参与代谢途径的基因的受损等位基因以及用于检测和使用其的方法

专利名称：：参与代谢途径的基因的受损等位基因以及用于检测和使用其的方法参与代谢途径的基因的受损等位基因以及用于检测和使用其的方法政府资助本发明是在DefenseAdvancedResearchProjectsAgency禾口U.S.ArmyResearchOffice(#W911NF-06-1-0166)和NationalInstitutesforHealth(GM072859)的政府支助下进行的。美国政府确实具有本发明的某些权利。发明领域本发明涉及影响代谢的酶变体、其对辅因子的功能敏感度以及用于检测编码此类酶变体的受损等位基因和测定其对辅因子的敏感度的测定。背景叶酸/高半胱氨酸代谢途径构成代谢叶酸和/或影响高半胱氨酸的酶和酶途径的网络。所述途径通过甲硫氨酸合酶反应相联系，并且细胞培养物、动物模型系统中和人中的边缘性叶酸缺乏削弱高半胱氨酸再甲基化(参见，例如，StoverPJ.2004.PhysiologyoffolateandvitaminB12inhealthanddisease.NutrRev62S3-12)。已将叶酸不足与神经管缺陷(“NTD”)以及其他出生缺陷和不利的怀孕结果例如口面裂(orofacialcleft)、先兆子痫、早产/低出生体重和反复早期自发性流产相关联(参见，例如，Mills等人，1995.Homocysteinemetabolisminpregnanciescomplicatedbyneuraltubedefects丄ancet345149-1151)。叶酸不足还与心血管疾病、冠状动脉疾病、缺血性中风、动脉粥样硬化、血栓形成、视网膜动脉闭塞、唐氏综合征(Down'sSyndrome)>结直肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、抑郁症、精神分裂症、阿尔茨海默病/痴呆、年龄相关性黄斑变性和青光眼关联。叶酸/高半胱氨酸代谢途径中的所有代谢步骤都潜在地与和叶酸不足和/或高半胱氨酸代谢相关的状况和疾病相关。涉及的参与叶酸/高半胱氨酸代谢的酶包括例如双功能酶AICAR转甲酰酶和IMP环水解酶(ATIC)、甘氨酰胺核糖核苷酸转甲酰基酶(GART)、甲硫氨酸腺苷转移酶I，α(ΜΑΤΙΑ)、甲硫氨酸腺苷转移酶II，α(ΜΑΤ2Α)、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)和次甲基四氢叶酸合成酶(MTHFS)。叶酸不足还削弱由S-腺苷-甲硫氨酸(“SAM”)介导的甲基化，其是MTHFR和CBS的变构抑制齐Ll(参见，例如，Kraus等人，1999.Cystathionineβ-synthasemutationsinhomocystinuria.HumMut13362-375;Daubner等人，1982.InFlavinsandFlavoproteins,eds.Massey，V.&Williams，C.H.(Elsevier,NewYork),pp.165-172)。在NTD发育的机制中已提及S-腺苷-高半胱氨酸S-腺苷-甲硫氨酸(SAH/SAM)的比升高。5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)参与其中将高半胱氨酸转化成甲硫氨酸的叶酸依赖性多步骤途径。高半胱氨酸的减少的转化可导致高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia)。已鉴定了与临床MTHFR缺陷(一种常染色体隐性遗传病症)相关的MTHFR的几个罕见突变。MTHFR缺陷的临床症状是高度可变的，其包括发育延迟、运动和步态异常、癫痫发作(seizure)和早期血管疾病(prematurevasculardisease)。MTHFR的常见多态性也已得到描述，包括功能受损的等位基因A222V。常见多态性与疾病的遗传关联性不是始终一致的。这可能部分因为掩盖疾病的潜在风险的叶酸可获得性的补偿效应以及迄今仍未鉴定到的低频受损等位基因对此类疾病的贡献。有趣地，已将常见多态性与化疗剂例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶的功效和毒性的个体差异相关联。已描述了酵母基因metll的功能互补测定(Shan等人，JBC，27432613-32618，1999)。在该测定中显示，野生型人MTHFR与酿酒酵母M.cerevisiae.)中的metll突变互补。然而，该测定对由MTHFR突变引起的活性的量的变化不敏感，如由与野生型酶相比较功能受损的等位基因A222V互补酵母突变的相似能力所证明的；该测定对叶酸可获得性的作用也不敏感。除了利用叶酸的酶外，少数维生素B6-和B12-依赖性酶和酶途径与高半胱氨酸代谢、NTD和其他出生缺陷和不利的怀孕结果相关。例如，利用B6的酶胱硫醚-β-合酶(“CBS”)的缺陷导致高半胱氨酸的积累(Kraus等人，1999.Cystathionineβ-synthasemutationsinhomocystinuria.HumMut13362-375)。同样地，利用B6的酶胱硫醚-Y-裂解酶(“CTH”)的单核苷酸多态性(“SNP”)也与高半胱氨酸血症相关联(Wang等人，2004.SinglenucleotidepolymorphisminCTHassociatedwithvariationinplasmahomocysteineconcentration.ClinGenet65483-486)。发明概述本发明部分地来源于用于鉴定代谢途径中的编码酶的基因的受损等位基因和测定它们对辅因子补救(cofactorremediation)的敏感度的新型体内测定的开发。复合酵母突变体(其包括允许由功能同源的目的酶互补的第一突变和使得菌株依赖于辅因子的补充的第二突变(或突变群))提供了作为辅因子可获得性的函数的酶互补作用的研究。