结 合到本发明的公开内容中。
[0064] 在本文中提出的发明的范围内，第一次提供新型的式（I)的芳基喹唑啉化合物。 本发明的化合物亲合地和/或选择性地控制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，特别是DNA-PK。得 自式（I)的化合物及其衍生物的特点在于高的特异性和稳定性、低制备成本和容易处理。 基于这些性质，形成可再现作用模式和与相应靶结构的可靠和安全的相互作用。本发明还 包括本发明的芳基喹唑啉衍生物用于抑制、调整和/或调节丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（特 别是DNA-PK)的信号级联，因此提供研究和/或诊断的新工具。
[0065] 此外，包含所述化合物的药剂和药物组合物以及这些化合物用于治疗激酶-介导 的病症的用途为用于广谱治疗的高度有希望的方法，由此能够在人和动物中直接和立即缓 解症状。作为单一治疗或与其它抗肿瘤治疗联用，这对于有效抗击严重疾病（例如癌症） 特别有利。在DNA修复过程中DNA-PK的关键参与和DNA-PK抑制剂使得哺乳动物细胞变得 对辐射更敏感的证据，使得在例如实体癌肿瘤治疗(通过放疗和/或目的在于DNA-DSB的化 疗）中实现DNA-PK特异性抑制剂的治疗用途。
[0066] 式（I)的化合物、其盐、异构体、互变异构体、对映异构体、非对映异构体、外消旋 物、衍生物、前药和/或代谢物不仅在所述临床疾病情形中有效，而且结合DNA-PK信号级 联，同样在诊断和治疗所有疾病中有效，特别是在细胞增殖和迀移的抑制方面。此外，通 过抑制逆转录病毒整合，本发明的抑制剂可用于治疗逆转录病毒疾病（R.Daniel(1999) Science284:644)。最后，本发明的抑制剂可用作免疫调节剂和端粒维持的调节剂。低分 子量抑制剂单独使用和/或与其它治疗手段联用，例如外科介入、免疫治疗、放疗和/或化 疗。后者涉及用任何期望的NME(S卩，NCE和/或NBE)的靶向治疗，其作为单一治疗和/或 中靶/脱靶联合治疗。
[0067] 由于它们对通过dsDNA修复而调整细胞过程的酶具有意外强的和/或选择性的抑 制，本发明的化合物可有利地低剂量给药，同时与现有技术的效力较低或选择性较低的抑 制剂相比，它们实现类似或甚至优越的生物学效力。降低的剂量还伴随降低的或没有医疗 副作用。此外，通过本发明化合物的高度选择性抑制还伴随着独立于剂量的降低的不期望 的副作用。
[0068] 特别是，本发明的化合物不具有生理相关的Kv 11. 1 hERG钾离子通道的抑制或阻 滞。
[0069] 不言而喻，本发明不局限于本文描述的特定化合物、药物组合物、用途和方法，因 为这些事物可变化。此外，不言而喻，本文使用的术语排他地用于描述特别的实施方案的目 的，并且不旨在限制本发明的保护范围。本文说明书（包括所附权利要求）中所用的单数词 语形式，例如"一个"、"该"或"所述"，包括复数等价物，只要上下文没有另外特别说明。例 如，提及"一种化合物"包括单个化合物或多种化合物，其又可相同或不同，或者提及"一种 方法"包括本领域技术人员已知的等价步骤和方法。
[0070] 以下参考具体实施方案的非限制性实施例来更详细地解释本发明。特别是，这些 实施例应解释为不局限于具体说明的特征组合，而例示性特征又可自由组合，只要这实现 本发明的目的。 实施例
[0071] 实施例的概述提供在表1-7中。其中给出的生物学数据适用于下列范围： DNA-PK(酶）： A: IC50< 3nM B: 3 nM ^ IC50< 7 nM C: 7 nM ^ IC50< 30 nM D: 30 nM 彡 IC50 pDNA-PK(细胞）： A: IC50< 0. 5μΜ B: 0. 5 μΜ ^ IC50< 5 μΜ C: 5 μΜ ^ IC50< 10 μΜ D: 10 μΜ ^ IC50< 30 μΜ Kvll. 1hERG: A: Kx> 25μΜ B: 25 μΜ ^ ^>15 μΜ C: 15μΜ^Kx> 10μΜ D: 10 μΜ 彡 K1〇
