抗凋亡蛋白抑制剂的制作方法

专利名称：抗凋亡蛋白抑制剂的制作方法
抗凋亡蛋白抑制剂背景 发明领域本发明一般涉及用于治疗多种病症、疾病和病理状况的化合物，以及更具体地，涉 及包括噻唑烷部分的化学化合物治疗这些病症的用途。
背景技术：
已知细胞中的凋亡级联反应引起细胞死亡。当细胞过量产生抗凋亡蛋白，例如 BCL-2家族蛋白时，可能随即发生不可控制的细胞生长，有可能引起多种严重疾病、病症和 病状，特别是癌症的发生。因此，对抑制抗凋亡蛋白，例如BCL-2家族蛋白存在需要。以往已鉴定多种可能的 BCL-2拮抗物。但是，这些化合物没有一个抑制BCL-2家族中的所有六种蛋白，S卩，所有下列 蛋白BCL-Xl、BCL-2、BCL-W、BCL-B, BFL-I和MCL-1。例如，以往鉴定的合成的BCL-2拮抗 物没有一个有效抑制蛋白BFL-I。因此，这些拮抗物的效力不像期望的那样高。另外，现有 的拮抗物的特点是其它缺点，例如功能不全(insufficiency)或安全问题。鉴于现有BCL-2抑制剂的上述缺点和缺陷，期望抗凋亡蛋白例如BCL-2家族蛋白 的新的拮抗物。期望的是，这些新的拮抗物比现有化合物更安全和更有效。发明概述根据本发明的一个实施方式，提供具有结构A的化合物，或其药学上可接受的盐、 水合物、N-氧化物或溶剂化物 在具有结构A的化合物中，R1和R2中的每个可以是氢、取代或未取代的直链脂族 基、卤素、烷氧基、卤素取代的烷基、卤素取代的烷氧基、羟基、羧基、氰基、酰氨基、取代或未 取代的脂环基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂环基；X可以是氧、硫或亚氨基； 以及ζ是可具有结构I、II和III中任何一个的部分 在部分1、11和111的每个中，民、礼、1 5、1 6、1 7、1 8和1 9中的每个可以是氢、取代或未
取代的直链脂族基、卤素、烷氧基、卤素取代的烷基、卤素取代的烷氧基、羟基、羧基、氰基、 酰氨基、取代或未取代的脂环基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂环基。在部分 I、II和III的每个中，*符号表示部分Z与C( = )-Ri结构中紧邻碳的连接点。根据本发明的另一个实施方式，提供用于治疗癌症或自身免疫疾病的方法，包括 向需要所述治疗的对象施用治疗有效量的至少一种具有结构11的化合物，或其药学上可 接受的盐、水合物、N-氧化物或溶剂化物 附图简述

图1表示本发明化合物与BCL-2家族蛋白的预测结合模式。图2A表示本发明另一化合物与BCL-2家族蛋白的预测结合模式。图2B表示本发明又一化合物与BCL-2家族蛋白的预测结合模式。图3提供显示本发明化合物与BCL-2家族蛋白结合的NMR数据。图4和5提供显示本发明其它化合物与BCL-2家族蛋白结合的NMR数据。图6、7和8是示意性表示制备本发明的一些化合物的一些示例性方法的反应方 案。发明详述应用下列术语、定义和缩写一般性术语“烷基”和“烷氧基”是指直链和支链基团二者；对单个基团的指代具体 包括直链或支链基团，而不是二者兼有。例如，对“丙基”的指代仅包括直链基团，而对“异 丙基”的指代仅包括支链基团。术语“烷基”是指单价直链或支链烃基。可使用的烷基结构的实例包括(C1-C6)烷 基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、3-戊基或己基。术语“卤”在本文是指氟、氯、溴或碘。术语“卤烷基”是指卤素取代的烷基，例如 卤(C1-C6)烷基，例如碘甲基、溴甲基、氯甲基、氟甲基、三氟甲基、2-氯乙基、2-氟乙基、2，2， 2-三氟乙基或五氟乙基。术语“烷氧基(alkoxyl) ”或“烷氧基(alkoxy) ”是指_0_烷基部分，其中烷基如上 定义。可使用的烷氧基结构的实例包括(C1-C6)烷氧基基团，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、 异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、3-戊氧基或己氧基。术语“羧基(carboxyl)，，或“羧基(carboxy)，，是指羰基和羟基官能团组合并具有 结构-C( = 0)-OH的部分。术语“脂族的”是指仅含有直链或支链碳原子排列并缺乏任何环或芳香性的部分。术语“脂环的”是指除了芳香族结构的任何环结构。术语“芳香的”是指环状共轭分子实体，由于离域，其具有显著高于假设定域结构 的稳定性，例如凯库勒结构。术语“芳基”是指苯基基团或具有至少一个芳环的单边稠双环碳环结构。芳基的一 些实例包括但不限于苯基、茚基或萘基、联苯基、二氢萘基、四氢萘基、茚满基、奧基、蒽基、 菲基、芴基和芘基。术语“杂环”或“杂环”是指单价饱和或不饱和基团，其具有单环或多个稠环，环中 具有1至8个碳原子和1至4个选自氮、硫或氧的杂原子。杂环基可以任选地用1至3个取 代基取代，所述取代基例如但不限于C1,烷基、C1,烷氧基、芳基、卤素、-OH、-SH、-CN、-NO2 或三卤甲基。杂环基的一些实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡喃基、吡咯基、吲哚基、苯 并咪唑基、吡啶基等。术语“氰基”是指官能团-CN，即碳和氮原子用三键连接的基团。术语“亚胺”或亚氨基是指官能团-CR = N-，其中碳和氮原子用双键连接。术语“酰胺”或“酰氨基”是指部分-CON(R1R2)，其中R1和R2中的每个独立地是氢 或烷基。
