二酮基哌嗪和包含它们的组合物的使用方法

专利名称：二酮基哌嗪和包含它们的组合物的使用方法
技术领域：
本发明涉及采用一些二酮基哌溱抑制血小板活化因子作用的方法。本发明亦涉及采用这些二酮基哌。秦抑制白细胞介素8(IL-8)的生成和/或释放的方法。最后，本发明涉及包含二酮基哌口秦的药物组合物。
背景技术：
血小板活化因子(PAF; 1-0-烷基-2-乙酰基-^2-甘油-3-磷酸胆碱)是具有各种生理活性的有效的炎性磷酯介体。它由嗜碱粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、多形核白细胞、嗜曙红细胞、嗜中性白细胞、天然杀伤淋巴细胞、血小板和内皮细胞，以及由在适当免疫和非免疫的刺激下肾和心脏的組织产生和释放。参见PCT申请WO 94/04537。 PAF通过结合在许多细胞和组织中发现的特异的PAF受体介导生物反应。对PAF和其类似物结构-活性的研究说明PAF结合这些受体的能力是结构特异的和立体有择的。参见PCT WO94/04537。
当PAF介导基本的生物反应时，它还表现出在病理学免疫和炎性反应中起作用。许多出版的研究论文已经提供证据，说明PAF与疾病有关，其中包括关节炎、急性炎症、哮喘、变态反应、心血管疾病、肿瘤性疾病、内毒素休克、疼痛、牛皮癣、眼发炎、局部缺血、胃肠溃疡、心肌梗死、炎性肠疾病和急性呼吸窘迫综合征。参见PCT申请WO 94/04537。
PAF与病理学的发炎和免疫状态有关已经促进大量研究以鉴别PAF受体拮抗剂，并且已经鉴别许多不同化学结构的化合物为PAF拮抗剂。参见，例如，PCT申请WO 94/04537和WO 96/00212(和这两篇申请中引用的参考文献)，PCT申请WO 95/18610和WO 99/49865,美国专利4,940,709,5,358,938, 5,434,151， 5,463,083, 5,648，486, 5,741,809 5,792,776， 5,780,503，5,856,323,日本申请63 290868, Shimazaki等，Chem. Phare. Bull" 35 (8)，3527-3530 (1987), Shimazaki等，J. Med. Chem., 30,1709-1711 (1987)， Yoshida等，Prog. Biochem. Pharmacol" 22,68-80 (1988)， Shimazaki等，Lipids, 26 (12)，1175-1178 (1991)。已知大量的病理学免疫和炎性反应由PAF介导，有鉴别抑制PAF活性的新的化合物和组合物的需要。
已经报道二酮基哌。秦具有许多生理活性。参见，例如，美国专利4,289，759(免疫调节剂)，4,331,595(免疫调节剂)，4,940,709(PAF拮抗剂)，5，700，804(纤溶酶原活化因子抑制剂的抑制剂)，5，750，530(纤溶酶原活化因子抑制剂的抑制剂)，5，990,112(金属蛋白抑制剂)，PCT申请WO 97/36888(法呢-蛋白转移酶抑制剂)和WO 99/40931(中枢神经系统损伤治疗剂),EP申请43219(免疫调节剂)，日本申请63 290868 (PAF拮抗剂)，日本申请317647S(免疫抑制剂)，Shimazaki等，Chem. Phare. Bull" 35 (8)， 3527-3530 (1987)(PAF拮抗剂)，Shimazaki等，J. Med. Chem.， 30,17091711 (1987)(PAF拮抗剂)，Shimazaki等，Lipids, 26 (12), 1175-1178 (1991 )(PAF拮抗剂)，Yoshida等，Prog.Biochem. Pharmacol" 22,68-80 (1988)(PAF拮抗剂)，Alvarez等，丄Antibiotics,47(11)， 1195-1201 (1994) (4丐激活中性蛋白酶抑制剂)。
由天冬氨酸和丙氨酸组成的二酮基哌溱(3-曱基-2，5 二酮基哌嗪-6-乙酸;DA-DKP)是已知的。已经报道它作为在30。C以上贮藏的人血清蛋白降解的结果形成。Chan等，Eur,J. Biochem.，227, 524-528 (1995)。不知道它具有生物活性。
本发明提供一种治疗血小板活化因子介导的疾病或病症的方法。这种方法包括给予需要该治疗的动物有效量的该结构式的二酮基哌嗪<formula>formula see original document page 4</formula>
R1是-CH2COR3,或-CH2-CH2COR3;
R"是选自由甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、羟赖氨酸、组氨
