量无离子水喷淋1-2次。
[0029] 本发明的技术方案中，步骤（4)中微滤的操作参数为：压栗0. 05-0. 3MPa、pH值 6-7、温度40-50°C、膜面流量1-4M/S、浓缩比3-4倍。
[0030] 本发明的技术方案中，步骤（5)中所述的第1次超滤的操作参数为：压栗 0. 1-0. 43MPa、pH值5-6、温度40-50°C、膜面流速1-3M/S、浓缩比4-5倍；第2次超滤的操作 参数为：压栗〇. 3-0. 6MPa、pH值为5-6、温度40-50°C、膜面流量1-3M/S、浓缩比6-7倍。
[0031] 本发明的技术方案中，步骤（9)中所述的碱性酶的酶活为10万u/g ;胰酶的酶活 >4000u/g〇
[0032] 本发明的技术方案中，步骤（11)中微滤的操作参数为：压栗0· 05-0. 3MPa、pH值 6-7、温度40-50°C、膜面流速1-4M/S、浓缩比3-4倍。
[0033] 本发明的技术方案中，步骤（12)中第1次超滤和第2次超滤的操作参数为：压栗 0· 2-0. 4MPa、pH 值 5-6、温度 40-50°C、膜面流速 1-3M/S、浓缩比 5-6 倍。
[0034] 本发明的技术方案中，步骤（13)中所述钠滤的操作参数为：压力0. 7-0. 9MPa，循 环流量I. 5-2. 5m3/h，浓缩倍数7-9。
[0035] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0036] 1.本发明提供用物理方法替代化学法分离酸性多肽，获得酸性多肽粗品，可作复 配含酸性多肽的中成药或作纯化酸性多肽的前提物，分离率高，能很好保护其活性，无污染 产生，达到清洁生产。
[0037] 2.本发明的方法使用的金边蚂蟥含蛋白质极高，分离出酸性多肽后仍存在很高的 蛋白质，将其进行酶解，获得以短肽为主体，只含少量游离氨基酸和小分蛋白的混合物，比 未酶解的蛋白质吸收更多更快，生理功能更强。
[0038] 3.本发明的方法除获得酸性多肽粗品，蚂蟥蛋白多肽混合物还得到蚂蟥蛋白粉， 用于制取甲壳素的蚂蟥皮，使蚂蟥的开发利用达到初步综合利用。
【附图说明】
[0039] 图1为本发明从金边蚂蟥中制取蛋白多肽的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0040] 下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，但本发明的实施方式并不 局限于实施例表示的范围。这些实施例仅用于说明本发明，而非用于限制本发明的范围。此 外，在阅读本发明的内容后，本领域的技术人员可以对本发明作各种修改，这些等价变化同 样落于本发明所附权利要求书所限定的范围。
[0041] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所 使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0042] 实施例1:
[0043] 一种从金边蚂蟥中制取蛋白多肽的方法，包括如下步骤：
[0044] (1)先用清水冲洗鲜蚂蟥或解冻蚂蟥体表的污染物，然后移入浓度为3%。高锰酸 钾溶液中，搅拌浸泡IOmin ;捞起后用清水洗掉高锰酸钾溶液，再将其移入浓度为5%氯化 钠溶液中搅拌浸泡l〇min，捞起后用清水洗去其体表的盐份，再用去离子水冲洗1次，沥去 水分，置于容器内；
[0045] (2)将蚂蟥体表消毒灭菌后，按蚂蟥重量计算，加入3%。亚硫酸氢钠，1 %。抗坏血酸 和3倍去离子水拌匀，投入胶体磨中研磨，研磨温度控制在小于50°C，得到蚂蟥浆液；所述 的蚂蟥浆液的细度为18目；
[0046] (3)将步骤（2)所得的蚂蟥浆液进行2次粗滤，合并2次粗滤的滤渣和滤液；所述 的2次粗滤的具体操作为：第1次粗滤用60目滤布在三足离心机过滤，积累于滤布的滤渣 用适量无离子水喷淋1次；第2次粗滤用200目在三足离机过滤，积累于滤布的滤渣用适量 无离子水喷淋1次；
[0047] (4)将步骤（3)所得滤液用可拦截分子量30000Da的30000膜进行微滤，收集微 滤透过液；微滤的操作参数为：压栗0. 〇5Mpa、pH值6、温度40°C、膜面流量1M/S、浓缩比3 倍；
