专利名称：微生物发酵制备大豆肽工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种大豆肽生产制备工艺，尤其是产蛋白酶微生物发酵制备大 豆肽工艺。
背景技术：
大豆肽，是大豆蛋白质的酶解产物，不仅具有降血脂、易消化、易吸收、 促进能量代谢和抗肥胖作用，而且能恢复疲劳、增强肌肉及抗过敏等。大豆肽 在食品、保健品以及饲料生产领域具有广阔的发展前景。
目前常见的大豆肽生产制备工艺主要有酶水解法和微生物发酵法，国内外 应用碱性蛋白酶水解生产大豆肽的研究论文和专利较多，有发明利用水解的方
法生产大豆多肽(METHOD FOR PRODUCING SOYBEAN PEPTIDE/Inventor :TANAKA MASARU;SASAKI MASAKUNI; HIGASHIMURA MAKOTO〃JP2007124973)。但是利用 酶水解生产大豆肽的过程中易暴露出疏水性氨基末端，导致产品苦味重，带来 不良风味。
近几年来国内外利用微生物发酵法制备大豆肽取得一定的进展，主要表现 在发酵菌种的筛选上，并针对筛选的菌株发酵工艺进行了一些优化。刘唤明等 就发酵法制备大豆肽的工艺进行了摇瓶发酵试验，在最优发酵条件下，发酵 48h，水解度为60%(发酵法生产大豆肽的研究/刘唤明邓楚津，广东海洋大学 食品科技学院〃饲料工业.-2006, (19).)。目前国内外利用微生物发酵法制备大 豆肽所需时间一般达到36 60h，发酵周期较长，并且水解度(DH)较低，为15% 60%,这些都大大制约了利用微生物发酵法制备大豆肽在工业中的的应用和发展。
发明内容
本发明的目的是提供一种产蛋白酶微生物发酵制备大豆肽工艺，系利用大 豆分离蛋白为原料，经一种产蛋白酶微生物发酵制备大豆肽。发酵制备的大豆 肽苦味小，口感好，风味明显优于酶解制备的大豆肽，且发酵周期短，水解度 高，容易在工业生产中推广应用。
本发明以大豆分离蛋白为原料，添加少量的盐和磷酸二氢钾，经一种产蛋白酶微生物发酵后分离提取制备大豆肽。 大豆肽发酵制备工艺包括以下步骤-
1) 将2% 10%的大豆分离蛋白、0. 1% 2%的氯化钠、0. 1% 2%的磷酸二氢 钾以及饮用水混匀，以上原料百分比均按重量计。然后灭菌接种该微生物25 "C 4(TC进行发酵，发酵12 24h后，获得发酵液。
2) 离心分离发酵液，过滤采用分子通透量为2000 10000Dalton的纤维 素膜，采用活性炭吸附柱脱苦脱臭，真空浓縮然后喷雾千燥，获得大豆肽粉。
本发明制备的大豆肽总蛋白质99. 1%，大豆肽82.2%，灰分6.3%， 89.09% 的大豆肽的分子量低于2000Dalton。
所述大豆分离蛋白原料是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白 类产品，其蛋白质含量在90%以上。
所采用的发酵菌种为一种自主研发的产蛋白酶微生物，系自然界中分离纯 化获得。
所述灭菌是在121。C灭菌15 30min 。 所述离心分离发酵液，离心转速为2000 6000r/min。 所述真空浓缩，是在真空度0. 06 0. 1Mpa条件下浓縮。 所述喷雾干燥，其进风温度145 21(TC，出风温度65 11(TC。 本发明的优点是
1) 本发明涉及的产蛋白酶微生物发酵制备大豆肽工艺简单，时间短，发酵 周期为12 24h，比目前一般发酵所需时间48h縮短了24 36h，生产成本低；
