包含抑制scf或者其受体的物质的用于治疗或预防血管渗透性相关疾病的组合物的制作方法

包含抑制scf或者其受体的物质的用于治疗或预防血管渗透性相关疾病的组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种用于治疗或预防血管渗透性相关疾病的组合物，所述组合物包含抑制SCF(干细胞因子)或其受体的物质。另外，本发明涉及一种血管渗透性相关疾病治疗剂的筛选方法，所述方法包括：(a)用治疗剂候选物质处理血管渗透性相关疾病疑似病人的被分离的试样的步骤；以及(b)将SCF或者其受体的表达水平与对照组进行比较的步骤。本发明查明了对调节血管渗透性的作为新的靶点的SCF，在利用其的情况下，针对血管渗透性增加的眼球疾病，降低血管渗透性，从而能够有效治疗或者预防血管渗透性相关疾病，并且利用上述组合物有效调节血管渗透性。另外，通过测量SCF及C-Kit表达调节，可以作为用于血管渗透性相关疾病治疗剂的筛选的有效方法而提供。
【专利说明】包含抑制SCF或者其受体的物质的用于治疗或预防血管渗 透性相关疾病的组合物

【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种用于治疗或预防血管渗透性相关疾病的组合物，所述组合物包含 抑制SCF(干细胞因子（stem cell factor))或其受体的物质。另外，本发明涉及一种血管 渗透性相关疾病治疗剂的筛选方法，包括：(a)用治疗剂候选物质处理血管渗透性相关疾 病疑似病人的被分离的试样的步骤；以及（b)将SCF或者其受体的表达水平与对照组进行 比较的步骤。

【背景技术】
[0002] 血管系对维持正常的生理功能起重要的作用。例如，血管系内皮细胞在正常的情 况下，形成起着调节流体、电解质及蛋白质移动到组织和器官内的作用的细胞性屏障。构成 这样的血管系的血管是构成人体的所有细胞的生存及维持正常功能中所必须的器官，实际 上，特别是由血管不足引起的各种各样的缺血性疾病及由血管内平衡丧失引起的疾病由于 其发生频率高而被认为重要的治疗靶点疾病。
[0003] 关于血管渗透性，虽然导致丧失内皮屏障的功能的因素稍微复杂而没有完全被 理解，但广泛地进行了关于增强并维持血管系的渗透性的研究（Kagsbrun&Moses, Chemist ry&Biology (1999)，6:R217-R224 ;Ferrara，Endocrine Reviews (2004)，25(4):581-611)。 然而，关于扰乱血管渗透性的正确的机制，并没有被明确地阐明，但推定为，从癌到自身 免疫疾病一样的炎症疾病为止，与各种各样的疾病和病理学疾病的病因非常密切相关。 另外，已报道有，与血管系关联的炎症刺激与血管渗透性的扰乱关联的细胞外血管形成 (Kirkpatrick et al·，Int. J.Microcirc. (1997),17 :231_240)。例如，可以举出表面粘附 分子及其配体的表达增加、炎症性细胞浸润、细胞因子生成、炎症趋化因子释放、氧化性应 激及先天免疫的活化等。这些炎症反应典型地与血管渗透性上的改变，白血球血管外流出 (粘附、迁移及化学趋向性）及组织的再生有关。
[0004] 已报道有血管的生成及血管渗透性的调节与低氧血症（hypoxia)有密切的关联 性。特别是在胚胎发生阶段或细胞增殖活跃的癌组织、或者血管损伤的组织中出现的低 氧血症状态，成为现有血管和内皮细胞之间的结合断开而渗透性增加的不稳定状态，在这 样的情况下，促进血管内皮细胞的增殖及移动，从而形成新的血管。已知，调节这样的血 管不稳定化及血管新生过程的机制涉及与在低氧状态下通过HIF-I (hypoxia inducible factor-1)等转录因子而被差异表达的各种各样的基因，这些基因的大部分是生长因子/ 细胞因子，它们通过降低血管内皮细胞的细胞间结合而提高血管的渗透性、或者通过促进 血管内皮细胞的生长/移动能力而形成新生血管。
[0005] 另一方面，非正常的血管新生及血管渗透性调节过程不仅与胚胎发生过程中的器 官形成有直接关系，而且与出生后成人中的许多疾病的发生有直接关系。已知，过多的血 管新生与癌的增殖及糖尿病性视网膜症、风湿性关节炎等疾病有关。相反地，在血管新生 不足的情况下，将发生慢性伤口、缺血性心血管疾病等。另外已知，血管的渗透性调节也与 各种各样的疾病有密切关联，特别是在缺血性脑疾病或心肌梗塞的情况下，如果血管的渗 透性高，则诱发浮肿而促进神经细胞或者心肌细胞的死亡。然而，为了开发这样的疾病的根 源性的治疗方法，实际上迫切的是查明血管新生及血管渗透性调节的分子学机制。目前正 在试图着用于查明这样的血管新生及血管渗透性调节的分子机制的各种各样的研究。作 为其例子，已知血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF)为 调节血管的渗透性的代表性基因，在低氧（Hypoxia)状态下过表达，从而与血管内皮细胞 的VEGF受体结合，因此增加血管渗透性。已知VEGF受体与调节血管内皮细胞间的结合的 VE-钙粘蛋白形成复合体，从而由VEGF诱导VE-钙粘蛋白的内吞来增加血管渗透性。另外 已知，由VEGF/eNOS生成的NO诱导β-连环蛋白的S-亚硝基化作用（S-nitrosylation) 来促进与VE-1丐粘蛋白（VE-cadherin)的分离，从而增加血管内皮细胞的渗透性（M. Rizwan et al.，J. Cell Bol. (2011) 193 ;841-850)。已报道有，增加血管内皮细胞的渗透性的凝 血酶（thrombin)诱导eNOS的NO生成及RhoA的活化，由此促进细胞的肌动蛋白细胞骨 架（actin cytoskeleton)和粘附连接分子（adherent junction molecule)的不稳定化， 从而促进血管渗透性（Thibeault et al. ,Molecular cell(2010)39;468_476)。