专利名称：用于叶酸靶向剂的改进方法
技术领域：
本发明涉及用于制备叶酸靶向缀合物EC145的改进方法，用改进方法制备的缀合物EC145，和包含用改进方法制备的缀合物EC145的药物组合物。发明背景和概述
叶酸靶向药物已开发并在临床试验中作为癌症治疗药试验。EC145包括高效长春花生物碱细胞毒性化合物，缀合到叶酸的去乙酰长春碱酰肼(DAVLBH)。EC145分子靶向在上皮瘤表面上发现的高水平叶酸受体，这些上皮瘤包括非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、子宫内膜癌和肾癌及其它癌，包括输卵管癌和原发性腹膜癌。相信EC145结合到表达叶酸受体的肿瘤，这种叶酸受体将长春花部分直接输送到癌细胞，同时避开正常细胞。因此，在结合后，EC145通过胞吞进入癌细胞，释放DAVLBH，并引起细胞死亡或抑制细胞功能。EC145具有下式
权利要求
1.一种制备EC145的方法，所述方法包括在pH小于8的含水缓冲剂存在下用下式的化合物
2.权利要求I的方法，其中X为2-硫基吡啶基或3-硝基-2-硫基吡啶基。
3.权利要求I的方法，其中X为2-硫基吡啶基。
4.权利要求I至3中任一项的方法，其中缓冲剂具有5.9至6. 3的pH。
5.权利要求4的方法，其中缓冲剂具有5.9至6. I的pH。
6.权利要求I至5中任一项的方法，其中缓冲剂为磷酸盐缓冲剂。
7.权利要求6的方法，其中缓冲剂为磷酸钠缓冲剂。
8.权利要求I的方法，所述方法包括在pH5. 9至6. 3的磷酸钠缓冲剂存在下用下式的化合物
9.权利要求I至8中任一项的方法，其中处理在包含乙腈的液体介质中进行。
10.权利要求I至9中任一项的方法，所述方法进一步包括用式Y-C0-0-(CH2)2-S-X的酰化剂或其酸加成盐处理去乙酰长春碱酰肼的步骤，其中Y为离去基团，以形成包含下式的化合物的反应混合物
11.权利要求10的方法，其中酰化剂为下式的化合物
12.权利要求11的方法，其中酰化剂为下式的化合物
13.权利要求11的方法，其中酰化剂为下式的化合物
14.权利要求10至13中任一项的方法，其中去乙酰长春碱酰肼用酰化剂在包含乙腈的溶剂中处理。
15.权利要求10至14中任一项的方法，其中去乙酰长春碱酰肼以高纯化形式提供。
16.权利要求10至15中任一项的方法，其中用酰化剂处理去乙酰长春碱酰肼以生成包含下式化合物
17.权利要求I至16中任一项的方法，所述方法进一步包括其中包含EC145的反应混合物用柠檬酸盐缓冲氯化钠水溶液稀释，并装到聚苯乙烯-二乙烯基苯聚合物树脂柱或柱体上纯化的步骤。
18.权利要求17的方法，所述方法进一步包括使用包含乙腈和柠檬酸盐缓冲氯化钠水溶液的流动相从柱或柱体洗脱EC145产物。
19.权利要求I至18中任一项的方法，所述方法进一步包括用超滤提供EC145作为水溶液中的纯化产物的步骤。
20.权利要求I至19中任一项的方法，其中在任何步骤使用的水包含不超过约0.9ppm浓度的溶解氧。
21.缀合物EC145，所述缀合物EC145通过权利要求I至20中任一项所述的方法制备。
22.通过一种方法制备的缀合物EC145，所述方法包括在其中缓冲剂具有5.9至6. 3的PH的含水缓冲剂存在下用下式的化合物
23.权利要求22的缀合物，其中X为2-硫基吡啶基。
24.权利要求22或23的缀合物，其中所述方法进一步包括用式Y-C0-0-(CH2)2-S-X的酰化剂或其酸加成盐处理去乙酰长春碱酰肼的步骤，其中Y为离去基团，以形成包含下式的化合物的反应混合物
25.权利要求24的缀合物，其中酰化剂为下式的化合物
26.—种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求21至25中任一项所述的缀合物EC145与稀释剂、赋形剂或载体。
全文摘要
本发明涉及用于制备叶酸靶向缀合物EC145的改进方法，用改进方法制备的缀合物EC145，和包含用改进方法制备的缀合物EC145的药物组合物。
文档编号A61K31/519GK102984943SQ201180035630
公开日2013年3月20日 申请日期2011年5月19日 优先权日2010年5月19日
发明者D.S.雷诺, K.M.斯坦福德, I.R.弗拉霍夫 申请人:恩多塞特公司