本发明涉及一种兽用复方制剂的制备方法，尤其涉及一种含咖啡酸苯乙酯的兽用复方制剂的制备方法，属于化合物或药物制剂的特定治疗活性领域。
背景技术：
在动物疾病治疗方面，随着抗生素、化学药物和激素类药物的滥用，其所导致动物的耐药性增强、药物残留、动物致畸及对生态环境的危害等日趋明显。由于合成抗菌剂、抗生素、激素等长期使用所带来问题的日益严重，加上西药化合物研究成本上升、开发思路枯竭等原因，在天然药物中寻找高效、无副作用、无耐药性的配方和制剂已成为世界新药开发的新思潮。
兽药作为制药领域的一个分支，在国外，其研发、生产、销售和应用，都受到严格的监管和控制；但是我国兽药仍处于制药的边缘领域，一直未被重视；其造成的结果就是各种药物泛滥、药物滥用、过量使用、违禁药物使用等的现象屡见不鲜，如瘦肉精、抗生素的滥用，造成巨大的食品安全隐患。随着我国经济发展，人民生活水平提高，法制更加健全，对兽药领域的监管必将越来越严格，对药物的使用要求也会越来越高，专业化和优质化必将成为兽药领域发展的大方向。
目前国内只有以简单提取物制成的制剂，如黄芪多糖注射液。此类药物最大的问题是黄芪多糖是由多种有效成分组成的混合物，其中的任何一 种糖的成分含量并不一致，而且缺乏有效的检测标准和方法；其次，药物容易受到产地、处理工艺的影响，很难保证每批次的药物有效成分含量稳定。有效成分含量的不稳定，对实际用药造成困难，无法保证每次用药剂量的稳定性：过多，容易造成损伤，过少，则疗效不明显。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种含咖啡酸苯乙酯的兽用复方制剂的制备方法，便于工业化生产和长期稳定保存兽用制剂。
本发明所述含咖啡酸苯乙酯的复方制剂的制备方法是：
(1)在注射用水中加入辅料，充分搅拌、混合均匀得混合液；
(2)向步骤(1)得到的混合液中少量多次添加咖啡酸苯乙酯，搅拌至其全部溶解；然后将溶液分为3份，第一份、第二份和第三份的质量比为：3:1:2；
(3)向第二份溶液中加入豆甾醇，第三份溶液中加入七叶内酯，分别少量多次添加，边加边搅拌至其溶解；
(4)将第二份溶液和第三份溶液混合，并搅拌均匀；再将第一份溶液加入，得混合液；
(5)步骤(4)所得混合液稳定后，调节pH值为5.0-8.0；待pH值稳定后，添加注射用水，得到确定最终体积和重量的产物；产物经过后处理，得到本发明所述含咖啡酸苯乙酯的复方制剂产品。
所述制备方法中，咖啡酸苯乙酯：2-12％，豆甾醇：1-5％，七叶内酯：2-12％，辅料：10-40％，以百分数计，剩余为注射用水。
优选咖啡酸苯乙酯：5-8％，豆甾醇：1-3％，七叶内酯：3-7％，辅料： 15-35％，剩余为注射用水。
所述辅料为丙三醇，PEG-200和磺丁基-β-环糊精。
进一步地，辅料中丙三醇，PEG-200和磺丁基-β-环糊精的质量比优选：3:3:4。
所述步骤(4)中，第二份溶液和第三份溶液加入流速比为质量比。
所述步骤(5)中，pH值调节试剂采用浓度为1mol/L的HCL溶液和1mol/L的NaOH溶液；
所述步骤(5)中，后处理过程包括：将产物过滤、灌装，然后进行灭菌处理；待灭菌产品冷却后，得到产品。
由于咖啡酸苯乙酯在冷水中很难溶解，且经过高温灭菌后容易变性、有晶体析出，是制备注射剂和口服溶液最大的困难之一。本发明结合咖啡酸苯乙酯药物性质和结构式特点，经过大量实验发现，通过合理控制温度、辅料比例、原料添加速率和添加的先后顺序，能够有效克服上述困难。