[0048] (5)将微滤透过液进行2次超滤，第1次超滤选用10000膜；浓缩液加入上述粗滤 渣中，透过液进行第2次超滤，选用5000膜；透过溶液并入前述之滤渣中，所得浓液即为富 集含水蛭素溶液；所述的第1次超滤的操作参数为：压栗0.1 Mpa、pH值5、温度40°C、膜面 流速1M/S、浓缩比4倍；第2次超滤的操作参数为：压栗0. 3Mpa、pH值为5、温度40°C、膜面 流量1M/S、浓缩比6倍；
[0049] (6)把粗滤渣和微滤透过液及超滤1浓液、超滤2之透液，调pH值为9,投入有搅 拌装置，功率2KW的微波罐中，用2KW功率微波升温，控控温小于60°C，微波20min，在55°C 保温20min，排出冷却；
[0050] (7)将步骤（6)排出的溶液冷至45°C，用200目滤布三足离心机过滤，积累于滤布 的滤渣用无离子水适量喷淋，所得滤液即为蚂蟥蛋白溶液；
[0051] (8)将步骤（7)所得蚂蟥蛋白溶液，先用稀盐酸调pH值至6,然后再用10%冰醋 酸溶解2%的壳聚糖溶液调pH值至5,将蛋白沉析出来，静置lh，待溶液分层后弃去上层液 再用400目滤布离心过滤，得湿蛋白，加入2倍于湿蛋白量0. 75%高锰酸钾溶液在35°C温 度下浸泡I. 5h，然后用400目尼龙滤布脱去高锰酸钾并用清水冲洗1次，用2倍于湿渣的 0. 75%草酸溶液浸泡2h，观察蛋白为白色时，即开始收集脱色蛋白；
[0052] (9)将脱色的湿蛋白用无离子水稀释，待蛋白质浓度达到7%时，调pH值为9,加入 底物质量3 %的碱性酶搅拌均匀，置于带搅拌装置功率2KW微波罐中，启动2KW功率，当酶 解液升温到45°C时检测酶解液pH值，当pH值下降至7. 5以下时，补碱液调至9,当pH值下 降至7. 5以上8以下时，补碱调至8. 5,酶解液升温至55°C再检1次pH值，当pH下降不到 7. 8以下不再补碱，下降至7. 8以下时补碱调至8,酶解液温度达到55°C时停止微波保留搅 拌，待温度下降低于50°C后再启动2KW功率微波待酶解液升温至55°C，关掉微波保留搅拌， 待酶解液温度下降至45°C以下时检测酶解液pH值，当pH低于8时补碱调至8,添加底物质 量2. 5%的胰酶，启动2KW微波，酶解液升温至50°C时，检查酶解液pH值，当pH下降低于或 接近7时，补碱调至7. 8,继续微波升温至55°C关掉微波，再检测pH，当pH下降至7. 3以下 补碱调至7. 5,启动搅拌，待酶解液温度下降至45°C再启动微功率2KW，酶解液升温至55°C， 保温5分钟后，启动功率IOKW升温至85°C，保温10分钟灭酶活；所述的碱性酶的酶活为10 万u/g ;胰酶的酶活>4000u/g ;
[0053] (10)将灭酶活后的酶解液排出，冷却至40°C，在搅拌状态下，缓慢添加用含20% 冰醋酸溶解1. 5%的壳聚糖溶液，使pH值调至5,沉析未酶解的蛋白及其他大分子杂质等， 沉析液静置2小时，用400目滤布离心除去的沉析物即为蚂蟥蛋白，离心时先过滤上层液后 过滤浓液；
[0054] (11)将400目过滤所得的滤液，再用30000膜进行微滤；浓液合并入上述400目 粗滤渣中；微滤的操作参数为：压栗0. 〇5Mpa、pH值6、温度40°C、膜面流速1M/S、浓缩比3 倍；
[0055] (12)步骤（11)所得微滤透过液进行2次超滤，第1次超滤用10000膜，第2次超 滤用5000膜，两次超滤的浓缩液合并进粗滤渣中；第1次超滤和第2次超滤的操作参数为： 压栗0. 2Mpa、pH值5、温度40°C、膜面流速1M/S、浓缩比5倍；
[0056] (13)将步骤（12)中超滤2所得透过液进行钠滤；所述钠滤的操作参数为：压力 0. 7Mpa，循环流量I. 5m3/h，浓缩倍数7。
[0057] (14)将步骤（13)中纳滤所得浓缩液，选用喷雾干燥法干燥，获得多肽；将步骤 (10)的滤渣，步骤（11)微滤之浓液、步骤（12)超滤之浓液合并选用喷雾干燥法干燥，获得 蚂蟥蛋白粉。
[0058] 实施例2:
[0059] -种从金边蚂蟥中制取蛋白多肽的方法，包括如下步骤：
[0060] (1)先用清水冲洗鲜蚂蟥或解冻蚂蟥体表的污染物，然后移入浓度为3%。高锰酸 钾溶液中，搅拌浸泡15min ;捞起后用清水洗掉高锰酸钾溶液，再将其移入浓度为5%氯化 钠溶液中搅拌浸泡lOmin，捞起后用清水洗去其体表的盐份，再用去离子水冲洗1次，沥去 水分，置于容器内；
[0061] (2)将蚂蟥体表消毒灭菌后，按蚂蟥重量计算，加入3%。亚硫酸氢钠，1 %。抗坏血酸 和3倍去离子水拌匀，投入胶体磨中研磨，研磨温度控制在小于50°C，得到蚂蟥浆液；所述