据此， 正试图着通过抑制VEGF或者VEGF受体来治疗因血管渗透性增加而发生的糖尿病性视网 膜病（diabetic retinopathy),且也适用于由于生成渗透性高的未成熟血管而发生的脉 络膜血管新生（choroidal neovascularization)、早产儿视网膜病（ROP:retinopathy of prematurity) > ^ ^ SE ^ ft (age-related macular degeneration) ^ (Aiello1New England Journal of Medicine(1994)331(22) :1480-1487 ；Adamis,American journal of Ophthalmology(1994) 118:445-450 ；Steinbrook, New England Journal of Medicine(2006)355(14):1409-1412 ；Ferrara, American Journal of Physiol Cell Phys iol (2001) 280 (6) : C1358-C1366)。另外，已报道有，抑制VEGF或者VEGF受体的治疗法能够 使在肿瘤内或者周围生成的渗透性高的血管正常，使抗癌药物很好地传达至肿瘤的中心部 位，从而增大抗癌治疗效能（Jain, Science (2005) 307 (5706) : 58-62)。
[0006] 然而，目前为止与大部分的血管新生及血管渗透性调节相关的研究限于VEGF或 者VEGF受体，大部分集中在针对上述基因的抑制剂的开发，因此作为现况，与血管新生及 血管渗透性调节相关的研究不足。
[0007] 在这样的背景下，本发明人等为了寻找在眼球疾病中血管渗透性相关疾病的治疗 物质而精心努力的结果，确认了 SCF(干细胞因子）一方面增加血管渗透性，另一方面在抑 制SCF或者作为SCF受体的C-Kit的表达或者磷酸化的情况下，降低血管渗透性的增加，从 而完成了本发明。


【发明内容】

[0008] 技术问题
[0009] 本发明的目的在于提供一种用于治疗或预防血管渗透性相关疾病的组合物，所述 组合物包含抑制SCF(干细胞因子）或其受体的物质。
[0010] 本发明的另一个目的在于提供一种血管渗透性调节方法，所述方法包括利用上述 组合物在体外（in vitro)调节SCF或者其受体的表达的步骤。
[0011] 本发明的又一个目的在于提供一种血管渗透性相关疾病治疗剂的筛选方法，所述 方法包括：(a)用治疗剂候选物质处理血管渗透性相关疾病疑似病人的被分离的试样的步 骤；以及（b)将SCF或者其受体的表达水平与对照组进行比较的步骤。
[0012] 解决问题的方案
[0013] 本发明提供一种用于治疗或预防血管渗透性相关疾病的组合物，所述组合物包含 抑制SCF(干细胞因子）或其受体的物质。具体地，其特征在于，上述SCF的受体为C-Kit， 上述抑制SCF或者其受体的物质为对SCF或者其受体特异性的siRNA、反义寡核苷酸（sense oligonucleotide)、适体或者抗体。更具体地，其特征在于，上述抑制SCF的受体的物质为 C-Kit siRNA或者SCF受体抑制抗体。
[0014] 另一方面，上述血管渗透性相关疾病的特征在于，选自由糖尿病性视网膜病 (diabetic retinopathy)、脉络膜血管新生（choroidal neovascularization)、青光眼视 网膜色素变性（glaucoma retinitis pigmentosa)、早产儿视网膜病（R0P:retinopathy of prematurity)、老年性黄斑变性（age-related macular degeneration)、青光眼、角膜营养 不良（corneal dystrophy)、视网膜劈裂症（retinoschises)、斯塔加特病（Stargardt，s disease)、常染色体显性玻璃膜抚（autosomal dominant druzen)，贝斯特黄斑营养不 良（Best，s macular dystrophy)、囊样黄斑水肿（cystoid macular edema)、缺血性视网 膜病变（ischemic retinopathy)、诱导炎症视网膜退行性疾病（inflammation-induced retinal degenerative disease)，X染色体-相关青少年视网膜劈裂症（X-linked juvenile retinoschisis)、莫拉蒂致拉分提那斯（Malattia Leventinese ;ML)、多英蜂窝 状视网膜营养不良（Doyne honeycomb retinal dystrophy)及血管内皮细胞相关炎症疾病 组成的组中，上述血管渗透性相关疾病的治疗通过抑制血管内皮细胞的渗透性来实现。
[0015] 另外，本发明提供一种血管渗透性调节方法，所述方法包括利用上述组合物在体 外（in vitro)调节SCF或者其受体的表达的步骤。
[0016] 另外，本发明提供一种血管渗透性相关疾病治疗剂的筛选方法，所述方法包括（a) 用治疗剂候选物质处理血管渗透性相关疾病疑似病人的被分离的试样的步骤；以及（b)将 SCF或者其受体的表达水平与对照组进行比较的步骤。具体地，其特征在于，与上述SCF的 受体为C-Kit，更具体地，上述（b)步骤进一步包括将C-Kit的磷酸化水平与对照组比较的 步骤。
[0017] 发明效果
[0018] 本发明查明了作为调节血管渗透性的新的靶点的SCF，在利用本发明的抑制SCF 或者其受体的组合物的情况下，针对血管渗透性增加的眼球疾病，降低血管渗透性，从而 可以有效治疗或者预防血管渗透性相关疾病，并且利用上述组合物可以有效调节血管渗透 性。另外，通过测量SCF及C-Kit的表达调节，可以作为用于血管渗透性相关疾病治疗剂的 筛选（screening)的有效方法而提供。

【专利附图】

【附图说明】
[0019] 图1表示对由SCF引起的血管渗透性增加（A)、C-Kit依赖度（B)及信号传导通路 (C)进行分析的结果。
[0020] 图2表示对于基于SCF通过作为细胞内信号传导物质的AKT-eNOS来实现的NO的 生成及位于血管内皮细胞表面的作为细胞间粘附蛋白质的VE-钙粘蛋白的内吞作用的诱 导进行确认的结果。图2的A表示由SCF引起的NO的生成增加，B表示对于由SCF引起的 内皮细胞的渗透性增加被L-NAME所抑制的情况进行确认的结果。图2的C表示因 SCF及 VEGF而降低的VE-钙粘蛋白（VE-cadherin)在血管内皮细胞表面的表达通过L-NAME处理 及eNOS表达抑制而得以恢复的结果，D表示因 SCF及VEGF而增加的VE-钙粘蛋白的内吞 作用通过L-NAME处理及eNOS表达抑制而得以降低的结果。