发明概述酸、精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、曱状腺素、半胱氨酸、蛋氨酸、 正缬氨酸和鸟氨酸组成的组的氨基酸的侧链；
R3是-OH，-NH2,-OR4,-NHR4,或-NR4r,和 每个R"分别是烷基，芳基，烷芳基，或芳烷基； 或者它们生理学上可接受的盐。
本发明进一步提供一种抑制炎症的方法。这种方法包括给予需要该治 疗的动物有效量的结构式(l)的化合物或其生理学上可接受的盐。
本发明还提供一种抑制血小板聚集的方法。这种方法包括以有效量的 结构式(l)的化合物或其生理学上可接受的盐和血小板接触。
此外，本发明提供一种抑制由细胞产生、释放或者产生和释放白细胞 介素8的方法。这种方法包括以有效量的结构式(l)的化合物或其生理学上 可接受的盐和细胞接触。
本发明进一步提供抑制血小板活化因子(PAF)作用的方法。这种方法包 括以有效量的结构式(l)的化合物或其生理学上可接受的盐和PAF接触。
最后，本发明提供一种药物组合物。这种组合物包括药学上可接受的 载体和结构式(l)的化合物或其生理学上可接受的盐。
本发明优选的实施方案的详细说明
氨基酸的"侧链"指连在以上列出所有氨基酸共有的 2 主链 上的氨基酸部分。例如，甘氨酸的侧链是-H,丙氨酸的侧链是-CH3，和丝 氨酸的侧链是-ch20h。
"烷基"指含有1-30个碳原子，优选1-18个碳原子的直链或支链烷基。 "低级烷基"指含有1-6个碳原子的直链或支链烷基。
"芳基"指具有至少一个芳环(例如苯基)的芳香基团。
"烷芳基"指具有与其相连的芳基的低级烷基(例如，-CH2C6H5或 -CH3CH(C6H5)CH3)。
"芳烷基"指具有与其相连的低级烷基的芳基(例如，-C6H4-CH3)。
本文使用的"抑制"指减轻(完全或部分)或预防。
本文使用的"介导"指引起，恶化，或有关。
本文使用的"治疗"意指减轻(完全或部分)疾病或病症的症状，包括治愈疾病或病症，或者子贞防疾病或症卄犬。
本发明基于3-曱基-2，5-二酮基哌嗪-6-乙酸(DA-DKP)抑制PAF活性的 发现。这种抑制看来归因于DA-DKP与PAF和PAF受体的结合。认为DA-DKP与PAF结合归因于DA-DKP的羧基和PAF胆石咸部分上的N+的离子配 对。因此，预计其它的包括一个或多个羧基的二酮基哌。秦是PAF的有效抑 制剂。实际上，其它的含羧基的非二酮基哌。桊化合物，例如聚-天冬氨酸或 聚-谷氨酸，也可能是有效的PAF抑制剂。DA-DKP结合PAF受体的机理是 未知的，但是假设它归因于DA-DKP的二酮基哌唤环结构和/或DA-DKP的 疏水112侧《连。
制备二酮基哌。秦的方法是本领域已知的，并且可能采用这些方法合成结 构式(l)的二酮基哌嗪。参见，例如，美国专利4,694,081和5,817,751; Sm他 等，Bioorg Med. Chem. Letters, 8,2369-2374(1998)。然而，当采用现有技术方 法合成结构式(l)的二酮基哌嗪时，会遭遇困难或得到不令人满意的结果(参 见共同待审的临时申请60/223,075,2000年8月4提交)。从而，如共同待审 的临时申请60/223,075所述的方法合成结构式(l)的二酮基哌嗪是最优选的， 它的全部公开引入本文作为参考。
临时申请60/223,075描述的合成方法采用了本领域公知的标准溶液相 或固相肽合成法。固相肽合成法是优选的。
临时申请60/223,075描述的合成方法的第一步骤包括提供第一氨基酸。 第一氨基酸选自由甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、 苏氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、羟赖氨酸、组 氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、曱状腺素、半胱氨酸、蛋氨酸、 正缬氨酸和鸟氨酸组成的组。这些氨基酸可以是D-或L-对映体形式，是商 业上可得到的，或者能由本领域公知的方法制备(参见，例如，Williams, Synthesis Of Optically Active a-AminoAcids (Pergammon Press, 1989))。 4尤选的 是疏水氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和苯丙氨 酸。特别优选的是丙氨酸。
第 一氨基酸还优选以一种或多种保护基团保护，以防止合成期间不需要 的副反应。这种保护基团，和连接和除去它们的方法，是本领域公知的。参 见，例长口， Green禾口 Wuts, Protective Groups In Organic Chemistry (Wiley 1992) 和Grant, Synthetic Peptides : A User's Guide (Freemen 1992)。第一氨基酸与以下结构式NH2CH(CH2COOR5)COOH的天冬氨酸衍生
