>[0067] 下面利用实施例对本发明进行更详细的说明。
[0068] 实施例
[0069](一）标准溶液配制
[0070] 选择31种氨基酸的混合标准溶液，这31种氨基酸依次为：牛磺酸、尿素、天冬氨 酸、羟脯氨酸、苏氨酸、丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、肌氨酸、氨基乙酸、丙氨酸、瓜氨酸、α -氨 基丁酸、缬氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、氨 基丁酸、Y -氨基丁酸、色氨酸、乙醇胺、羟赖氨酸、氨、赖氨酸、组氨酸、肌肽、精氨酸；氨基 酸混合标准溶液浓度为：〇·25 μ mol/mL(Pickering, calibration standard);依次用洗脱 液稀释为：0· 005 μ mol/mL、0. 0125 μ mol/mL、0. 025 μ mol/mL、0. 05 μ mol/mL、0. 25 μ mol/mL 五个梯度。
[0071] (二）测定条件
[0072] (1)色谱条件：
[0073] A、色谱柱采用：
[0074] 预柱：阳离子交换锂保护柱，内径2. 0X20mm, 5 μ m(购自Pickering公司的 Pickering Laboratories Catalog No. 0352020)
[0075] 分析柱：高效阳离子交换锂柱，内径4. OX 100mm，5 μ m(购自Pickering公司的 Pickering Laboratories Catalog No. 0354100T)
[0076] B、流动相为：购自Pickering公司的锂离子洗脱液Li275(pH2. 75)、 Li750(pH7. 50)
[0077] 梯度洗脱程序为：
[0078]
[0079] C、流速：0· 37mL/min，进样量 20 μ L
[0080] D、柱温程序
[0081] CN 105092718 A 说明书 6/17 页
[0082] (2)柱后衍生条件：
[0083] A、柱后衍生反应温度：125°C
[0084] B、柱后衍生反应容量：0. 5mL
[0085] C、柱后衍生试剂：购自Pickering公司的讳三酮试剂
[0086] D、流速：0· 3mL/min。
[0087] (三）标准曲线的绘制
[0088] 使用日本岛津液相色谱仪LC-20AD和Pickering公司的氨基酸柱后衍生装置 Pinnacle PCX检测上述氨基酸混合标准溶液后，分别以峰面积-浓度作图，得到标准曲线 回归方程，如下所示。
[0089] 1、牛磺酸
[0090] 其峰面积-浓度标准曲线图如图1所示，从图1得到线性回归方程为：
[0091] Y = aX+b
[0092] a = 8. 98644e-008
[0093] b = 6. 369296e-004
[0094] R'2 = 0. 9999988
[0095] R = 0. 9999994
[0096] 外标法
[0097] 曲线拟合类型：线性
[0098] 原点：未强制
[0099] 加权：无
[0100] 平均 RF: 9. 365528e-008
[0101] RF SD:4. 02271 le-009
[0102] RF % RSD :4. 295231
[0103] 2、尿素
[0104] 其峰面积-浓度标准曲线图如图2所示，从图2得到线性回归方程为：
[0105] Y = aX+b
[0106] a = 3. 391365e-006
[0107] b = I. 316433e-003
[0108] R'2 = 0. 9998763
[0109] R = 0. 9999381
[0110] 外标法
[0111] 曲线拟合类型：线性
[0112] 原点：未强制
[0113] 加权：无
[0114] 平均 RF:3. 681337e_006
[0115] RF SD:3. 875297e-007
[0116] RF% RSD:10. 52688
[0117] 3、天冬氨酸
[0118] 其峰面积-浓度标准曲线图如图3所示，从图3得到线性回归方程为：
[0119] Y = aX+b
[0120] a = 8. 233558e-008
[0121] b = I. 942854e-004
[0122] R'2 = 0. 9999929
[0123] R = 0. 9999964
[0124] 外标法
[0125] 曲线拟合类型：线性
[0126] 原点：未强制
[0127] 加权：无
[0128] 平均 RF:8. 254781e_008
[0129] RF SD:1. 449103e-009