使用本文中公开的测定，可鉴定辅因子敏感性受损等位基因包括可补救的等位基因(remediableallele),并且可分析辅因子可获得性酶活性的关系。获得的结果可用于为预防性和治疗性营养补充法提供信息，以预防和治疗与代谢酶功能障碍和异常代谢相关的状况和疾病。本发明还部分地来源于在本文中首次证明，编码酶的基因的低频受损等位基因的辅因子补救令人惊讶地普遍。如本文中举例说明的，代谢途径中多个辅因子敏感性基因各自在群体中可具有多个低频突变。结合起来看，此类突变共同地对代谢途径具有更显著的影响(与单个基因的单个低频受损等位基因的影响相比)。此外，因为对于多个此类低频受损等位基因是杂合的细胞展示数量性缺陷(quantitativedefects)，此类各自罕见的等位基因的合计频率可以甚至在更常见的多态性不存在的情况下促成常见表型。此类对途径具有影响的低频受损等位基因还可促成对于常见多态性观察到的表型变异。因此，本发明涉及诊断和预后方法，所述方法特别地聚焦于编码酶的基因的此类低频受损等位基因的检测和表征以及它们的有效补救的测定。本发明还部分地来源于此类测定用于鉴定和表征特别地参与叶酸/高半胱氨酸代谢的编码酶的基因的新型低频受损等位基因的特殊应用。如本文中对于MTHFR所证明的，存在许多低频受损等位基因，其可累积性地促成酶缺陷且也能通过辅因子补充来解决。本发明也部分地来源于这样的发现，MTHFR的受损等位基因包括定位至酶的N端催化结构域的编码序列的序列改变。因此本发明提供了用于检测参与叶酸/高半胱氨酸代谢的编码酶的基因(包括例如ATIC、GART>ΜΑΤΙΑ、ΜΑΤ2Α、MTHFR和MTHFS)的受损但可补救的等位基因的新型体内测定。虽然现有技术描述了其中野生型人MTHFR活性互补metll缺陷的互补测定Mhah等人，JBC，27432613-32618，1999)，但该测定不是高灵敏的并且不能检测所有功能受损的人MTHFR等位基因。例如，该测定不能区分野生型MTHFR与功能受损的常见多态性A222V。此外，该测定没有揭示叶酸水平与酶活性之间的关系。与现有技术相反，本申请公开的体内测定是高度灵敏的并且能够显示参与叶酸/高半胱氨酸代谢的基因的受损等位基因(如本文中对于MTHFR所证明的)，同时测定其对叶酸的敏感性。鉴定到的等位基因包括低频等位基因、以杂合子形式展示表型的显性或共显性等位基因、叶酸敏感性等位基因(包括叶酸可补救的等位基因)以及具有这些特征的组合的等位基因。重要地，此类受损等位基因与多种状况和疾病的风险以及化疗剂的不同功效和毒性相关联。此类受损等位基因的缺陷在一些个体中可能因为叶酸可获得性的补偿效应而不表现为状况、疾病或对化疗剂的不同响应。揭示MTHFR的功能受损等位基因的能力提供了筛查此类状况和疾病的风险以及化疗剂的潜在治疗功效和毒性的方法。本发明还提供了用于检测CTH和CBS的受损等位基因的新型体内测定。揭示这些基因的功能受损等位基因的能力类似地提供了筛查相关疾病和状况的风险的方法。因此，在一个方面，本发明提供了用于检测代谢途径中编码酶的基因的受损等位基因和测定它们对辅因子的敏感度的体内测定。所述测定包括使用酵母菌株，所述酵母菌株包含可由编码野生型酶的基因互补的第一基因中的第一突变和使得酵母菌株在与第一基因的功能相关的可测定的表型方面依赖于辅因子(或其前体)的补充的第二基因(或基因群)中的第二突变。该方法包括ω将编码酶的基因的受试等位基因引入酵母细胞，其中酵母细胞包含功能上与编码酶的基因同源的第一基因中的第一突变和第二基因(或基因群)中的第二突变，所述第二突变使得酵母细胞依赖于酶功能所需的辅因子的补充，其中第一突变改变与第一基因的功能相关的酵母的可测量的特征；(ii)给生长培养基补充辅因子；和(iii)检测与在野生型酶存在的情况下相比，在受试等位基因存在的情况下更少的可测量的特征的恢复，从而检测受试等位基因对第一基因突变的不完全互补作用，并且将受试等位基因鉴定为受损等位基因。通过滴定补充的辅因子的量，测定受损等位基因对辅因子可获得性的敏感度。在一个实施方案中，使用二倍体酵母。二倍体酵母对于受试等位基因可以是纯合的或杂合的。二倍体酵母可包含野生型基因和受试等位基因。二倍体酵母可包含受试等位基因的组合。在优选实施方案中，编码酶的基因在序列上相应于天然发生的等位基因，或相应于个体天然发生的等位基因的汇编(compilation)。在优选实施方案中，编码酶的基因包括人编码酶的基因的等位基因，或个体人等位基因的汇编。在优选实施方案中，酵母是酿酒酵母。在一个实施方案中，第一酵母基因是metl3并且第二酵母基因是fol3。这样的酵母菌株可用于确定MTHFR等位基因的活性和其对叶酸状态的响应。因此，在一个实施方案中，本发明提供了用于测定MTHFR等位基因的活性的体内测定，其还能够测定作为叶酸状态的函数的活性。在优选实施方案中，编码酶的基因包括天然发生的人MTHFR等位基因。在另一个优选实施方案中，编码酶的基因包括个体人MTHFR等位基因的汇在优选实施方案中，测定方法包括将目的MTHFR等位基因的活性与野生型MTHFR的活性相比较。在优选实施方案中，测定方法包括滴定叶酸的量以确定MTHFR酶对叶酸可获得性是否敏感。在一个实施方案中，酵母是二倍体。在一个实施方案中，二倍体酵母对于将就互补作用进行测试的MTHFR等位基因是杂合的。在一个实施方案中，二倍体酵母包含野生型MTHFR和突变的MTHFR等位基因。在优选实施方案中，测定的测量输出(output)是生长。在一个实施方案中，第一酵母基因是adel6或adel7并且第二酵母基因是fol3。这样的酵母菌株可用于测定双功能酶AICAR转甲酰酶和IMP环水解酶(ATIC)等位基因的活性和其对叶酸状态的响应。因此，在一个实施方案中，本发明提供了用于测定ATIC等位基因的活性的体内测定，其还能够测定作为叶酸状态的函数的活性。在优选实施方案中，编码酶的基因包括天然发生的人ATIC等位基因。在另一个优选实施方案中，编码酶的基因包括个体人ATIC等位基因的汇编。在一个实施方案中，第一酵母基因是ade7并且第二酵母基因是fol3。这样的酵母菌株可用于测定甘氨酰胺核糖核苷酸转甲酰基酶(GART)等位基因的活性和其对叶酸状态的响应。