RS是低级烷基或烷芳基。RS优选是千基(-CH2C6H5;Bz)。已经发现千基不仅 保护这些氨基酸的侧链羧基，而且促进二肽的环化。此外，可在防止手性 中心(连接I^和R2基团的碳原子)外消旋作用的中性条件下从二肽除去节基。
天冬氨酸和谷氨酸衍生物 NH2CH(CH2COOR5)COOH 和 NH2CH(CH2CH2COOR5)COOH是商业上可得到的或可由已知方法制备(参 见，例^口， Bodansky ,口 Bodansky, The Practice ofPeptide Synthesis, 63-66页(第 2版，Springer-Verlag, 1994)。天冬氨酸和谷氨酸衍生物的氨基或a羧基任选 以标准保护基(见上述)保护以便防止不需要的副反应。
如上所述，二酮基哌。秦的合成优选采用固相肽合成方法。第一氨基酸 或者天冬氨酸或谷氨酸衍生物经其a羧基连接至固体载体以便固相合成。固 体载体可以是任何与肽合成相容的载体，例如Grant和Atherton描述的方法， Solid Phase Peptide Synthesis : A Practical Approach (BL Press 1989)。适当的固 体载体是商业上可得到的或者能由标准方法制备。参见PCT申请WO 96/00391。固体载体包含固定第一氨基酸或者天冬氨酸或谷氨酸衍生物至载 体表面的接头或间隔分子。许多具有各种性质的接头是本领域公知的。参见， 例如，Grant, Synthetic P印tides : A User's Guide (Freemen 1992)和PCT申请 WO 96/00391。这种接头通常包括连接第一氨基酸或者天冬氨酸或谷氨酸衍 生物的官能团。
优选地，第一氨基酸连接在固体载体上，并且，在偶合天冬氨酸或谷 氨酸衍生物至第一氨基酸之前，如果存在，除去在键合的第一氨基酸的ot氨 基上的保护基团。然而，应避免任何侧链氨基的保护基团的除去，应该选择 这样的条件以在不去保护侧链氨基时去保护a氨基。适当的去保护条件是本 领域已知的。例如，以20%至55%的仲胺碱例如哌啶，在极性非质子传递 溶剂，例如二曱基曱酰胺、二氯曱烷或N-曱基吡咯烷中可进行9-芴基甲氧 基羰基的除去。优选加入二异丙基硅烷以防止去保护期间的具说在大规模制 备中存在的酯交换。
第 一氨基酸和天冬氨酸或谷氨酸衍生物之间的反应在有效产生肽键的 条件下进行，这样以形成二肽。这些条件是本领域公知的。例如，偶合催化齐寸(例如2-(lH-苯并三唑-l-基)-l,2，3，3-四曱基脲铬四氟硼酸盐，苯并三唑-l-
基-氧基三(二曱氨基)辚六氟磷酸盐，2-(lH-笨并三唑-l-基)-l，l,3,3-四曱基脲镎 六磷酸盐，1-羟基苯并三唑，二异丙胺，二环已基碳二亚胺)可用于形成二肽。 通常，使用过量的偶合催化剂，具有2至10当量或更多的量。通常相对于 偶合的化学物质的反应性确定过量的范围。极性非质子传递溶剂(例如二曱 基曱酰胺，N-曱基吡咯烷，二氯曱烷和二曱亚砜)是优选的。反应时间可以是 一个半小时至整夜，温度由室温至回流变化。
下一步，如果二肽与固体载体键合，采用本领域^^知的标准方法由固体 载体除去二肽。由固体载体有效除去二肽的条件将取决于固体载体和选择的 接头。通常，采用强酸，例如三氟乙酸通过酸水解除去该肽。
接着环化二肽以形成二酮基哌。秦；这种二酮基哌噪会具有仍然为酯形式 的天冬氨酸或谷氨酸衍生物的侧链羧基。环化通过在中性条件下加热二肽完 成。典型地，二肽在约80。C至约180。C加热，优选约120°C。溶剂是中性溶 剂。例如，这种溶剂包括醇(例如丁醇、曱醇、乙醇和高级醇，但不是酚)和 共沸的共溶剂(例如曱苯、苯，或二甲苯)。优选地，醇是丁-2-醇，共沸溶剂 是曱苯。持续加热直至反应完全，并且根据经验确定加热时间。典型地，二 肽通过将其回流约8-24小时，优选约18小时环化。
最后，R5基团从二酮基哌溱通过本领域公知的方法除去以便除去保护基 (见上述)。当RS基团是苄基时，它优选从二酮基哌嗪通过采用碳载钯(Pd/C) 催化剂氢化除去。应该避免强酸(无机酸，例如硫酸或盐酸)、强碱(碱金属 碱，例如氢氧化钾或氢氧化钠)和强的还原剂(例如，氢化铝锂)的使用，以便 保持最终化合物的手性。 一旦除去RS基团，可衍生游离酸，如果需要，形成标准衍生物，例如 酰胺和酯。用于转化游离酸成为酰胺或酯的方法是本领域^^知的。