[0072] 分析 使用以下参数进行NMR(1H) 仪器：BrukerAvanceDRX500、BrukerAvance400、BrukerDPX300 参比：TMS TD(时间域=数据点的数量或数字分辨率）：65536 溶剂：DMSOd6 NS(扫描次数=扫描频率）：32 SF(分光计频率=透射频率）：400或500MHz TE(温度）：303K、363K或 393K 耦合常数（J)以赫兹（Hz)为单位 HPLC:带有UV检测器的高效色谱 LC-MS:带有UV-和MS检测器的高效色谱SFC:带有UV检测器的超临界流体色谱。
[0073]借助LC-MS鉴宙合成中间产物和合成产物： LC-MS方法A: 柱：ChromolithSpeedRODRP_18e50-4. 6mm,流速：2· 4ml/min.,波长：220nm, 洗脱液A:水+0. 05体积％甲酸，洗脱液B:乙臆+ 0. 4体积％甲酸，梯度：4体积％_100 体积％洗脱液B2.8min,然后100%洗脱液B0.5min。
[0074]LC-MS方法B: 柱：ChromolithSpeedRODRP_18e50-4. 6mm,流速：2· 4ml/min.，波长：220nm, 洗脱液A:水+0. 1体积％三氟乙酸，洗脱液B:乙腈+ 0. 1体积％三氟乙酸，梯度：4体 积％-100体积％洗脱液B2. 8min,然后100体积％洗脱液B0. 5min。
[0075]借助HPLC和SFC分离立体异构体混合物： HPLC:首先使用下列柱针对每种立体异构体混合物进行柱筛选：ChiralpakAD-H、ChiralpakAS_H、ChiralpakIA、ChiralpakIB、ChiralpakIC、Chiralcel0D_H、Chiralcel 0]-!1、1^?0611111〇86-2、1^?-411171〇86-2，对于所有的柱：250-4.6 1111]1。对于下列测量(例如 测定对映异构体比例)使用最合适的柱。流速：〇. 8ml/min,波长：可变，其对应于吸光最大 值和使用的洗脱液而调节。洗脱液：使用下列溶剂或溶剂混合物作为洗脱液：正庚烷、正己 烷、乙醇、甲醇、2-丙醇、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷；作为洗脱液添加剂可以使用：0. 01-0. 5 体积％甲酸、0. 01-0. 5体积％二乙胺；根据需要使用梯度或等度的测量条件。
[0076]SFC:首先使用下列柱针对每种立体异构体混合物进行柱筛选：ChiralpakAD-H、 ChiralpakAS_H、ChiralpakIA、ChiralpakIB、ChiralpakIC、Chiralcel0D_H、Chiralcel 0J-H、LuxCellulose-2、Lux-Amylose-2,对于所有的柱：250-4. 6mm。对于下列测量(例 如测定对映异构体比例）使用最合适的柱。流速：5ml/min，波长：可变，其对应于吸光最 大值和使用的洗脱液而调节。洗脱液：液态二氧化碳（>70bar)，共洗脱液：使用下列溶剂 或溶剂混合物作为共洗脱液：乙醇、甲醇、异丙醇、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷。作为洗脱液添 加剂可以使用：〇. 01-0. 5体积％甲酸、0. 01-0. 5体积％二乙胺。根据需要使用梯度或等度 的测量条件。
[0077] 生物测试 A)DNA-PK检测（生物化学） 在涂覆有链霉抗生物素的348-孔微量滴定FlashPlates中进行激酶检测。为此，将1. 5DNA-PK/蛋白质络合物和100ng生物素化的底物（例如PESQEAFADLWKK-生物素-NH2 ("生物素-DNA-PK-肽"））以总体积 36·5μLCM·25mMHEPES/K0H、7·85mMTris-HCl、 68. 5mMKC1、5μΜΑΤΡ、6· 85mMMgCl2、0. 5mMEDTA、0. 14mMEGTA、0. 69mMDTT，pH7· 4) 在室温下温育90分钟，其中每孔有500ng得自小牛胸腺的DNA、0. 1MCi的33P-ATP和1.8% 的DMS0,其中含有或不含所述测试化合物。使用50μL/孔的200mMEDTA停止反应。在室 温下温育另外30分钟后，将液体除去。每一个孔用100μL的0. 9%氯化钠溶液洗涤三次。 使用10剛的专门激酶抑制剂测定非特异性反应（空白值）。借助TopCount进行放射性测 量。在RS1中计算了IC5。值。
