专利名称：大环内酯化合物的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及大环内酯化合物的新用途。
更确切地说，本发明是有关大环内酯化合物在防止或治疗大脑缺血性疾病方面的新用途。
因此，本发明提供了防止或治疗大脑缺血性疾病的大环内酯化合物的新用途。
用于本发明的大环内酯化合物是已知的和已公开过的，例如公开在欧洲专利EP0184162和国际专利WO89/05304中的。
这些已知的化合物包括发酵产物，如FR-900506，FR-900520，FR-900523和FR-900525，它们是从链霉菌属，如Streptomycestsukubaensis9993(FERMBP-927)或吸水链霉菌属Yakushimaensis7238(FERMBP-928)的微生物中分离出的，和从这些发酵产物中制备的相关化合物。
特别指出了这些大环内酯化合物是用于治疗移植排斥反应、自身免疫病和例如由曲霉属、镰孢菌属、毛癣菌属引起的传染性疾病等等。
本发明的发明人惊奇地发现，下面提到的大环内酯化合物具有神经保护作用，它们对防止或治疗大脑缺血性疾病，特别是对脑梗塞是有用的。
本发明所使用的大环内酯化合物能由下列通式(Ⅰ)代表
其中每个取代基的连位对[R1和R2]，[R3和R4]，[R5和R6]分别是(a)代表两个连位氢原子，或(b)在它们连在的连位碳原子之间形成第二个键。
除上述提到的意义外，R2可以代表烷基;
R7代表H、OH、被保护的羟基或O-烷基，或和R1(可代表＝O)相连接;
R8和R9分别代表H或OH;
R10代表H、烷基、由一个或多个羟基取代的烷基、链烯基、由一个或多个羟基取代的链烯基，或由＝O取代的烷基;
X代表O、(H、OH)、(H、H)或-CH2O-;
y代表O、(H、OH)、(H、H)，N-N R11R12，或N-OR13;
R11和R12分别代表H、烷基、芳基或甲苯磺酰基;
R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R22和R23分别代表H或烷基;
R20和R21分别代表O，或它们可以各自分别代表(R20a，H)和(R21a，H);R20a和R21a分别代表OH，O-烷基或OCH2OCH2CH2OCH3或R21a是被保护的羟基;
此外，R20a和R21a可以一起代表环氧环上的氧原子;
n是1，2或3;
除上述提到的意义外，Y、R10和R23可以和它们连着的碳原子一起代表含N-，S-或O-的5-或6-员杂环，杂环可以是饱和的或不饱和的，可以是由一个或多个从烷基、羟基、由一个或多个羟基取代的烷基，O-烷基，苄基和-CH2Se(C5H5)选出的基团所取代。
化合物(Ⅰ)定义的具体实例和本发明较好的加工方式详细叙述如下。
使用在本发明中的述语“低级”的意义，除另外所指，为包括1和6在内的1-6的任意数量的碳原子。
适用的“烷基”的意思为直链或支链饱和脂族烃残基和可以包括低级烷基，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、新戊基、己基等等。
适合的“链烯基”的意义为有一个双键的直链或支链不饱和脂族烃残基并可以包括低级链烯基，如己烯基、丙烯基(例烯丙基)、丁烯基、甲基丙烯基、戊烯基、己烯基等等。
适合的“芳基”可以包括苯基、甲苯基、二甲苯基、枯烯基、 基、萘基等等。