因此，在一个实施方案中，本发明提供了用于测定GART等位基因的活性的体内测定，其还能够测定作为叶酸状态的函数的活性。在优选实施方案中，编码酶的基因包括天然发生的人GART等位基因。在另一个优选实施方案中，编码酶的基因包括个体人GART等位基因的汇编。在一个实施方案中，第一酵母基因是saml或sam2并且第二酵母基因是fol3。这样的酵母菌株可用于测定甲硫氨酸腺苷转移酶I，α(ΜΑΤΙΑ)等位基因的活性和其对叶酸状态的响应。因此，在一个实施方案中，本发明提供了用于测定MATlA等位基因的活性的体内测定，其还能够测定作为叶酸状态的函数的活性。在优选实施方案中，编码酶的基因包括天然发生的人MATlA等位基因。在另一个优选实施方案中，编码酶的基因包括个体人MATlA等位基因的汇编。在一个实施方案中，第一酵母基因是saml或sam2并且第二酵母基因是fol3。这样的酵母菌株可用于测定甲硫氨酸腺苷转移酶II，α(ΜΑΤ2Α)等位基因的活性以及其对叶酸状态的响应。因此，在一个实施方案中，本发明提供用于测定ΜΑΤ2Α等位基因的活性的体内测定，其还能够测定作为叶酸状态的函数的活性。在优选实施方案中，编码酶的基因包括天然发生的人ΜΑΤ2Α等位基因。在另一个优选实施方案中，编码酶的基因包括个体人ΜΑΤ2Α等位基因的汇编。在一个实施方案中，第一酵母基因是faul并且第二酵母基因是fol3。这样的酵母菌株可用于测定次甲基四氢叶酸合成酶(MTHFS)等位基因的活性和其对叶酸状态的响应。因此，在一个实施方案中，本发明提供了用于测定MTHFS等位基因的活性的体内测定，其还能够测定作为叶酸状态的函数的活性。在优选实施方案中，编码酶的基因包括天然发生的人MTHFS等位基因。在另一个优选实施方案中，编码酶的基因包括个体人MTHFS等位基因的汇编。在另一个实施方案中，第一酵母基因是cys3并且第二酵母基因群是六重缺失(sextuple-delete)snolΔSno2ΔSno3ΔsnzlΔSnz2ΔSnz3Δ。这样的菌株可用于测定CTH等位基因的活性和其对维生素B6状态的响应。因此，在一个实施方案中，本发明提供了用于测定CTH等位基因的活性的体内测定，其还能够测定作为维生素B6状态的函数的活性。在优选实施方案中，编码酶的基因包括天然发生的人CTH等位基因。在另一个优选实施方案中，编码酶的基因包括个体人CTH等位基因的汇编。在另一个实施方案中，第一酵母基因是cys4并且第二酵母基因群是六重缺失snolΔSno2ΔSno3ΔsnzlΔSnz2ΔSnz3Δ。这样的酵母菌株可用于测定CBS等位基因的活性和其对维生素B6状态的响应。因此，在一个实施方案中，本发明提供了测定CBS等位基因的活性的体内测定，其还能够测定作为维生素B6状态的函数的活性。在优选实施方案中，编码酶的基因包括天然发生的人CBS等位基因。在另一个优选实施方案中，编码酶的基因包括个体人CBS等位基因的汇编。在一个方面，本发明提供了能够检测参与叶酸/高半胱氨酸代谢的基因的受损等位基因和其对辅因子的敏感度的酵母菌株。在一个实施方案中，本发明提供了能够检测选自ATIC、GART,ΜΑΤΙΑ、ΜΑΤ2Α、MTHFR和MTHFS的编码酶的基因的受损等位基因和测定其对叶酸的反应性的酵母菌株。在优选实施方案中，酵母包括上文中对于每一个这样的编码酶的基因描述的各自的突变和添加。在一个实施方案中，本发明提供了能够检测CTH的受损等位基因和测定其对维生素B6的反应性的酵母菌株。在一个实施方案中，本发明提供了能够检测CBS的受损等位基因和测定其对维生素B6的反应性的酵母菌株。在一个方面，本发明提供了用于检测代谢途径例如叶酸/高半胱氨酸代谢中的编码酶的基因的受损等位基因的方法。在一个实施方案中，受损等位基因在人ATIC、GART>ΜΑΤΙΑ、ΜΑΤ2Α、MTHFR和/或MTHFS中天然发生。在一个实施方案中，受损等位基因是CBS等位基因。在一个实施方案中，受损等位基因是CTH等位基因。在优选实施方案中，该方法包括使用本文中提供的体内测定和方法来检测已显示为辅因子可补救的编码代谢酶的基因的受损等位基因。在另一个方面，本发明提供了鉴定和/或表征受试者的代谢酶缺陷的方法，其包括从受试者获得样品，然后检测多个受损等位基因在所述样品中的存在或不存在，其中至少一个受损等位基因的存在表示受试者处于酶缺陷的风险中。多个受损等位基因可来自代谢途径中相同的编码酶的基因，或可以是来自相同途径中多个基因的等位基因。在优选实施方案中，一个或多个受损等位基因是例如通常在低于4%的一般群体中，更通常地在低于3%的一般群体中，优选低于2.5%至2%和最优选在低于的一般群体中表达的低频等位基因。在优选实施方案中，一个或多个受损等位基因是辅因子可补救的等位基因。在特别优选的实施方案中，通过本文中提供的体内测定和方法来鉴定辅因子可补救的受损等位基因。在另一个方面，提供了用于检测受试者对辅因子依赖性酶缺陷的易感性的方法，其包括从受试者获得样品，然后检测多个受损等位基因在所述样品中的存在或不存在，其中至少一个受损等位基因的存在表示受试者可能具有可补救的酶缺陷。多个受损等位基因可来自代谢途径中相同的编码酶的基因或可以是来自相同途径中的多个基因的等位基因。在优选实施方案中，一个或多个受损等位基因是例如通常在低于4%的一般群体中，更通常地在低于3%的一般群体中，优选低于2.5%至2%和最优选在低于的一般群体中表达的低频等位基因。在优选实施方案中，一个或多个受损等位基因是辅因子可补救的等位基因。在特别优选的实施方案中，通过本文中提供的体内测定和方法来鉴定辅因子可补救的受损等位基因。在样品中检测特定等位基因在本领域内是很普通的，任何常规检测方案都可有利地用于所述方法，包括基于例如杂交、扩增、测序、RFLP分析等的方案，如本文中所描述的。还预期用于本文中的是将来开发的在检测核酸样品中的等位基因中具有特珠功用的方案和/或材料。在另外的方面，提供了用于治疗受试者的代谢酶缺陷的方法，其包括从具有或怀疑具有这样的缺陷的受试者获得样品，检测辅因子可补救的多个受损等位基因在样品中的存在或不存在，然后基于样品中检测到的受损等位基因的数目和类型给受试者施用适当的辅因子补充物，如本文中所描述的。