[0078]文献：Kashishian等人（2003)MolecularCancerTherapeutics1257。
[0079]B)在丝氨酸2056上的DNA-PK磷酸化(细胞） 在37°C和10% 0)2下，在具有10%的胎牛血清和2mM谷氨酰胺的MEMα培养基中培 养HCT116细胞。借助胰蛋白酶/EDTA将细胞从培养容器的基底中分离，在离心管中离心分 离，吸收于新鲜的培养基中，并且测定细胞密度。在1ml培养基中，24-孔细胞培养板的每 孔中播种100000个细胞，并且培养过夜。第二天，将新鲜培养基中的10μΜ博来霉素（DNA 嵌入剂和DNA双链断裂的诱导物)和测试物质加入到细胞中，将这些培养另外6小时。随后 进行细胞溶解，且将细胞溶解产物加入到涂覆有DNA-PK特异性抗体的阻滞的96-孔ELISA 板上（Sigma-AldrichWH0005591M2:总的DNA-PK;Abeamabl8192 或EpitomicsEM09912: 磷酸化-丝氨酸2056DNA-PK)并且在4°C下过夜培养。然后用检测抗体（Abeamab79444: 总的DNA-PK)和链霉抗生物素-HRP偶联物处理该96-孔ELISA板。借助化学发光试剂进 行酶促反应的显影，化学发光借助MithrasLB940测量。将磷酸化-DNA-PK-特异性抗体的 信号基于针对总蛋白质DNA-PK的抗体的信号而标准化。通过参考经博来霉素处理的媒介 物对照组的信号水平（100%的对照)，测定IC5。值和百分比值。DMS0对照用作空白样品。
[0080] C)Kvll.l(hERG)离子通道活性（膜片钳测定法） 用于检测和表征与Kvll. 1 (hERG)通道干涉的测试物质的方法：Kvll. 1 (hERG，人类ether-a-go-go相关基因）是钾通道，其在心室心肌细胞中对于细胞的复极化起到关键作 用。
[0081] 膜片钳测量在室温下在人类胚胎肾细胞（HEK293 )上以全细胞模式进行，其中人类 胚胎肾细胞与hERG基因稳定转染。
[0082] 使用自动化膜片钳装置（PatchlinerTM，NanionTechnologies，慕尼黑）进行全细 胞模式。它是基于玻璃芯片的系统，使用它可以同时自动化地全细胞测量多达8个细胞。 该玻璃芯片具有确定尺寸的孔，在其上通过施加负压将细胞转移到吉咖欧封口（Gigaseal) 且引入全细胞模式。将缓冲液、细胞悬浮液和测试物质使用特氟隆涂覆的移液器添加到所 述芯片的微通道。
[0083] 将细胞钳制在_80mV的保持电位。为了测量Kvll. 1通道的物质介导的抑制，以10 秒的时间间隔施加如下电压程序：51ms/ -80mV, 500ms/ +40mV, 500ms/ -40mV, 200ms/ -80mV。漏电流通过P4方法减去。将细胞再悬浮于细胞外悬浮液（EC)中且施 用在芯片中。在细胞被收集之后，通过加入密封增强剂缓冲液改进密封。当达到全细胞模 式之后，洗去密封增强剂缓冲液且替代为细胞外悬浮液。在EC中开始测量1.5min。之后 施用DMS0 (媒介物对照，0.1%的DMS0)且记录对照流3min。然后以相同的浓度两次添加 测试物质，且分别测量钾流3. 5min。
[0084] 如果在10μΜ的起始浓度下测试物质的测量结果小于（-)50%效果（阈值）（例如 (-)60%效果），为了测定剂量-作用关系则以连续增加的浓度添加测试物质，其中测量各个 浓度5min。
[0085] 作为参照物质，使用Kvll. 1 (hERG)离子通道阻滞剂奎尼丁。将测试物质和奎尼 丁的效果基于相关的媒介物对照而标准化。对Kvll. 1 (hERG)通道活性的效果借助钾流 在-40mV下评测。为了计算，分别评估最后痕迹的电流。Kvll. 1 (hERG)通道的由于测试 物质所致的抑制基于媒介物对照（〇. 1%DMS0)而标准化。
[0086] 在测量时，取出测试物质的等分试样用于浓度测定。将样品直接通过HPLC测量和 基于校正曲线确定最终浓度。
[0087] 如果在10μΜ的起始浓度下测试物质的测量结果大于或等于（-)50%效果（阈值） (例如（-)30%效果，即在1〇μΜ情况下30%的抑制），则根据下式计算^ = 1.0E-5X (100+%效果）八-％效果），[Μ]。