术语“噻唑烷”是指化合物，其含有衍生自具有下式的化合物的部分 术语“萘”是指化合物，其含有衍生自具有下式的化合物的部分 术语“二氢化萘”是指化合物，其含有衍生自部分氢化萘、例如衍生自具有下式的 化合物的部分 术语“患者”是指用本发明的方法治疗的生物体。这些生物体包括但不限于人类。 在本发明的内容中，术语“对象”通常是指将接受或已接受如下所述治疗(例如，给予本发 明化合物和任选地一种或更多种另外的治疗剂)的个体。术语“BCL-2蛋白家族”是指目前包括至少下列蛋白的蛋白家族BCL-Xp BCL-2、 BCL-W、BCL-B, BFL-I 和 MCL-1。根据本发明的一个实施方式，提供具有结构A的化合物或其药学上可接受的盐、 水合物或溶剂化物，用于治疗多种疾病、病症和病状 在具有结构A的化合物中，R1和R2中的每个包括氢、取代或未取代的直链脂族基、 卤素、烷氧基、卤素取代的烷基、卤素取代的烷氧基、羟基、羧基、氰基、酰氨基、取代或未取 代的脂环基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂环基；X包括氧、硫或亚氨基；以及Z是选自具有结构I、II和III的基团的部分
在部分1、11和111的每个中，民、礼、1 5、1 6、1 7、1 8和1 9中的每个可以是氢、取代或未
取代的直链脂族基、卤素、烷氧基、卤素取代的烷基、卤素取代的烷氧基、羟基、羧基、氰基、 酰氨基、取代或未取代的脂环基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂环基中的任一。 在部分I、II和III的每个中，*符号表示部分Z与C( = )-Ri结构中紧邻碳的连接点。因此，在实施方式中，在具有结构A的化合物中，Z是取代的萘基(S卩，部分I )，具 有这种取代基ζ的化合物可具有结构AI 在具有结构AI的化合物中，R1^ R2> R3> R4> R5> R6> R7> R8和R9中的每个可以独立地
是氢、取代或未取代的直链脂族基、卤素、烷氧基、卤素取代的烷基、卤素取代的烷氧基、羟 基、羧基、氰基、酰氨基、取代或未取代的脂环基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂 环基。例如，R1^ R2> R3> R4> R5> R6> R7> R8和R9中的每个可以独立地是氢、甲基、正丙基、异丙 基、氟、氯、溴、苯基、羟基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、羧基或-C(O)NH2中的任一。在其它实施方式中，在具有结构A的化合物中，Z可以是取代的二氢萘基(S卩，部 分II )，并且具有这种取代基Z的化合物可具有结构AII 在具有结构AII的化合物中，礼、R2、R3>R4>R5>R6>R7>R8和R9中的每个可以独立地
是氢、取代或未取代的直链脂族基、卤素、烷氧基、卤素取代的烷基、卤素取代的烷氧基、羟 基、羧基、氰基、酰氨基、取代或未取代的脂环基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂 环基。例如，R1^ R2> R3> R4> R5> R6> R7> R8和R9中的每个可以独立地是氢、甲基、正丙基、异丙 基、氟、氯、溴、苯基、羟基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、羧基或-C(O)NH2。在其它实施方式中，在具有结构A的化合物中，Z可以是部分III并且具有这种取代 基Z的化合物可具有结构AIII : 在具有结构AIII的化合物中，礼、1 2、1 3、1 4、1 5、1 6和1 7中的每个可以独立地是氢、
取代或未取代的直链脂族基、卤素、烷氧基、卤素取代的烷基、卤素取代的烷氧基、羟基、羧 基、氰基、酰氨基、取代或未取代的脂环基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂环基。 例如，R1^ R2> R3、R4> R5、R6和R7中的每个可以独立地是氢、甲基、正丙基、异丙基、氟、氯、溴、 苯基、羟基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、羧基或-C(O)NH2。可使用的结构A所述的一些示例性化合物包括2-[5-(2_甲基_3_苯基亚烯丙 基)-4_氧代-2-硫代噻唑烷-3-基]-2-苯乙酸(化合物1)和3-甲基-2-[5-(2-甲 基-3-苯基亚烯丙基)-4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基]丁酸(化合物2)，如下所示 由此可见，示例性化合物1和2在结构AIII的范围内，其中，R1^ R2> R3> R4和R5中