在一个实施方案中，该方法还包括使用本文中描述的用于测定酶活性的体内测定。在一个实施方案中，该方法还包括使用测定酶活性(如本文中所描述的)和检测编码酶的核酸中的突变的体内测定。在一个实施方案中，该方法还包括使用本文中描述的用于测定酶活性的体内测定和用于测定在升高的温度下的酶稳定性的温度敏感性测定。在一个实施方案中，该方法还包括使用本文中描述的用于测定酶活性的体内测定和用于测定酶的比活性(specificactivity)的体外测定。在一个方面，本发明提供了筛查与异常高半胱氨酸代谢相关的疾病或状况的风险的方法。该方法包括筛查参与高半胱氨酸代谢的基因的受损等位基因，如本中所公开的。在优选实施方案中，该方法包括检测已使用本文中描述的体内测定进行表征的受损等位基因。在优选实施方案中，疾病或状况选自心血管疾病、冠状动脉疾病、缺血性中风、动脉粥样硬化、神经管缺陷、口面裂、先兆子痫、早产/低出生体重、反复早期自发性流产、血栓形成、视网膜动脉闭塞、唐氏综合征、结直肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、抑郁症、精神分裂症、阿尔茨海默病/痴呆、年龄相关性黄斑变性和青光眼。在一个实施方案中，该方法包括筛查ATIC、GART、ΜΑΤΙΑ、ΜΑΤ2Α、MTHFR和/或MTHFS的受损等位基因，如本文中所描述的。在一个实施方案中，该方法包括筛查CBS的受损等位基因，如本文中所描述的。在一个实施方案中，该方法包括筛查CTH的受损等位基因，如本文中所描述的。在一个方面，本发明提供了确定个体的化疗剂响应潜能的方法。该方法包括使用本文中描述的用于检测参与叶酸/高半胱氨酸代谢的基因的受损等位基因的方法。在优选实施方案中，基因选自MTHFR、ATIC>MTHFS>ΜΑΤΙΑ、ΜΑΤ2Α和GART。通过本文中描述的体内测定法和/或通过用于特定等位基因的检测方法的应用在个体中检测到受损等位基因表示减少的响应潜能。在一个方面，本发明提供了测定对于个体的潜在化疗剂毒性的方法。该方法包括使用本文中描述的用于检测参与叶酸/高半胱氨酸代谢的基因的受损等位基因的方法。在优选实施方案中，基因选自MTHFR、ATIC、MTHFS、ΜΑΤΙΑ、ΜΑΤ2Α和GART。通过本文中描述的体内测定法和/或通过用于特定等位基因的检测方法的应用在个体中检测到受损等位基因表示增加的毒性潜能。在一个方面，本发明提供了在序列上相应于选自MTHFR、ATIC>MTHFS>ΜΑΤΙΑ、ΜΑΤ2Α和GART的编码酶的基因的等位基因的分离的核酸。在一个实施方案中，分离的核酸具有和/或包含MTHFR基因的等位基因的序列，例如表A中公开的SNP。在一个实施方案中，分离的核酸具有和/或包含ATIC基因的等位基因的序列，例如表B中公开的SNP。在一个实施方案中，分离的核酸具有和/或包含MTHFS基因的等位基因的序列，例如表C中公开的SNP。在一个实施方案中，分离的核酸具有和/或包含MATlA基因的等位基因的序列，例如表D中公开的SNP。在一个实施方案中，分离的核酸具有和/或包含MAT2A基因的等位基因的序列，例如表E中公开的SNP。在一个实施方案中，分离的核酸具有和/或包含GART基因的等位基因的序列，例如表F中公开的SNP。在一个实施方案中，核酸相应于MTHFR等位基因的序列并且包含编码选自M110I、H213R、D223N、D291N、R519C、R519L和Q648P的MTHFR蛋白的非同义突变的序列。在一个方面，本发明提供了用于检测参与叶酸/高半胱氨酸代谢的基因的受损等位基因的阵列。在一个实施方案中，本发明提供了用于检测选自ATIC、GART、ΜΑΤΙΑ、ΜΑΤ2Α、MTHFR和MTHFS的基因的受损等位基因的阵列。在优选实施方案中，阵列能够检测选自该群体的基因的多于一个的受损等位基因。在优选实施方案中，阵列能够检测选自该群体的多个基因的多于一个的受损等位基因。在一个实施方案中，阵列能够检测选自该群体的多个基因的每一个基因的多于一个的受损等位基因。在优选实施方案中，阵列能够检测这样的为可补救的受损等位基因的受损等位基因。在优选实施方案中，阵列能够检测多个这样的为可补救的受损等位基因的受损等位基因。在优选实施方案中，至少一个受损等位基因是低频等位基因。在一个实施方案中，本发明提供了用于检测受损MTHFR等位基因的阵列。在一个实施方案中，阵列包含一个或多个能够与MTHFR等位基因杂交的核酸，所述MTHFR等位基因包含选自编码M110I、H213R、D223N、D291N、R519C、R519L和Q648P的突变的非同义突变。在一个实施方案中，本发明提供了用于检测CBS的受损等位基因的阵列。阵列包含一个或多个能够与CBS的受损等位基因杂交的核酸。在一个实施方案中，本发明提供了用于检测CTH的受损等位基因的阵列。阵列包含一个或多个能够与CTH的受损等位基因杂交的核酸。在优选实施方案中，本发明提供了用于检测参与叶酸/高半胱氨酸代谢的多个基因的受损等位基因的阵列。本发明的阵列可使用本领域内已知的许多阵列、探针和读出技术中的任一个。在一个方面，本发明提供了预防个体的与异常叶酸/高半胱氨酸代谢相关的状况或疾病的方法，所述个体具有参与叶酸/高半胱氨酸代谢的基因的可补救的受损等位基因。在一个实施方案中，该方法包括增加个体对叶酸的摄取。在一个实施方案中，该方法包括增加个体对维生素B6的摄取。在优选实施方案中，该方法包括筛查与异常叶酸/高半胱氨酸代谢相关的疾病或状况的风险的方法，如本文中所描述的。在一个方面，本发明提供了治疗与异常叶酸/高半胱氨酸代谢相关的状况或疾病的方法，其中患者具有参与叶酸/高半胱氨酸代谢的基因的可补救的受损等位基因。在一个实施方案中，该方法包括增加患者对叶酸的摄取。在一个实施方案中，该方法包括增加个体对维生素B6的摄取。在优选实施方案中，该方法包括筛查与异常叶酸/高半胱氨酸代谢相关的疾病或状况的风险的方法，如本文中所描述的。