[0021] 图3表示通过小鼠皮下组织实验来确认由SCF引起的血管渗透性增加的结果。图 3的A及B表示由SCF引起的血管渗透性增加，C及D表示由SCF受体抑制抗体引起血管渗 透性降低的结果。
[0022] 图4表示通过小鼠的眼睛视网膜血管实验确认由SCF引起的血管渗透性增加的结 果。图4的A及B表示由SCF引起的血管渗透性增加，C及D表示由SCF受体抑制抗体引 起的血管渗透性降低的结果。
[0023] 图5表示糖尿病性视网膜病动物的视网膜中的SCF(A)及VEGF(B)的表达增加。
[0024] 图6表示在糖尿病性视网膜病动物的视网膜中血管渗透性的增加被SCF抑制抗体 所抑制的结果。
[0025] 最佳实施方式
[0026] 作为用于实现上述目的的一个实施方式，本发明提供一种用于治疗或预防血管渗 透性相关疾病的组合物，所述组合物包含抑制SCF (干细胞因子）或其受体的物质。
[0027] 在本发明中，术语"SCF(干细胞因子）"被称作Kit-配体（Kit-Iigand)或者青灰 因子（Steel factor)，是与C-Kit受体（CD117)结合的细胞因子（cytokine)，并以贯通膜 蛋白质及水溶性形式存在。已知SCF促进形成血液细胞的造血作用、精子形成作用、黑色素 形成作用等，但SCF是否增加血管渗透性尚未有报道。本发明人等最早查明了 SCF使血管 渗透性增加，确认了如果抑制SCF或者其受体，则对于治疗血管渗透性相关疾病具有效果。
[0028] 具体查明了：如果以SCF或者其受体为靶点并将其抑制，则有血管渗透性相关疾 病的治疗效果。SCF或者其受体的抑制不仅可以通过SCF或者其受体的表达抑制来实现，而 且可以通过磷酸化的抑制来实现。本发明的SCF的序列信息可以从公知的数据库中获得， 作为其例子可以为NCBI GenBank Accession No. NG_012098,但并不限于此，只要以SCF来 表示增加血管渗透性的活性，则可以具有80%、90(%，优选95 (%，更优选97(%以上的序列同 源性。上述SCF的受体只要能够增强血管渗透性的作用就可以无限制地使用，但并不限于 此，可以优选C-Kit。
[0029] 在本发明中，术语"C-Kit (0)117) "也被称作原致癌基因 C-Kit (proto oncogene C-Kit)或者酪氨酸蛋白激酶 Kit (tyrosine-protein kinase Kit)，是编码（encoding) 人类KIT基因的蛋白质。上述C-Kit为在造血干细胞表面表达的细胞因子的受体，是 与SCF的受体结合的蛋白质，已知上述受体的变异体与几种癌有关联。本发明的C-Kit 的序列信息可以从公知的数据库中获得，作为其例子可以是NCBI GenBank Accession No. BC071593. 1，但并不限于此，只要以C-Kit来表示增加血管渗透性的活性，则可以具有 80%、90%，优选95%，更优选97%以上的序列同源性。
[0030] 根据本发明的具体的一个实施例，在用SCF处理培养血管内皮细胞的培养基进行 培养的情况下，确认到内皮细胞的血管渗透性增加（图1A)，在抑制SCF的受体的情况下，确 认到血管渗透性降低（图3及4)。另外，在使用抑制作为SCF的受体的C-Kit的siRNA来 抑制C-Kit的表达的情况下，确认到血管渗透性降低（图1的B)，在作为血管渗透性相关疾 病之一的糖尿病性视网膜病动物模型中，确认到SCF的表达增加（图5)。
[0031] 在本发明中，术语"抑制SCF或者其受体的物质"为抑制使血管渗透性增加的SCF 或者其受体（例如C-Kit)的物质，意指通过调节血管渗透性来发挥抑制血液向细胞外基质 流出的功能的物质，其可以以由血管渗透性的增加诱发的血管渗透性相关疾病的治疗或者 预防的目的使用。这样的抑制不仅可以通过抑制SCF或者其受体的表达水平来实现，而且 通过抑制由SCF引起的C-Kit的磷酸化来实现。
[0032] 上述抑制SCF或者其受体的物质可以无限制的使用能够以SCF或者其受体为靶点 来抑制SCF或者其受体的表达或者C-Kit的磷酸化的化合物、核酸、肽、病毒或者包含上述 核酸的载体等。优选地，本发明中，可以是对SCF或者其受体特异性的SiRNA、反义寡核苷 酸、适体或者抗体。另外，上述SCF或者其受体表达的抑制不仅可以是能够抑制SCF或者其 受体自身的表达的物质，而且可以是抑制由SCF或者其受体产生的信号传导的物质。
[0033] 具体地，在本发明的一个实施例中，在用SCF进行处理的情况下，确认到与血管渗 透性相关的作为SCF受体的C-Kit的磷酸化增加，Akt蛋白质的磷酸化增加，另外可确认到 与血管渗透性相关的eNOS蛋白质的磷酸化增加，从而增加血管渗透性（图1的C)。这样的 结果启示若抑制SCF来抑制C-Kit的磷酸化或者与由SCF及C-Kit产生的信号传导相关的 蛋白质的磷酸化，则可以降低血管渗透性。
[0034] 在本发明中，术语"siRNA"为可以介导RNA干扰或者基因沉默（silencing)的核酸 分子，可以抑制靶基因的表达，因此作为有效的基因敲低（knockdown)方法或者基因治疗 方法来使用。上述siRNA是双链RNA被Dicer酶所切割而生成的21-25核苷酸大小的小的 RNA碎片，可以特异性地与具有互补的序列的mRNA结合而抑制蛋白质表达。通过siRNA是否 诱发具有互补的碱基序列的mRNA分解或者是否诱导翻译抑制是根据对应的21-25个的核 苷酸RNA与mRNA间的互补性程度来决定。本发明中使用的抑制SCF的转录的物质为siRNA， 通过利用上述片断的互补性部分来抑制涉及血管渗透性的SCF的效果的方法来起到抑制 血管渗透性增加的作用。另外，还通过抑制SCF的受体的C-Kit的表达的方法来起到抑制血 管渗透性增加的作用。本发明的一个实施例中，在抑制SCF的受体方面使用C-KitsiRNA，当 使用抑制上述C-Kit的siRNA来抑制C-Kit的表达的情况下，确认到血管渗透性降低（图 1的B)。就这样的针对SCF或者C-Kit的siRNA而言，本领域技术人员可以从公知的数据 库的上述基因序列通过公知的方法来制造，上述C-Kit siRNA不限于此，可以优选为具有序 列号2、3、4或者5的碱基序列的siRNA。