的每个是氢，R6是甲基，X是硫和R7是苯基(化合物1)或异丙基(化合物2)。
可使用的结构A所述的一些另外的示例性化合物包括下列化合物2- [5- (1-异丙基-2，3- 二甲氧基_7_甲基萘_6_基-亚甲基)~4~氧代_2_硫代 噻唑烷-3-基]-3-甲基丁酸(化合物3)；2-[5-((2，3-二羟基-1-异丙基-7-甲基萘-6-基)亚甲基)_4_氧代_2_硫代噻 唑烷-3-基]-3-甲基丁酸(化合物4)；2-[5-((4-溴-1，2-二氢-6，7-二甲氧基萘-3-基)亚甲基)_4_氧代_2_硫代噻 唑烷-3-基]-3-甲基丁酸(化合物5)；2-[5-((4-溴-1，2-二氢-6，7-二羟基萘-3-基)亚甲基)_4_氧代_2_硫代噻唑 烷-3-基]-3-甲基丁酸(化合物6)；2-[5-((1，2_二甲氧基萘-3-基)亚甲基)_4_氧代_2_硫代噻唑烷_3_基]_3_甲 基丁酸(化合物7)；2-[5_((萘-2-基)亚甲基)-4-氧代_2_硫代噻唑烷_3_基]乙酸(化合物8)；3-甲基-2-[4-氧代-5-(3-苯基亚烯丙基)-2-硫代噻唑烷-3-基]丁酸(化合 物9)；和2- [4-氧代-5- (3-苯基亚烯丙基)_2_硫代噻唑烷_3_基]丙酸(化合物10)。如上鉴定的化合物3至10的结构显示如下 本发明的一些化合物可具有手性中心，并可以以旋光形式和外消旋形式分离。一 些化合物可显示多形性。本发明的化合物包括任何外消旋、旋光、多形或立体异构形式或其 混合物，其具有本文所述的有用性质。如果期望，可使用通常已知的技术制备旋光形式，例 如，通过重结晶技术进行外消旋形式的拆分、通过从旋光原料合成、通过手性合成或通过使 用手性固定相进行层析分离。在一个实施方式中，提供用于抑制抗凋亡家族蛋白BCL-2的方法。该方法包括在 有利于BCL-2蛋白与本发明化合物接触的条件下，将BCL-2蛋白与至少一个如上鉴定的化 合物接触。尽管不期望被束缚于具体的机制，但认为如上鉴定的本发明化合物能够抑制 BCL-2家族的六个蛋白，例如，能够抑制例如BCL-Xl、BCL-2、BCL-W、BCL-B, BFL-I和MCL-1 的所有这些蛋白。本发明的一些化合物与BCL-2蛋白的预测结合模式由图1 (下文所示的化合物11 的结合)、图2A(上文所示的化合物1的结合)和图2B(上文所示的化合物2的结合)图 示。结合进一步由图3-5图示，图3-5显示支持结合已发生的结论并表明BCL-\蛋白中结 合位点的NMR数据。图3显示下文所示的化合物11与不含抑制剂的组合物比较的这些NMR 数据。图4和图5显示上文所示化合物6和7的这些NMR数据。也通过测量本发明的一些 化合物的解离常数(Kd)值来评估抑制。这些抑制数据显示于表1。表1.本发明的一些化合物的抑制数据 根据其它实施方式，提供用于治疗疾病或病症的方法。该方法可包括施用向需要 这种治疗的对象施用有效量的任何上述化合物或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化 物。可被治疗的疾病或病症的非限制实例是癌症和自身免疫疾病。根据另一个实施方式，提供用于治疗癌症的方法。该方法包括向需要所述治疗的 对象施用治疗有效量的2- [5- (2-甲基-3-苯基亚烯丙基)-4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基] 乙酸——其是具有结构11的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、N-氧化物或溶剂化
物 由此可见，化合物11在结构AIII的范围内，其中HHRjPR7中的每个是 氢，R6是甲基和X是硫。提供使用化合物11治疗癌症的方法。一方面，癌症不是结肠癌。本发明的一些化合物也在B6BCL-2转基因小鼠体内测试。如上所示，本发明的化 合物3、5和11显示等于或优于已知化合物棉子酚和阿朴棉子酚的体内活性。另一个已 知化合物阿朴棉子酚酮(apogossypolone)根本没有效果。棉子酚描述在例如美国专利 号 7，186，708 中。阿朴棉子酚描述在例如 Meyers A.I. ；Willemsen J. J.，Tetrahedron Letters, vol. 37，No. 6，February, 51996, pp. 791-792 中。关于体内效力，这些化合物的功 效为下列顺序化合物11 >化合物5 >化合物3 =阿朴棉子酚=棉子酚。关于毒性，毒性作 用严重性以下列顺序降低棉子酚>>>阿朴棉子酚>化合物5 =化合物3 =化合物11。