在“被保护的羟基”中的保护基的合适例子可以包括1-(低级烷硫)(低级)烷基，如低级烷硫甲基(例如，甲硫甲基，乙硫甲基，丙硫甲基，异丙硫甲基，丁硫甲基，异丁硫甲基，己硫甲基等)，更合适的为C1-C4烷硫甲基，及最适合的为甲硫甲基;三取代甲硅烷基，如三(低级)烷基甲硅烷基(例如，三甲基甲硅烷基，三乙基甲硅烷基，三丁基甲硅烷基，叔-丁基二甲基甲硅烷基，三-叔丁基甲硅烷基等)，低级烷基二芳基甲硅烷基(例如，甲基二苯基甲硅烷基，乙基二苯基甲硅烷基，丙基二苯甲硅烷基，叔丁基二苯基甲硅烷基等)，更合适的为三(C1-C4)烷基甲硅烷基和C1-C4烷基二苯基甲硅烷基和最合适的为叔-丁基二甲基甲硅烷基和叔丁基二苯基甲硅烷基;和酰基，如脂族酰基，芳族酰基和由芳基取代的脂族酰基，这些酰基是从羧酸，磺酸或氨基甲酸中衍生的。
脂族酰基可以包括任意有一个或多个适合取代基如羧基的烷酰基(例甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、新戊酰基、己酰基、羧乙酰基、羧丙酰基、羧丁酰基、羧己酰基等)，可以任意有一个或多个适合取代基例如低级烷基的环(低级)一烷氧基(低级)烷酰基(如，环丙氧基乙酰基，环丁氧基丙酰基，环己氧基丁酰基，甲氧基乙酰基，甲氧基丙酰基，甲氧基丁酰基，甲氧基戊酰基，甲氧基己酰基等)，樟脑磺酰基、有一个或多个适合取代基如羧基或被保护的羧基(如羧基(低级)烷基氨基甲酰基)的低级烷基氨基甲酰基(例，羧甲基氨基甲酰基，羧乙基氨基甲酰基，羧丙基氨基甲酰基，羧丁氨基甲酰基，羧戊基氨基甲酰基，羧乙基氨基甲酰基等)，被保护的羧基(低级)烷基氨基甲酰基例如三-(低级)烷基甲硅烷基(低级)烷氧羰基(低级)烷基氨基甲酰基(例，三甲基甲硅烷基甲氧羰基乙基氨基甲酰基，三甲基甲硅烷基乙氧羰基丙基氨基甲酰基，三乙基甲硅烷基-乙氧羰基丙基氨基甲酰基，叔-丁基二甲基甲硅烷乙氧基羰基丙基氨基甲酰基，三甲基甲硅烷基丙氧基羰基丁基氨基甲酰等)等等。
芳族酰基可以包括可以任意有一个或多个适合取代基如硝基的芳酰基(例如，苯甲酰基，甲苯酰基，二甲苯酰基，萘酰基，硝基苯甲酰基，二硝基甲酰基，硝基萘酰基等)，可以任意有一个或多个适合取代基如卤素的芳烃磺酰基(例苯磺酰基，甲苯磺酰基，二甲苯磺酰基，萘基磺酰基，氟代苯磺酰基，氯代苯磺酰基，溴代苯磺酰基，碘代苯磺酰基等)等等。
芳基取代的脂族酰基可以包括任意有一个或多个适合取代基如低级烷氧基和三卤代(低级)烷基的芳(低级)烷酰基(例，苯乙酰基，苯丙酰基，苯丁酰基，2-三氟代甲基-2-甲氧-2-苯乙酰基，2-乙氧-2-三氟代甲基-2-苯乙酰基，2-三氟代甲基-2-丙氧-2-苯乙酰基等)等等。
在上述提到的酰基中，最合乎需要的酰基是可以是任意由羧基取代的C1-C4烷酰基、在环烷基部分有2个(C1-C4)烷基的环(C5-C6)烷氧基(C1-C4)烷酰基、樟脑磺酰基、羧基(C1-C4)烷基氨基甲酰基、三(C1-C4)烷基甲硅烷基(C1-C4)烷氧基羰基(C1-C4)烷基氨基甲酰基、可以有一个或两个硝基的苯甲酰基、卤素取代的苯磺酰基、有C1-C4烷氧基和三卤代(C1-C4)烷基的苯基(C1-C4)烷酰基。在这些基团中，最适用的是乙酰基、羧丙酰基、 氧乙酰基、樟脑磺酰基、苯甲酰基、硝基苯甲酰基、二硝基苯甲酰基、碘代苯磺酰基和2-三氟甲基-2-甲氧基-2-苯乙酰基。
适用的“含N-、S-或O-和5-或6-员杂环”可以包括吡啶基、四氢呋喃基等等。
符号R1-R10，R14-R23，X、Y和n的优选实例如下R1和R2各自是氢或结合一起以形成第二个键;
R3和R4结合一起形成第二个键;
R5和R6结合一起形成第二个键R7是氢、羟基、O-低级烷基，如甲氧基或被保护的羟基;
R8是氢或羟基;
R9是羟基;
R10是甲基，乙基，丙基，烯丙基或2-氧代丙基;
R14，R15，R16，R17，R18，R19和R22各自是甲基;
R20是氧代或(R20a，H)，其中R20a是羟基或甲氧基;
R21是(R21a，H)，其中R21a是羟基或被保护的羟基;