[0088] 在10μΜ的测试物质浓度的情况下，（_) 30%效果的测量结果得到23μΜ的I。
[0089] D) Kvll. 1离子通道结合测定法 Kvll.l(hERG=人类ether-a-go-go相关酶）是心脏K+通道，其应该尽可能不与测试 物质相互作用。这种相互作用借助LifeTechnologies的Predictor?hERG焚光偏振（FP) 测定法定量测定。在该测定原理的情况下，分离具有一定含量的Kvll. 1通道的心肌细胞 膜。染料标记的Kvll. 1结合配对物通过与Kvll. 1相互作用而产生高荧光偏振信号。在染 料位移的情况下，导致荧光偏振信号的降低。
[0090] 如下自动化地进行该测定：将15nL的测试物质（最高浓度：10mM，10个浓度：稀释 系数1 :3. 16，DMS0)由声学（akustisch)移液器转移到具有384孔的空的微孔滴定板中。然 后加入3yL的分离的膜。膜和测试物质在22°C下温育15min(+/-5min)。在下一步骤中 加入染料标记的结合配对物，接着在22°C下温育。在2小时温育之后，在Envision多功能 酶标仪上测量荧光偏振。测得的原始数据借助基因数据检测分析仪而标准化。在 Cawi/oseo中计算IC50和％效果值。
[0091]化学合成 在本文的上下文中，所有温度的单位为°c。
[0092] 对映异构体实施例27、72、82、83、135、136、185、234、251、455和456的立体化学构 型结构通过X射线结构分析确定。对于实施例234和251，通过结晶和X射线结构分析确定 了前体。
[0093] 在表中标记为手性的其余化合物(在非对称C原子上标有星号)通过在手性固定相 上的色谱法获得。在各自条件下作为首先流出的对映异构体称为"Ena1"，第二流出的对映 异构体称为"Ena2"。
[0094] 实施例1和2: (3, 5-二氟-吡啶-4-基）-[4-氟-3- (7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基）-苯基]-甲醇 (1) (4-氯-5-氟-吡啶-3-基）-[4-氟-3- (7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基）-苯基]-甲 醇⑵
将（3-溴-4-氟-苯基）-乙腈（4.00g，18.32mmol)、联硼酸频那醇酯（5.22g， 20. 15mmol)、乙酸钾（55. 86mmol)和双（三苯基膦）二氯化钯（II) (15. 2%Pd) (393. 53 mg, 0.55mmol)在氩气下溶解在无氧的1,4-二噁烧（40ml,最多0.005%的水）中。然 后将该反应混合物在130°C的温度下加热90min。在完全反应之后，经硅藻土过滤。将滤 液用二氯甲烷（200ml)和水（50ml)稀释并萃取。将有机相经硫酸钠干燥，然后过滤和 在真空下浓缩至干燥，从而得到油状的[4-氟-3-(4, 4, 5, 5-四甲基-[1，3, 2]二氧杂环戊 硼烷-2-基）_苯基]-乙腈（7.59g，纯度81%，MS: 262.2 [M+H+])，其未经进一步后处 理而用于接下来的反应。
[0095] 将4-氟-3-(4, 4, 5, 5-四甲基-[1，3, 2]二氧杂环戊硼烷-2-基）-苯基]-乙 腈（7.60g，23.53mmol)、1，4_ 二噁烷（85.6ml,最多 0.005% 的水）、4_ 氯-7-吗 啉-4-基-喹唑啉（5.00g，20.02mmol)、双（三环己基膦）-二氯化钯（II) (597.24mg， 0.80mmol)和碳酸钠溶液（2.0M，30ml, 60. 07mmol)预先置于三颈烧瓶中。在氮气气 氛下，将获得的悬浮液在140°C的温度下在搅拌下加热2.5h的时间。在完成反应之后，冷 却到室温且经硅藻土过滤。将滤液用乙酸乙酯（250ml)和水（100ml)稀释并萃取。将 水相用乙酸乙酯（分别75ml)再洗涤两次。将合并的有机相经硫酸钠干燥，然后过滤和 在真空下浓缩至干燥。为了进一步后处理，将其悬浮在甲基-叔丁基醚中，过滤和用另外的 甲基-叔丁基醚（分别30ml)再洗涤两次。将滤饼在真空下过夜干燥，从而得到黄色固 体的[4-氟-3-(7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基）-苯基]-乙腈（4. 91g，13. 49mmol, MS: 349.1 [M+H+], 67% 的产率）。