根据另一个实施方式，任何上述化合物可用于制备用于治疗哺乳动物例如人类的 病理状况或症状的药物。该药物可涉及治疗癌症，其在上述限制内。具有结构11的化合物 可能不优选地用于治疗结肠癌。根据另一个实施方式，提供药学组合物，该药学组合物包括任何上述化合物或其 药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物以及药学上可接受的稀释剂或载体。该药学组合物 可用于治疗癌症。该药学组合物可进一步任选地包括一种或更多种另外的治疗性抗癌剂， 包括但不限于这些药剂，例如(1)生物碱，包括微管抑制剂(例如长春新碱、长春碱和长 春地辛等)，微管稳定剂(例如，紫杉醇[Taxol]和多西紫杉醇、泰素帝等)，和染色质功能 抑制剂，包括拓扑异构酶抑制剂，例如，表鬼臼毒素(例如，依托泊苷[VP-16]和替尼泊苷 [VM-26]等)，和靶向拓扑异构酶I的药剂(例如，喜树碱和Isirin0tecan[CPT-ll]等)； (2)共价DNA-结合剂[烷化剂]，包括氮芥(例如，Mechlorethamine，苯丁酸氮芥，环磷酰 胺，Ifosphamide和白消安[马利兰]等)，亚硝脲(例如，卡氮芥，罗氮芥和甲环亚硝脲等)和其它烷化剂(例如，达卡巴嗪，羟甲基三聚氰胺，塞替派和Mitocycin等)；(3)非共 价DNA-结合剂[抗肿瘤抗生素]，包括核酸抑制剂(例如，更生霉素[放线菌素D]等)， 蒽环类抗生素(例如，柔红霉素[道诺霉素和正定霉素]，多柔比星[亚德里亚霉素]和去 甲氧正定霉素[依达比星]等)，蒽二酮(例如，蒽环类抗生素类似物，例如，[米托蒽醌] 等)，博来霉素(硫酸博来霉素)等和普卡霉素(光辉霉素)等；(4)抗代谢物，包括抗叶 酸剂(例如，甲氨蝶呤，富血铁_叶酸和甲氨蝶呤钠等)，嘌呤抗代谢物(例如，6-巯基嘌呤 [6-MP，巯嘌呤]，6-硫代鸟嘌呤[6-TG]，硫唑嘌呤，无环鸟苷，更昔洛韦，氯脱氧腺苷，2-氯 脱氧腺苷[CdA]和2'-脱氧助间型霉素[喷司他丁]等)，嘧啶拮抗物(例如，氟嘧啶[例 如，5-氟尿嘧啶(Adrucil)，5-氟脱氧尿苷(FdUrd)(氟尿苷)]等)和阿糖胞苷(例如，赛 德萨[ara-C]和氟达拉滨等)；(5)酶，包括L-天冬酰胺酶和羟基脲等；(6)激素，包括糖皮 质激素，例如，抗雌激素(例如，他莫昔芬等)，非类固醇抗雄激素(例如，氟他胺等)和芳香 酶抑制剂(例如，阿那曲唑[瑞宁得]等)；(7)钼化合物(例如，顺钼和卡钼等)；(8)与抗 癌药、毒素和/或放射性核素等偶联的单克隆抗体等；(9)生物反应修饰剂(例如，干扰素 [例如，IFN-α等]和白细胞介素[例如，IL-2等]等)；(10)过继免疫疗法；(11)造血生 长因子；(12)诱导肿瘤细胞分化的药剂(例如，全反式维甲酸等)；(13)基因治疗剂；(14) 反义治疗剂；(15)肿瘤疫苗；(16)针对肿瘤转移的药剂(例如，Batimistat等)，(17)血管 发生抑制剂；和(18)选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI’ S)。 可以使用的合适的SSRIs的代表性但不是限制性的实例包括舍曲林(例如，盐 酸舍曲林，Pfizer, Inc.以商标“Zoloft ”销售)或舍曲林代谢物氟伏沙明(例如，马来 酸氟伏沙明，Solvay Pharmaceuticals, Inc.以商标“LUVOX ”销售by)，帕罗西汀(例 如，盐酸帕罗西汀，SmithKlineBeecham Pharmaceuticals, Inc.以商标“Paxil ，’销售)， 氟西汀(例如，盐酸氟西汀，Eli Lilly and Company以商标“prozac ”或“Sarafem ’’销 售)禾口西駄普兰(例如，氧漠酸西駄普兰，Forest Laboratories, Parke-Davis, Inc.以 商标“Celexa ”销售)及其代谢物。另外的实例包括文拉法辛(例如，盐酸文拉法辛， Wyeth-Ayerst Laboratories 以商标"Effexor ’’销售)，米氮平(例如，Organon, Inc.以
商标“Remeron ”销售)，丁螺环酮(例如，盐酸丁螺环酮，Bristol-Myers Squibb以商 标“Buspar ”销售)，曲唑酮(例如，盐酸曲唑酮，Bristol-Myers Squibb和Apothecon 以商标“Desyrel ’’销售)，萘发扎酮(例如，盐酸萘发扎酮，Bristol-Myers Squibb以商 标“Serzon ”销售)，氯米帕明(例如，盐酸氯米帕明，Novopharm，LTD, Ciba and Taro Pharmaceuticals 以商标"Anafranil ，’销售)，丙米嗪(例如，盐酸丙米嗪，Glaxo-Welcome， Inc.以商标“Tofranil ”销售)，去甲替林(例如，盐酸去甲替林，Lundbeck以商标 “Nortrinel ’’销售)，米安色林(例如，Organon, Inc.