2) 本发明采用的主要原料大豆分离蛋白来源广泛；发酵制备的大豆肽总 蛋白质99.1%，大豆肽82.2%，灰分6.3%, 89.0 %的大豆肽的分子量低于 2000Dalton。质量优于目前中华人民共和国轻工行业标准大豆肽粉(QB/T2653) I型指标的总蛋白质90%以上、大豆肽80%以上、灰分6. 5%以下、90%以上大豆 肽的分子量分布在lOOOODalton以下，具有潜在生物活性的短肽占绝大部分；
3) 本发明发酵制备大豆肽较酶解法制备的大豆肽苦味小，口感、风味好。 本发明所采用的发酵菌种生物材料样品保藏日期2009年1月9日保藏
编号CGMCCNo. 2857分类名称地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心地址北京市朝阳
区大屯路中国科学院微生物研究所
具体实施例方式
本发明使用的大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的--种全价
蛋白类产品，其蛋白质含量在90%以上。从低温脱溶大豆粕中提取大豆分离蛋 白的技术是公知的，如中国专利200510019452公开了 "一种提取大豆分离蛋 白的方法"，中国专利00109175公开了 -种提取大豆分离蛋白的工艺"。合 适的大豆分离蛋白也可以从商业产品中选择，如可从山东万得福实业集团有限 公司购买大豆分离蛋白。
利用自主研发的产蛋白酶微生物发酵制备大豆肽分两步进行，第一步将 2% 10%的大豆分离蛋白、0. 1% 2%的氯化钠、0. 1% 2%的磷酸二氢钾以及饮 用水混合。混合可以采用高压均质机，也可以采用胶体磨或借助工具手工搅拌 10 30min，使物料基本混合均匀即可。然后于121。C条件下灭菌15 30min， 冷却至室温后接种该微生物25 40。C条件下发酵12 24h，得到发酵液。第一 步将发酵后的发酵液离心分离，转速为2000 6000r/min，过滤采用分子通透 量为2000 10000Dalton的纤维素膜，然后使用活性炭柱脱苦脱臭，在真空度 0.06 0, 1Mpa条件下浓縮为原体积的二分之一至四分之一，然后喷粉，进风温 度145 21(TC，出风温度65 11(TC，获得大豆肽粉。
以下结合具体实施例进一步说明本发明。
以下实施例均以大豆分离蛋白为原料，经自主研发的产蛋白酶微生物发酵 制备大豆肽。该产蛋白酶微生物为一种发酵菌种，系自然界中分离纯化获得。 所用原料百分比均按重量计。
实施例l:其制备工艺包括以下步骤
1) 称取7%大豆分离蛋白、2%氯化钠、1%磷酸二氢钾，加90%的饮用水经 12MP高压均质一次，然后于12rC灭菌20min，冷却至室温后接种该产蛋白酶 微生物，3(TC进行发酵24h，获得发酵液。
2) 将发酵液离心，转速3000 r/min，采用分子通透量为10000 Dalton 的纤维素膜过滤，使用活性炭柱脱苦脱臭，在真空度0.08Mpa条件下浓縮至原体积的三分之一，然后喷雾干燥，进风温度185。C，出风温度85。C，获得大豆 肽粉。
实施例2:其制备工艺包括以下步骤
1) 称取2%大豆分离蛋白、1%氯化钠、2%磷酸二氢钾，加入95%的饮用水， 手工搅拌30min，然后于12rC灭菌20min，冷却至室温后接种该产蛋白酶微生 物，40。C进行发酵12h，获得发酵液。
2) 将发酵液离心，转速4000 r/min，采用分子通透量为3000 Dalton的 纤维素膜过滤，使用活性炭柱脱苦脱臭，在真空度0. 06Mpa条件下浓縮至原体 积的三分之一，然后喷雾干燥，进风温度16(TC，出风温度73r，获得大豆肽 粉。