R23是氢;
x是氧代，(H，OH)或(H，H);
y是氧代;和n是1或2。
化合物(Ⅰ)的药用盐是非毒性的，其可从是带有无机或有机碱的相应的盐，如碱金属盐(例钠盐、钾盐等)、碱土金属盐(例钙盐，镁盐等)、铵盐和胺盐(例三乙基胺盐，N-苄基-N-甲胺盐，等)等等。
大环内脂化合物(Ⅰ)，它们可以有一种或多种构型异构体，或一种或多种立体异构体，如旋光和几何异构体，这是由于不对称碳或双键的缘故。
那些构型异构体和同分异构体也在本发明的范围内。
特别是，最感兴趣的化合物是下述通式的FR-900506 (在下文被描述为FK506)化学名称17-烯丙基-1，14-二羟基-12-[2-(4-羟基-3-甲氧环己基)-1-甲基乙烯基]-23，25-二甲氧基-13，19，21，27-四甲基-11，28-二氧杂-4-氮杂三环[22.3.1.04.9]二十八碳-18-烯-2，3，10，16-四酮。
其它优选的化合物列在下面。
1，14-二羟基-12-[2-(4-羟基-3-甲氧基环己基)-1-甲基乙烯基]-23，25-二甲氧基-13，19，17，21，27-五甲基-11，28-二氧杂-4-氮杂三环[22.3.1.04.9]二十八碳-18-烯-2，3，10，16-四酮。
12-[2-(4-乙酰氧基-3-甲氧基环己基)-1-甲基乙烯基]-17-稀丙基-1，14-二羟基-23，25-二甲氧基-13，19，21，27-四甲基-11，28-二氧杂-4-氮杂三环[22.3.1.04.9]二十八碳-18-烯-2，3，10，16-四酮。
17-稀丙基-1，14-二羟基-23，25-二甲氧基-13，19，21，27-四甲基-12-[2-[4-3，5-二硝基苯甲酰氧基)-3-甲氧基环己基]-1-甲基乙烯基]-11，28-二氧杂-4-氮杂三环[22.3.1.04.9]二十八碳-18-烯-2，3，10，16-四酮。
17-稀丙基-12-[2-[4-[(-)-2-三氟甲基-2-甲氧基-2-苯基乙酰氧基]-3-甲氧基环己基]-1-甲基乙烯基]-1，14-二羟基-23，25-二甲氧基-13，19，21，27-四甲基-11，28-二氧杂-4-氮杂三环[22.3.1.04.9]二十八碳-18-烯-2，3，10，16-四酮。
17-乙基-1，14-二羟基-12-[2-(4-羟基-3-甲氧基环已基)-1-甲基乙烯基]-23，25-二甲氧基-13，19，21，27-四甲基-11，28-二氧杂-4-氮杂三环[22.3.1.04.9]二十八碳-18-烯-2，3，10，16-四酮，和17-乙基-1，14，20-三羟基-12-[2-(3，4-二羟基环己基)-1-甲基乙烯基]-23，25-二甲氧基-13，19，21，27-四甲基-11，28-二氧杂-4-氮杂三环[22.3.1.04.9]二十八碳-18-烯-2，3，10，16-四酮。
本发明的大环内脂化合物(Ⅰ)能以纯或不纯形式和以单一化合物或它们的混合物施用，较好地是和药物载体施用。
本发明的药物组合物能以药剂形式使用，例如，固体、半固体或液体形式，其含有本发明的大环内脂化合物作为有效成份，和与适用于外用(局部)、肠内、口服、静脉、肌内或非肠道应用的有机或无机载体或赋形剂混合。有效成份可以和，例如用于软膏、霜剂、膏药、片剂、丸剂、胶囊、栓剂、溶液(例如盐水乳剂、悬浮液和其它任何适于使用的形式盐水的无毒性药用载体混合。可以使用的载体是水、蜡、葡萄糖、乳糖、阿拉伯胶、明胶、甘露糖酵、淀粉糊、三硅酸镁、滑石、玉米淀粉、角蛋白、石蜡、胶态硅石、土豆淀粉、尿素和适于用在制造固体、半固体或液体形式药剂中的其它载体，及此外还有辅助剂、稳定剂、增稠剂和着色剂和香料可以使用。在药物组合物中包括的活性化合物的有效量足以产生对疾病过程或情况所需的效果。