[0035] 在本发明中，术语"反义寡核苷酸"为含有与特定mRNA的序列互补的核酸序列的 DNA或RNA或者其衍生物，其与mRNA内的互补序列结合从而起到阻止mRNA翻译成蛋白质 的作用。反义寡核苷酸序列意指与上述SCF或者其受体mRNA互补且可以与上述mRNA结合 的DNA或者RNA序列。它可以阻止上述SCF或者其受体mRNA的翻译、向细胞质内的转运 (translocation)、成熟（maturation)或者其它所有对整个生物学功能必须的活性。反义 寡核苷酸的长度可以为6至100碱基，优选8至60碱基，更优选10至40碱基。上述反义 寡核苷酸可以通过通常的方法在试管内合成而给药至生物体内或者使反义寡核苷酸在生 物体内合成。作为在试管内合成反义寡核苷酸的一个例子，利用RNA聚合酶I。作为使反义 RNA在生物体内合成的一个例子，使用多克隆位点（MCS)的起源（origin)在相反方向的载 体使反义RNA转录。优选使上述反义RNA在序列内存在翻译终止密码子，从而不让使其翻 译为肽序列。通过参考SCF或者C-Kit基因的碱基序列，按照本领域公知的方法可以容易 进行本发明中可被利用的反义寡核苷酸的设计。
[0036] 在本发明中，术语"适体（aptamer) "为单链寡核苷酸，是指大小为20?60核苷酸 程度且对规定的靶分子具有结合活性的核酸分子。根据序列具有各种各样的三维结构，如 抗原-抗体反应那样可以与特定物质具有高的亲和力。适体通过与规定的靶分子结合，能 够阻止规定的靶分子的活性。本发明的适体可以为RNA、DNA、修饰的（modified)核酸或者 其混合物，并且可以为直链状或者环状形态。优选地，上述适体可以与SCF结合而起到阻止 SCF活性的作用。此外，通过与作为SCF受体的C-Kit结合，阻止SCF受体的活性，使SCF不 与SCF受体结合的作用，能够起到间接地阻止SCF活性的作用。本领域技术人员可以从公 知的数据库的上述基因序列，通过公知的方法来制造这样的基于SCF或者C-Kit的siRNA。
[0037] 在本发明中，术语"抗体"意指在生物体的免疫系统中循环血液或淋巴时作为外 来物质的抗原侵入的情况下，对其作出反应的物质，由于其是在淋巴组织中形成的球蛋 白系蛋白质因此也被称作免疫球蛋白。抗体是在B细胞生成后流向体液中的蛋白质，其 与抗原特异性地结合，在一个抗体分子中有两个重链（heavy chain)和两个轻链（light chain)，各个重链和轻链在其N-末端有可变区。各自的可变区由3个互补性决定区 (Complementarity determining region :CDR)和 4 个构架区（framework regions ：FRs) 构成，互补性决定区决定抗体的抗原结合特异性，以由可变区的构架区来维持的比较短的 肽序列形式存在。优选地，上述抗体可以是通过与SCF结合而能够抑制SCF的活性的抗体 或者抑制SCF受体（C-Kit)的抗体。本发明的一个实施例中，在使用SCF受体抑制抗体的 情况下，确认到血管渗透性降低（图3及4)。
[0038] 在本发明中，术语"L-NAME(L_N-硝基精氨酸甲酯（L-N-nitro arginine methyl ester))"为一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,N0S)的抑制剂，其在血管内皮细胞中 抑制一氧化氮的合成，从而起到调节血管渗透性的作用。在本发明的具体实施例中，以通过 抑制由SCF生成的NO来抑制血管内皮细胞的渗透性的用途使用了 L-NAME。
[0039] 在本发明中，术语"血管（或者血管系）"是指哺乳类遍及全身的运输血液及淋巴 液的血管系，是指包括动脉、细动脉、毛细血管、细静脉、静脉、及脉管壁血管的哺乳类血管 系的所有管。另外，本发明中，术语"血管渗透性（vascular permeability)"通常是指通过 上述血管的性质，包括调节血液向血管内皮细胞的细胞外基质流出的功能。上述血管渗透 性只要是在个体内的血管，则不限制地包含所有通过血管的性质，例如可以包含血管内皮 细胞的渗透性。
[0040] 根据本发明的具体实施例，在用SCF处理培养血管内皮细胞的培养基进行培养的 情况下，确认到血管内皮细胞的血管渗透性增加（图1的A)，在小鼠皮下组织（图3的A及 B)及小鼠视网膜血管（图4的A及B)中也可以确认到血管渗透性的增加。
[0041] 在本发明中，术语"血管渗透性相关疾病"为由于血管渗透性的正常调节崩溃而引 起的疾病，通常是指由于血管发生变化而渗透性增加，从而引起出血的疾病。作为上述血 管渗透性相关疾病的例子，可以是糖尿病性视网膜病（diabetic retinopathy)、脉络膜血 管新生（choroidal neovascularization)、青光眼视网膜色素变性（glaucoma retinitis pigmentosa)、早产儿视网膜病（R0P:retinopathy of prematurity)、老年性黄斑变性 (age-related macular degeneration)、青光眼、角膜营养不良（corneal dystrophy)、视 网膜劈裂症（retinoschises)、斯塔加特病（Stargardt's disease)、常染色体显性玻璃膜 抚（autosomal dominant druzen)、贝斯特黄斑营养不良（Best，s macular dystrophy)、囊 样黄斑水肿（cystoid macular edema)、缺血性视网膜病变（ischemic retinopathy)、诱导 炎症视网膜退行性疾病（inflammation-induced retinal degenerative disease)、X染色 体-相关青少年视网膜劈裂症（X-linked juvenile retinoschisis)、莫拉蒂致拉分提那 斯（Malattia Leventinese ;ML)、多英峰窝状视网膜营养不良（Doyne honeycomb retinal dystrophy)及血管内皮细胞相关炎症疾病，优选地，可以是作为眼科疾病的糖尿病性视网 膜病或者老年性黄斑变性，但并不限于此。