[0130] RF% RSD:1. 755471
[0131] 4、羟脯氨酸
[0132] 其峰面积-浓度标准曲线图如图4所示，从图4得到线性回归方程为：
[0133] Y = aX+b
[0134] a = 4. 994522e-006
[0135] b = 3. 679774e-004
[0136] R'2 = 0. 9995992
[0137] R = 0. 9997996
[0138] 外标法
[0139] 曲线拟合类型：线性
[0140] 原点：未强制
[0141] 加权：无
[0142] 平均 RF: 4. 802750e_006
[0143] RF SD:6. 047676e-007
[0144] RF % RSD :12. 59211
[0145] 5、苏氨酸
[0146] 其峰面积-浓度标准曲线图如图5所示，从图5得到线性回归方程为：
[0147] Y = aX+b
[0148] a = 7. 954622e-008
[0149] b = 9. 531137e-004
[0150] R'2 = 0. 9998900
[0151] R = 0. 9999450
[0152] 外标法
[0153] 曲线拟合类型：线性
[0154] 原点：未强制
[0155] 加权：无
[0156] 平均 RF:8. 139004e_008
[0157] RF SD:2. 894489e-009
[0158] RF% RSD:3. 556318
[0159] 6、丝氨酸
[0160] 其峰面积-浓度标准曲线图如图6所示，从图6得到线性回归方程为：
[0161] Y = aX+b
[0162] a = 7. 71974e-008
[0163] b = I. 189979e-003
[0164] R'2 = 0. 9999866
[0165] R = 0. 9999933
[0166] 外标法
[0167] 曲线拟合类型：线性
[0168] 原点：未强制
[0169] 加权：无
[0170] 平均 RF: 8. 405820e_008
[0171] RF SD:8. 374029e-009
[0172] RF % RSD :9. 962180
[0173] 7、天冬酰胺
[0174] 其峰面积-浓度标准曲线图如图7所示，从图7得到线性回归方程为：
[0175] Y = aX+b
[0176] a = I. 128944e-007
[0177] b = 8. 154756e-004
[0178] R'2 = 0. 9999799
[0179] R = 0. 9999899
[0180] 外标法
[0181] 曲线拟合类型：线性
[0182] 原点：未强制
[0183] 加权：无
[0184] 平均 RF: I. 172985e_007
[0185] RF SD:4. 30781 le-009
[0186] RF% RSD:3. 672520
[0187] 8、谷氨酸
[0188] 其峰面积-浓度标准曲线图如图8所示，从图8得到线性回归方程为：
[0189] Y = aX+b
[0190] a = 7. 783641e-008
[0191] b = 4. 977117e-004
[0192] R'2 = 0. 9999766
[0193] R = 0. 9999883
[0194] 外标法
[0195] 曲线拟合类型：线性
[0196] 原点：未强制
[0197] 加权：无
[0198] 平均 RF: 7. 892650e_008
[0199] RF SD:1. 830097e-009
[0200] RF% RSD:2. 318736
[0201] 9、肌氨酸
[0202] 其峰面积-浓度标准曲线图如图9所示，从图9得到线性回归方程为：
[0203] Y = aX+b
[0204] a = 4. 89576e-〇07
[0205] b = 2. 691175e-003
[0206] R'2 = 0. 9997014
[0207] R = 0. 9998507
[0208] 外标法
[0209] 曲线拟合类型：线性
[0210] 原点：未强制
[0211] 加权：无
[0212] 平均 RF: 5. 460605e_007
[0213] RF SD:4. 705813e-008
[0214] RF% RSD:8. 617750
[0215] 10、氨基乙酸
[0216] 其峰面积-浓度标准曲线图如图10所示，从图10得到线性回归方程为：
[0217] Y = aX+b
[0218] a = 8. 230658e-008
[0219] b = 4. 62648e-004
[0220] R'2 = 0. 9999948
[0221] R = 0. 9999974
[0222] 外标法