金属螯合法制备固定化果胶酶的制作方法
【专利摘要】一种以硅胶为载体的金属螯合型固定化果胶酶的制备方法。以活化硅胶为载体，硅烷偶联剂GLYMO为交联剂，IDA为螯合配基螯合金属离子Zn2+，然后固定果胶酶，形成固定化果胶酶，其结构为硅胶-GLYMO-IDA-Zn-Enzyme，所得固定化果胶酶为固态。此固定化果胶酶可构造酶反应器，反复分批反应或装柱连续反应，可用于果汁、果酒的澄清，麻类的脱皮，木材的防腐等。
【专利说明】金属螯合法制备固定化果胶酶
【技术领域】
[0001]本发明专利涉及ー种以硅胶为载体的金属螯合型固定化果胶酶的制备エ艺。
【背景技术】
[0002]果胶酶多用于果汁果酒的澄清，麻类的脱皮，木材的防腐等，在食品、医药、酿酒、环保及纺织エ业等方面有广泛的应用。游离酶稳定性差、易失活、不能重复使用，并且反应后混入产品，纯化困难。此外，分离和提纯酶以及它们的一次性使用也大大增加了其作为催化剂的成本。以固定化酶代替游离酶有很多显著的优点:①酶的稳定性増加，可反复使用；
②易于将固定化酶和产物、底物分离；③可构造酶反应器，反复分批反应或装柱连续反应；
④酶的使用效率显著増加，生产成本大大降低。传统的果胶酶固定化方法有包理法、交联法、吸附法等，但酶活回收率较低，稳定性差。直接化学键合法与前述方法相比具有酶与载体间的连接牢固，稳定性好的特点，但是反应条件激烈，控制条件苛刻，对于载体的要求较高，酶活回收率较低，且成本一般较高。
【发明内容】
[0003]本发明专利的目的是提供一种以硅胶为载体的金属螯合型固定化果胶酶的制备エ艺，该エ艺制得的固定化果胶酶为固体颗粒状。
[0004]本发明专利解决其技术问题所采用的技术方案是以活化硅胶为载体，GLYMO为交联剂，IDA为螯合配基螯合金属离子Zn2+，然后固定果胶酶，形成固定化果胶酶Sllane -GLYMO-1DA-Zn-Enzyme,所得固定化果胶酶为固态。
[0005]本发明专利的有益效果是，所得固定化果胶酶为固态颗粒，酶活回收率> 90 %，最适反应PH4.0，最适反应温度55°C，重复使用10次后酶活> 80%。
【专利附图】
【附图说明】
[0006]附图是本发明提供的以硅胶为载体的金属螯合型固定化果胶酶的制备エ艺的各步反应示意图。
【具体实施方式】
[0007]①将水浮选好的硅胶加入到1:1的盐酸中，120°C回流4h，产物水洗于90°C下烘
干，备用。
[0008]②将PH为11的螯合剂IDA溶液转移到圆底烧瓶中，利用冰浴使温度降到0°C，用移液管量取偶联剂硅烷偶联剂GLYM0，在电磁搅拌下慢慢的滴加入反应液中，加热到65°C，在搅拌下反应6h。反应后得到淡黄色、澄清透明的液体即为GLYM0-1DA，用浓盐酸调节PH到6，转移到密封的容器中，放入冰箱中保存。
[0009]③将活化的硅胶加入用0.2mol/l的CH3COONa调节PH5.5的溶液中加热到95°C，再加入GLYMO-1DA产物，回流2h，产物水洗，备用。[0010]④用0.lmol/1的ZnSO4对硅胶-GLYM0-1DA加载Zn2+2h，得到产物硅胶-GLYMO-1DA-Zn2+，用大量的水洗，离心，备用。
[0011]⑤将硅胶-GLYMO-1DA-Zn2+和果胶酶加入到用0.lmol/1的磷酸盐调节PH为7.0的溶液中，于室温下反应6h，得到的产物即为固定化果胶酶:硅胶-GLYMO-1DA-Zn-果胶酶，用磷酸缓冲液洗，水洗，NaCl洗，`水洗，冷藏备用。
【权利要求】
1.ー种固定化果胶酶的制备方法，其反应如下:
2.如权利要求1所述的固定化果胶酶的制备方法，其特征在干，步骤①所述硅胶的活化是在1:1盐酸中120°C回流4h。
3.如权利要求1所述的固定化果胶酶的制备方法，其特征在干，步骤②所述螯合剂为亚氨基二こ酸，偶联剂为硅烷偶联剂3-(2, 3-环氧丙氧)丙基二甲氧基硅烷、Y-氨丙基3こ氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷，加热搅拌温度为65°C，反应时间为4~8h。
4.如权利要求1所述的固定化果胶酶的制备方法，其特征在干，步骤③所述加热温度为95°C，回流时间为2h。
5.如权利要求1所述的固定化果胶酶的制备方法，其特征在于，步骤④所述Zn2+加载反应时间为I~4h。
6.如权利要求1所述的固定化果胶酶的制备方法，其特征在于，步骤⑤所述反应温度为室温，反应时间为4~6h。
【文档编号】C12N11/14GK103589712SQ201210292765
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2012年8月16日 优先权日:2012年8月16日
【发明者】党辉, 陈佩 申请人:党辉, 陈佩