以商标“Tolvon ”销售)，度洛西汀 (例如，盐酸度洛西汀，由Eli Lilly and Company销售)，达泊西汀(例如，盐酸达泊西汀， 由ALZA Corporation销售)，利托西汀(例如，盐酸利托西汀，由Synthelabo Recherche (L. Ε. R. S.)，Bagneux, France.销售)，非莫西汀，洛非帕明(例如，MERCK & Co.，Inc.以商标 “Gamonil ’’销售)，托莫西汀(例如，由Eli Lilly and Company销售)。本发明包括目前 使用或以后发现或配制的SSRIs。包括如上所列的SSRIs可以以每日约2mg至约2，500mg之间的量口服施用。在广泛的意义上说，任何癌症或肿瘤(例如血液肿瘤和实体肿瘤)都可以根据本 发明的实施方式治疗。可以根据本发明的实施方式治疗的示例性癌包括但不限于头颈癌、 脑癌(例如多形性恶性胶质瘤)、乳腺癌、结肠直肠癌、食道癌、胃癌、肝癌、膀胱癌、宫颈癌、 子宫内膜癌、肺癌(非小细胞)、卵巢癌和其它妇科癌(例如子宫和子宫颈肿瘤)、胰腺癌、 前列腺癌、肾癌、绒毛膜癌(肺癌)、皮肤癌(例如黑色素瘤、基底细胞癌)、毛细胞白血病、 慢性淋巴白血病、急性淋巴细胞白血病(乳腺和膀胱)、急性髓细胞性白血病、脑膜白血病、 慢性髓细胞性白血病和红白血病。更常见地，治疗的癌症包括白血病和B细胞癌(例如淋 巴瘤、多发性骨髓瘤和MDS。本文提供的化合物的生物学活性可通过体外和体内分析以及本领域已知的方法 评价，包括例如:Alley, Μ. C.等 Feasibility of DrugScreening with Panels of Human Tumor Cell Lines Using a MicrocultureTetrazolium Assay. Cancer Research 48: 589-601,1988 ；Grever,M. R.等The National Cancer Institute :Cancer Drug Discovery and DeveIopmentProgram. Seminars in Oncology, Vol. 19, No. 6, pp 622—638,1992 ； Boyd, M.R.禾口 Paul1, K. D. Some Practical Considerations and Applications ofthe National Cancer Institute In Vitro Anticancer Drug Discovery Screen. Drug Development Research 34 91~109,1995 ；Shoemaker, R. H. TheNCI60 Human Tumour Cell line Anticancer Drug Screen. Nature Reviews，6 :813_823，2006 中所描述的，其中每个 通过引用全部并入本文。可使用本发明的化合物和方法治疗的自身免疫疾病的非限制实例包括类风湿关 节炎、银屑病关节炎、幼年特发性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、重症肌无力、青少 年型糖尿病、肾小球肾炎、自身免疫性甲状腺炎、贝切特病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、大疱 性类天疱疮、结节病、牛皮癣、鱼鳞病、格雷夫斯眼病、牛皮癣、牛皮癣炎性肠病和哮喘。在本发明化合物的碱性或酸性足以形成稳定无毒的酸式或碱式盐的情况下，施用 作为盐的化合物可以是合适的。药学上可接受的盐的实例包括与酸形成的有机酸加成盐， 所述酸形成生理学可接受的阴离子，例如，甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二 酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、酮戊二酸盐和甘油磷酸盐。也可能形成 合适的无机盐，包括盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐。药学上可接受的盐可以使 用本领域熟知的标准方法获得，例如通过将足够碱性的化合物例如胺与提供生理学可接受 的阴离子的合适的酸反应。也可制备羧酸的碱金属(例如钠、钾或锂)或碱土金属(例如 钙)盐。并入本发明化合物的任何片剂、含片、丸剂、胶囊等可还包含粘合剂例如黄蓍胶、 阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂例如磷酸二钙；崩解剂例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、褐 藻酸等；润滑剂例如硬脂酸镁；以及可添加甜味剂例如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜，或矫 味剂例如薄荷油、冬青油或樱桃调味剂。