阳性对照胰岛素（100nm〇l/L)处理细胞，24小时后采用葡萄糖氧化酶法对各孔剩余培养 液的葡萄糖含量进行测定（图2)，葡萄糖消耗量=培养液原始葡萄糖含量-培养液剩余葡萄 糖含量。结果显示：与正常组(〇·56mmol/L)相比，Antroalbol Η在2·5~40ymol/L浓度范围 内呈现良好的增加脂肪细胞糖消耗的趋势，在20ymol/L浓度组达到最大值(0.94mmol/L)， 接近阳性对照胰岛素组（1.14mmol/L)。
[0037] 实施例3:
[0038] 本发明化合物Antroalbol Η对3T3-L1脂肪细胞糖消耗影响实验：
[0039]实验仪器:普通倒置光学显微镜(Leica，德国），超纯水系统，超净工作台（Thermo， 美国），低温保存箱(海尔，中国），全自动高压灭菌锅(Hirayama，日本），细胞二氧化碳培养 箱（Thermo，美国），移液枪（Eppendorf，德国），酶标仪（PerkinElmer，美国），电子天平 (Denver Instrument，美国），超低温冰箱(海尔，中国），针头过滤器(Millex-HV，美国），通 风橱窗（昆明天悦）。
[0040] 实验试剂：DMEM培养基（Hyclone，美国），小牛血清（Gibco,美国），胎牛血清 (Biological Industries，以色列），IBMX( Sigma，美国），地塞米松（Adamas )，罗格列酮 (Sigma，美国），胰岛素(Roche，瑞士），链霉素/青霉素 (Biological Industries，以色列）， 0· 25%胰酶（Biological Industries，以色列），96孔板(NEST)，DMS0(Sigma，美国），PBS，细 胞冻存管(Thermo,美国），葡萄糖检测试剂盒(上海荣盛，中国）。
[0041 ]实验方法:3T3-L1小鼠成纤维细胞购自美国模式培养物集存库(ATCC，CL-173?)。 先将冻存的在液氮罐中的细胞取出，在37°C的水浴锅中融化，接种到含有DMEM+10%CS+1% P/S培养基的10cm培养皿中，在37°C10%⑶2培养箱中培养，每隔两天换一次培养基，长到 60 %的汇合度时传代。准备分化培养的健康细胞弃培养液，加入PBS洗去血清，再加入 0.25%的胰酶消化悬浮，接种到6cm培养皿中，两天换一次培养基，至细胞长到100%的汇合 度，加入分化培养基(DMEM+10%FBS+1%P/S)，其中每10ml培养基加入20μ1 ΙΒΜΧ，10μ1胰岛 素，10μ1 Dex，ΙμL罗格列酮;72小时后弃旧培养液，换成只含胰岛素的培养基。分化成熟的 细胞胰酶消化悬浮后，接种至96孔板中，待细胞完全贴壁分别加入胰岛素或者Antroalbol H，对照组加入与样品等量DMS0的培养液，实验中Antroalbol Η的浓度梯度是2.5、5、10、20 和40ymol/L，胰岛素浓度为100ηπι〇1/Ι^24小时后，取各孔培养液进行葡萄糖含量的测定，测 定方法依照试剂盒说明书，实验结果以葡萄糖消耗量表示，葡萄糖消耗量=培养液原始葡 萄糖含量-培养液剩余葡萄糖含量。结果如前图所示:随着Antroalbol Η浓度的逐渐升高， 葡萄糖消耗量增加，即表示脂肪细胞的葡萄糖消耗能力也增加，在20umol/L时达到最佳效 果。阳性对照药胰岛素也显著提高脂肪细胞葡萄糖消耗能力，证明实验体系准确性。
[0042] 实施例4:
[0043]按实施例1制得化合物Antroalbol H，按化合物与赋形剂重量比1:1的比例加入赋 形剂，制粒压片。
[0044] 实施例5:
[0045]按实施例1制得化合物Antroalbol H，按常规胶囊制剂方法制成胶囊。
[0046] 实施例6:
[0047]按实施例1制得化合物Antroalbol H，按化合物与赋形剂重量比1:2的比例加入赋 形剂，制粒压片。
[0048] 实施例7:
[0049]按实施例1制得化合物Antroalbol H，按化合物与赋形剂重量比1:3的比例加入赋 形剂，制粒压片。
[0050] 实施例8
[0051 ]片剂：Antroalbol H 100mg
[0052] 淀粉 l〇〇mg
[0053] 玉米浆17 % 适量
[0054] 硬脂肪镁适量
[0055] 实施例9:
[0056] 胶囊剂:Antroalbol H 100mg
[0057] 淀粉 l〇〇mg
[0058] 硬脂肪镁适量
[0059]制备方法:将An troal bo 1 Η与助剂混合，过筛，在合适的容器中均匀混合，把得到 的混合物装入硬明胶胶囊。
【主权项】
1. 下述结构式（1)所示的化合物lAntroa化ol Η或其药学上可接受的盐，2. 如权利要求1所述的化合物1，其特征在于该化合物包括立体异构体和互变异构体。3. 如权利要求1所述的化合物1或其药学上可接受的盐，其中所述的药学上可接受的盐 为盐酸盐、氨漠酸盐、硝酸盐、硫酸盐、憐酸盐、酒石酸盐、巧樣酸盐、甲酸盐、乙酸盐、乙二酸 ±h πττ. ο4. 权利要求1所述的化合物1的制备方法，该方法包括下述步骤:取高等真菌白黄小薄 孔菌(Antrodiella a化ocinnamomea)，通过液体发酵，用乙酸乙醋溶剂萃取，所得提取物反 复用硅胶、RP-18和Se地adex LH-20柱层析分离，得化合物lAntroa化〇1 H。5. 如权利要求4所述的化合物1的制备方法，其特征在于该方法是对白黄小薄孔菌斜面 菌种采用转摇瓶液体培养的方法进行发酵培养，培养规模300mL X 60瓶;培养基为:葡萄糖 5%，猪肉蛋白腺0.15 %，酵母粉0.5 %，K出Κ)4和MgS〇4各0.05% ;培养条件为摇床培养，在恒 溫24°C、转速15化pm条件下摇床暗培养26天;过滤，除去菌丝，滤液用乙酸乙醋萃取3次，减 压浓缩得到乙酸乙醋提取物，经硅胶柱层析用100:0-0:100的氯仿/甲醇系统梯度洗脱得4 个组分A-D，组分B经过Sephadex LH-20 CHCb-MeOH，1:1柱层析分离得到Ξ个亚组分B1- B3，组分B3经RP-18水/甲醇，100:0-0:100分离得到9个组分B3a-B3 j，其中B3c经过反复硅胶 柱层析和Se地adex LH-20C肥13-MeOH, 1:1和C册C0C册柱层析分离得到化合物1。6. 用于治疗和预防糖尿病的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的化 合物1或其药学上可接受的盐和载体。7. 权利要求1所述的的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗和预防糖尿病的药物 中的应用。8. 权利要求6所述的的药物组合物在制备治疗和预防糖尿病的药物中的应用。
【专利摘要】本发明提供一种新的具有药用价值的化合物Antroalbol？H，及从白黄小薄孔菌(Antrodiella？albocinnamomea)发酵液中提取该化合物的方法，同时提供一种以式1化合物为活性成分用于治疗糖尿病的药物组合物，以及该化合物及其药物组合物在制备治疗和预防糖尿病药物方面的应用。
【IPC分类】C07C45/81, C07C49/573, C12P7/26, A61P3/10, A61K31/122
【公开号】CN105566088
【申请号】CN201610003454
【发明人】刘吉开, 熊文勇, 王芳, 杨晓艳
【申请人】中国科学院昆明植物研究所
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月4日