在一个方面，本发明提供了增加具有参与叶酸/高半胱氨酸代谢的基因的可补救的受损等位基因的个体的化疗剂响应潜能的方法。该方法包括增加个体对叶酸的摄取。在优选实施方案中，该方法包括筛查与异常叶酸/高半胱氨酸代谢相关的疾病或状况的风险的方法，如本文中所描述的。在优选实施方案中，基因选自MTHFR、ATIC、MTHFS、ΜΑΤΙΑ、ΜΑΤ2Α禾口GART。在一个方面，本发明提供了减少化疗剂对具有参与叶酸/高半胱氨酸代谢的基因的可补救的受损等位基因的个体的毒性的方法。该方法包括增加个体对叶酸的摄取。在优选实施方案中，该方法包括筛查与异常叶酸/高半胱氨酸代谢相关的疾病或状况的风险的方法，如本文中所描述的。在优选实施方案中，基因选自MTHFR、ATIC>MTHFS、ΜΑΤΙΑ、ΜΑΤ2Α禾口GART。附图概述图1.亚叶酸补充对fol3Δ::KanMX细胞的生长速率和人MTHFR的细胞活性的影响。(a)如材料和方法中所述在96孔板中测量fol3Δ::KanMXMET13二倍体酵母的生长。用指定浓度的亚叶酸补充培养基。标记有FOL3的曲线(FOL3MET13)来自无亚叶酸的培养基中的生长。(b)用phMTHFR转化的fol3Δ:KanMXmetl3Δ:KanMX二倍体酵母在缺乏甲硫氨酸和补充有指定浓度的亚叶酸的培养基中的生长。在各亚叶酸浓度上测试3个独立的转化体以测试重现性。标记有metl3Δ的曲线代表在50μg/ml亚叶酸上生长的、用空载体转化的单个细胞分离株。图2.非同义MTHFR群体变体的功能影响和叶酸可补救性(folate-remediability)。(a)在3个不同亚叶酸浓度上在缺乏甲硫氨酸的培养基中就拯救fol3Δ-KanMXmetl3Δ::KanMX细胞的能力测试6个MTHFR变体。只在50和25μg/ml亚叶酸上测试MllOI等位基因和MllOIA222V双置换等位基因。标记有“主要的”的曲线相应于群体中最常见的MTHFR等位基因。各曲线来自3至6个独立的转化体的库。(b)分成几乎相同大小的N端催化结构域和C端调节结构域的MTHFR蛋白(656个氨基酸)的示意图(3。标示出所有非同义变化的位置。良性变化以绿色表示。编号为1至4的变化代表按严重度的递增顺序标示的叶酸可补救的等位基因。变化#5(R134C)几乎丧失功能并且不被称为叶酸可补救的(参见结果)，但其在一定程度上是叶酸可改善的(folate-augmentable)。图3.MTHFR变体的酶活性。如本文中所述，制备来自用指定的MTHFR构建体转化的细胞的粗酵母提取物并且就MTHFR活性对其进行测定。在加入放射性标记的底物之前对反应物进行热处理，进行指定的时间。测量是两组独立的一式三份测定的平均值；误差棒是6个数据点的标准差。图4.在酵母中重现的MTHFR变体的杂合子表型。如本文中所描述的，就主要的、R134C和A222V等位基因在二倍体酵母中重建MTHFR等位基因的纯合性或杂合性。通过将各自表达整合在基因组中的MTHFR的单个等位基因的单倍体菌株交配来获得二倍体。准确地测定作为亚叶酸补充的函数的生长，如对于单倍体的。图5.酵母中表达的人MTHFR变体的免疫印迹。(a)如本文中所描述的，从携带不同MTHFR等位基因的酵母细胞制备提取物并且用抗HA抗体进行检测。A222VMllOI是双置换的等位基因；“主要的”表示群体中最常见的MTHFR等位基因。最右边的两个泳道并排地是主要的等位基因和不可磷酸化的T34A等位基因(37)。(b)将本研究中鉴定的所有MTHFR变体的未磷酸化的下方条带对磷酸化的上方条带的信号强度的比作为不断增加的功能影响的严重度的函数作图。X轴上的等位基因被分类为良性的或按照活性进行排序。对所有良性等位基因(包括主要的等位基因和所有调节结构域变化)作图，其显示几乎相同的两种MTHFR的比，从而显示重叠的符号。图6.两个人B6酶CBS和CTH的B6(吡多辛)_反应性的测定。发明详述如上文中所指出的，本发明提供了用于鉴定代谢途径中的编码酶的基因的受损等位基因和测定它们对辅因子补救的敏感性的新型体内测定。复合酵母突变体提供了作为辅因子可获得性的函数的酶互补作用的研究，所述复合酵母突变体包含允许通过功能上同源的目的酶互补的第一突变和使得菌株依赖于辅因子的补充的第二突变(或突变群)。显著地，本发明还显示编码酶的基因的低频受损等位基因的辅因子补救令人惊讶地普遍，并且此类等位基因共同地可对代谢途径具有显著的影响。因此，本发明涉及诊断和预后方法，所述方法特别地聚焦于编码酶的基因的此类低频受损等位基因的检测和表征以及它们的有效补救的测定。MTHFR的“N端催化结构域”是指人MTHFR的氨基酸1至359。参照人MTHFRmRNA序列见于Genbank登录号NM_005957，而编码的656个氨基酸的序列见于Genbank登录号NP_005958。MTHFR功能障碍是指与野生型MTHFR活性的偏差。酶功能障碍以及相关的状况和疾病可由于例如酶的比活性的改变、酶的错误定位(mislocalization)、酶的水平的改变和其他改变而发生。测量酶活性和其对辅因子的敏感性的体内测定本文中提供的测定可用于测试编码酶的基因的等位基因补偿功能上同源的酵母基因中的突变的能力以及测量此类酶对辅因子的反应性。测定包括测量与酵母基因的正常功能相关且因其功能障碍而改变的输出或表型。测定包括使用酵母菌株，所述酵母菌株包含允许通过功能上同源的目的酶互补的第一突变和使得菌株在与第一基因的功能相关的可测定的表型方面依赖于辅因子的补充的第二突变。该方法包括(i)将编码酶的基因的受试等位基因引入酵母细胞，其中酵母细胞包含功能上与编码酶的基因同源的第一基因中的第一突变和使得酵母细胞依赖于酶功能所需的辅因子的补充的第二基因(或基因群)中的第二突变，其中第一突变改变与第一基因的功能相关的酵母的可测量的特征；Gi)给生长培养基补充辅因子；和Gii)检测与在野生型酶存在的情况下相比，在受试等位基因存在的情况下更少的可测量的特征的恢复，从而检测受试等位基因对第一基因突变的不完全互补作用和将受试等位基因鉴定为受损等位基因。通过改变补充的辅因子的量，测定受损等位基因对辅因子可获得性的敏感度。