lianmeatindustry-precisionandaccuracyofpredictingleanmeat yieldinlambcarcass[J]·MeatScience, 2004, 67:269-274)评估总肉产量（腿部、腰部 和肩部肉产量之和）。
[0033] 应用一般线性混合效应模型（GLMM)评估特定等位基因存在/缺失对生产性状的 影响。针对目标性状，等位基因存在缺失分别定义为1和〇,考虑等位基因效应，性别效应 及出生等级（单羔和多羔）为固定因素，家系效应为随机因素，配合下列模型进行最小二乘 方差分析，
[0034] Yijkng=I1+Mi+Gj+ffg+Ck+Xn+eijkng
[0035] 其中：Y1]kng为性状；μ为群体平均值;Μ$基因型，等位基因效应；G,为出生等级 效应；Wg为性别效应；Ck为家系效应；Xns二级或二级以上互作效应；eljkng为随机残差效 应。
[0036] 分析结果采用"平均数+标准误"，P〈0. 05为显著水平，P〈0. 1表示有影响趋势， P>0. 15表示无影响。
[0037] 根据上述分析鉴定结果，绵羊肉用性能评估等级分别为等位基因A为优质（高产 肉性能），等位基因B和C对总产肉量有影响趋势（P〈0. 1)，为良好，等位基因B存在时具有 较高的总产肉量（51.207±0. 179Kg)，而等位基因C总产肉量较低（51.027±0. 165Kg)，所 以评估等位基因B同样可参考作为绵羊肉用性能基因标记。等位基因D合格，等位基因E 建议淘汰。
[0038] 本申请人对绵羊特异主效基因FABP4进行检测，共发现5种等位基因（A、B、C、D和 E)，分析了 5种等位基因对绵羊产肉性能指标的影响，确定绵羊高产肉性能特异等位基因： 将等位基因A和B作为绵羊肉用性能基因标记，建立绵羊肉用性能特异主效基因等位基因 的标记辅助选择技术。应用本实用新型试剂盒能够快速的完成绵羊肉用性能的检测，从而 判断是否留做种用。
[0039] 本实用新型的绵羊肉用性能特异主效基因等位基因检测试剂盒将检测过程中所 使用的多种试剂存放在一起，使用方便。
【附图说明】
[0040] 附图用来提供对本实用新型的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本实用 新型的实施例一起用于解释本实用新型，并不构成对本实用新型的限制。在附图中：
[0041] 图1为绵羊肉用性能特异主效基因等位基因SSCP带型图；
[0042] 图2为绵羊肉用性能特异主效基因等位基因检测试剂盒结构图。
【具体实施方式】
[0043] 以下的实施例便于更好地理解本实用新型，但并不限定本实用新型。下述实施例 中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说 明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
[0044] 实施例1
[0045] 本实用新型所述的绵羊肉用性能特异主效基因等位基因检测试剂盒的具体结构 参见图2,其中，10 :盒盖；11 :盒体；12 :衬垫，衬垫上设有9个容器孔。各个孔内分别装有 以下物质：
[0046] 1 :5ml20mMNaOH试剂；2 孔：5ml1 倍TE溶液；3 孔：2ml
[0047] PCR混合试剂（buffer、去离子水、MgCl2溶液、dNTP、5倍Q溶液、Taq聚合酶）；4 孔：0. 5ml特异性上下游引物混合溶液，0. 5ml等位基因标准DNA样本；5孔：5ml银染液；6 孔：10ml40%的丙烯酰胺溶液；7孔：0.5ml变性上样缓冲液；8孔：2mlTEMED溶液和2ml 10%的过硫酸铵溶液；9孔：特殊DNA承载滤纸。
[0048] 等位基因标准DNA样本包括等量的FABP4*A标准DNA样本、FABP4*B标准DNA样 本、FABP4*C标准DNA样本、FABP4*D标准DNA样本和FABP4*E标准DNA样本。所述FABP4*A 标准DNA样本的核苷酸序列参见序列表中SEQIDNo. 1，所述FABP4*B标准DNA样本的核苷 酸序列参见序列表中SEQIDNo. 2,所述FABP4*C标准DNA样本的核苷酸序列参见序列表 中SEQIDNo. 3,所述FABP4*D标准DNA样本的核苷酸序列参见序列表中SEQIDNo. 4,所 述FABP4*E标准DNA样本的核苷酸序列参见序列表中SEQIDNo. 5。
[0049] 现就绵羊肉用性能分子选种技术为例，对本实用新型试剂盒的操作方法进行进一 步详细地说明。
[0050] 一、试验材料
[0051] 本实用新型绵羊样品220份采自新西兰罗姆尼羊群体，采用NaOH两步法提取绵羊 基因组DNA。
[0052] 二、试验方法
[0053] 1、基因组DNA的提取
[0054] 本实用新型采用NaOH法提取DNA。FTA卡打孔（直径1.2mm)取样，200微升 20mMNa0H浸泡血样小点30分钟，吸净变色液体加入200微升1倍TE室温放置5分钟，吸净 残液待血样小点干燥后进行PCR扩增。
[0055] 2、引物设计和PCR扩增
[0056] 上游引物Up:TGTGGGCTTTGCTACCAG;
[0057] 下游引物Dn:ACTTAGATGAAGGTGCTCTG。
[0058] PCR反应体系为：
[0059] 10XPCR缓冲液（2. 5mM) 2 Mg2+ (3.0μM) L2μ1 5XQ溶液（1·5ιηΜ) 2μ1 dNTP(150μΜ) 1,2 :μ1 上下游混合引物（0。25 ΡΜ) 1μ1 Taq聚合酶 0. 5U 0:· :1U: 1 模板DNA用量 1个滤纸小圆盘（I. 2mm) 双蒸水 Μ.5:μL?