可以用本发明治疗的哺乳动物包括家畜哺乳动物(例如牛，马，等)、家养动物(如狗、猫、鼠，等)和人;较好的是人。
为了对人施用此组合物，最好是由口服、非肠道、肠内、静脉内或肌内施用方式应用它。
而大环内酯化合物的治疗有效量的剂量不同，并取决于每个被治疗的病人的年令和条件，假如全身施用，日剂量施用约0.0001-1000mg，较好的是0.001-500mg和更好地是0.01-100mg的有效成份通常是用于治疗各种疾病，及通常施用的平均单剂量约为0.001-0.01mg、0.2-0.5mg、1mg、5mg、10mg、50mg、100mg、250mg和500mg。人类长期施用的日剂量的范围约为0.05-50mg/Kg/天，0.1-10mg/Kg/天较好，0.1-0.3mg/Kg/天最好。
此外，在下述专利申请中公开的化合物是可考虑的，例如EP-A-353678，日本专利申请JP-2(1990)-74330，PCT/GB90/01262，EP-A-413532，PCT/JP91/00314，英国专利申请GB9012963，6，GB9014136，7，GB9014681，2，GB9014880，0，GB9014881，8，GB9015098.8，GB9016115，9和GB9016693，5，EP-A-323865，EP-A-349061，EP-A-358508，Ep-A-364031，EP-A-364032，EP-A-378317，EP-A-378320，EP-A-378321，EP-A-388153，Ep-A-396399，EP-A-396400，EP-A-399579，EP-A-403242，EP-A-428365，Ep-A-356399，GB2225576A，EP-A402931，EP-A-427680，Ep-A-445975，EP-A-455427，EP-A-463690，EP-A-464895，EP-A-466365，EP-A-478235，EP-A-480623，EP-A-509753，EP-A-515071，EP-A-520554，Ep-A-526934，EP-A-530888，EP-A-532089，和EP-A-532088，WO92/06992，WO92/20688，WO93/04679，WO93/05059，和WO93/04680，US5149701，德国专利申请A-4021404，A-4028664，A-4028665，A-4038666，A-4028667，A-4028675，A-4028676，A-4028677，A-4028678，和A-4039587;等等，它们对本专利说明书中所述各种疾病也是有效的。
为了显示本发明的功能，将抗脑冠状部分的神经病理学损伤的大环内脂化合物的代表化合物的作用叙述如下。
方法(1)对雄性Sprague-Dawley大鼠(300-350g;CharlesRiver)进行研究。在腹膜内施用FK506(10mg/Kg)或载体(50%乙醇在含吐温-80的生理盐水中;最终体积为1mg/kg)前用戊巴比妥(Sagittal;60mg/Kg;腹膜内注射)麻醉动物。三十分钟后，通过立体定位放入到中脑动脉背部约0.5mm的梨状皮质中(前囟外侧5.2mm和前面0.2mm;并于硬脑膜下7.5mm)的31号插管1分钟内注射内皮素-1(60微微摩尔，3微升)。在2-3分钟内缓慢拨出前，插管在原地再停留5分钟，然后缝合头皮。在整个过程中，借助连在置于动物直肠中的温度计的热毯使动物维持在37-38℃。当手术完成，在把动物送回笼中前，动物放在恒温箱保持37℃，直到它们完全从麻醉中清醒过来。
