n T-REx-293细胞中，构建URAT1高表达细胞293/hURATl，测定转染细胞摄取放射性同 位素标记尿酸的能力。通过测定化合物阻断转染细胞摄取尿酸的能力来评价化合物的活 性。
[0375]将293/hURATl细胞以40000细胞/孔的密度接种于多聚D-赖氨酸包被的96孔板 (BD，356461)中孵育过夜。移除培养基，加入预热的反应缓冲液（125mM葡萄糖酸钠，4.8mM葡 萄糖酸钾，1.3mM葡萄糖酸|丐，1.2mM磷酸二氢钾，1.2mM硫酸镁，5.6mM葡萄糖，25mM HEPES， ρΗ7·4)，37°C孵育10分钟。移除缓冲液，加入含有50μΜ 14C-尿酸(American Radiolabeled Chemical s，ARC0513)以及化合物或溶剂的反应缓冲液，37 °C孵育5分钟。移除缓冲液，用缓 冲液洗3次。加入100mM NaOH裂解细胞20分钟。将细胞裂解液转移到Isoplate-96孔板 (PerkinElmer，6005040)中，加入焚光闪烁液，在MicroBeta 2(PerkinElmer)计数器中计数。
[0376] 测试中使用的化合物均溶解于DMS0中，并且以相同浓度的DMS0为不含化合物的溶 剂对照。将含有DMS0溶剂对照的细胞中尿酸的摄取量作为100 %，计算各化合物测试孔中细 胞摄取尿酸的抑制率百分比，通过不同浓度下化合物的尿酸摄取抑制率计算IC50值。
[0377] 本发明所述化合物原型根据如上方案进行检测，结果示于下表中（前药及盐型参 照原型，体外数据无需进行检测），其中：
[0378] A 表示 IC50 在 30μΜ_100μΜ 范围内；
[0379] Β 表示 IC50 在 15μΜ-30μΜ 范围内；
[0380] C表示IC50在 1μΜ_15μΜ范围内·
[0381]
【主权项】
1. 一种具有通式I所代表的苯并咪唑类衍生物及其药学上可接受的盐、及药学上可接 受的前药，其化学结构如下： 式I其中： RjPR2选自氢原子、烷基、苯基或有取代基的苯基(取代基包括但不限于卤素、氰基、烷 基、烷氧基、酯基、N-酰基衍生物，N-酰氧基衍生物、氨基酸偶联物）； R3选自氢原子、卤素、氰基、&-6直链或支链烷基或烷氧基； R4为烷基、苯基、有取代基的苯基、萘基或有取代基的萘基(取代基包括但不限于卤素、 氰基、烷基、烷氧基、酯基、N-酰基衍生物，N-酰氧基衍生物、氨基酸偶联物）； Μ为氢原子、烷基、氨基、酯基或药学上可以接受的阳离子。2. 根据权利要求1所述的苯并咪唑类衍生物及其药学上可接受的盐、及药学上可接受 的前药，其特征在于，所述药学上可接受的盐为Na、K、Li、Ca、]\felkd;i^&Na、K、Li&。3. 根据权利要求1所述的苯并咪唑类衍生物及其药学上可接受的盐、及药学上可接受 的前药，其特征在于，所述药学上可接受的前药，包括但不限于酯、碳酸酯、硫代碳酸酯、N-酰基衍生物、N-酰氧基衍生物、氨基酸偶联物。4. 根据权利要求1所述的苯并咪唑类衍生物及其药学上可接受的盐、及药学上可接受 的前药，其特征在于，选自以下化合物： 2-甲基-2-[ [5-甲氧基-1-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸（II); 2-甲基-2-[[l-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸（12); 2-甲基_2-[ [5-溴-1-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸（13); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-苯腈基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸（I4); 2-甲基-2-[ [1-(4-环丙基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸（15); 2-(4-氯苯基)-2-[[1-(4_环丙基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]乙酸（16); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-硝基-2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸（I7); 2-甲基-2-[(1 -苯基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)巯基]丙酸（I8); 2-甲基-2-[(l-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)巯基]丙酸（19); 2-甲基-2-[ [1-(4-乙酰氨基-2-氟苯基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸（110); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-溴-2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸（I11); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-氯-2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸（I12); 2-甲基-2-[[ 1 -(2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸（I13); 2-甲基-2-[ [5-甲氧基-1-(4-氰基萘-1-基）-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钠 （I 14); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-乙酰氨基-2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钠（I15); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-溴-2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钠 （I16); 2-甲基-2-[ [1-(4-硝基-2-氟苯基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钠（117); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-苯腈基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钠（I18); 2-甲基-2-[ [1-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钠（119); 2-甲基-2-[ [1-(4-环丙基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钠（120); 2-甲基-2-[(l-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)巯基]丙酸钠（121); 2-甲基-2-[ [1-(2-氟苯基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钠（122); 2-甲基-2-[ [1-(4-氯-2-氟苯基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钠（123); 2-甲基_2-[ [5-溴-1-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钠（124); 2-甲基-2-[(l-苯基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)巯基]丙酸钠（125); 2-(4-氯苯基）-2-[[1-(4_环丙基萘-1-基）-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]乙酸钠 （I 26); 2-甲基-2-[ [5-甲氧基-1-(4-氰基萘-1-基）-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钾（I 27); 2-甲基-2-[ [1-(4-乙酰氨基-2-氟苯基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钾（128); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-溴-2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钾（I29); 2-甲基-2-[ [1-(4-硝基-2-氟苯基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钾（130); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-苯腈基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钾（I31); 2-甲基-2-[ [1-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钾（132); 2-甲基-2-[ [1-(4-环丙基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钾（133); 2-甲基-2-[(l-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)巯基]丙酸钾（134); 2-甲基-2-[ [1-(2-氟苯基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钾（135); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-氯-2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钾（I36); 2-甲基_2-[ [5-溴-1-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸钾（137); 2-甲基-2-[(l-苯基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)巯基]丙酸钾（138); 2-(4-氯苯基）-2-[[1-(4_环丙基萘-1-基）-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]乙酸钾（I 39) ; 2-甲基_2-[ [5-甲氧基-1-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸甲酯（I 40) ； 2-甲基-2-[[ 1-(4-乙酰氨基-2-氟苯基）-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸甲酯（I 41) ； 2-甲基-2-[[ 1 -(4-溴-2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸甲酯（I42); 2-甲基-2-[ [1-(4-硝基-2-氟苯基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸甲酯（143); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-苯腈基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸甲酯（I44); 2-甲基-2-[ [1-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸甲酯（145); 2-甲基-2-[ [1-(4-环丙基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸甲酯（146); 2-甲基-2-[(l-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)巯基]丙酸甲酯（147); 2-甲基-2-[[ 1 -(2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸甲酯（I48); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-氯-2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸甲酯（I49); 2-甲基-2-[ [5-溴-1-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸甲酯（150); 2-甲基-2-[(1 -苯基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)巯基]丙酸甲酯（I51); 2-(4-氯苯基)-2-[[1-(4_环丙基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]乙酸甲酯（I 52) ; 2-甲基_2-[ [5-甲氧基-1-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸乙酯（I 53) ; 2-甲基-2-[[ 1-(4-乙酰氨基-2-氟苯基）-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸乙酯（I 54) ; 2-甲基-2-[[ 1 -(4-溴-2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸乙酯（I55); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-硝基-2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸乙酯（I56); 2-甲基-2-[ [1-(4-苯腈基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸乙酯（157); 2-甲基-2-[ [1-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸乙酯（158); 2-甲基-2-[ [1-(4-环丙基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸乙酯（159); 2-甲基-2-[(l-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)巯基]丙酸乙酯（160); 2-甲基-2-[ [1-(2-氟苯基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸乙酯（161); 