重结晶。
[0029]实施例3苯并吡啶酮化合物的制备
[0030] 取5kg牛皮消寥全草，粉碎，用5L甲醇/乙醇混合液回流提取，提取物浓缩（100mL)， 用l〇〇g硅藻土拌样，5L正丁醇热提取;进行正相硅胶柱层析分离(200-300目，lkg;硅胶柱尺 寸L500mm，0 12Qmill)，依次以体积比9:1、5:1、3:1、1:1、1:3、1:9的氯仿/甲醇混合液进 行梯度洗脱，每次5L;TLC检测馏分，收集洗脱比例3:1的馏分合并，再用丙酮/正己烷(体积 比1:1)重结晶。
[0031] 实施例4苯并吡啶酮化合物的制备
[0032]取5kg牛皮消寥全草，粉碎，用5L甲醇/乙醇混合液回流提取，提取物浓缩（100mL)， 用l〇〇g硅藻土拌样，5L正丁醇热提取;进行正相硅胶柱层析分离(200-300目，lkg;硅胶柱尺 寸L500mm，0 120mm)，依次以体积比9:1、5:1、3:1、1:1、1:3、1:9的氯仿/甲醇混合液进 行梯度洗脱，每次5L;TLC检测馏分，收集洗脱比例3:1的馏分合并;馏分用反相硅胶柱层析/ 高效液相色谱分离，洗脱剂为甲醇/水(9:1-1:9)，高效液相色谱的检测波长为254nm;用甲 醇重结晶。
[0033]实施例5苯并吡啶酮化合物的制备
[0034]取5kg牛皮消寥全草，粉碎，用5L甲醇/乙醇/丙酮混合液回流提取，提取物浓缩至 无醇味，用5L正丁醇萃取，萃取液浓缩，水混悬后上大孔树脂（尺寸L500mm，0 120mm) 除糖；乙醇洗下后浓缩，l〇〇g硅胶拌样，进行正相硅胶柱层析分离(200-300目，lkg;硅胶柱 尺寸L500mm，0 120mm)，依次以体积比9:1、5:1、3:1、1: 1、1:3、1:9的氯仿/甲醇混合液 进行梯度洗脱，每次5L;TLC检测馏分，收集洗脱比例3:1的馏分合并;馏分用反相硅胶柱层 析/高效液相色谱分离，洗脱剂为甲醇/水(9:1-1:9)，高效液相色谱的检测波长为254nm;用 甲醇重结晶。
[0035]实施例6苯并吡啶酮化合物的结构鉴定
[0036] 采用HPLC对制得的化合物进行纯度鉴定，纯度大于98%的样品运用质谱和核磁共 振技术进行结构鉴定，核磁共振用BrukerAVANCEDRX-500NMRSectrometer测定，TMS作内 标；高分辨质谱FTICRMS用BrukerApexSpectrometer测定；电喷雾质谱ESI-MS用Bruker Esquire3000plusSpectrometer测定。
[0037] 根据化合物的一维匪R分析结果(见表1)和二维NMR分析结果(见图1)，可知，该物 质为苯并吡啶酮化合物，分子式为C12HnN05，结构如下所示：
[0039] 表1苯并吡啶酮化合物的NMR数据
[0041] aRecordedon125MHz.
[0042] bMultiplicitiesinferredfromDEPTandHMQCexperiments.
[0043] cRecordedon500MHz.
[0044] 实施例7苯并吡啶酮化合物对酪氨酸酶抑制活性分析
[0045] 苯并吡啶酮化合物用甲醇溶解至浓度为2.5%;酪氨酸酶(28nM)与化合物孵育10 分钟;加入LD0PA(0.5mM)。化合物对酪氨酸酶的抑制活性计算公式如下：
[0046]抑制率（％) =[(B_S)/B]X100%
[0047]其中，B为空白吸收，S为样品吸收。
[0048]由实验结果知，该化合物的IC5Q= 19μΜ，表明该化合物对酪氨酸酶抑制活性较好。
[0049]实施例8含苯并吡啶酮化合物滴丸制剂的制备
[0050]取0.5g苯并吡啶酮化合物与10.5g聚乙二醇-6000混合均匀，加热熔融，化料后移 至滴丸滴灌中，药液滴至6~8°C液体石蜡中，除油，制得滴丸300粒。
[0051]实施例9含苯并吡啶酮化合物冻干粉针剂的制备
[0052] 取苯并吡啶酮化合物0.5g、葡萄糖4.5g、硫代硫酸钠0.9g和蒸馏水1000ml，上述组 分混合均匀后，冷冻干燥，分装400支，即得。
【主权项】
1. 一种苯并吡啶酮化合物，其特征在于，结构如式(I)所示：2. -种如权利要求1所述的苯并吡啶酮化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步 骤： (1) 采用有机溶剂对粉碎后的牛皮消寥（Fallopia cynanchoides(Hemsl ·) Harald. var. cynanchoides)全草进行浸提得到浸提液； 所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、正丁醇和丙酮中的一种或多种混合物； (2) 用萃取剂对步骤(1)得到的浸提液进行萃取，萃取液经浓缩后得到粗提物； (3) 对步骤（2)得到的粗提物进行层析分离和纯化处理，得到所述的苯并吡啶酮化合 物。3. 根据权利要求2所述的苯并吡啶酮化合物的制备方法，其特征在于，所述的牛皮消寥 全草与有机溶剂的重量比优选为1:1-1: 8。4. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的萃取剂为正丁醇。5. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)中，所述的提取液先进行浓 缩，然后加入硅藻土拌样，再加入所述萃取剂进行萃取。6. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)中，所述的提取液先进行浓 缩，然后加水进行混悬，再加入所述萃取剂进行萃取。7. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的层析分离为正相硅 胶柱层析分离，洗脱剂为氯仿和甲醇的混合液。8. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的纯化处理包括:反 相硅胶柱层析分离、高效液相色谱分离和重结晶中的一种或者多种。9. 根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述反相硅胶柱层析分离的洗脱剂为 甲醇和水的混合液。10. -种如权利要求1所述的苯并吡啶酮化合物在制备酪氨酸酶抑制药物、美白化妆品 或美白保健食品中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种苯并吡啶酮化合物及其制备方法和应用。该苯并吡啶酮化合物的结构如式(Ⅰ)所示，其制备方法包括：将粉碎后的牛皮消蓼全草置于有机溶剂中浸提，分离得到浸提液，再对浸提液进行萃取，萃取液经浓缩后得到提取物；对提取物进行层析分离、纯化处理，制得所述的苯并吡啶酮化合物；其中，所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、正丁醇和丙酮中的一种或多种混合物。本发明从牛皮消蓼全草中提取、分离获得了一种具有新颖结构的苯并吡啶酮化合物，该化合物对酪氨酸酶抑制活性较好，可用于制备酪氨酸酶抑制药物、美白化妆品或美白保健食品，具有良好的开发前景。
【IPC分类】A61Q19/02, A61K31/4704, A61K8/49, A23L33/105, C07D215/60
【公开号】CN105461625
【申请号】CN201510795499
【发明人】吴斌
【申请人】浙江大学
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年11月18日