结构式(l)的二酮基哌嗪生理学上可接受的盐还可用于本发明的实践。 生理学上可接受的盐包括常规的无毒盐，例如衍生自无机酸(例如盐酸、氢 溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)、有机酸(例如乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、 硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、枸椽酸、谷氨酸、天冬氨酸、苯曱酸、水 杨酸、草酸、抗坏血酸等)或碱(例如的药学上可接受金属阳离子或者衍生自 N， N-二节基乙二胺、D-葡糖胺或乙二胺的有机阳离子的氢氧化物、碳酸盐 或碳酸氢盐)的盐。这类盐用常规方法，例如，通过用酸中和游离碱形式的化合物制备。
结构式(l)的二酮基哌溱，或其生理学上可接受的盐，能用于治疗PAF 介导的疾病或病症。为此，向需要该治疗的动物给药结构式(1)的二酮基哌。秦， 或其生理学上可接受的盐。优选的动物是哺乳动物，例如兔、山羊、狗、猫、 马或人。可以根据经验确定适于本发明的各种化合物的有效剂型、给药模式 和剂量，并且在本领域的技术熟练人员做出这种决定。本领域的熟练人员理 解剂量会随采用的特定化合物、治疗的疾病或病症、疾病或病症的严重性、 给药途径、化合物的排泄速率、治疗持续时间、任何其它要给予动物的药物 的鉴别、年龄、动物的大小和种类以及医学和兽医学领域已知的相似因素而 变化。 一般，本发明化合物的适当的每天剂量会是化合物产生治疗作用的最 低有效剂量的那种剂量。然而，每天剂量会由主治医师或兽医在合理的医学 判断范围内确定。如果需要，有效的每天剂量可以作为两、三、四、五、六 个或更多子剂量给药，全天以适当的间隔单独给药。持续该化合物的给药直 至获得一种可接受的反应。
本发明的化合物(即，结构式(l)的二酮基哌嗪和它生理学上可接受的盐) 可以向动物患者给药以便通过任何适当的给药途径治疗，包括经口、鼻、直 肠、阴道、非肠道(例如，静脉内、脊柱内、皮下、腹膜内或肌肉内)、脑池 内、透皮、颅内、大脑内和局部(包括颊和舌下)给药。优选的给药途径是经 口和静脉内。
对于本发明的化合物可单独给药，该化合物优选以药物制剂(组合物) 形式给药。本发明的药物组合物包括作为活性组分的 一种或多种本发明的 化合物和一种或多种药学上可接受的载体，并且，任选地包括一种或多种 其它化合物、药物或其它物质。在与制剂内其它组分相容和对动物无损伤 的意义上，每种载体必须是"可接受的"。药学上可接受的载体是本领域公知 的。不考虑选择的给药途径，本发明的化合物通过本领域熟练人员已知的
常规方法配制成药学上可接受的剂型。参见，例如，Renzington's Pliarniaceutical Sciences 。
本发明的适于口服给药的制剂可以是胶嚢剂、扁嚢剂、丸剂、片剂、 散剂、颗粒剂，或者作为含水或非水液体内的溶液或悬浮液，或者水包油 或油包水液体乳剂，或者作为酏剂或糖浆剂，或者作为锭剂(采用惰性基质， 例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)，等等，每个含有预定量的作为活性组分的本发明的化合物。本发明的化合物还可以大丸剂、药糖剂或糊剂给药。
本发明口服给药的固体剂型(胶嚢剂、片剂、丸剂、糖衣丸、散剂、颗 粒剂等)中，活性组分与一种或多种药学上可接受的载体混合，所述载体例
如枸椽酸钠或磷酸二4丐，和/或以下任何一种(l)填充剂或膨胀剂，例如淀 粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如，如，羧曱 基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)湿润 剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、 一些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，例如石蜡；(6)吸收促进剂，例如季 铵化合物；(7)润湿剂，例如，鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；(8)吸收剂，例如 高岭土和膨润土； (9)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙醇、 月桂基硫酸钠和它们的混合物；和(10)着色剂。在胶嚢剂、片剂和丸剂的情 况下，药物组合物还包括緩沖剂。在采用例如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙 二醇等赋形剂的软和硬填充的明胶胶嚢中，采用相似种类的固体组合物作为 填充剂。