[0096] 将14-氟-3-(7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基）-苯基]-乙腈（400mg, 1· 12 mmol)、4_氯-3,5-二氟-Ρ比啶（189. 9mg, 1.23mmol)在干燥的氩气气氛下溶解在无氧 的除气的四氢呋喃（8ml,最多0.0075%的水）中。然后将叔丁醇钾（263.9mg, 2.35 mmol)加入到反应混合物中，其中生成深红色溶液，将其在室温下搅拌另外30min。在完成 反应之后，用饱和的氯化铵溶液（20ml)和水（50ml)稀释。然后将水相用二氯甲烷（分 别60ml)萃取两次。将有机相经硫酸钠干燥，过滤和在真空下旋转蒸发至干燥。将残余 物通过快速柱色谱法（梯度：二氯甲烷/ 0-4体积％乙醇）纯化，从而得到如下物质的油 状混合物（420mg，约5:3) : (3, 5-二氟-吡啶-4-基）-[4-氟-3- (7-吗啉-4-基-喹 唑啉-4-基）-苯基]-乙腈（263mg, 0.57mmol,MS: 462.1 [M+H+], 50% 的产率）和 (4-氯-5-氟-吡啶-3-基）-[4-氟-3-(7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基）-苯基]-乙腈 (157mg, 0.33mmol,MS: 478.1/480.1 [M+H+]，29% 的产率）。
[0097] 将（3, 5-二氟-吡啶-4-基）-[4-氟-3- (7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基）-苯 基]-乙腈和（4-氯-5-氟-吡啶-3-基）-[4-氟-3- (7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基）-苯 基]-乙腈的混合物（420mg，约5:3)溶解在乙腈（12.7ml)中。在搅拌下，将叔丁醇钾 (80.90mg，0.72mmol)加入到反应溶液中，由此生成深红色的溶液。在搅拌15min之后冷 却到〇°C，然后滴加30%浓度的过氧化氢溶液（276μL，2. 70mmol)。在0°C下搅拌5min 之后移除冷却浴。将反应溶液在室温下再搅拌1h。在完全反应之后，加入10%的硫代硫 酸钠溶液（5ml)并用水（25ml)稀释。将水溶液用二氯甲烷萃取两次（分别50ml)。 将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤和在真空下浓缩至干燥。将残余物通过快速柱色谱法 (梯度：二氯甲烷/0-4体积％乙醇）纯化，从而得到如下物质的油状混合物（310mg，约 3:1) : (3, 5-二氟吡啶-4-基）-[4-氟-3- (7-吗啉-4-基-P奎唑啉-4-基）-苯基]-甲酮 (233mg, 0.50mmol,MS: 451.1 [M+H+])和（4-氯-5-氟吡啶-3-基）-[4-氟-3-(7-吗 啉-4-基-喹唑啉-4-基）-苯基]-甲酮（77mg, 0.16mmol,MS: 467.1/469.1 [M+H+])。
[0098] 将（3, 5-二氟吡啶-4-基）-[4-氟-3- (7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基）-苯基]-甲 酮和（4-氯-5-氟-吡啶-3-基）-[4-氟-3- (7-吗啉-4-基-喹唑啉-4-基）-苯基]-甲 酮的混合物（310mg，约3:1)溶解在甲醇（15ml)中。然后加入硼氢化钠（30. 4mg，0.80 mmol)(产生气体）。将反应混合物在室温下搅拌45min。在完全反应之后用饱和的氯化铵 溶液（5ml)和水（15ml)稀释。然后将水相用二氯甲烷（分别20ml)萃取三次。将合并 的有机相经硫酸钠干燥，过滤