[0042] 在本发明的一个实施例中，在作为代表性的血管渗透性相关疾病的糖尿病性视网 膜病动物模型中，确认到随着时间的经过SCF的表达水平增加（图5的A)，由此确认到SCF 可以成为治疗或者预防血管渗透性相关疾病的靶点，并且在用SCF抑制抗体处理的情况 下，确认到血管渗透性降低（图6)，由此确认到抑制SCF的物质具有血管渗透性相关疾病的 治疗效果。
[0043] 在本发明中，术语"治疗"是指为了改变要治疗的每个人或者细胞的自然过程而临 床介入的情形，其可以在临床病理状态进展过程中执行或者为了预防其而执行。治疗效果 的目的包括预防疾病的发生或者复发、缓解症状、降低由疾病引起的所有直接或者间接的 病理学结果、预防扩散、降低疾病发展速度、减轻疾病状态或者暂时缓解、见好或者改善预 后。优选地，在本发明中包括通过给药包含抑制SCF或者作为其受体的C-Kit的物质的组 合物使血管渗透性相关疾病的经过好转的所有行为。
[0044] 在本发明中，术语"预防"是指通过给药包含根据本发明的抑制SCF或者作为其受 体的C-Kit的物质的组合物来抑制或延迟上述血管渗透性相关疾病的发病的所有行为。
[0045] 本发明的组合物可以是通过抑制血管内皮细胞的渗透性而能够治疗血管渗透性 相关疾病的药物组合物。
[0046] 本发明的药物组合物可以进一步包含在制造药物组合物中通常使用的适当的载 体、赋形剂或者稀释剂。包含可药用的载体的组合物可以是口服或者非口服的多种剂型。 在制剂化的情况下，可以使用通常使用的填充剂、增量剂、结合剂、润湿剂、崩解剂、表面活 性剂等稀释剂或者赋形剂来调制。用于口服给药的固体制剂可以包括片剂、丸剂、散剂、颗 粒剂、胶囊剂等，这样的固型制剂可以在一种以上的化合物中混合至少一种以上赋形剂，例 如淀粉、碳酸I丐、鹿糖（sucrose)或者乳糖（lactose)、明胶等来进行调制。另外，除了简单 的赋形剂之外也可以使用如硬脂酸镁、滑石等润滑剂。作为用于口服给药的液相制剂，有悬 浮剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂等，除了作为通常使用的简单稀释剂的水、液体石蜡之外，还可 以包含多种赋形剂，例如润湿剂、甜味剂、芳香剂、保鲜剂等。用于非口服给药的制剂可以包 含灭菌的水溶液、水不溶性溶剂、悬浮剂、乳剂、冻干制剂、栓剂。作为水不溶性溶剂、悬浮 齐U，可以使用丙二醇（propylene glycol)、聚乙二醇、如橄榄油之类的植物性油、如油酸乙 酯之类的可注射的酯等。作为栓剂的基质，可以使用Witepsol、聚乙二醇（Macrogol)、吐温 61 (Tween 61)、可可脂、甘油三月桂酸酯（Laurin butter)、甘油明胶等。
[0047] 另外，本发明的药物组合物可以具有选自由片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、悬 浮剂、液剂、乳剂、糖浆剂、灭菌的水溶液、水不溶性溶剂、悬浮剂、乳剂、冻干制剂及栓剂组 成的组中的任意一种剂型。
[0048] 在本发明中，术语"血管内皮细胞"为围绕作为血管内侧部分的内膜的细胞，在形 成新的血管中执行核心作用。特别地，血管内皮细胞调节我们身体中最小且最多的毛细血 管的形成。
[0049] 根据本发明的实施例，在血管内皮细胞中，以不同浓度添加 SCF进行培养的情况 下，确认到血管内皮细胞的渗透性增加。具体地，在血管内皮细胞中以10、20及50ng/mL 浓度添加 SCF来进行培养的结果，可以确认到内皮细胞的血管渗透性呈浓度依赖性地增加 (图1A)。即，这启示SCF增加血管内皮细胞的渗透性，在抑制SCF的情况下能够减低血管 渗透性。
[0050] 作为另一个实施方式，本发明涉及一种血管渗透性相关疾病的治疗方法，所述方 法包括：将包含抑制SCF或者作为其受体的C-Kit的物质的组合物给药至个体的步骤。 [0051 ] 在本发明中，术语"个体"意指持有或者发生本发明的血管渗透性相关疾病的包括 人类的所有动物。通过将本发明的组合物给药至个体，能够缓解或者治疗血管渗透性相关 疾病。
[0052] 在本发明中，术语"缓解"是指通过给药根据本发明的组合物使血管渗透性相关疾 病变好转或者变有利的所有行为。
[0053] 上述本发明的组合物以药学有效量给药。
[0054] 在本发明中，术语"给药"是指以任意适当的方法向对象导入本发明的药物组合 物，就给药途径而言，只要是能够到达目标组织，则可以通过口服或者非口服的各种途径给 药。
[0055] 根据目的或者需要可以将上述药学上的组合物按照本发明【技术领域】中使用的通 常的方法、给药途径、给药量来适当地给药至个体。作为给药途径的例子可以以口服、非口 月艮、向皮下、腹腔内、肺内、及鼻腔内给药。非口服注入包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹腔内 或者皮下给药。另外，按照本发明【技术领域】中公知的方法可以选择适当的给药量及给药次 数。根据如同要治疗的症状的种类、给药途径、性别、健康状态、食物、个体的年龄及体重，及 疾病的严重程度般的各种各样的因素来适当地决定实际给药的本发明的药学上的组合物 的量及给药次数。
[0056] 本发明中的术语"药学有效量"意指以能够适用于医学用途的合理的受益/危险 比例来充分抑制或缓解血管渗透性增加的量，有效剂量水平可以根据包括个体种类及严重 程度、年龄、性别、药物的活性、对药物的敏感度、给药时间、给药途径和排泄比例、治疗时 间、同时使用的药物的要素以及其它在医学领域中众所周知的要素来决定。本发明的组合 物可以以单独治疗剂给药或者与其它治疗剂并用给药，可以与现有的治疗剂依次或者同时 给药。另外可以单次或者多次给药。考虑上述的所有要素以基于没有副作用的最小的量来 获得最大效果的量给药是非常重要的，并且可以由本领域技术人员容易地决定。
[0057] 作为另一个实施方式，本发明涉及一种血管渗透性调节方法，所述方法包括利用 上述组合物调节SCF或者其受体的表达的步骤。
