酸分解酶活性程度的图。
[0065] 图43为示出在向四环素诱导DU145变异株及四环素诱导MDA-MB-231变异株进行 四环素处理后的集落形成能力的图。
[0066] 图44为示出在向四环素诱导DU145变异株及四环素诱导MDA-MB-231变异株进行 四环素处理后的细胞增殖率的图。
[0067] 图45为示出在向四环素诱导DU145变异株及四环素诱导MDA-MB-231变异株进行 四环素处理后的5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU)混合程度的图。
[0068] 图46为示出同源性磷酸酶-张力蛋白在p34表达Hs578T细胞株中的表达及集落 形成能力的图。
[0069] 图47为示出在向小鼠注入四环素诱导DU145变异株来形成肿瘤后，基于四环素注 射的同源性磷酸酶-张力蛋白的表达水平、P34的表达水平及NEDD4-1的表达水平的图。
[0070] 图48为示出在向小鼠注入四环素诱导MDA-MB-231变异株来形成肿瘤后，基于四 环素注射的同源性磷酸酶-张力蛋白的表达水平、P34的表达水平及NEDD4-1的表达水平 的图。
[0071] 图49为示出在向小鼠注入四环素诱导DU145变异株来形成肿瘤后，基于四环素注 射的肿瘤体积变化的图。
[0072] 图50为示出在向小鼠注入四环素诱导MDA-MB-231变异株来形成肿瘤后，基于四 环素注射的肿瘤体积变化的图。
[0073] 图51为示出在向小鼠注入四环素诱导DU145变异株来形成肿瘤后，基于四环素注 射的同源性磷酸酶-张力蛋白的核定位的图。
[0074] 图52为示出在向小鼠注入四环素诱导MDA-MB-231变异株来形成肿瘤后，基于四 环素注射的同源性磷酸酶-张力蛋白的核定位的图。
[0075] 图53为示出同源性磷酸酶-张力蛋白及NEDD4-1蛋白在p53 / /小鼠胚胎成纤维 细胞中的表达水平的图。
[0076] 图54为示出在P537/小鼠胚胎成纤维细胞中，基于Ras的表达、p34的表达及 NEDD4-1的表达的集落形成能力的图。
[0077] 图55为示出同源性磷酸酶-张力蛋白及NEDD4-1蛋白在NEDD4-1抑制p53 /小 鼠胚胎成纤维细胞细胞中的表达水平的图。
[0078] 图56为示出在NEDD4-1抑制p53 /小鼠胚胎成纤维细胞细胞中，基于Ras的表达、 P34的表达及NEDD4-1的表达的集落形成能力的图。
[0079] 图57为示出同源性磷酸酶-张力蛋白在NEDD4-1抑制p53 /小鼠胚胎成纤维细 胞细胞中的多聚泛素化程度的图。
[0080] 图58为示出p53 //小鼠胚胎成纤维细胞细胞中的Ras活性的图。
[0081] 图59为示出基于在各种乳腺癌级结肠癌细胞中的NEDD4-l/p34的表达的同源性 磷酸酶-张力蛋白的表达比率的图。
[0082] 图60为示出基于在各种乳腺癌级结肠癌细胞中的NEDD4_l/p34的表达的同源性 磷酸酶-张力蛋白的表达比率的图。
[0083] 图61为以图样化的方式示出p34、NEDD4-1及同源性磷酸酶-张力蛋白之间的综 合相互作用的图。
[0084] 图62为示出基于在人类乳腺癌细胞及大肠癌细胞中的p34活性抑制剂处理的同 源性磷酸酶-张力蛋白泛素化抑制程度的图。
[0085] 图63为示出基于p34活性抑制剂处理的p34及NEDD4-1蛋白的结合抑制效果的 图。
[0086] 图64为示出在人类乳腺癌细胞株中，p34活性抑制剂处理对细胞死亡及蛋白表达 产生的影响的图。
[0087] 图65为示出在人类乳腺癌细胞株中，p34活性抑制剂处理对同源性磷酸酶-张力 蛋白脂质磷酸分解酶活性产生的影响的图。
[0088] 图66为示出在人类大肠癌细胞株中，p34活性抑制剂处理对细胞死亡及蛋白表达 产生的影响的图。
[0089] 图67为示出在人类大肠癌细胞株中，p34活性抑制剂处理对同源性磷酸酶-张力 蛋白脂质磷酸分解酶活性产生的影响的图