[0060] PCR反应条件为：预变性95°C5分钟，变性94°C30秒，退火温度60°C30秒，延伸 温度72°C45秒，最后延伸温度72°C10分钟。得到的350bp大小的PCR产物，可直接进行 SSCP〇
[0061] 3.SSCP检测及结果判定
[0062] 为保证检测样本DNA等位基因判读的准确性，等位基因标准DNA与待测样本DNA同时进行SSCP电泳，参照等位基因标准DNA样本判定检测样本等位基因类型。
[0063] 待测样本DNA的SSCP电泳如下：将PCR产物20微升与60微升SSCP上样缓冲液 (98%去离子甲酰胺、10mMEDTA、0.025%溴酚蓝、0.025%二甲苯青FF)混合，加热器105°C 变性5分钟后，立即冰上冷却10分钟，14%非变性聚丙烯酰胺凝胶在室温7. 5°C、冷循环 4. 2°C、390V电压下电泳19小时，银染后，观察带型。
[0064] 如SSCP带型与图1中A相符则为高产肉性能绵羊品种，SSCP带型与图1中B相 符产肉性能良好的绵羊品种。SSCP带型与图1中C或D相符为合格，SSCP带型与图1中E 相符建议淘汰。
[0065] 最后应说明的是：以上所述仅为本实用新型的优选实施例而已，并不用于限制本 实用新型，尽管参照前述实施例对本实用新型进行了详细的说明，对于本领域的技术人员 来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征 进行等同替换。凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等， 均应包含在本实用新型的保护范围之内。
【主权项】
1.绵羊肉用性能特异主效基因等位基因检测试剂盒，包括盒体（11)、盒盖（1ο)和衬垫 (12)，在衬垫（12)上设有9个容器孔，其特征在于：所述容器孔分3列放置，每列之间设有 挡板或凹槽；左列上部设有容器孔（9)，容器孔（9)为长方体形，左列下部横向并排设有两 个容器孔，分别为容器孔（1)和容器孔（2);中间列设有竖向的两个容器孔，分别为容器孔 (3)和容器孔（4)，所述容器孔（4)的直径大于所述容器孔（3)的直径；右列设有竖向的四个 容器孔，分别为容器孔（5 )、容器孔（6 )、容器孔（7 )和容器孔（8 )。
【专利摘要】本实用新型提供绵羊肉用性能特异主效基因等位基因检测试剂盒，包括盒体（11）、盒盖（10）和衬垫（12），在衬垫（12）上设有9个容器孔，在容器孔中分别放置特异性上下游引物混合溶液和FABP4基因的等位基因的标准样（4）以及PCR反应液（3）；所述FABP4基因的等位基因的标准样由等量的FABP4*A的标准样、FABP4*B的标准样、FABP4*C的标准样、FABP4*D的标准样和FABP4*E的标准样组成。本实用新型的绵羊肉用性能特异主效基因等位基因检测试剂盒将检测过程中所使用的多种试剂存放在一起，使用方便。
【IPC分类】C12Q1/68, C12M1/34
【公开号】CN205046120
【申请号】CN201520150321
【发明人】闫伟, 胡江, 罗玉柱
【申请人】甘肃农业大学
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年3月17日