当本发明化合物的单位剂量形式存在于胶囊中时， 除了上述类型的物质外，它还可以包含液体载体，例如植物油或聚乙二醇。多种其它物质可 以作为包衣存在或另外地改变固体单位剂量形式的物理形式。例如、片剂、丸剂或胶囊可以 用明胶、蜡、虫胶或糖等包衣。糖浆或酏剂可以含有活性化合物、作为甜味剂的蔗糖或果糖、 作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和矫味剂例如樱桃或橙味剂。用于制备任何单位剂量形式的任何物质在使用量下都应是药学上可接受的和实质无毒的。 另外，活性化合物可以并入缓释制剂和设备中。本发明的活性化合物也可通过输注或注射静脉内或腹膜内施用。化合物或盐的溶 液可在水中制备，任选地与无毒表面活性剂混合。分散液也可在甘油、液体聚乙二醇、三醋 汀及其混合物中和在油中制备。在储存和使用的通常条件下，这些制备物可含有防腐剂以 防止微生物的生长。可这样制备无菌注射溶液按照需要，将合适溶剂中的足够治疗量的本发明化合 物与如上列举的各种其它成分混合，然后过滤灭菌。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末 的情况下，制备的优选方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其产生之前灭菌过滤溶液中存在 的活性成分加任何另外期望成分的粉末。对于外部(topical)施用，本发明化合物可以以纯的形式应用，即，当它们是液体 时。但是，通常期望的是，将它们作为与皮肤病学可接受的载体组合的组合物或制剂施用至 皮肤，所述载体可以是固体或液体。有用的固体载体包括细碎的固体，例如滑石、粘土、微晶 纤维素、硅石、矾土等。有用的液体载体包括水、醇或乙二醇或水-醇/乙二醇掺合物，其中 本发明化合物可以以有效水平、任选地在无毒表面活性剂的辅助下溶解或分散。可添加佐 剂和另外的抗微生物剂以优化性质用于指定用途。得到的液体组合物可从吸收垫上应用， 用于加固绷带和其它敷料，或使用泵型或气雾喷雾器喷洒在受影响的区域上。增稠剂例如 合成的聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯、脂肪醇、改性纤维素或改性矿物材料可也与液体载 体一起应用，以形成可涂抹的糊剂、凝胶、软膏、肥皂等，以便直接应用于使用者的皮肤，这 是本领域普通技术人员已知的。
本发明实施方式可进一步通过下列非限制实施例说明。实施例1.蛋白表达和纯化重组全长BCL-Xl从pET_19b (Novagen)质粒构建体产生，其含有融合至N-末端 多聚His标记的BID的全部核苷酸序列。未标记的蛋白在LB培养基中37°C下在大肠杆菌 (E.coli)BL21中表达，用ImM IPTG诱导3_4小时的时间。类似地产生15N-标记蛋白，其生 长发生在添加0.5g/L 15NH4Cl的M9培养基中。细胞裂解后，可溶蛋白通过Hi-Trap螯合柱 (Amersham,Pharmacia)纯化，然后用 MonoQ(Amersham，Pharmacia)柱离子交换纯化。最终 BID样品在适合于后续实验的缓冲液中透析。实施例2.分子建模在几个R12000 SGI Octane工作站上使用软件包Sybyl 6. 9版(TRIPOS)进行分子 建模研究。化合物的对接结构(docked structure)最初由Gold获得。用MAXIMN2 (Sybyl) 将化合物的分子模型能量最小化。对于每个分子，产生20种溶液并根据Goldscore分级。 最终通过在BCL-xL表面上深的疏水沟中相连化合物的视觉观察对溶液分级。通过MOLCAD 产生(Surface representation)。实施例3. NMR光谱对于所有匪R实验，将BCL-xL在pH7. 5的50mM磷酸缓冲液中交换并在30°C进行 测量。用0. 5mM的15N-标记蛋白样品测量BCL-xL的2D[15N, 1H]-HSQC光谱。所有实验用 600MHz Bruker Avance光谱仪进行，其配备TXI探针或TCI冷冻探针。在所有实验中，以 WATERGATE序列获得剩余水信号的去相位。为了检测测试化合物结合Bcl_xL的能力，制备25 μ M蛋白样品并在缺乏和存在测试化合物的情况下收集ID1H NMR光谱。通过观察光谱的 脂族区域，在这些简单实验中可容易地检测结合，其原因在于lie、Leu、Thr, Val或Ala的 活性位点甲基的化学位移改变(0. 8至0. 3ppm之间的区域)。实施例4.合成方法将绕丹宁乙酸或3-甲基-2-(4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基)丁酸添加至二甲基 甲酰胺中的醛溶液(1 l.lmmol比)(1ml)，搅拌混合物直到它变得均一。