注射三天后，用4%于磷酸盐缓冲盐水中的甲醛经心脏(transcardiac)固定前，用甲己炔巴比妥(75mg/Kg;腹膜内)深度麻醉大鼠。原封不动取出大脑，然后在冠平面低温切片(20μm)。接着用甲苯基紫染色脑切片。用光显微镜检查切片，由不了解治疗组的观察人员通过估计梗塞体积以测定神经病理损害。
FK506(10mg/Kg)对由内皮素-1经外周血管微量应用于大鼠中脑动脉所产生的缺血损害的体积的影响
整个半球纹状体新大脑皮层载体n=7116±1225±391±10FK506(n=8)62±12＊＊24±238±11＊＊出现的数据是每个治疗组n个动物的平均梗塞体积(mm3)±平均标准误差(S.e.m.)＊＊;p≤0.01为了多重比较，用Bonferronnl统计学进行Studentt-检验。
观察到FK506减少皮层梗塞体积58%，而对纹状体梗塞体积无效。在FK506治疗组中，缺血损伤的整个半球体积减少47%。
(2)为了把插管插入右股静脉，用在一氧化二氮和氧中(1-2%于80∶20V/V)的氟烷的气体混合物麻醉动物(280-300g，雄性，Sprague-Dawley;CharlesRiver，英国)。随着麻醉的持续，把大鼠放在立体定位架上，进行颅骨切除术并把内皮素-1(120微微摩尔，3μl)在3分钟内通过立体定位放入到中脑动脉背侧约0.5mm的梨形此层(前囟前0.2mm和外侧5.2m;及硬脑膜下7.5mm)的29一号插管注射。在内皮素注射完成后一分钟，通过静脉给大鼠注入FK506(0.1，0.3，1.0mg/Kg)或静脉注入载体(10%于生理盐水中的聚氧乙烯氧化的蓖麻油60(400mg/ml)/乙醇;1ml/Kg)。在缓慢撤出前，插管原地再停留5分钟，然后缝合颅骨。在全部过程中，用连到直肠的温度计恒温控制的热毯把大鼠保持在37-38℃。直到手术完成，动物被放在体温维持37℃的保温箱中，直到它们完全从麻醉中清醒过来。注射三天后，在用多聚甲醛(4%于磷酸盐缓冲盐水中)经心脏固定前，大鼠用戊巴比妥深度麻醉。然后原封不动地移出大脑，并且在恒温低温切片为20μm和用甲苯基紫组织染色前浸在含10%蔗糖的固定剂中到少24小时。由不了解治疗组的个人在光显微镜下观察切片。在8个预定水平的梗塞范围被注释到放大的图表上，并且由每个立体定位水平的损伤的截面面积结合各面间的距离计算梗塞体积。当和载体对照组比较时，皮层中的局部缺血脑损伤的体积减少62%(0.1mg/Kg)、58%(0.3mg/Kg)和65%(1.0mg/Kg)。
为了说明本发明的目的，给出下列实施例。
实施例1FK5061g羟丙基甲基纤维素2910(TC-5R)1g乳糖2gCroscarmelloseSodium(AC-Di-Sol)1g把FK506(1g)溶解在乙醇中(10ml)，并加入羟丙基甲基纤维素2910(TC-5R)(1g)以制备悬浮液。把二氯甲烷(5ml)加到此悬浮液中以制备均匀的溶液。乳糖(2g)和CroscarmelloseSodium(商标AC-Di-Sol，制造者AsahiChemicalIndustry)均匀的悬浮到此溶液中，然后用蒸发的方法除去有机溶剂。残余物用真空干燥器减压干燥10小时。用咖啡磨磨两分钟，然后过筛(32目)，以得到FK506(5g)固体分散组合物(下文叙述为SDF)。用普通方法用胶囊包装，得到每个胶囊含1mg或5mgFK506的胶囊。
实施例2FK50610mgHCO-60(聚氧乙烯氢化的蓖麻油60)400mg乙醇1ml用普通方法把FK506和HCO-60溶解在乙醇中，制备含上述成份的溶液。通过用适合体积的生理盐水稀释，它能通过静脉输射施用。
实施例3FK5062mg聚山梨酸酯50mg丙二醇到1ml用类似实施例2的方法制备上述溶液。
