-种从金边蚂蟥中制取蛋白肽的方法_3

文档序号:9628122阅读:来源:国知局
的蚂蟥浆液的细度为20目;
[0062] (3)将步骤(2)所得的蚂蟥浆液进行2次粗滤,合并2次粗滤的滤渣和滤液;所述 的2次粗滤的具体操作为:第1次粗滤用80目滤布在三足离心机过滤,积累于滤布的滤渣 用适量无离子水喷淋2次;第2次粗滤用200目在三足离机过滤,积累于滤布的滤渣用适量 无离子水喷淋2次;
[0063] (4)将步骤(3)所得滤液用可拦截分子量30000Da的30000膜进行微滤,收集微滤 透过液;微滤的操作参数为:压栗0. 3Mpa、pH值7、温度50°C、膜面流量4M/S、浓缩比4倍;
[0064] (5)将微滤透过液进行2次超滤,第1次超滤选用10000膜;浓缩液加入上述粗滤 渣中,透过液进行第2次超滤,选用5000膜;透过溶液并入前述之滤渣中,所得浓液即为富 集含水蛭素溶液;所述的第1次超滤的操作参数为:压栗0. 43Mpa、pH值6、温度50°C、膜面 流速3M/S、浓缩比5倍;第2次超滤的操作参数为:压栗0. 6Mpa、pH值为6、温度50°C、膜面 流量3M/S、浓缩比7倍;
[0065] (6)把粗滤渣和微滤透过液及超滤1浓液、超滤2之透液,调pH值为9,投入有搅 拌装置,功率IOKW的微波罐中,用2KW功率微波升温,控控温小于60°C,微波20min,在60°C 保温20min,排出冷却;
[0066] (7)将步骤(6)排出的溶液冷至45°C,用200目滤布三足离心机过滤,积累于滤布 的滤渣用无离子水适量喷淋,所得滤液即为蚂蟥蛋白溶液;
[0067] (8)将步骤(7)所得蚂蟥蛋白溶液,先用稀盐酸调pH值至6,然后再用10%冰醋酸 溶解2%的壳聚糖溶液调pH值至5,将蛋白沉析出来,静置2h,待溶液分层后弃去上层液再 用400目滤布离心过滤,得湿蛋白,加入3倍于湿蛋白量0. 75 %高锰酸钾溶液在45°C温度 下浸泡2h,然后用400目尼龙滤布脱去高锰酸钾并用清水冲洗1次,用3倍于湿渣的0. 75 % 草酸溶液浸泡3h,观察蛋白为白色时,即开始收集脱色蛋白;
[0068] (9)将脱色的湿蛋白用无离子水稀释,待蛋白质浓度达到7%时,调pH值为9,加入 底物质量3%的碱性酶搅拌均匀,置于带搅拌装置功率IOKW微波罐中,启动2KW功率,当酶 解液升温到45°C时检测酶解液pH值,当pH值下降至7. 5以下时,补碱液调至9,当pH值下 降至7. 5以上8以下时,补碱调至8. 5,酶解液升温至55°C再检1次pH值,当pH下降不到 7. 8以下不再补碱,下降至7. 8以下时补碱调至8,酶解液温度达到55°C时停止微波保留搅 拌,待温度下降低于50°C后再启动2KW功率微波待酶解液升温至55°C,关掉微波保留搅拌, 待酶解液温度下降至45°C以下时检测酶解液pH值,当pH低于8时补碱调至8,添加底物质 量2. 5%的胰酶,启动2KW微波,酶解液升温至50°C时,检查酶解液pH值,当pH下降低于或 接近7时,补碱调至7. 8,继续微波升温至55°C关掉微波,再检测pH,当pH下降至7. 3以下 补碱调至7. 5,启动搅拌,待酶解液温度下降至45°C再启动微功率2KW,酶解液升温至55°C, 保温5分钟后,启动功率IOKW升温至85-90°C,保温10分钟灭酶活;所述的碱性酶的酶活 为10万u/g ;胰酶的酶活>4000u/g ;
[0069] (10)将灭酶活后的酶解液排出,冷却至40°C,在搅拌状态下,缓慢添加用含20% 冰醋酸溶解1. 5%的壳聚糖溶液,使pH值调至5,沉析未酶解的蛋白及其他大分子杂质等, 沉析液静置2小时,用400目滤布离心除去的沉析物即为蚂蟥蛋白,离心时先过滤上层液后 过滤浓液;
[0070] (11)将400目过滤所得的滤液,再用30000膜进行微滤;浓液合并入上述400目粗 滤渣中;微滤的操作参数为:压栗0. 3Mpa、pH值7、温度50°C、膜面流速4M/S、浓缩比4倍;
[0071] (12)步骤(11)所得微滤透过液进行2次超滤,第1次超滤用10000膜,第2次超 滤用5000膜,两次超滤的浓缩液合并进粗滤渣中;第1次超滤和第2次超滤的操作参数为: 压栗0. 4Mpa、pH值6、温度50°C、膜面流速3M/S、浓缩比6倍;
[0072] (13)将步骤(12)中超滤2所得透过液进行钠滤;所述钠滤的操作参数为:压力 0. 9Mpa,循环流量2. 5m3/h,浓缩倍数9。