然后将混合物置 于微波中(CEM)，在其中它经历四轮10分钟加热(140°C, 1, OOOff)和5分钟冷却(25°C )。 然后将水添加至溶液，在其中形成沉淀。通过过滤收集沉淀，从丙酮/水中重结晶并干燥以 产生期望的化合物。棚列5.伺織禾口二纏■白牀测怜去图6所示的反应方案示意性地表示制备一些上述化合物的一种示例性方法。图7 所示的反应方案示意性地表示制备一些上述化合物的一种示例性方法。图8所示的反应方 案示意性地表示制备一些上述化合物的一种示例性方法。实施例6.依帕司他体内口服递送将依帕司他(化合物11)以日剂量0. 12mmol/kg 口服强饲给予三个一组的 B6Bcl2小鼠三天(S卩，QDX3)。作为阴性对照，将绕丹宁乙酸(其不结合Bcl-xL)以日剂量 0. 12mmol/kg 口服强饲给予三天(S卩，QDX3)。依帕司他和阴性对照都溶于PBS。3天后，去除动物的脾。脾重量依帕司他193. 9mg阴性对照240. 9mg因此，无论是口服或腹膜内给药，依帕司他均诱导脾收缩。腹膜内注射诱导的收 缩％大于口服给药，但是结果清楚地表明依帕司他可以以口服或腹膜内两种方式施用。因 此，本发明化合物尤其是依帕司他可以口服或静脉内地在人类中施用。我们应注意的是经过身体检查，没有重量减轻或毒性迹象，这表明依帕司他是安 全的药物并且质量上比ApoG更安全，原因在于通过腹膜内和口服途径施用缺乏明显的毒 性迹象。虽然本发明已通过参考上述实施例描述，应理解的是其修改和变化包括在本发明 的精神和范围内。因此，本发明仅被所附权利要求书限制。
权利要求
具有结构A的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、N 氧化物或溶剂化物其中R1和R2中的每个包括氢、取代或未取代的直链脂族基、卤素、烷氧基、卤素取代的烷基、卤素取代的烷氧基、羟基、羧基、氰基、酰氨基、取代或未取代的脂环基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂环基；X包括氧、硫或亚氨基；以及Z是选自具有结构I、II和III的基团的部分其中R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9中的每个是氢、取代或未取代的直链脂族基、卤素、烷氧基、卤素取代的烷基、卤素取代的烷氧基、羟基、羧基、氰基、酰氨基、取代或未取代的脂环基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂环基；以及符号*表示部分Z与C(＝) R1结构中紧邻碳的连接点。FPA00001159278200011.tif,FPA00001159278200012.tif,FPA00001159278200021.tif
2.权利要求1的化合物，其中Z是部分I。
3.权利要求2的化合物，其中R”R2> R3> R4> R5、R6、R7、R8和R9中的每个选自氢、甲基、正丙基、异丙基、氟、氯、溴、苯基、羟基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、羧基和-C(O) NH2。
4.权利要求1的化合物，其中Z是部分II。
5.权利要求4的化合物，其中R”R2> R3> R4> R5、R6、R7、R8和R9中的每个选自氢、甲基、正丙基、异丙基、氟、氯、溴、苯基、羟基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、羧基和-C(O) NH2。
6.权利要求1的化合物，其中Z是部分III。
7.权利要求6的化合物，其中R”R2> R3> R4> R5、R6、R7、R8和R9中的每个选自氢、甲基、正丙基、异丙基、氟、氯、溴、苯基、羟基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基、羧基和-C(O) NH2。
8.权利要求1的化合物，其中所述化合物是2-[5-(2_甲基-3-苯基亚烯丙基)-4-氧 代-2-硫代噻唑烷-3-基]-2-苯乙酸。
9.权利要求8的化合物，其具有式1
10.权利要求1的化合物，其中所述化合物是3-甲基-2-[5-(2-甲基-3-苯基亚烯丙 基)-4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基]丁酸。
11.权利要求10的化合物，其具有式2