通过任选地加上一种或多种辅助组分压缩或模制制备片剂。采用粘合剂 (例如，明胶或羟丙基曱基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例 如，羟基乙酸淀粉钠或交联的羧曱基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂制备 压片。通过在适合的机器中模制以惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混 合物制备模制片。
本发明的药物组合物的片剂和其它固体剂型，例如糖衣丸、胶嚢剂、丸 剂和颗粒剂，任选地-故刻痕，或者以包衣和壳体，例如肠溶衣和其它药物制 备领域公知的包衣制备。它们还可被配制成提供其中活性组分的緩释或控制 释放，例如，采用各种比例提供需要的释放曲线的羟丙基曱基纤维素、其他 聚合物基质、脂质体和/或微球。它们可以通过，例如，经截留细菌滤器过滤 进行消毒。这些组合物还任选包含遮光剂，并且是^l仅或优先在胃肠道的某 一部分任选地以延迟方式释放活性组分的组合物。可以被使用的包埋组合物 的例子包括聚合物质和蜡。活性组分还可是微胶嚢形式。
适于本发明化合物口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳 剂、溶液、悬浮液、糖浆剂和酏剂。除了活性组分之外，液体剂型可包含本 领域通常使用的惰性稀释剂，例如，水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、醋酸乙酯、千醇、苯曱酸千酯、丙二醇、1,3-丁 二醇、油(特别地，棉子油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和 芝麻油)、甘油、四氩呋喃曱醇、聚乙二醇和脱水山梨醇脂肪酸酯，及其混合物。
除了惰性稀释剂之外，口服组合物还可包括助剂，例如润湿剂、乳化和 悬浮剂、增甜剂、调味剂、着色剂、香味剂和防腐剂。
悬浮液，除了活性化合物之外，可含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、
聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminum metahydroxid)、膨润土、琼脂和西黄蓍胶，以及它们的混合物。
本发明的直肠或阴道给药用药物组合物制剂可以栓剂存在，它可通过混 合本发明的一种或多种化合物与 一种或多种适当的非刺激性赋形剂或载体 (包括，例如，可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸酯)制备，它在室温下是 固体，但是在体温下是液体，因此，会在直肠或阴道腔内熔化并释放这种活 性化合物。适于阴道给药的本发明的制剂还包括含有本领域已知是适当的载 体的阴道栓、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾制剂。
适于本发明的化合物局部或经皮给药的剂型包括散剂、喷雾剂、软膏、 糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、溶液、贴剂、滴剂和吸入剂。活性组分在无菌条 件下与药学上可接受的载体，和任何緩沖剂，或需要的喷射剂混合。
软膏、糊剂、乳膏和凝胶除了活性组分之外，可含有赋形剂，例如动物 和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、 硅氧烷、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌，或者它们的混合物。
散剂和喷雾剂除了活性组分之外，可包含赋形剂，例如乳糖、滑石、 硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混和物。喷雾剂另外 包含通常的喷射剂，例如氯氟代烃和挥发性的未取代的烃，例如丁烷和丙 烷。
皮肤贴剂具有附加的提供控制本发明的化合物输送至体内的优点。这种 剂型可通过在适当基质，例如弹性基质物质中，溶解、分散或掺入一种或多 种本发明的化合物制备。吸收增强剂还可用于增加化合物经皮肤的流动。这 种流动的速率可通过或者提供一种控制速率的膜，或者在聚合物基质或凝 胶中分散该化合物控制。
药物制剂包括适于吸入或吹入或适于鼻或眼内给药的那些。为了通过吸
ii入向上(鼻)或下呼吸道给药，由吹入器、喷雾器或加压包或其它输送气溶胶 喷雾剂的方便装置方便地输送本发明的化合物。加压包可包括适当的喷射 剂，例如二氯二氟曱烷、三氯氟曱烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适当 的气体。在加压气溶胶的情况下，可通过提供输送计量剂量的阀确定剂量单位。