[0058] 具体地，上述方法涉及一种通过抑制SCF或者其受体来抑制血管渗透性的方法。 上述方法可以是降低SCF的表达或者作为SCF的受体的C-Kit (⑶117)的表达或者磷酸化， 抑制作为血管内皮型NO合成酶的eNOS (内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase))的磷酸化的方法。
[0059] 在本发明中，术语"eNOS"为刺激生成血管内皮型NO(-氧化氮）的酶，在用本发 明中公开的SCF处理的情况下，在血管内皮细胞中作为细胞内传导物质的Akt被磷酸化而 eNOS被磷酸化，从而活化的Akt-eNOS在血管内皮细胞中促进NO的生成，结果是增加血管渗 透性。
[0060] 若对此用本发明的组合物处理，则可以抑制eNOS的磷酸化来抑制NO合成从而降 低血管渗透性来治疗血管渗透性相关疾病。
[0061] 根据本发明的一个实施例，对于将对照组SiRNA和C-Kit SiRNA导入至细胞内的 血管内皮细胞，分别用SCF以20ng/ml浓度进行处理后，确认了由SCF引起的血管内皮细胞 渗透性增加的C-Kit依赖度，结果确认到SCF使血管内皮细胞的渗透性增加，在降低C-Kit 的表达量时显著降低（图1B)，在用SCF处理血管内皮细胞后，确认了作为内皮细胞信号传 导物质的Akt-eNOS的磷酸化程度，结果确认到在用SCF处理的情况下，Akt-eNOS进行磷酸 化而被活化，并根据活化的酶在血管内皮细胞中NO的合成量增加（图1C)。另外，在血管内 皮细胞的NO的合成量增加的情况下，确认到血管渗透性增加（图2A)，这样的渗透性增加在 用作为抑制NO在内皮细胞中合成的抑制剂的L-NAME进行处理的情况下降低（图2B)。
[0062] 上述组合物是包含抑制SCF或者其受体的物质的组合物，如同上述说明，可以无 限制地使用具有降低血管渗透性效果的物质、即将SCF及其受体作为靶点来抑制SCF或者 其受体（例如C-Kit)的表达或者磷酸化的物质。
[0063] 作为另一个实施方式，本发明涉及一种血管渗透性相关疾病治疗剂的筛选方法， 所述方法包括（a)用治疗剂候选物质处理血管渗透性相关疾病疑似病人的被分离的试样 的步骤；以及（b)将SCF或者SCF受体的C-Kit的表达水平与对照组比较的步骤。优选地， 上述（b)步骤可以进一步包括将作为SCF受体的C-Kit的磷酸化水平与对照组比较的步 骤。
[0064] 在本发明中，术语"试样"包含来源于血管渗透性相关疾病疑似病人的诸如全血、 血清、血液、血浆、唾液、尿、痰、淋巴液、脑脊髓液及细胞间液之类的试样等，只要包含可以 检测出血管渗透性的增加与否的细胞的试样，则无限制地包含于此。
[0065] 在本发明中，术语"对照组"包含来源于血管的渗透性正常的个体的诸如全血、血 清、血液、血浆、唾液、尿、痰、淋巴液、脑脊髓液及细胞间液之类的试样等，其特征在于，与用 作实验组的血管渗透性相关疾病疑似病人相比，SCF或者SCF受体的C-Kit的表达水平或 者磷酸化水平更低。
[0066] 另外在本发明中，所谓术语"候选物质"意指对SCFX-Kit表达或者磷酸化变化活 性进行测试的药剂，是测量通过直接或者间接改变SCF或者C-Kit的表达水平而能够治疗 血管渗透性相关疾病的能力的对象，例如包括蛋白质、寡肽、有机小分子、多糖类、多核苷酸 及一般化合物等任意分子。这样的候选物质不仅包括天然物质还包括合成物质。
[0067] 在本发明中，所谓术语"血管渗透性相关疾病治疗剂"意指具有通过调节血管渗透 性的机制来降低血管渗透性功能的物质。
[0068] 本发明中血管渗透性的增加与否的确认及血管渗透性相关疾病治疗剂的筛选的 方法，可以以包括下述步骤的方法来筛选血管透过性相关疾病的治疗剂，所述步骤是：对于 如上述的在对照组及实验组，用抑制血管渗透性的物质进行处理后，比较增加血管渗透性 的SCF或者作为SCF受体的C-Kit的表达水平，从而将SCF或者作为SCF受体的C-Kit的表 达水平降低至正常个体的对照组的水平的物质判断为血管渗透性相关治疗剂。另外，其可 以以包括下述步骤的方法来筛选血管渗透性相关疾病的治疗剂，所述步骤是：将作为SCF 受体的C-Kit磷酸化降低至作为正常个体的对照组的水平的物质判断为血管渗透性相关 治疗剂。这样的表达及磷酸化的变化水平可以根据通过C-Kit及Akt-eNOS连接的信号传 导系的磷酸化或者表达发生变化与否来判断。

【具体实施方式】
[0069] 以下，根据本发明实施例进行更详细的说明。但是，下述实施例只是例示本发明， 本发明的内容并不限定于下述实施例。
[0070] 〈实施例〉
[0071] 实施例1 :某于干细朐闵子（SCF)的血管内皮细朐渗诱件分析
[0072] 将血管内皮细胞（Endothelial cell)放入至12孔Transwell过滤器（Corning Costar)的上室（upper chamber)中并培养48小时。然后用含有1 % FBS的内皮细胞 基本培养液（Endothelial basal medium)替换，培养 3 小时。用 SCF(10、20、50ng/ml) (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)以不同浓度处理1小时后，进行FITC-标记的葡聚 糖（Fluorescein isothiocyanate_dextran)(lmg/ml)处理。30 分钟后米取下室（lower chamber)的培养液，用荧光光度计进行测量。
[0073] 其结果是，确认到SCF呈浓度依赖性地增加血管内皮细胞的渗透性（图1A)。
[0074] 实施例2 :由SCF引起的血管内皮细朐渗诱件增加的C-Kit依赖度分析
[0075] 将血管内皮细胞放入至60mm板，利用脂质体（Iipofectamin)将作为对 照 siRNA 的 5'-AAUGGAAGACCACUCCCACUC-3' （序列号 1)和作为 C-Kit siRNA 的 5'-UCAUUCUUGAUGUCUCUGG-3' （序列号 2) ;5'-UUUGAGUUCAGACAUGAGG-3' （序列号 3); 5' -UCUUAUAAAGUGCAGCUUC-3'（序列号 4) ;5' -UACAAUGCCAUUCUGAAGC-3'（序列号 5)导入至 细胞内。24小时后，将内皮细胞放入至12孔Transwell过滤器（Corning Costar)上室中 并培养24小时。然后用含有1 % FBS的内皮细胞基本培养液（Endothelial basal medium) 替换，培养3小时。用SCF(20ng/ml)处理1小时后，进行FITC-标记的葡聚糖（lmg/ml)处 理。30分钟后采取下室的培养液用荧光光度计进行测量。