在优选实施方案中，编码酶的基因的受试等位基因在序列上相应于天然发生的等位基因，或相应于个体天然发生的多态性的汇编。在优选实施方案中，受试等位基因在序列上相应于人基因的等位基因或相应于多个人等位基因的个体多态性的汇编。在优选实施方案中，酵母是酿酒酵母Maccharomycescerevisiae,"S.cerevisiae")，虽然可使用其他种类的酵母。在一个实施方案中，使用二倍体酵母。二倍体酵母对于受试等位基因可以是纯合的或杂合的。二倍体酵母可包含野生型基因和受试等位基因。二倍体酵母可包含受试等位基因的组合。如本文中所证明的，功能受损等位基因可包括具有杂合表型的等位基因。在一个实施方案中，二倍体酵母对于将就互补作用进行测试的等位基因是杂合的。在一个实施方案中，二倍体酵母包含编码酶的基因的野生型等位基因和受损等位基因。在优选实施方案中，测定的测量的输出是生长。在优选实施方案中，测定方法包括将目的受试等位基因的活性与相应的野生型等位基因的活性相比较。在一个实施方案中，本发明提供了用于测定受试等位基因例如编码酶的基因的等位基因的活性的体内测定。在一个实施方案中，编码酶的基因参与或涉及叶酸/高半胱氨酸代谢。在另一个实施方案中，受试等位基因选自MTHFR等位基因、ATIC等位基因、GART等位基因、MATlA等位基因、MAT2A等位基因和MTHFS等位基因，所述测定还能够测定作为叶酸状态的函数的活性。在另一个实施方案中，编码酶的等位基因选自CTH等位基因和CBS等位基因。在一个实施方案中，受试等位基因是MTHFR等位基因，其包含N端催化结构域中的至少一个置换和C端调节区中的至少一个突变。虽然C端区域中的置换单独通常不削弱功能，但它们可与其他置换组合来在功能上损伤等位基因。在优选实施方案中，第一突变存在于酵母基因metl3中，其在功能上可被野生型人MTHFR互补。在另一个实施方案中，第一酵母基因是adel6或adel7，其在功能上可被野生型人ATIC互补。在一个实施方案中，第一酵母基因是ade7，其在功能上可被野生型人GART互补。在一个实施方案中，第一酵母基因是saml或sam2，其在功能上可被野生型人MATlA或野生型人MAT2A互补。在一个实施方案中，第一酵母基因是faul，其在功能上可被野生型人MTHFS互补。在优选实施方案中，第二突变存在于酵母基因fol3中，其使得酵母依赖于补充培养基中的叶酸。这样的酵母菌株可用于测定受试等位基因(该受试等位基因依赖于第一突变)的活性和其对叶酸状态的响应。例如，在酵母基因metl中具有第一突变且在酵母基因fol3中具有第二突变的复合酵母可用于测定MTHFR等位基因的活性和其对叶酸状态的响应。在优选实施方案中，测试方法包括改变叶酸的量以确定由受试等位基因编码的酶是否对叶酸可获得性敏感。在优选实施方案中，测定方法包括在低于50μg/ml的叶酸存在的情况下测量输出。在优选实施方案中，测试方法包括在大约50μg/ml叶酸存在的情况下测量输出。在优选实施方案中，测定方法包括在高于50μg/ml的叶酸存在的情况下测量输出。在一个实施方案中，改变叶酸以确定编码酶的基因的受损等位基因是否可被叶酸补救。在另一个实施方案中，第一酵母基因是cys3并且第二酵母基因是六重缺失snolΔSno2ΔSno3ΔsnzlΔSnz2ΔSnz3Δ。这样的酵母菌株可用于测定CTH等位基因的活性和其对维生素B6状态的响应。因此，在一个实施方案中，本发明提供了用于测定CTH等位基因的活性的体内测定，其还能够测定作为维生素B6状态的函数的活性。在优选实施方案中，CTH等位基因包括天然发生的人等位基因。在另一个优选实施方案中，CTH等位基因包括个体人CTH等位基因的汇编。在另一个实施方案中，第一酵母基因是cys4并且第二酵母基因是六重缺失snolΔSno2ΔSno3ΔsnzlΔSnz2ΔSnz3Δ。这样的酵母菌株可用于测定CBS等位基因的活性和其对维生素B6状态的敏感性。因此，在一个实施方案中，本发明提供了用于测定CBS等位基因的活性的体内测定，其还能够测定作为维生素B6状态的函数的活性。在优选实施方案中，CBS等位基因包括天然发生的人等位基因。在另一个优选实施方案中，CBS等位基因包括个体人CBS等位基因的汇编。下面的表1列出了编码酶的基因并且提供了可用于测定编码酶的基因的等位基因的活性的示例性复合酵母突变。权利要求1.筛查可通过辅因子施用补救的编码酶的基因的受损等位基因的体内方法，其包括i)将编码酶的基因的受试等位基因引入酵母细胞，其中所述酵母细胞包含功能上与编码酶的基因同源的第一基因中的第一突变以及使得所述酵母细胞依赖于酶功能所需的辅因子的补充的第二基因或基因群中的第二突变，其中所述第一突变改变与所述第一基因的功能相关的酵母的可测量的特征；(ii)给生长培养基补充辅因子；和(iii)检测与在野生型酶存在的情况下相比，在受试等位基因存在的情况下更少的可测量的特征的恢复，从而检测受试等位基因对第一基因突变的不完全互补作用，并且将受试等位基因鉴定为受损等位基因。2.权利要求1的方法，其还包括滴定补充的辅因子的量以确定受试等位基因是否是辅因子敏感性的。3.权利要求1的方法，其中所述酵母是二倍体。4.权利要求1的方法，其中二倍体酵母对于编码酶的基因的受试等位基因是杂合的。5.权利要求1的方法，其中所述第一基因是metl3，所述第二基因是fol3，所述辅因子是叶酸，所述可测量的特征是生长，以及所述编码酶的基因选自MTHFR、MAT1A、MAT2A、GART、MTHFS禾口ATIC。6.权利要求1的方法，其中所述第一基因是cys3，所述第二基因群是六重缺失snolASno2Asno3AsnzlASnz2ASnz3A，所述编码酶的基因是CTH，所述辅因子是维生素B6，以及所述可测量的特征是生长。7.权利要求1的方法，其中所述第一基因是cys4，所述第二基因群是六重缺失snolASno2Asno3AsnzlASnz2ASnz3A，所述编码酶的基因是CBS，所述辅因子是维生素B6，以及所述可测量的特征是生长。8.