本发明提供了防止或治疗大脑缺血性疾病，换句话说，是由缺血引起的脑损伤，如脑梗塞的有用药物。因此，当下列病或损害发生时，它们是有用的，那就是热损害，脑出血如蛛网膜下的出血或大脑内的出血，脑血栓，脑栓塞，心动停止，中风，短暂的缺血发作(TIA)，高血压脑病等等。
权利要求
1.通式(Ⅰ)的大环内脂化合物或其药用盐在防止和治疗大脑缺血性疾病中的应用 其中每个取代基的连位对[R1和R2]，[R3和R4]，[R5和R6]分别为(a)代表两个连位氢原子，或(b)在它们连在的连位碳原子之间形成第二个键。除上述意义外，R2可以代表烷基；R7代表H、OH、被保护的羟基或O-烷基，或和R1(可代表=O)相连；R8和R9分别代表H或OH；R10代表H、烷基、由一个或多个羟基取代的烷基、链烯基、由一个或多个羟基取代的链烯基，或由=O取代的烷基；X代表O、(H、OH)、(H、H)或-CH2O-y代表O、(H、OH)、(H、H)，N-NR11R12，或N-OR13；R11和R12分别代表H、烷基、芳基或甲苯磺酰基；R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R22和R23分别代表H或烷基；R20和R21分别代表O，或它们可以各自分别代表(R20a，H)和(R21a，H)；R20a的R21a分别代表OH，O-烷基或OCH2OCH2CH2OCH3或R21a是被保护的羟基；此外，R20a和R21a可以一起代表环氧环上的氧原子；n是1，2或3；除了它们的上述意义外，Y、R10和R23可以和它们连着的碳原子一起代表含N-、S-或O-的5-或6-员杂环，杂环可以是饱和的或不饱和的，可以是由一个或多个从烷基、羟基、由一个或多个羟基取代的烷基、O-烷基、苄基和-CH2Se(C6H5)选出的基团所取代。
2.按照权利要求1定义的大环内酯化合物(Ⅰ)或它们的药用盐作为大脑缺血性疾病预防或治疗剂的应用。
3.大脑缺血性疾病的预防剂或治疗剂，其特征在于含有如权利要求1定义的大环内化合物(Ⅰ)或它们的药用盐。
4.预防或治疗哺乳动物大脑缺血性疾病的方法，其特征在于施用如权利要求1定义的大环内酯化合物(Ⅰ)或它们的药用盐。
5.如权利要求1定义的大环内酯化合物(Ⅰ)或它们的药用盐在制备防止或治疗大脑缺血性疾病的药物中的应用。
6.治疗或防止大脑缺血性疾病的药物组合物，其特征在于含有如权利要求1定义的大环内脂化合物(Ⅰ)或它们的药用盐和载体或赋形剂。
7.制备权利要求6的药物组合物的方法，其特征在于将大环内酯化合物(Ⅰ)或它们的药用盐和载体或赋形剂混合。
8.用于权利要求1至7的任何一项中的大环内脂化合物是17-烯丙基-1，14-二羟基-12-[2-(4-羟基-3-甲氧基环己基)-1-甲基乙烯基]-23，25-二甲氧基-13，19，21，27-四甲基-11，28-二氧杂-4-氮杂三环[22.3.1.04.9]二十八碳-18-烯-2，3，10，16-四酮。
9.按权利要求1到8项中的任何一项的大脑缺血性疾病是脑梗塞。
全文摘要
本发明涉及防止或治疗大脑缺血性疾病的通式(I)的大环内酯化合物的新应用。其中每个符号的定义如说明书。本发明提供了防止或治疗大脑缺血性疾病，换句话说，是由缺血引起的脑损伤，例如脑梗塞的有用药物。因此，当患有下列病或损伤时，它们是有益的，那就是热损害、脑出血、如蛛网膜下的出血或大脑内的出血、脑血栓、脑栓塞、心动停止、中风、短暂的缺血发作(TIA)，高血压脑病等等。
文档编号A61P25/28GK1103580SQ9312175
公开日1995年6月14日 申请日期1993年12月29日 优先权日1992年12月29日
发明者J·S·凯利, S·P·布彻, J·沙基 申请人:藤泽药品工业株式会社