实施例3:其制备工艺包括以下步骤
1) 称取4%大豆分离蛋白、0. 5%氯化钠、0.5%磷酸二氢钾，加入95%的饮 用水，手工搅拌30min，然后于12rC灭菌20min,冷却至室温后接种该产蛋白 酶微生物，35。C进行发酵18h，获得发酵液。
2) 将发酵液离心，转速4000 r/min，采用分子通透量为5000 Dalton的 纤维素膜过滤，使用活性炭柱脱苦脱臭，在真空度0. 06Mpa条件下浓縮至原体 积的三分之一，然后喷雾干燥，进风温度16CTC，出风温度73。C，获得大豆肽 粉。
权利要求
1.一种微生物发酵制备大豆肽工艺，是以大豆分离蛋白为原料，添加盐和磷酸二氢钾，经一种产蛋白酶微生物发酵后分离提取制备大豆肽；其制备工艺包括以下步骤(1)将2％～10％的大豆分离蛋白、0.1％～2％的氯化钠、0.1％～2％的磷酸二氢钾以及饮用水混匀，以上原料百分比均按重量计，然后灭菌接种该微生物25℃～40℃进行发酵，发酵12～24h后，获得发酵液；(2)离心分离发酵液，过滤采用分子通透量为2000～10000Dalton的纤维素膜，采用活性炭吸附柱脱苦脱臭，真空浓缩后喷雾干燥，获得大豆肽粉。
2. 根据权利要求1所述的微生物发酵制备大豆肽工艺，其特征在于所述大豆分离蛋白原料是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类产品，其蛋白质含量在90%以上。
3. 根据权利要求1所述的微生物发酵制备大豆肽工艺，其特征在于所述将大豆分离蛋白、氯化钠、磷酸二氢钾，加饮用水经高压均质、胶体磨或借助工具手工搅拌混匀10 30min。
4. 根据权利要求1所述的微生物发酵制备大豆肽工艺，其特征在于所述灭菌是在12rC灭菌15 30min 。
5. 根据权利要求1所述的微生物发酵制备大豆肽工艺，其特征在于所采用的发酵菌种为一种自主研发的产蛋白酶微生物，系自然界中分离纯化获得。
6. 根据权利要求1所述的微生物发酵制备大豆肽工艺，其特征在于所述离心分离发酵液的离心转速为2000 6000r/min。
7. 根据权利要求1所述的微生物发酵制备大豆肽工艺，其特征在于所述真空浓缩，是在真空度0.06 0. lMpa条件下浓縮。
8. 根据权利要求1所述的微生物发酵制备大豆肽工艺，其特征在于所述喷雾干燥，其进风温度145 21(TC，出风温度65 11(TC。
全文摘要
本发明公开了一种微生物发酵制备大豆肽工艺。其制备工艺步骤将2％～10％的大豆分离蛋白、0.1％～2％的氯化钠、0.1％～2％的磷酸二氢钾及饮用水混匀，后灭菌接种经自主研发的产蛋白酶微生物25℃～40℃进行发酵，发酵12～24h，获发酵液；离心分离发酵液，过滤采用分子通透量为2000～10000Dalton的纤维素膜，用活性炭吸附柱脱苦脱臭，真空浓缩后喷雾干燥，获大豆肽粉。本发明制备大豆肽工艺简单，时间短，发酵周期为12～24h，比一般发酵时间48h缩短24～36h，成本低；主要原料大豆分离蛋白来源广泛；制备的大豆肽总蛋白质99.1％，大豆肽82.2％，灰分6.3％，89.0％的大豆肽分子量低于2000Dalton，质量优于QB/T2653 I型指标，具有潜在生物活性的短肽占绝大部分，较酶解法制备的大豆肽苦味小，口感、风味好。
文档编号A23J3/16GK101491288SQ20091006407
公开日2009年7月29日 申请日期2009年1月14日 优先权日2009年1月14日
发明者乐超银, 张自安, 李盘欣, 伟 邵, 韩晓凯 申请人:河南省南街村(集团)有限公司