12.权利要求1的化合物，选自2- [5- (1-异丙基-2，3- 二甲氧基-7-甲基萘-6-基-亚甲基)-4-氧代-2-硫代噻唑 烷-3-基]-3-甲基丁酸；2-[5-( (2，3- 二羟基-1-异丙基-7-甲基萘-6-基)亚甲基)-4-氧代-2-硫代噻唑 烷-3-基]-3-甲基丁酸；2-[5- ((4-溴-1，2- 二氢-6，7- 二甲氧基萘-3-基)亚甲基)-4-氧代-2-硫代噻唑 烷-3-基]-3-甲基丁酸；2_ [5- ((4-溴-1，2- 二氢-6，7- 二羟基萘-3-基)亚甲基)-4-氧代-2-硫代噻唑 烷-3-基]-3-甲基丁酸；2- [5- ((1，2- 二甲氧基萘-3-基)亚甲基)-4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基]-3-甲基 丁酸；2-[5-((萘-2-基)亚甲基)-4-氧代-2-硫代噻唑烷-3-基]乙酸；3-甲基-2-[4-氧代-5-(3-苯基亚烯丙基)-2-硫代噻唑烷-3-基]丁酸；和 2- [4-氧代-5- (3-苯基亚烯丙基)-2-硫代噻唑烷-3-基]丙酸。
13.权利要求12的化合物，其具有选自集合3-10的式子
14.治疗疾病或病症的方法，其包括向需要所述治疗的对象施用治疗有效量的至少一 个权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、N-氧化物或溶剂化物，从而治疗所 述疾病或所述病症。
15.权利要求14的方法，其中所述疾病或所述病症是癌症。
16.权利要求14的方法，其中所述治疗包括抑制至少一个BCL-2家族蛋白的活性。
17.治疗癌症的方法，其包括向需要所述治疗的对象施用治疗有效量的具有结构11的 化合物或其药学上可接受的盐、水合物、N-氧化物或溶剂化物
18.权利要求14或17的方法，包括与抗癌剂联合施用所述化合物。
19.治疗具有至少一个提高的BCL-2家族蛋白表达水平的对象中的癌症或自身免疫疾 病的方法，其包括对所述对象施用治疗有效量的具有结构11的化合物或其药学上可接受 的盐、水合物、N-氧化物或溶剂化物
20.权利要求19的方法，其进一步包括测定所述对象对利用具有结构11的化合物或其 药学上可接受的盐、水合物、N-氧化物或溶剂化物的治疗是否具有反应性，包括测定所述对 象中至少一个BCL_2家族蛋白的水平并与正常对照样品比较，其中升高的水平表示对象对 利用具有结构11的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、N-氧化物或溶剂化物的治疗具 有反应性。
21.测定对象对利用具有结构11的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、N-氧化物或溶剂化物的治疗是否具有反应性的方法 包括测定所述对象中至少一个BCL-2家族蛋白的水平并与正常对照样品比较，其中升 高的水平表示对象对利用具有结构11的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、N-氧化物 或溶剂化物的治疗具有反应性。
22.权利要求20或21的方法，其中所述测定基于来自所述对象的样品进行。
23.权利要求19的方法，其中所述样品是生物流体或肿瘤样品。
24.权利要求19或21的方法，其中BCL-2家族多核苷酸或多肽选自BCL-XpBCL-2、 BCL-W、BCL-B, BFL-I 或 MCL-1。
25.诱导细胞凋亡的方法，所述细胞的至少一个BCL-2家族蛋白成员的水平高于对照 细胞的水平，所述方法包括对所述细胞施用有效量的具有结构11的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、N-氧化物或溶剂化物 以便降低所述Bcl-2家族蛋白的水平并诱导所述细胞凋亡。
26.权利要求25的方法，其中所述细胞是癌细胞。
27.权利要求25的方法，其中所述细胞是免疫系统的细胞。
28.确定治疗方案有效性的方法，所述治疗方案包括在对象中施用具有结构11的化合 物或其药学上可接受的盐、水合物、N-氧化物或溶剂化物 所述方法包括比较用具有结构11的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、N-氧化物 或溶剂化物治疗前和治疗过程中所述对象细胞中BCL-2家族蛋白的水平，其中BCL-2家族 蛋白降低的水平表示利用具有结构11的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、N-氧化物 或溶剂化物的治疗的有效性。
29.权利要求28的方法，其中所述对象患有癌症。
30.权利要求28的方法，其中所述对象患有自身免疫病症。
全文摘要
本发明描述了包括噻唑烷环的多种化合物以及这些化合物抑制至少一个BCL-2蛋白家族成员的用途。所述化合物之一具有结构A的结构，其中R1和R2中的每个包括氢、取代或未取代的直链脂族基、卤素、烷氧基、卤素取代的烷基、卤素取代的烷氧基、羟基、羧基、氰基、酰氨基、取代或未取代的脂环基、取代或未取代的芳基、或取代或未取代的杂环基；X包括氧、硫或亚氨基；以及Z包括例如萘或脱氢萘部分等。
文档编号A61K31/535GK101896184SQ200880120783
公开日2010年11月24日 申请日期2008年10月17日 优先权日2007年10月19日
发明者M·派利奇亚 申请人:伯恩哈姆医学研究协会