用于检测对辅因子依赖性酶缺陷的易感性的方法，其包括i)从所述受试者获得样品；ii)检测至少一个编码酶的基因的多个辅因子可补救的受损等位基因的存在或不存在；其中至少一个受损等位基因的存在表示受试者处于辅因子依赖性酶缺陷的风险中。9.用于鉴定和/或表征受试者的代谢途径中的酶缺陷的方法，其包括i)从所述受试者获得样品；ii)检测所述途径中至少一个编码酶的基因的多个受损等位基因的存在或不存在；其中受损等位基因的存在表示受试者具有可补救的酶缺陷。10.权利要求8或9的方法，其中所述受损等位基因是低频等位基因。11.权利要求8或9的方法，其中所述受损等位基因来自所述途径中的多个编码酶的基因。12.权利要求8或9的方法，其中利用权利要求1至7的任一项的方法鉴定所述多个受损等位基因。13.用于治疗受试者的代谢酶缺陷的方法，其包括i)从所述受试者获得样品；ii)检测至少一个编码酶的基因的多个受损等位基因的存在或不存在；以及iii)基于至少一个受损等位基因的存在给所述受试者施用辅因子补充物。14.权利要求8至13的任一项的方法，其中所述代谢途径是高半胱氨酸，所述维生素是叶酸，并且所述受损等位基因选自人MTHFR的Ml101、H213R、D223N、D291N、R519C、R519L和Q648P。15.权利要求8至13的任一项的方法，其中所述代谢途径是高半胱氨酸，所述维生素是叶酸，并且所述受损等位基因选自人MTHFS的R84Q、V119L和T202A。16.权利要求8至13的任一项的方法，其中所述代谢途径是高半胱氨酸，所述维生素是叶酸，并且所述受损等位基因选自人MAT1A的I90V、L176R和R312Q。17.权利要求8至13的任一项的方法，其中所述代谢途径是高半胱氨酸，所述维生素是叶酸，并且所述受损等位基因选自人GART的T16M、A161G、L363I、V367M、R385K、I397V、V421I、A445T、D510G、H601R、A632V、P641A、D752G、L797M、E804A和N870S。18.用于评估代谢途径中的可补救的酶缺陷的试剂盒，其包含多个用于检测所述代谢途径中的编码酶的基因的低频可补救的受损等位基因的核酸探针。19.权利要求18的试剂盒，其中利用权利要求1至7的任一项的方法鉴定所述受损等位基因。20.包含受损等位基因突变或其互补序列的分离的核酸，其中所述受损等位基因突变选自MTHFR基因的核苷酸4078；MTHFR基因的核苷酸4234；MTHFR基因的核苷酸5733；MTHFR基因的核苷酸5872；MTHFR基因的核苷酸6642；MTHFR基因的核苷酸6657；MTHFR基因的核苷酸6681；MTHFR基因的核苷酸6774；MTHFR基因的核苷酸10906；MTHFR基因的核苷酸11656；MTHFR基因的核苷酸11668；MTHFR基因的核苷酸11902;MTHFR基因的核苷酸12232；MTHFR基因的核苷酸2622；MTHFR基因的核苷酸12759；MTHFR基因的核苷酸13040；MTHFR基因的核苷酸14593；MTHFR基因的核苷酸14612;MTHFR基因的核苷酸14705；MTHFR基因的核苷酸13170；MTHFR基因的核苷酸116401；其中表A中提供了SNP的序列。21.包含受损等位基因突变或其互补序列的分离的核酸，其中所述受损等位基因突变选自ATIC基因的核苷酸1100；ATIC基因的核苷酸1114；ATIC基因的核苷酸1179；ATIC基因的核苷酸1244；ATIC基因的核苷酸1270；ATIC基因的核苷酸1288；ATIC基因的核苷酸1301；ATIC基因的核苷酸1380；ATIC基因的核苷酸1396；ATIC基因的核苷酸1453；ATIC基因的核苷酸1506；ATIC基因的核苷酸1689；ATIC基因的核苷酸7227；ATIC基因的核苷酸7232；ATIC基因的核苷酸7388；ATIC基因的核苷酸8756；ATIC基因的核苷酸8808；ATIC基因的核苷酸14099；ATIC基因的核苷酸14140；ATIC基因的核苷酸14144;ATIC基因的核苷酸14183;ATIC基因的核苷酸14229;ATIC基因的核苷酸14238；ATIC基因的核苷酸14245；ATIC基因的核苷酸14260；ATIC基因的核苷酸14489；ATIC基因的核苷酸14970；ATIC基因的核苷酸15003；ATIC基因的核苷酸15040;ATIC基因的核苷酸15043；ATIC基因的核苷酸15149；ATIC基因的核苷酸15240；ATIC基因的核苷酸15844；ATIC基因的核苷酸16063；ATIC基因的核苷酸21363;ATIC基因的核苷酸21372；ATIC基因的核苷酸21400；ATIC基因的核苷酸21521;ATIC基因的核苷酸21611；ATIC基因的核苷酸22187；ATIC基因的核苷酸22273;ATIC基因的核苷酸22282；ATIC基因的核苷酸22291；ATIC基因的核苷酸22342;ATIC基因的核苷酸22512；ATIC基因的核苷酸22519；ATIC基因的核苷酸22538酸22737酸27757酸28015酸33920酸35737酸35917酸38338酸38342ATIC基因的核苷酸22564ATIC基因的核苷酸24992ATIC基因的核苷酸27855ATIC基因的核苷酸33901ATIC基因的核苷酸33933ATIC基因的核苷酸35742ATIC基因的核苷酸35968ATIC基因的核苷酸38342ATIC基因的核苷酸38582；ATIC基因的核苷ATIC基因的核苷ATIC基因的核苷ATIC基因的核苷ATIC基因的核苷ATIC基因的核苷ATIC基因的核苷ATIC基因的核苷ATIC基因的核苷酸22589ATIC基因的核苷酸25009ATIC基因的核苷酸27985ATIC基因的核苷酸33919ATIC基因的核苷酸35723ATIC基因的核苷酸35840ATIC基因的核苷酸35973ATIC基因的核苷酸38437ATIC基因的核苷酸38627；ATIC基因的核苷酸38667和ATIC基因的核苷酸38725；其中表B中提供了核苷酸的序列。22.