2-甲基-2-[[ 1 -(4-氯-2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸乙酯（I62); 2-甲基_2-[ [5-溴-1-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸乙酯（163); 2-甲基-2-[ (1-苯基-1H-苯并[d ]咪唑-2-基)巯基]丙酸乙酯（164); 2-(4-氯苯基)-2-[[1-(4_环丙基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]乙酸乙酯（I 65); (5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基）甲基2-甲基-2-[ [5-甲氧基-1-(4-氰基萘- 1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸酯（166); (5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基）甲基2-甲基-2-[ [1-(4-乙酰氨基-2-氟苯 基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸酯（167); (5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基）甲基2-甲基-2-[ [1-(4-溴-2-氟苯基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸酯（168); (5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基）甲基2-甲基-2-[ [1-(4-硝基-2-氟苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸酯（169); (5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基）甲基2-甲基-2-[ [1-(4-苯腈基)-1Η-苯并 [d]咪唑-2-基]巯基]丙酸酯（I70); (5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基）甲基2-甲基-2-[[l-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸酯（I71); (5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基）甲基2-甲基-2-[ [1-(4-环丙基萘-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸酯（I72); (5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基）甲基2-甲基-2-[(l-甲基-1H-苯并[d]咪 唑-2-基)巯基]丙酸酯（173); (5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基）甲基2-甲基-2-[ [1-(2-氟苯基)-1Η-苯并 [d]咪唑-2-基]巯基]丙酸酯（174); (5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基）甲基2-甲基-2-[ [1-(4-氯-2-氟苯基)-1Η- 苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸酯（I75); (5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基）甲基2-甲基-2-[ [5-溴-1-(4-氰基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]丙酸酯（176); (5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基）甲基2-甲基-2-[(l-苯基-1H-苯并[d]咪 唑-2-基)巯基]丙酸酯（177); (5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基）甲基2-(4-氯苯基)-2-[ [1-(4-环丙基萘-1-基)-1Η-苯并[d]咪唑-2-基]巯基]乙酸酯（178)。5.权利要求1所述的苯并咪唑类衍生物及其药学上可接受的盐、及药学上可接受的前 药的制备方法，包括以下步骤： (1) 使式Π 所示化合物与式m所示化合物在碱的作用下生成式IV所示化合物： II 111IV (2) 使式IV所示化合物在还原剂作用下生成式V所示化合物： IVV (3) 使式V所示化合物与硫光气反应生成式VI所示化合物：(4) 使式VI所示化合物在碱性条件下与式W所示化合物反应生成式珊所示化合物：Y1 W Μ (5) 使式VI所示化合物在碱性条件下水解生成式IX所示化合物：m ιχ： (6) 使式IX所示化合物与相应的碱反应生成式X所示化合物，Mi代表可药用阳离子：IX X (7) 使式IX所示化合物与草酰氯反应酰化，然后与相应的醇或氨反应生成式?所示化 合物，Μ2代表&- 3烷基、氨基、酯基Ε XI ?6. -种药物组合物，其特征在于，以权利要求1-4任一项所述的苯并咪唑类衍生物及其 药学上可接受的盐、及药学上可接受的前药作为药物活性成分。7. 权利要求1所述的苯并咪唑类衍生物及其药学上可接受的盐、及药学上可接受的前 药在制备调节尿酸水平和/或治疗痛风的药物中的应用，或，权利要求6所述的药物组合物 在制备调节尿酸水平和/或治疗痛风的药物中的应用。8. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用所对应的相关适应症为高尿酸血 症、痛风、痛风性关节炎、炎症性关节炎、肾病、肾石病、关节炎症、尿酸盐结晶在关节中沉 积、尿石症、尿酸盐结晶在肾实质中沉积、痛风发作、痛风石性痛风或其组合。9. 权利要求1所述的苯并咪唑类衍生物及其药学上可接受的盐、及药学上可接受的前 药，与第二种治疗痛风的药剂联合使用或者制备成药物组合物，在制备调节尿酸水平和/或 治疗痛风的药物中的应用。10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于，第二药剂为URAT1抑制剂、黄嘌呤氧化酶 抑制剂、黄嘌呤脱氢酶、黄嘌呤氧化还原酶抑制剂、嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂、尿酸转运体 抑制剂、葡萄糖转运体抑制剂、有机阴离子转运体(ΟΑΤ)抑制剂、0ΑΤ-4抑制剂或组合，第二 药剂优选为别嘌醇、非布索坦、托匹司他或其组合。
【专利摘要】本发明属于医药领域，涉及一系列苯并咪唑类的衍生物及其可药用盐和药学上可接受的前药的制备方法、包含所述衍生物的药物组合物、以及所述衍生物和药物组合物在制备抗痛风药物和治疗相关疾病中的用途。
【IPC分类】C07D235/28, C07D405/12, A61K31/4184, A61P19/02, A61P13/12, A61P29/00, A61P13/04, A61P19/06
【公开号】CN105601571
【申请号】CN201510968215
【发明人】杨琰, 王文峰, 扈占坤, 孙翔宇
【申请人】华润赛科药业有限责任公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2015年12月22日