一种含LncRNA的药物组合物及其用图
【技术领域】
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[0001]本发明属于医药生物技术领域，涉及一种内源性长链非编码RNA的新药及其用途，特别是一种含LncRNA的药物组合物及其用途。
【背景技术】
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[0002]心血管疾病主要包括高血压、冠心病和充血性心力衰竭等，心血管疾病是人类健康的头号杀手，全世界范围内每年有一千七百万人死于心血管疾病，其死亡率已接近所有癌症死亡率的总和。随着人民生活水平日益提高和饮食结构的改变，心血管疾病死亡率呈明显上升趋势，已超过癌症成为第一大致死原因，预防和治疗心血管疾病仍然是医学与生物学的重大任务。心肌肥大是指组织水平上心肌组织的增厚和细胞水平上心肌细胞体积的增大的总称，是由于心肌细胞体积增大而导致心脏体积增大所发生的一种疾病。该病是由一些生理和病理因素的共同刺激而发生的，是许多心血管疾病的综合性表现；心肌肥大是心肌病的一种，是心肌细胞针对于血液动力学增加的一种应答反应，多种情况可引起人体内血液动力的增加，如高血压，心脏瓣膜疾病。长期的超负荷血液动力刺激会引起以心肌细胞体积增大为特征的心肌细胞重塑过程，就是心肌肥大。现在一般认为存在两种情况的心肌肥大，一种是正常的生理性肥大，比如出生后伴随着发育发生的心肌肥大，还有体育锻炼引起的心肌肥大；另外一种是病理性心肌肥大，其早期特征是室壁和室间隔增厚，心肌收缩功能增强，因此被视为代偿性肥大，如果病情一直未得到缓解，心肌肥大后期会发生心室壁间质纤维化、心肌细胞收缩功能失调以及能量代谢，基因表达和电生理特征的异常，最终导致心脏功能衰竭。鉴于心肌肥大的发生是一个进行性不可逆过程，而且最终会引起心力衰竭，现代医学已经把它作为心脏发生临床病变的一个里程碑式的心肌形态变化，认为它是导致心脏疾病和心脏猝死的一个危险因素。
[0003]通常，LncRNA是指大于200个核苷酸的非编码RNA，与其他非编码RNA相比较，LncRNA具有类型多、作用模式多和数量多的特点；LncRNA可以通过改变染色质的结构来调节基因的表达，也可以通过顺式或反式方法来沉默或激活一个基因或一个基因家族，甚至整条染色体。由于LncRNA功能很广泛，所以LncRNA与心脏疾病的关系已经引起了人们的重视。现在LncRNA在心脏中的表达调控以及功能尚且不为人们所知，我们想对这类在心脏中表达的LncRNA进行表达调控以及功能的研宄，从而加深人们对心肌肥大等相关心脏疾病的了解，提供新的药物作用靶点。
【发明内容】
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[0004]本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，提供一种含LncRNA核苷酸序列的药物组合物及其用途，本发明确定或发现调控心肌细胞肥大的在心脏中表达的LncRNA，进一步确定其在心脏疾病中的作用，并将其应用于防治这些心脏疾病的药物。
[0005]为了实现上述目的，本发明涉及的LncRNA核苷酸序列如下列SEQ ID NO:1所示:
[0006]SEQ ID NO:1:
[0007]TTTTTTTTTATTTATTTATTTTTTGGTTATTTCTGACTAGTACTTGAATTACCCTCATTGGATTATTCATTGGTTACTATGATAGTATTGATCAATGTAATATACTGATTACTATTATAACCCATAATTATTATTCATGGTTAGTATATATAATATTTATATTGTATTTGACACATATGTCAAATGATATAATTTTTTGTAGTACATTAAGTATGCTTAGGAGAATTTTAAAAGAGGTGAGAAGATTTATCAAAAGGAGGCATCCATTATCTCTCCTGAGATTTGCAACCACCGTTTTAGTGGATTTTTGCTGTTGCTGGCAAAGAAGAACTAATCTCTTTGAGGTATCACGTTACAAAAATGCAAACATTGGGTAAGTACAGAAGGCAAACTGCCTCTGTTCTATGAGAAATAGTTTTAATGATGACACGGATTTGAAATCCAAACCTGTGAGTTTGAGTCATGTGTCCCTCACTGTTGGTATCAACTTTTAACTTAGAATCATCTGGAAAATGAGTGACAATTGAGGAATATTCTAGACAAAGTTGTCTGTGAGTATTTCTGTAGGATTGTCTTGACTGTTAGTTGATTTAGCCCCTTGTTGGCAGCAGAATTCCTTAGCAGAGATCCTAAACTCTGCAAGATAGGAGAAATCTAGCTGAGAGAAACAAGCAAGCAGCCTGGTCCAGTTGTTTCTCTCTGCTCTTAACTGTGATATCATATAACTAGCTACTTGAGTGTGTGCCTTTCCTTCCCCACTTGATAGAATATTGTAGGACCATGAAAAGCAGCTTGTTTTCTGGTCAAGCTAGATTTAAACCCTGGAAACCCAGCAGGTGTTTCTACAAGGGACAGAGGCCTGTTTGCCATCCTACCAGACACAAGGCTTACGATGCTCCAGCTCCATAATTCTGTTACCATCAGTCATGTAGGGCAAACCGCCCCCTCCCCACCCAAGCCCCTGGTATTCTGTCTGGACTCCACCCCCACAGTAACCTGGCAACAGCTAGGCAAGCTCCTCCCCACAGTTATTTGGCAATAGCCAGATAGGCACAGCCCACTATAAAAGGGGTTGTTTGTCCCCTCCTCCCTCTCTTACTCTCTTGTTCTTACTCTCTTACTCTTGCCTCTTGCTCCCTTGCCCCCTTTCTCTCCACATTCCTTTTCCCCCATCTCTCCACATGGCCATGGCCAGCCTCTACTTCCATACTCTCTCCCTCTCTTTGCCTTTCTACAATAAATGTCTTAAAACCATTTGCCCCTTTTCATCGGGATCCACAGTGCTGGAGCAACGGTGCAGGTCTTCCTCTAAGGAGCCCCTCTTTGCCAGAAGGTCTCCCAGCCCTTCCAGTCACAGCTGTCAGCCAAACCAAGCCAAGCCCACCACCAGAGCAAGCTTAGGACTCTCCTCCCCATGGGAACCTGTCAGAGTTCCCCCCTCCTGCTCTTTTCCCTTAGGTCCTGGGCCAGAGCCCACCTGTGGGCCCCTATTCTGTTCCCTGCTCTTCTGTGGCATACAGAAGCATCAGGGATATCCAAGAGCCCGAGAACCTGTCATCCTCGGTCTCGGTGCAGGTCCTGGGACCCTGAACCAATTCCAGTAGTTCCCCGGAGACCTCAGACTGTGCTTCCCCACACCCAAAGCAGGGTGCTGTGGCTTCTCACAGCCTGACACCCACCTGGCGCCTGTGTGGGGTCCACACAGTCAGACTTCCTTCATACAGCCTCGCTTAGGAGCCCGAACCCTGGGACAGACATGGGACTCCATTTTAACCCACAGAATATAACCTGGAATTTAAGATGAATACACCCTTTCTTTCACTATGTTAATTTTTTTTTTTTGGTTTTTGTTTGCTTGTTTATTTGTTTAGGATATTTTATTTCAGCAAAAGTAATGAAACTAGGACACTGGATCACAAACATCAGTATGTTAACCATCACACCTAAAACATTACTGGAAAACTGTGCACATCTCTTTTTACAGGGTAACTTAATAAGTATTCACAAACATTCTTAGTGCTCATCAAATACTCAGAAATTGCATGTGTCAAGAAGTCAAATAACACAATAATTTCTACAGATTAATGATTCTTGTAATTTCTTGTAATTGTAAAATAAAATAATTTTTATTTTATTTTCTTTTGAAATCATTTTGTACAATGATAAAAAGACAAGCAGGTAGACTTTTGATTCATTCTGAATGGCTTAATAGTAAGTGATTAAAGAAGAGAATCCATATTGACTCCAATATTAAGTATATTAAAGCATCTTAAAGTCCCAATTAAATACACAGTTGTATTCCTTTTTTTTTTTCAGAAAAAAAAGTAGAGGTAACCTTTACCTATTAAAGTCCATGTTTAATATAACATCTGAATATGTTTCTATGAATGAGTAAGATGTCTTTGGATTATTCAGTACTCATATCTCTGAAGACCTGAAGTGTTCATACTGACTTTTCTACTTTTTCTCAGCTATCAACAATATAATTTTGACTGTTTACAGAACAGATTTCCTGTATGTGGTTGTAAAAGAAACACATTTGTTGCATTATGCTTATAGAAAAATAAACAACATACTTC ;其重组病毒的制备以小鼠基因组为模板，PCR扩增得到LncRNA序列，亚克隆连入Amb1n公司的pSi lencer Adeno LO-CMVj7I病毒载体系统，构建LncRNA过表达病毒；所述PCR的引物序列为:
[0008]上游引物:5，-ATTTTTTGGTTATTTCTGACTAGTAC-3，，
[0009]下游引物:5，-GAAGTATGTTGTTTATTTTTCTATAA-3，。
[0010]本发明采用常规工艺配成药物组合物，包括感染滴度为116PFU过表达LncRNA载体、病毒或辅料，所述载体为胆固醇、纳米颗粒或脂质体；病毒载体为腺病毒载体、慢病毒载体、逆转录病毒载体中的一种或多种；所述辅料为甘露醇、磷酸盐缓冲液、生理盐水中的一种或多种；
[0011]药物剂型为口服制剂、注射制剂、片剂、干粉剂型中的一种或多种，优选的为注射用小水针剂或注射用冻干粉针。
[0012]本发明的LncRNA药物组合物，通过口服或注射用于预防和治疗心肌肥厚、心肌纤维化、冠心病和心衰。
[0013]本发明涉及的药物组合物在肥大的心肌细胞和心脏肥厚中表达显著下调，对心肌肥厚和心肌纤维化具有保护作用，在细胞水平通过感染LncRNA发现，它能够抑制肥大刺激因子所诱导的心肌细胞肥大，包括肥大指标如细胞表面积及蛋白/DNA的比值与刺激组相比都有明显的降低；在动物水平通过注射外源LncRNA腺病毒能够抑制肥大模型的肥大效应包括心脏体重比、边缘区的心肌细胞横截面积(WGA染色)和心肌纤维化(Masson染色)都有明显的降低，同时心功能也有明显的改善。
[0014]本发明与现有技术相比，其药物组合物配方合理，药理可靠，制作工艺简单，治疗效果明显，应用范围广，使用环境友好。
【附图说明】
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[0015]图1为经心脏肥大刺激因子Ang II (血管紧张素)诱导的心肌细胞肥大过程中LncRNA表达水平的变化；
[0016]图2为经LncRNA感染的原代细胞进行Ang II处理，在细胞水平上对Ang II所诱导的肥大的抑制情况；
[0017]图3为小鼠静脉注射Ang II腺病毒能抑制Ang II所诱导的肥大模型的检测结果示意图。
【具体实施方式】
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[0018]下面通过具体实施例并结合附图对本发明作出进一步阐述。
[0019]实施例1、
[0020]LncRNA过表达腺病毒载体及阴性对照腺病毒构建，本实施例以小鼠基因组为模板，PCR扩增得到LncRNA序列，亚克隆连入Amb1n公司的pSi lencer Adeno 1.0-CMV