另一方面，为了通过吸入或吹入给药，所述组合物可以是干粉形式，例 如，本发明 一种或多种化合物的粉末和适当粉末基质(例如乳糖或淀粉)的混 合物。粉末组合物可以以，例如，胶嚢剂或药筒，或者，例如明胶或薄膜包 装单位剂量的形式存在，其中粉末可以借助于吸入器、吹入器或计量剂量的 吸入器给药。
对于鼻内给药，本发明的化合物可通过滴鼻液或喷雾液给药，例如通过
塑料瓶雾化器或计量剂量的吸入器给药。典型的雾化器是Mistometer (Wintrop)禾口 Medihaler (Riker)。
滴剂，例如滴眼液或滴鼻液，可以和还包括一种或多种分散剂、增溶剂
或悬浮剂的含水或非水基质配制。喷雾液由加压包方便地输送。滴剂可借助 于简单的加盖滴眼瓶或适于由特定形状的闭合逐滴输送液体成分塑料瓶输送。
适于非肠道给药的本发明的药物组合物包括一种或多种本发明的化合 物，和一种或多种药学上可接受的载体组合成无菌等渗含水或非水溶液、分 散液、悬浮液或乳液，或者能够刚好在使用之前重新配制成无菌可注射溶液 或分散液的无菌粉末，它包含抗氧化剂、緩沖剂、使制剂和预期受体血液等 渗的溶质或悬浮剂或增稠剂。
本发明的药物组合物中可采用的适当的含水和非水载体的例子包括水、 乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)，和它们适当的混合物，植 物油，例如橄榄油，以及可注射的有机酯，例如油酸乙酯。能够保持适当的 流动性，例如，通过利用包衣材料，例如卵磷酯，在分散液的情况下通过维 持需要的粒度，以及通过利用表面活性剂。
这些组合物还可含有助剂，例如润湿剂、乳化剂和分散剂。在该组合物 中也需要包括等渗剂，例如糖、氯化钠等。此外，通过掺入延迟吸收的药齐寸， 例如单硬脂酸铝和明胶能产生可注射的药物形式的延长吸收。
在某些情况下，为了延长药物的作用，延緩皮下或肌肉注射的药物的吸收是需要的。这可通过利用具有不良水溶性的结晶或无定形物质的液体悬浮 液完成。药物吸收的速率于是取决于溶解速率，其本身取决于结晶大小和结 晶形式。另一方面，非肠道给药的延迟吸收通过在油载体中溶解或悬浮药物
通过在可生物降解的聚合物例如聚交酯-聚乙醇酸交酯中形成药物的微 胶嚢基质制备注射贮存形式。根据药物与聚合物的比，和采用的具体聚合物 的性质，可控制药物释放的速率。其它可生物降解聚合物的例子包括聚(原 酸酯)和聚(酸酐)。贮存注射制剂还可通过使药物收集在与身体组织相容的脂 质体或微乳剂中制备。注射材料可灭菌，例如通过经截留细菌过滤器过滤灭菌。
制剂可存在于单位剂量或多剂量密封的容器，例如安瓿和小瓶中，并
且在冻干条件下! i藏，在使用之前仅仅需要加入无菌液体载体，例如注射 用水。临时注射溶液和悬浮液可由以上描述种类的无菌粉末、颗粒和片剂 制备。
如上所述，业已才艮道PAF在各种疾病和病症治疗中起作用。这些疾病 和病症包括急性呼吸窘迫综合征，变态反应，关节炎，哮喘，自身免疫性疾 病，支气管炎，心血管疾病，克罗恩氏病，嚢性纤维化，肺气肿，胃肠道溃疡， 炎症，炎性肠病，局部缺血，多器官功能失调综合征，心肌梗死，肿瘤性疾病， 眼炎，疼痛，牛皮癣，呼吸道感染，脓毒病，休克，和溃疡性结膜炎。PAF还 介导血小板聚集。结构式(l)的二酮基哌嗪可用于治疗这些疾病和病症以及任 何其它PAF起作用的疾病和病症。本发明的化合物可以与其它适于给定疾病 或病症的标准疗法组合纟会药。
已经报道PAF诱发白细胞介素8(IL-8)的产生和分泌(参见以下实施例3 的讨论)。IL-8是促炎细胞因子，已经报道它在大量的疾病和病症的发病中 起作用，包括急性呼吸窘迫综合征，变态反应，关节炎，哮喘，自身免疫性疾 病，'支气管炎，癌症，克罗恩氏，嚢性纤维化，肺气肿，心内膜炎，胃炎，炎 症性肠病，局部缺血再灌注(ischemia reperftision)，多器官功能失调综合征， 肾炎，胰腺炎，呼吸道病毒感染，脓毒病，休克，溃疡性结肠炎，和其它炎症 疾病。已经发现结构式(l)的二酮哌抑制PAF诱导IL-8产生和/或释放。初步 数据表明它们在无PAF时还抑制IL-8的产生和/或释放。已经具体发现脂多 糖(LPS)-诱导的正常人的支气管上皮细胞的IL-8的产生和/或释放受抑制(数据未显示)。因此，本发明的二酮基哌。秦显示通过两种不同的机制起作用，
并且可用于治疗IL-8以及PAF介导的疾病或病症。
实施例
实施例1: 3-曱基-2,5-二酮基哌。秦-6-乙酸(5)的制备
具有与它连接的9-芴基曱氧基羰基-保护的丙氨酸(Ala-Fmoc)的Wang 树脂(3克(g), 2.52 mmol， 1当量，NovaBiochem)转移至洁净的100mL圆底烧 瓶中，将哌啶(12 mL)的二曱基曱酰胺(DMF; 18 mL)溶液加入烧瓶中的树指 中。溶液搅拌l小时，用烧结玻璃漏斗分离树脂。以DMF (3 x 30 mL)洗涤 树脂，接着用二氯甲烷(DCM;3x30mL)洗、;条，并且真空干燥5分钟。