[0076] 其结果是，确认到因 SCF而内皮细胞的渗透性增加，这样的效果在使作为SCF的受 体的C-Kit的表达降低时显著降低（图1B)。
[0077] 实施例3 :某于SCF的血管内皮细朐的细朐内信号传导通路分析
[0078] 将血管内皮细胞放入至60mm板，培养24小时。然后用含有1% FBS的内皮细胞基 本培养液（Endothelial basal medium)替换，培养6小时。用SCF(20ng/ml)进行处理后 按照时间采集（harvest)细胞,进行蛋白质印迹。
[0079] 其结果是，确认到SCF使作为内皮细胞的信号传导物质的C-Kit、Akt-eN0S磷酸化 (图 1C)。
[0080] 实施例4 :由SCF引起的血管内皮细朐的NO(-氣化氮）牛成测量
[0081] 将血管内皮细胞放入至12孔-板，培养24小时。然后用含有1%FBS的内皮细胞 基本培养液（Endothelial basal medium)替换后，用SCF(20ng/ml)进行处理。按照时间 收集培养液，进行离心分离后，利用上层液测量全部NO(-氧化氮）量（总一氧化氮/亚硝 酸盐/硝酸盐检测试剂盒）。
[0082] 其结果是，确认到由SCF引起内皮细胞的NO (-氧化氮）量增加（图2A)。
[0083] 实施例5 :由SCF引起的血管内皮细朐的渗诱件增加的eNOS依赖度分析
[0084] 将血管内皮细胞（Endothelial cell)放入至12孔Transwell过滤器（Corning Costar)的上室并培养48小时。然后用含有1% FBS的内皮细胞基本培养液（Endothelial basal medium)替换，培养3小时。用作为eNOS抑制剂（inhibitor)的L-NAME(ImM)进行 前处理 30 分钟后，用 SCF(20ng/ml) (R&D Systems，Minneapolis，MN，USA)进行处理 1 小时， 用 FITC-标记的葡聚糖（Fluorescein isothiocyanate_dextran)(lmg/ml)处理。30 分钟 后采取下室的培养液用荧光光度计进行测量。
[0085] 其结果是，确认到由SCF引起内皮细胞的渗透性增加，这样的效果通过利用作为 eNOS抑制剂（inhibitor)的L-NAME而得到显著抑制（图2B)。
[0086] 实施例6 :由SCF引起的血管内皮细朐的VE-钙粘蛋白内吞作用分析
[0087] 将血管内皮细胞（Endothelial cell)放入至8孔腔室玻片（Chamber Slide, Lab-Tek)中并培养48小时。然后用含有1% FBS的内皮细胞基本培养液（Endothelial basal medium)替换，培养 16 小时。用 VE-I丐粘蛋白抗体（R&D Systems，Minneapolis, MN, USA)在 4 °C 处理 1 小时后，添加 SCF(20ng/ml)和 VEGF(50ng/ml) (R&D Systems, Minneapolis，丽，USA)在37°C诱导VE-钙粘蛋白的细胞内吸收30分钟。为了观察细胞表 面的VE-钙粘蛋白，用4 % PFA固定后进行免疫染色，为了确认通过由SCF及VEGF引起的内 吞而位于细胞内的VE-钙粘蛋白，用酸性缓冲液（pH2. 7)去除细胞表面的VE-钙粘蛋白后， 用4% PFA固定而进行免疫染色，并用荧光显微镜进行观察。
[0088] 其结果是，确认到由SCF引起对血管内皮细胞间的粘附重要的VE-钙粘蛋白在细 胞表面的表达降低，诱导了内吞（图2C、D)。
[0089] 实施例7 :由SCF引起的血管内皮细朐的VE-钙粘蛋白内吞作用的eNOS依赖度分 近
[0090] 在血管内皮细胞中，利用Amaxa 4D Nucleofector向细胞内导入作为eNOS siRNA 的 5' -ACCGGAACAGCACAAGA⑶UAU-3'（序列号 6) ;5' -AGCUGCAAGGAUUCAGCAUUAU-3'（序列号 7) ;5'-ACGGAACAGCACAAGA⑶UAUA-3'（序列号 8) ;5'-CCAGGAGUAUCUUACCUGUAAA-3'（序列号 9)。24小时后，将细胞放入至8孔腔室玻片（Lab-Tek)并培养24小时。然后用含有1 % FBS的内皮细胞基本培养液（Endothelial basal medium)替换，培养16小时。在4°C使 VE-钙粘蛋白抗体反应1小时后，用L-NAME(ImM)前处理30分钟，然后添加 SCF (20ng/ml) 和VEGF(50ng/ml)，在37°C诱导VE-钙粘蛋白的细胞内吸收30分钟。为了观察细胞表面的 VE-钙粘蛋白，用4 % PFA固定后进行免疫染色，为了确认通过由SCF及VEGF引起的内吞而 位于细胞内的VE-钙粘蛋白，用酸性缓冲液（pH2. 7)去除细胞表面的VE-钙粘蛋白后，用 4% PFA固定而进行免疫染色，并用荧光显微镜进行观察。
[0091] 其结果是，确认到由SCF引起的VE-钙粘蛋白的内吞通过eNOS的表达抑制及eNOS 抑制剂而被抑制，维持VE-钙粘蛋白的细胞表面的表达（图2的C及D)。
[0092] 实施例8 :小鼠樽型中由SCF引起的血管渗诱件增加分析
[0093] 向C57/BL6小鼠的尾巴静脉注入伊文思蓝（Evans blue)染料100。10分钟后在 鼠的背皮下（intradermally)注入 SCF 及 SCF 受体抑制抗体（anti-ckit IgG :Monoclonal anti-SCF receptor neutralization antibody(抗-Ckit IgG:单克隆抗-SCF受体中和抗 体）：R&D Systems，Minneapolis，MN, USA)。20分钟后从小鼠收集皮肤后，对伊文思蓝染料 向组织渗透出来的部位进行拍照，放入至甲酰胺（formamide)中，并在常温下放置4天。然 后用分光光度计在620nm处测量吸光度。