本发明中，辅料的主要作用是将本发明所述五种物质进行溶解，增加其在水溶液中的稳定性，并促进药物在体内的吸收和利用；所述注射用水的主要作用是溶解药物和辅料。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明所述制备方法得到的注射制剂，药物成分稳定、无晶体析出；克服了天然药物单体制剂溶解度低、药物不稳定的问题。
(2)本发明提供所述单体复方制剂的制备方法，便于工业化生产，所得兽用制剂便于长期稳定保存。
具体实施方式
以下结合制备实施例和药理学实施例对本发明进行详细的阐述，其中制备实施例1是本发明的最优方案。
实施例1
所述含咖啡酸苯乙酯的复方制剂，各组分质量为：
咖啡酸苯乙酯：0.75kg、豆甾醇：0.25kg、七叶内酯：0.5kg、丙三醇：0.75kg、PEG-200：0.75kg、磺丁基-β-环糊精：1kg(辅料共计：2.5kg)和注射用水：6kg。
所述含咖啡酸苯乙酯的复方制剂，其制备方法为：
(1)在50℃下，将2.5kg注射用水加入到反应釜A中；依次分别加入丙三醇、PEG-200和磺丁基-β-环糊精，充分搅拌，保持转速为30r/min，直至混合均匀得混合液；
(2)在50℃下，将咖啡酸苯乙酯分25次，每次30g，加入到反应釜A中的混合物中，搅拌至其全部溶解，保持转速为30r/min；然后将溶液分为3份，按照3:1:2的比例分别转移至反应釜B、反应釜C和反应釜D中，温度均恒定在50℃；
(3)向反应釜C中加入豆甾醇，分25次，每次10g加入；向反应釜D中加入七叶内酯，分25次，每次20g加入；充分搅拌，直至反应釜中的药物全部溶解；保持转速为30r/min，温度为50℃；
(4)将反应釜C和反应釜D中溶液按流速比为1:2的速度加入定容罐E中，混合并搅拌均匀；再将反应釜B中溶液加入，边加边搅拌得混合液；
(5)混合液稳定后，调节温度为37℃，加入1mol/L的HCL溶液和1mol/L的NaOH溶液调节pH值，充分搅拌混匀；待pH值稳定为6.5后，添加注射 用水，得到确定最终体积和重量的稀释液10kg，此时，注射用水质量约占总质量的60％；
(6)将定容罐E中的稀释液经孔径为0.45微米的滤芯，以1L/min的流速转移到分装罐F中，温度控制为20℃，气压为0.2MPa；在空气洁净度级别为100级，室温为20℃的条件下，将分装罐F中的溶液分装到容积为125mL且无菌无热源棕色透明的西林瓶中，分装量为100mL，然后压盖、密封；将西林瓶置于灭菌柜中，在120℃下灭菌10分钟，自然冷却后取出，即得本发明所述产品(记为A)。
实施例2
所述含咖啡酸苯乙酯的复方制剂，各组分质量为：
咖啡酸苯乙酯：0.5kg、豆甾醇：0.1kg、七叶内酯：0.6kg、丙三醇：0.84kg、PEG-200：0.84kg、磺丁基-β-环糊精：1.12kg(辅料共计：2.8kg)和注射用水：6kg。
所述含咖啡酸苯乙酯的复方制剂，其制备方法为：
(1)在40℃下，将2kg注射用水加入到反应釜A中；依次分别加入丙三醇、PEG-200和磺丁基-β-环糊精，充分搅拌，保持转速为50r/min，直至混合均匀得混合液；
(2)在60℃下，将咖啡酸苯乙酯分20次，每次25g，加入到反应釜A中的混合物中，搅拌至其全部溶解，保持转速为50r/min；然后将溶液分为3份，按照3:1:2的比例分别转移至反应釜B、反应釜C和反应釜D中，温度均恒定在60℃；
(3)向反应釜C中加入豆甾醇，分20次，每次5g加入；向反应釜D 中加入七叶内酯，分30次，每次20g加入；充分搅拌，直至反应釜中的药物全部溶解；保持转速为40r/min，温度为60℃；
(4)将反应釜C和反应釜D中溶液按流速比为1:2的速度加入定容罐E中，混合并搅拌均匀；再将反应釜B中溶液加入，边加边搅拌得混合液；