[0073] (14)将步骤(13)中纳滤所得浓缩液,选用喷雾干燥法干燥,获得多肽;将步骤 (10)的滤渣,步骤(11)微滤之浓液、步骤(12)超滤之浓液合并选用喷雾干燥法干燥,获得 蚂蟥蛋白粉。
[0074] 实施例3:
[0075] -种从金边蚂蟥中制取蛋白多肽的方法,包括如下步骤:
[0076] (1)先用清水冲洗鲜蚂蟥或解冻蚂蟥体表的污染物,然后移入浓度为3%。高锰酸 钾溶液中,搅拌浸泡12min ;捞起后用清水洗掉高锰酸钾溶液,再将其移入浓度为5%氯化 钠溶液中搅拌浸泡l〇min,捞起后用清水洗去其体表的盐份,再用去离子水冲洗1次,沥去 水分,置于容器内;
[0077] (2)将蚂蟥体表消毒灭菌后,按蚂蟥重量计算,加入3%。亚硫酸氢钠,1 %。抗坏血酸 和3倍去离子水拌匀,投入胶体磨中研磨,研磨温度控制在小于50°C,得到蚂蟥浆液;所述 的蚂蟥浆液的细度为19目;
[0078] (3)将步骤(2)所得的蚂蟥浆液进行2次粗滤,合并2次粗滤的滤渣和滤液;所述 的2次粗滤的具体操作为:第1次粗滤用70目滤布在三足离心机过滤,积累于滤布的滤渣 用适量无离子水喷淋2次;第2次粗滤用200目在三足离机过滤,积累于滤布的滤渣用适量 无离子水喷淋1次;
[0079] (4)将步骤(3)所得滤液用可拦截分子量30000da的30000膜进行微滤,收集微滤 透过液;微滤的操作参数为:压栗0. 2Mpa、pH值6. 5、温度45°C、膜面流量2M/S、浓缩比3. 5 倍;
[0080] (5)将微滤透过液进行2次超滤,第1次超滤选用10000膜;浓缩液加入上述粗滤 渣中,透过液进行第2次超滤,选用5000膜;透过溶液并入前述之滤渣中,所得浓液即为富 集含水蛭素溶液;所述的第1次超滤的操作参数为:压栗0. 3Mpa、pH值5. 5、温度45°C、膜面 流速2M/S、浓缩比4. 5倍;第2次超滤的操作参数为:压栗0. 4Mpa、pH值为5. 5、温度45°C、 膜面流量2M/S、浓缩比6. 5倍;
[0081] (6)把粗滤渣和微滤透过液及超滤1浓液、超滤2之透液,调pH值为9,投入有搅 拌装置,功率5KW的微波罐中,用2KW功率微波升温,控控温小于60°C,微波20min,在58°C 保温20min,排出冷却;
[0082] (7)将步骤(6)排出的溶液冷至45°C,用200目滤布三足离心机过滤,积累于滤布 的滤渣用无离子水适量喷淋,所得滤液即为蚂蟥蛋白溶液;
[0083] (8)将步骤(7)所得蚂蟥蛋白溶液,先用稀盐酸调pH值至6,然后再用10%冰醋酸 溶解2%的壳聚糖溶液调pH值至5,将蛋白沉析出来,静置I. 5h,待溶液分层后弃去上层液 再用400目滤布离心过滤,得湿蛋白,加入2. 5倍于湿蛋白量0. 75%高锰酸钾溶液在40°C 温度下浸泡I. 8h,然后用400目尼龙滤布脱去高锰酸钾并用清水冲洗1次,用2. 5倍于湿渣 的草酸溶液浸泡2. 5h,观察蛋白为白色时,即开始收集脱色蛋白;
[0084] (9)将脱色的湿蛋白用无离子水稀释,待蛋白质浓度达到7%时,调pH值为9,加入 底物质量3 %的碱性酶搅拌均匀,置于带搅拌装置功率5KW微波罐中,启动2KW功率,当酶 解液升温到45°C时检测酶解液pH值,当pH值下降至7. 5以下时,补碱液调至9,当pH值下 降至7. 5以上8以下时,补碱调至8. 5,酶解液升温至55°C再检1次pH值,当pH下降不到 7. 8以下不再补碱,下降至7. 8以下时补碱调至8,酶解液温度达到55°C时停止微波保留搅 拌,待温度下降低于50°C后再启动2KW功率微波待酶解液升温至55°C,关掉微波保留搅拌, 待酶解液温度下降至45°C以下时检测酶解液pH值,当pH低于8时补碱调至8,添加底物质 量2. 5%的胰酶,启动2KW微波,酶解液升温至50°C时,检查酶解液pH值,当pH下降低于或 接近7时,补碱调至7. 8,继续微波升温至55°C关掉微波,再检测pH,当pH下降至7. 3以下 补碱调至7. 5,启动搅拌,待酶解液温度下降至45°C再启动微功率2KW,酶解液升温至55°C, 保温5分钟后,启动功率IOKW升温至88°C,保温10分钟灭酶活;所述的碱性酶的酶活为10 万u/g ;胰酶的酶活>4000u/g ;
[0085] (10)将灭酶活后的酶解液排出,冷却至40°C,在搅拌状态下,缓慢添加用含20% 冰醋酸溶解1. 5%的壳聚糖
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