一种具有医药用途的二萜化合物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物技术领域，具体涉及从干燥祖师麻中分离得到的一种具有治疗前 列腺癌作用的二萜类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 祖师麻为瑞香科(Thymelaeaceae)植物黄瑞香(Daphne giraldii Nitsche)、凹叶 瑞香(D · retusa Hemsl)、陕甘瑞香(又名唐古特瑞香）（D · tangutica Maxim)的根皮及莖皮， 其性温、味辛苦，具有祛风湿，活血止痛之功效。秋季采收，除去细根，剥取根皮和茎皮而后 晒干而成。别名：狗皮柳、祖丝麻等。主要分布在山西、陕西、四川、青海、甘肃等地。祖师麻主 要用于治疗散瘀止痛、祛风通络、胃痛、头痛、四肢麻木、风湿痹痛、跌打损伤、关节炎、类风 湿性关节痛等。该药在土耳其民间治疗类风湿性关节炎和腰腿疼痛等症效果颇佳。
[0003] 祖师麻的化学成分研究始于二十世纪七十年代，王明时等首次从祖师麻中分离得 到了香豆素类化合物，随后对祖师麻的化学成分研究就逐渐开展起来。现有研究表明祖师 麻中除了含有主要活性成分香豆素类化合物以外，还含有黄酮类、木脂素类、二萜类等多种 化合物。
[0004] 祖师麻在临床上主要应用于抗炎、镇痛以及抗疟疾等方面。近年来通过进一步的 研究发现祖师麻在抗肿瘤以及治疗肾小球肾炎等方面也有着显著的功效。现市售的成药主 要包括祖师麻片、祖师麻风湿膏、祖师麻关节止痛膏、祖师麻胶囊、祖师麻缓释微丸、祖师麻 注射液等。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从干燥祖师麻中分离得到的一种具有治疗前列腺癌作 用的二萜类化合物，本发明的另一个发明目的在于提供上述二萜类化合物制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] -种具有医药用途的二萜化合物，它具有下述结构式的化合物(I)，
[0010] 作为优选，化合物(I)从祖师麻分离获得，分离步骤包括：
[0011] S01:将祖师麻干燥、粉碎，用75~85 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇 味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃 取物和正丁醇萃取物；
[0012] S02:步骤S01中乙酸乙酯萃取物用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用75~85%乙醇洗 脱10个柱体积，收集75~85%乙醇洗脱液，减压浓缩得乙醇洗脱物浸膏；
[0013] S03:步骤S02中乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为75:1、45:1、20:1、 12:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得至1」5个组分；
[0014] S04:步骤S03中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和5:1的 二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；
[0015] S05 :步骤S04中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为 75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合 物⑴。
[0016] -种上述具有医药用途的二萜化合物的制备方法，包含以下操作步骤：
[0017] a、将干燥祖师麻粉碎，用75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味， 依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物 和正丁醇萃取物；
[0018] b、步骤a中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用 75%乙醇洗脱10个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；
[0019] C、步骤b中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为75:1、45:1、20:1、 12:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得至1」5个组分；
[0020] d、步骤C中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和5:1的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；
[0021] e、步骤d中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的 甲醇水溶液等度洗脱，收集10~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I);
[0022] 上述乙醇的浓度均为体积百分浓度。
[0023] 进一步的，所述步骤b中大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0024] 进一步的，所述步骤a中国用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为80%。
[0025] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物 组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和 惰性的可药用载体和/或赋形剂。发明人通过CCK-8法和集落形成试验已验证上述化合物 (I)对前列腺癌细胞株PC3和DU 145的作用，且抑制作用具有浓度一一时间依赖性关系。因此 化合物（I)可能成为晚期前列腺癌治疗中的一个具有潜力的选择。因此，本发明的化合物 (I)具有医药作用。
[0026] 上述可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以 及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可通 过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控释 片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的水 性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0027]图1为化合物(I)结构式；
[0028]图2为化合物（I)理论E⑶值与实验E⑶值比较；
[0029]图3为不同浓度化合物（I)作用72h后PC3和DU145存活率；
[0030]图4为10.0 mg/L化合物（I)作用不同时间后PC3和DU145存活率。
【具体实施方式】
[0031]下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0032]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0033] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0034]制备方法：（a)将干燥祖师麻（1 Okg)粉碎，用80 %乙醇热回流提取（25L X 3次），合 并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水饱和的正 丁醇(3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(431g)和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用 75 %乙醇洗脱10个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏（157g); (c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为75:1(8个柱体积）、45:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积）、12:1 (8个柱体积)和1:1 (5个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4(49g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 20:1(8个柱体积）、12:1(10个柱体积)和5:1(8个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3 个组分；（e)步骤(d)中组分2(25g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度 为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10-12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合 物（I)(35mg)。
[0035] 结构确证:册431]\^显示[]\1+他]+为111/2 511.2308，结合核磁特征可得分子式为 C27H36〇8，不饱和度为 10。核磁共振氢谱数据δΗ(ppm，DMS〇-d6，500MHz): H-1 (2 · 47，t，J = 13.5) ，H-l(1.57，dd，J=13.5,3.5)，H-2(2.54，m)，H-3(5.69，t，J = 5.0)，H-4(3.01，d，J = 5.0)，H-7(1.75，ddd，J=15.5，12.5,2.0)，H-7(1.26，m)，H-8(1.92，m)，H-8(1.54，t，J = 12.5) ，H-9(3.37，dd，J = 9