(5)混合液稳定后，调节温度为45℃，加入1mol/L的HCL溶液和1mol/L的NaOH溶液调节pH值，充分搅拌混匀；待pH值稳定为6.8后，添加注射用水，得到确定最终体积和重量的稀释液10kg，此时，注射用水质量约占总质量的60％；
(6)将定容罐E中的稀释液经孔径为0.7微米的滤芯，以5L/min的流速转移到分装罐F中，温度控制为30℃，气压为0.3MPa；在空气洁净度级别为100级，室温为15℃的条件下，将分装罐F中的溶液分装到容积为125mL且无菌无热源棕色透明的西林瓶中，分装量为100mL，然后压盖、密封；将西林瓶置于灭菌柜中，在135℃下灭菌8分钟，自然冷却后取出，即得本发明所述产品(记为B)。
实施例3
所述含咖啡酸苯乙酯的复方制剂，各组分质量为：
咖啡酸苯乙酯：0.6kg、豆甾醇：0.3kg、七叶内酯：0.7kg、丙三醇：0.72kg、PEG-200：0.72kg、磺丁基-β-环糊精：0.96kg(辅料共计：2.4kg)和注射用水：6.2kg。
所述含咖啡酸苯乙酯的复方制剂，其制备方法为：
(1)在50℃下，将3kg注射用水加入到反应釜A中；依次分别加入丙三醇、PEG-200和磺丁基-β-环糊精，充分搅拌，保持转速为40r/min，直 至混合均匀得混合液；
(2)在50℃下，将咖啡酸苯乙酯分20次，每次30g，加入到反应釜A中的混合物中，搅拌至其全部溶解，保持转速为40r/min；然后将溶液分为3份，按照3:1:2的比例分别转移至反应釜B、反应釜C和反应釜D中，温度均恒定在50℃；
(3)向反应釜C中加入豆甾醇，分20次，每次15g加入；向反应釜D中加入七叶内酯，分35次，每次20g加入；充分搅拌，直至反应釜中的药物全部溶解；保持转速为40r/min，温度为50℃；
(4)将反应釜C和反应釜D中溶液按流速比为1:2的速度加入定容罐E中，混合并搅拌均匀；再将反应釜B中溶液加入，边加边搅拌得混合液；
(5)混合液稳定后，调节温度为30℃，加入1mol/L的HCL溶液和1mol/L的NaOH溶液调节pH值，充分搅拌混匀；待pH值稳定为6.0后，添加注射用水，得到确定最终体积和重量的稀释液10kg，此时，注射用水质量约占总质量的62％；
(6)将定容罐E中的稀释液经孔径为0.1微米的滤芯，以0.5L/min的流速转移到分装罐F中，温度控制为25℃，气压为0.25MPa；在空气洁净度级别为100级，室温为35℃的条件下，将分装罐F中的溶液分装到容积为125mL且无菌无热源棕色透明的西林瓶中，分装量为100mL，然后压盖、密封；将西林瓶置于灭菌柜中，在105℃下灭菌45分钟，自然冷却后取出，即得本发明所述产品(记为C)。
实施例4
本实施例为药理学实施例，采用本发明产品治疗母猪产后高热。
1.1药品制备：按照制备实施例1-3所述方法制备的得到产品A、B、C，以及采用类似方法制备得到的D、E和F产品，具体各组分质量比见表1：
表1 A-F药物各组分质量比
1.2实验动物：选取规模化牧场成年母猪，产后1-7天，直肠体温超过39.5℃猪为实验对象。
1.3实验方法
1)选取符合条件的实验猪，测定其直肠体温；
2)将符合条件的90头实验猪随机分为6组，A-F组各15头；
3)每组猪，肌肉注射给药，给药量30mL/头，早上9点给药，给药一次；
4)给药后，前12小时每隔2小时测定体温一次，后12小时每隔4小时测定体温一次，连续监测24小时。
1.4实验结果如表2。
表2 治疗过程中，母猪体温变化情况
结果显示：A、B、C组治疗后母猪体温明显低于D-F组，说明按照本发明所制备的组方制剂能够有效治疗母猪产后高温，效果明显好于两种药物的组合，且采用A组分的治疗效果好于B、C组分的治疗效果。