部分千燥的树脂转移入洁净的100mL圆底烧并瓦中，并且加入DMF (10 mL)。接着，加入Boc-Asp(OBz)OH(3.25g, 10. 07mmo1，4当量)，之后加入 二异丙胺(2.83 mL， 2.04 g, 20.19 mmol， 8当量)和2-(lH-苯并三唑-l-基)-l，2,3，3-四曱基脲错四氟硼酸盐(TBTU; 3.24 g, 10.09 mmol， 4当量， Acros)。使浆液在厌氧条件下反应12小时。反应结束时，该树脂显示阴性水 合茚三酮试验，表明偶合反应完成。树脂真空过滤并以DMF(3 x30mL)洗涤， 之后以DCM (3 x 30 mL)洗涤。将树脂在转移至洁净100mL圆底烧瓶之前室 溫真空下干燥10分钟。
将三氟乙酸(TFA; 16.5 mL)加至干燥树脂，在加入时树脂变成红色。在 搅拌树脂又30分钟之后，过滤除去TFA，以DCM (4 x 20 mL)洗涤树脂。 有机组分混合，加入曱苯(20 mL)。混合的有机物真空蒸发至干燥。痕量的 TFA通过加入曱苯和蒸发除去。重复此步骤直至已经除去所有的TFA。这种 步骤得到浅黄油状产物，它的NMR和质谱数据与预期的二肽千基酯一致， 以下显示了它的结构(3)。
将二肽3溶解在丁-2-醇(40 mL)中并以曱苯(60 mL)稀释。使这种溶液回 流24小时。此周期结束时，溶液冷却至室温。接着在旋转式蒸发器上浓缩， 同时保持温度在50。C。在浓缩时，沉淀出白色固体，过滤除去沉淀物。以曱 苯(10mL)洗涤沉淀物和干燥。残余物(0.650g)产生阴性水合茚三酮试验。接 着，由热曱醇中结晶。这种结晶产物的光谱学和分析结果确认它的结构是需 要的化合物-Asp-Ala 二酮基哌。秦千基酯，以下表示为(4)。
这种化合物(400 mg)溶解在曱醇(250 mL)中，并且仔细地加入碳载4巴(Pd/C; 10。/。，0.4g)催化剂。烧瓶以氢气吹扫并保持在正的氢气压力。在大气氛 下的溶液保持至少4小时。以助滤剂(硅藻土)除去催化剂并以曱醇洗涤。混 合曱醇洗涤液，除去溶剂(产量200 mg)。质镨和NMR分析显示游离酸 Asp-Ala 二酮基哌溱(3-甲基-2,5-二酮基哌。秦-6-乙酸，5)已经形成，不具有任何 的交叉污染。
向3-甲基-2，5-二酮基哌。秦-6-乙酸(0.151 g, 0.81 mmol， 1当量，实施例1 描述的产物,5)的DMF(2.5 mL)溶液中加入羰基二咪唑(0.26 g， 1.60 mmol, 2当 量，Aldich)。室温下搅拌1小时之后，加入固体醋酸铵(0.63 g, 8.17mmo1, 10 当量，Aldrich)。室温下持续搅拌过夜，此时反应物分布在水(20mL)和乙酸乙 酯(10mL)之间。以第二等分的乙酸乙酯(IO mL)洗涤水层，接着减压蒸发至 干燥(61。C)。通过以水然后曱苯进一步共蒸发除去痕量的DMF，产生白色固 体(362 mg)。其被溶解最小体积曱醇的DCM(20: 80 v/v)中。分馏洗脱的溶剂，
<formula>formula see original document page 15</formula>
实施例2: Asp-Ala 二酮基哌。秦酰胺(6)的制备
。该产物接着由曱醇重结
3曰得到需要的产物(0.116 g， 76%收率，6)。实施例3: IL-8释放的抑制
白细胞介素8 (IL-8)是促炎细胞因子和有效的嗜中性白细胞的化学诱 引剂和活化剂。还报道它是T-淋巴细胞和嗜曙红细胞的化学诱引剂和活化 剂。1L-8由免疫细胞(包括淋巴细胞、嗜中性白细胞、单核细胞和巨噬细胞)、 成纤维细胞和上皮细胞产生。报道表明IL-8在呼吸道病毒感染、哮喘、支气 管炎、肺气肺、嚢性纤维化、急性呼吸窘迫综合征、脓毒病、多器官功能失 调综合征和其它的炎性疾病的发病中的重要作用。
已经报道PAF诱导人肺成纤维细胞中IL-8的转录和分泌。Roth等，J. Exp. Med., 184,191-201 (1996)。还有报道PAF增强人单核细胞在脂多糖(LPS)反应 中产生IL-8,但是PAF独自仅仅微弱地诱导这些细胞产生IL-8。 Arbabi等， Archives Surgery, 134,1348-1353 (1999)。这些作者假定PAF'起动"先天免疫系
他们进一步推测如果这种起动泛化，它会变得有害。这种情况下，被认为由 不起动先天免疫系统的较小的次刺激，会诱发炎症介体的攻击、扩散和非集 中释放，可能导致多器官功能失调综合征。