包含受损等位基因突变或其互补序列的分离的核酸，其中所述受损等位基因突变选自MTHFS基因的核苷酸8808；MTHFS基因的核苷酸8912；MTHFS基因的核苷酸8957；MTHFS基因的核苷酸8998；MTHFS基因的核苷酸52560；MTHFS基因的核苷酸52878和MTHFS基因的核苷酸52902；其中表C中提供了SNP的序列。23.包含受损等位基因突变或其互补序列的分离的核酸，其中所述受损等位基因突变选自MAT1A基因的核苷酸5045；MAT1A基因的核苷酸5181；MAT1A基因的核苷酸5233；MAT1A基因的核苷酸6739；MAT1A基因的核苷酸6795；MAT1A基因的核苷酸9833；MAT1A基因的核苷酸10006；MAT1A基因的核苷酸10312；MAT1A基因的核苷酸10339;MAT1A基因的核苷酸10374；MAT1A基因的核苷酸10484；MAT1A基因的核苷酸10555;MAT1A基因的核苷酸14038；MAT1A基因的核苷酸14114；MAT1A基因的核苷酸14177;MAT1A基因的核苷酸15424；MAT1A基因的核苷酸15500；MAT1A基因的核苷酸15646;MAT1A基因的核苷酸15706；MAT1A基因的核苷酸15715；MAT1A基因的核苷酸15730；MAT1A基因的核苷酸15758；MAT1A基因的核苷酸16133；MAT1A基因的核苷酸16174；MAT1A基因的核苷酸15706；MAT1A基因的核苷酸15715；MAT1A基因的核苷酸15730；MAT1A基因的核苷酸15758；MAT1A基因的核苷酸16133;MAT1A基因的核苷酸16174;MAT1A基因的核苷酸16218；其中表D中提供了SNP的序列。24.包含受损等位基因突变或其互补序列的分离的核酸，其中所述受损等位基因突变选自MAT2A基因的核苷酸2871；MAT2A基因的核苷酸2873；MAT2A基因的核苷酸MAT2A基因的核苷酸3394MAT2A基因的核苷酸3650MAT2A基因的核苷酸4449MAT2A基因的核苷酸4660MAT2A基因的核苷酸5313293934663704447646925460MAT2A基因的核苷酸3287MAT2A基因的核苷酸3498MAT2A基因的核苷酸4174MAT2A基因的核苷酸4608MAT2A基因的核苷酸4931MAT2A基因的核苷酸MAT2A基因的核苷酸MAT2A基因的核苷酸MAT2A基因的核苷酸MAT2A基因的核苷酸和MAT2A基因的核苷酸5480；其中表E中提供了SNP的序列。25.包含受损等位基因突变或其互补序列的分离的核酸，其中所述受损等位基因突变选自GART基因的核苷酸3782；GART基因的核苷酸3842；GART基因的核苷酸7745GART基因的核苷酸7984；GART基因的核苷酸10775；GART基因的核苷酸11521GART基因的核苷酸11541GART基因的核苷酸14273GART基因的核苷酸14781GART基因的核苷酸18130GART基因的核苷酸18232GART基因的核苷酸20825GART基因的核苷酸20862GART基因的核苷酸25425GART基因的核苷酸25867GART基因的核苷酸25956GART基因的核苷酸31627GART基因的核苷酸31902GART基因的核苷酸33264GART基因的核苷酸33264GART基因的核苷酸36964GART基因的核苷酸38762其中表F中提供了SNP的序列。26.包含受损等位基因突变或其互补序列的分离的核酸，其中所述受损等位基因突变选自M110I、H213R、D223N、D291N、R519C、R519L和Q648P。27.筛查与异常叶酸/高半胱氨酸代谢相关的状况或疾病的风险的方法，其包括使用权利要求8至13的方法检测受损等位基因。28.权利要求27的方法，其中所述疾病或状况选自心血管疾病、冠状动脉疾病、缺血性中风、动脉粥样硬化、神经管缺陷、口面裂、先兆子痫、早产/低出生体重、反复早期自发性流产、血栓形成、视网膜动脉闭塞、唐氏综合征、结直肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、抑郁症、精神分裂症、阿尔茨海默病/痴呆、年龄相关性黄斑变性和青光眼。28.筛查化疗剂响应潜能的方法，其包括检测选自MTHFR和GART的基因的受损等位基因。29.筛查化疗剂毒性的方法，其包括检测选自MTHFR和GART的基因的受损等位基因。30.用于检测叶酸/高半胱氨酸代谢途径中的基因的受损等位基因的阵列，其包含权利要求20至25的任一项的分离的核酸。GART基因的核苷酸11522GART基因的核苷酸14200GART基因的核苷酸14739GART基因的核苷酸18064GART基因的核苷酸18197GART基因的核苷酸20812GART基因的核苷酸15706GART基因的核苷酸22521GART基因的核苷酸25601GART基因的核苷酸25951GART基因的核苷酸26195GART基因的核苷酸31887GART基因的核苷酸33173GART基因的核苷酸33173GART基因的核苷酸36963GART基因的核苷酸37433GART基因的核苷酸38989GART基因的核苷酸12356GART基因的核苷酸14282GART基因的核苷酸18055GART基因的核苷酸18142GART基因的核苷酸18401GART基因的核苷酸16174GART基因的核苷酸22481GART基因的核苷酸25433GART基因的核苷酸25912GART基因的核苷酸26127GART基因的核苷酸31641GART基因的核苷酸31933GART基因的核苷酸31933GART基因的核苷酸33286GART基因的核苷酸37428GART基因的核苷酸38914和全文摘要本发明涉及酶变体、其对辅因子的反应性以及用于测试酶变体的活性和其对辅因子的反应性的体内测定。文档编号C12Q1/25GK102027134SQ200980117301公开日2011年4月20日申请日期2009年3月27日优先权日2008年3月27日发明者J·里尼,N·马里尼申请人:加利福尼亚大学董事会