专利名称：高产脲酶的聚多曲霉及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及高产脲酶的聚多曲霉及其用途，属于微生物领域。
背景技术：
脲酶(Urease, urea amidohydrolase, EC 3. 5.)，又称尿素氨基水解酶，存在于大多数细菌、曲霉和高等植物里。它是一种酰胺酶、能使有机物质分子中酶键的水解。其作用极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和碳酸[1]。在国外，乳酸杆菌已经被用于生产脲酶酶制剂，能有效地减少葡萄酒中尿素含量 [2_6]。在国内，脲酶已经被用于降低黄酒中尿素含量。但是，酒用脲酶在我国尚未形成生产能力，目前所用的酶制剂均从国外进口 [7]。而在白酒行业中，这方面的研究几乎是空白。因此酒用脲酶的研究对我国酿酒业的发展，拓展国际市场等方面均有深远的意义。目前，江南大学分离获得的肠出血性大肠埃希氏菌，产脲酶活性为O.58Um。浙江大学分离的高产酸性脲酶菌株肺炎克雷伯氏菌，产脲酶活性达到17. 17U[9]。这些产脲酶菌株的属于细菌类，是从动物粪便(鸟粪、鼠粪、牛羊粪便)、农田土壤、污泥等中分离获得[8]。现有研究结果表明，海洋来源的聚多曲霉(Aspergillus sydowii) PFW-13能够产生抗肿瘤活性次级代谢产物[1°];胡利勇报道了 A. sydowii LC-562有较强的产纤维素酶活性[1]。至今未报道聚多曲霉有高产脲酶的能力。
发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题是提供一株高产脲酶的聚多曲霉菌株Aspergillus sydowii JNC-U5,该菌株已于2012年9月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No. 6577，保藏地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。进一步的，所述聚多曲霉的18S rDNA的序列如SEQ ID No.1所示。本发明还提供了所述的聚多曲霉在生产脲酶中的用途。本发明还提供了所述的聚多曲霉在酿酒中的用途。本发明还提供了所述的聚多曲霉在黄酒生产中的用途。本发明的菌株是从四川剑南春(集团)有限责任公司的酒曲中分离获得。该菌株为聚多曲霉，特征如下(I)菌落特征菌落在ME培养基上辐射生长，有辐射形沟纹，28°C培养7天直径约22_30mm ;颜色呈灰绿色，周围有白色的晕圈；菌落反面呈淡褐或暗褐色。(2)分生孢子及分生孢子梗特征分生孢子头球形，小分生孢子头，呈疏松柱形或散乱；分生孢子梗直接生于基质或生于气生菌丝，分生孢子为球形或近球形，孢子表面有小刺。(3)培养条件
培养基5 7波美麦芽汁；温度3(T35°C ;液态发酵15(T200rpm，6 8天。本发明的有益效果在于本发明首次发现一株产脲酶的聚多曲霉。该菌株产脲酶活性可达到49. 7U，为脲酶的生产提供了宝贵的菌株资源。本发明的聚多曲霉是从酒曲中分离出来的，所产的脲酶可用于提高酒曲中脲酶的活性，有效降低曲药中尿素的含量，提高白酒的安全质量。同时，本发明聚多曲霉也为生产酒用脲酶制剂提供了新的选择，具有极大的应用和推广价值。本发明提供的聚多曲霉(Aspergillus sydowii) JNC-U5,于2012年9月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No. 6577，保藏地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
图1本发明菌株的菌落形态图2本发明菌株的分生孢子及分生孢子梗的形态图3本发明菌株分生孢子的超微结构图4本发明菌株的分生孢子梗的超微结构
具体实施例方式本发明的聚多曲霉(Aspergillus sydowii)JNC_U5于2012年9月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No. 6577，保藏地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。进一步的，所述聚多曲霉的18S rDNA的序列如SEQ ID No.1所示。本发明还提供了所述的聚多曲霉在生产脲酶中的用途。本发明还提供了所述的聚多曲霉在酿酒中的用途。本发明还提供了所述的聚多曲霉在黄酒生产中的用途。本发明的菌株是从四川剑南春(集团)有限责任公司的酒曲中分离获得。本发明的聚多曲霉产脲酶能力可以达到49. 7U，是一株高产脲酶的新菌株，可用于脲酶的生产。本发明的聚多曲霉是从酒曲中分离出来的，所产的脲酶可用于提高酒曲中脲酶的活性，有效降低曲药中尿素的含量，提高白酒的安全质量。因此，本发明的聚多曲霉菌株可用于酿酒生产，特别是黄酒生产。同时，本发明的聚多曲霉也为生产酒用脲酶制剂提供了宝贵的菌种资源，具有极大的应用和推广价值。实施例1菌株筛选1、菌株的初筛材料四川剑南春(集团)有限责任公司使用的酒曲培养基蛋白胨10. 0g，葡萄糖18g，0. 4%酚酞溶液3mL，氯化钠5. 0g，磷酸二氢钾
2.Og,琼脂20. O,蒸馏水1000mL。除酚酞外，溶解上述各种成分，并调pH为6. 8飞.9，然后加入酚酞指示剂。分装三角瓶，121°C灭菌15min，待培养基冷至50_55°C时，加入预先过滤灭菌的20%尿素水溶液，使其在培养基中在最终浓度为2%，摇匀后备用。实验方法无菌条件下取10克酒曲于装有90mL无菌水并放有玻珠的25mL三角瓶中，置摇床上室温振荡30分钟。取菌液按10倍的梯度稀释到10_6，取各稀释度菌液ImL放入无菌平皿中，倒入灭菌后冷却至50°C的培养基，混匀，待凝固后放入30°C培养箱培养2 5天，按菌落周围是否变红进行初筛，结果见表I。因为脲酶分解尿素产生氨使培养基呈碱性；酚酞遇碱变红，颜色的深浅初步表示了菌株产脲酶能力的大小。挑选菌落周围变红的单菌落保存。初筛得到的菌株经形态观察发现主要为霉菌和细菌。表I初筛得到菌株的变红时间及颜色深浅
权利要求
1.高产脲酶的聚多曲霉Aspergillussydowii JNC-U5，其保藏号为CGMCC No. 6577。
2.根据权利要求1所述的产脲酶聚多曲霉，其特征在于其18SrDNA序列如SEQ IDNo.1所示。
3.权利要求1或2所述的聚多曲霉在生产脲酶中的用途。
4.权利要求1或2所述的聚多曲霉在酿酒中的用途。
5.权利要求1或2所述的聚多曲霉在黄酒生产中的用途。
全文摘要
本发明涉及一株高产脲酶的聚多曲霉(Aspergillus sydowii)及其用途，属于微生物领域。本发明所要解决的第一个技术问题是提供一株高产脲酶的聚多曲霉菌株Aspergillus sydowiiJNC-U5。本发明的聚多曲霉菌株已于2012年9月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No.6577。本发明提供聚多曲霉产脲酶可以达到49.7U，可用于高纯度脲酶的生产。
文档编号C12N9/78GK102994398SQ20121053202
公开日2013年3月27日 申请日期2012年12月11日 优先权日2012年12月11日
发明者唐清兰, 徐姿静, 魏勇, 徐占成 申请人:四川绵竹剑南春酒厂有限公司