NHBE 6122正常人支气管上皮细胞(Clonetics， San Diego, CA)以20,000 纟田月包/孔力卩至24孔组织培养板(Falcon,现在为BD Biosciences, Franklin
生长培养基；Clonetics)中于37。C和5%0)2下粘着^夜(16-18小时)。粘着之 后，以不含肾上腺素的BEGM培养基洗涤细胞两次。它们接着在完全培养 基或含有20pM3-甲基-2,5-二酮基哌嗪-6-乙酸(DA-DKP;实施例1描述的产 物,5; HEPES缓沖盐水(HBSS; Clonetics)中制备的储液)的完全培养基中以 4mM于37。C和5%<:02下培养20分钟。接着加入溶于二曱亚砜(DMSO;組 织培养级；Sigma, St Louis， MO)的血小板活化因子(PAF; Sigma, St. Louis, MO)至100 nM或500 nM的最终浓度，该细胞在37。C和5%C02下培养额 外的6小时。使用含有DMSO和HBSS的培养基作为对照。
通过采用人IL-8配对抗体的ELISA(Endogen， Cambridge, MA)测定细胞 上清液中的IL-8浓度。按照制造商指令和以下例外，采用Endogen, Cambridge, MA的ELISA试剂盒进行ELISA: (l)涂1 (ig/ml抗体；(2) ^r测抗体30 ng/ml; StrepAvidin HRP稀释1: 32，000。
结果如下表1-3所示。可以看出，NHBE 6122细胞中PAF诱导的IL-8 分泌由用DA-DKP预培养的细胞抑制。假定DA-DKP结合PAF, PAF受体，或者两者，阻滞产生(释放)IL-8
的信号。
表1
__IL-8(pg/ml)_SEM
DMSO 729.88 8.46
HBSS 809.62 198.23
AA-DKP(20|iM) 803.11 67.18
PAF(100nM) 1094.68 103.21
PAF+AA-DKP714.91 88.95
表2
____IL-8(pg/ml)_SEM
DMSO 602.99 73.48
HBSS 581.86 64.36
AA-DKP(20pM) 837.84 100.73
PAF(500nM) 887.87 112.56
PAF+AA-DKP542.5 37.17
表3
___IL-8(pg/ml) SEM
DMSO 209.79 13.24
HBSS 233.08 5.79
AA-DKP(20pM) 184.86 34.73
PAF(100nM) 355.36 11.28
PAF+AA-DKP 201.93 20.64
*对于表3，在试验之前4天均分细胞以产生5,000细胞/孔，并且使生 长至70%融合。
权利要求
1.药物组合物，包含药学上可接受的载体和具有下式的活性成分其中R1是-CH2COR3，或-CH2-CH2COR3；R2是选自甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、羟赖氨酸、组氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲状腺素、正缬氨酸和鸟氨酸的氨基酸的侧链；R3是-OH、-NH2、-OR4、-NHR4或-NR4R4；和每个R4分别是烷基、芳基、烷芳基或芳烷基；或者它们生理学上可接受的盐。
2. 权利要求l的组合物，其中R"是选自甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和正缬氨酸的氨基酸的侧链。
3. 权利要求2的组合物，其中W是丙氨酸的侧链。
4. 权利要求1-3中任一项的组合物，其中R 是-OH或-OR4。
5. 权利要求4的组合物，其中R 是-OH。
6. 权利要求1-3中任一项的组合物，其中R 是-NH2、 ->^114或^114114。
7. 权利要求6的组合物，其中113是-丽2。
8. 权利要求1-7中任一项的组合物，其中R'是-CH2COOH。
全文摘要
本发明涉及二酮基哌嗪和包含它们的组合物的使用方法。本发明提供一种抑制血小板活化因子(PAF)作用的方法。例如，可以治疗PAF介导的疾病或病症(特别是炎症)或者可以抑制血小板聚集。本发明也提供抑制由细胞产生和/或释放的白细胞介素8(IL-8)的方法。按照本发明PAF的作用和IL-8的产生和/或释放由该结构式(1)的化合物抑制，其中R₁和R₂在说明书中定义，或它们生理学上可接受的盐。本发明也提供包括这些化合物的药物组合物。
文档编号A61K31/495GK101632669SQ20091014568
公开日2010年1月27日 申请日期2001年8月2日 优先权日2000年8月4日
发明者C·杰拉尔德·柯蒂斯, 戴维·巴-奥尔, 格雷格·托马斯, 纳加拉杰·K·R·拉奥 申请人:Dmi生物科学公司