[0094] 其结果是，确认到由SCF引起鼠的皮肤血管渗透性增加（图3的A及B)，这样的效 果通过SCF受体抑制抗体而显著降低（图3的C及D)。
[0095] 实施例9 :利用小鼠的视网腊血管的、由SCF引起的血管渗诱件增加的血管诰影术 (Angiography)
[0096] 向C57/BL6小鼠的视网膜注入SCF及SCF受体抑制抗体。24小时后麻醉小鼠后向 心脏内注射 FITC-标记的葡聚糖（Fluorescein isothiocyanate-dextran) (intracardiac FITC-Dextran injection)，使荧光物质沿着血液流动。30分钟后取出小鼠的视网膜进行分 离后，进行平坦固定（flat mounting),通过突光显微镜进行观察。
[0097] 其结果是，确认到在注射SCF的小鼠中视网膜血管的渗透性增加，从而荧光物质 渗漏到血管周围组织（图4的A及B)，并且确认到这样的效果通过用SCF受体抑制抗体处 理而显著降低（图4的C及D)。
[0098] 实施例10 :利用糖尿病件视网腊病动物樽型的SCF表汰增加确认
[0099] SD 大鼠 （Sprague Dawley rat)的腹腔，注入 150mg/kg STZ (链脲霉素 (streptozotocin), Sigma)3天后测量血糖，并将250mg/dL以上的动物划分为糖尿，并 诱导糖尿病性视网膜病。诱导糖尿1周、4周后取出SD大鼠的视网膜，利用Trizol试剂 (Invitrogen公司）分离RNA,通过Real Time PCR确认了 SCF和VEGF的表达。
[0100] 其结果是，确认到在诱导糖尿病性视网膜病的大鼠中SCF和VEGF的表达量随着时 间的经过而增加（图5的A及B)，由此确认到SCF起着导致血管渗透性相关疾病的糖尿病 性视网膜病的重要因素的作用。
[0101] 实施例11 :糖尿病件视网腊病动物樽型中的、血管渗诱件增加及某于SCF抑制抗 体的降低效果确认
[0102] 向在上述实施例10中诱导糖尿病性视网膜病的大鼠的视网膜注入SCF抑制抗 体（anti-SCF IgG ：Monoclonal anti-SCF neutralization antibody (抗-SCF IgG :单克 隆抗-SCF中和抗体）：R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)。2周后，向麻醉的大鼠的心 脏内注射 FITC-标记的葡聚糖（Fluorescein isothiocyanate-dextran) (intracardiac FITC-Dextran injection)使荧光物质沿着血液流动。30分钟后，取出大鼠的视网膜进行 分离后，进行平坦固定（flat mounting),通过突光显微镜进行观察。
[0103] 其结果是，确认到在通过注射STZ而诱导糖尿病性视网膜病的大鼠中，视网膜血 管的渗透性增加，从而荧光物质渗漏到血管周围组织，并且确认到这样的效果通过用SCF 抑制抗体处理而显著降低（图6)，由此确认到SCF抑制抗体对糖尿病性视网膜病的治疗有 效。
[0104] 如上述的结果是启示本发明的SCF可以用作增加血管渗透性的调节剂的结果，是 启示在使用抑制SCF或者作为其受体的C-Kit的物质的情况下，能够治疗或者预防血管渗 透性相关疾病的结果。
【权利要求】
1. 一种用于治疗或预防血管渗透性相关疾病的组合物，所述组合物包含抑制SCF或其 受体的物质。
2. 根据权利要求1所述的用于治疗或预防血管渗透性相关疾病的组合物，其特征在 于，所述SCF的受体为C-Kit。
3. 根据权利要求1所述的用于治疗或预防血管渗透性相关疾病的组合物，其特征在 于， 所述抑制SCF或者其受体的物质选自由对SCF或者其受体特异性的siRNA、反义寡核苷 酸、适体及抗体组成的组中的任意一种。
4. 根据权利要求3所述的用于治疗或预防血管渗透性相关疾病的组合物，其特征在 于，所述抑制SCF的受体的物质为C-Kit siRNA或者SCF受体抑制抗体。
5. 根据权利要求4所述的用于治疗或预防血管渗透性相关疾病的组合物，其特征在 于，所述C-Kit siRNA为选自由序列号2至5组成的组中的任意一种的碱基序列。
6. 根据权利要求1所述的用于治疗或预防血管渗透性相关疾病的组合物，其特征在 于，所述血管渗透性相关疾病选自由糖尿病性视网膜病、脉络膜血管新生、青光眼视网膜色 素变性、早产儿视网膜病、老年性黄斑变性、青光眼、角膜营养不良、视网膜劈裂症、斯塔加 特病、常染色体显性玻璃膜疣、贝斯特黄斑营养不良、囊样黄斑水肿、缺血性视网膜病变、诱 导炎症视网膜退行性疾病、X染色体-相关青少年视网膜劈裂症、莫拉蒂致拉分提那斯、多 英峰窝状视网膜营养不良及血管内皮细胞相关炎症疾病组成的组中的任意一种。
7. 根据权利要求1所述的用于治疗或预防血管渗透性相关疾病的组合物，其特征在 于，所述血管渗透性相关疾病的治疗通过抑制血管内皮细胞的渗透性来实现。
8. -种血管渗透性调节方法，所述方法包括利用权利要求1至7中的任一项所述的组 合物在体外调节SCF或者其受体的表达的步骤。
9. 一种血管渗透性相关疾病治疗剂的筛选方法，所述方法包括： (a)用治疗剂候选物质处理血管渗透性相关疾病疑似病人的被分离的试样的步骤；以 及（b)将SCF或者其受体的表达水平与对照组进行比较的步骤。
10. 根据权利要求9所述的血管渗透性相关疾病治疗剂的筛选方法，其特征在于，所述 SCF的受体为C-Kit。
11. 根据权利要求10所述的血管渗透性相关疾病治疗剂的筛选方法，其特征在于，所 述（b)步骤进一步包括将C-Kit的磷酸化水平与对照组比较的步骤。
【文档编号】A61K38/17GK104334195SQ201280073658
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2012年10月25日 优先权日:2012年5月4日
【发明者】徐源希, 金知娟 申请人:亚洲大学校产学协力团