【具体实施方式】
[0090] 以下，详细说明本发明。
[0091] 本发明提供用于预防或治疗癌的组合物，上述用于预防或治疗癌的组合物包含 P34基因的表达抑制剂或p34蛋白的活性抑制剂作为有效成分。
[0092] 并且，本发明提供用于抑制癌转移的组合物，上述用于抑制癌转移的组合物包含 P34基因的表达抑制剂或p34蛋白的活性抑制剂作为有效成分。
[0093] 上述组合物包含药学组合物或食品组合物。
[0094] 根据本发明的p34基因的表达抑制剂可以为选自由互补结合于p34基因的信使核 糖核酸（mRNA)的反义核苷酸、短发夹核糖核酸（small hairpin RNA，shRNA)、小干扰核糖 核酸（small interfering RNA，siRNA)及核酶（ribozyme)组成的组中的一种以上，但不局 限于此。
[0095] 根据本发明的p34蛋白的活性抑制剂可以为选由特异结合于p34蛋白的化合物、 肽、肽模拟物、底物类似物、核酸适体及抗体组成的组中的一种以上，但不局限于此。
[0096] 根据沃森-克里克（Watson-Crick)碱基配对的定义，上述反义核苷酸为结合（混 合）于脱氧核糖核酸（DNA)的互补性碱基序列、未成熟的信使核糖核酸的互补性碱基序列 或成熟的信使核糖核酸的互补性碱基序列，从而作为蛋白质来在脱氧核糖核酸中妨碍遗传 密码的流动。
[0097] 上述小干扰核糖核酸由在对p34蛋白进行编码的基因的信使核糖核酸的碱基序 列中选择的15序列至30序列（mer)的正义序列及与上述正义序列互补性地结合的反义序 列构成，此时，上述义序列并不特别限定于此，但是，优选地由25个碱基构成。
[0098] 上述化合物均包含所有特异结合于p34蛋白，来可抑制p34蛋白活性的任意化合 物，优选为具有抑制P34蛋白和NEDD4-1蛋白结合的活性的化合物，但并不局限于此。在本 发明的一实施例中，作为特异结合于上述P34蛋白的化合物的一例，提出以下化学式1表示 的化合物或其的药学上可允许的盐。
：〇
[0101] 在本发明中，"药学上可允许的盐"是指所具有的浓度对个体起到比较无毒、无害 的有效作用，并且上述盐的副作用不使由化学式1表示的化合物的有益效能下降的上述化 合物的任意的所有有机附加盐或无机附加盐。由上述化学式1表示的化合物的药学上可允 许的盐在无其他条件的情况下，包含全部可存在于由化学式1表示的化合物的酸性盐或碱 性盐。
[0102] 上述肽模拟物（Peptide mimetics)通过抑制p34蛋白的结合域来抑制p34蛋白的 活性。肽模拟物可以为肽类或非肽类，可由如Psi结合等的非肽结合方式结合的氨基酸构 成。并且，上述肽模拟物可以为包含"构象受限的（conformationally constrained)"肽、 循环模拟物（cyclic mimetics)、至少一个的环外域（exocyclic domain)、结合部分（结合 氨基酸）及活性部位的循环模拟物。肽模拟物可以以与P34蛋白的二级结构特性相类似的 方式结构化，并可模仿如抗体或水溶性受体等巨大分子的抑制特性，可以为起到与天然对 抗剂相同作用的新型小分子。
[0103] 上述核酸适体（aptamer)作为单链脱氧核糖核酸或核糖核酸分子，可通过利 用称为数富集的配基系统进化技术（SELEX，systematic evolution of ligands by exponential enrichment)的寡核苷酸（oligonucleotide)库的进化方法来分离以对特定 化学分子或生物分子具有高亲和力和选择力的方式结合的低聚物而得。核酸适体可特异与 靶结合，并可调控靶的活性，例如，可通过结合来阻断靶的功能。
[0104] 上述抗体可特异、直接与p34蛋白结合来有效抑制p34蛋白的活性。优选地，作为 与上述p34蛋白特异结合的抗体，可使用多克隆（polyclonal)抗体或单克隆（monoclonal) 抗体。通过本发明所属领域公知的方法来制作与上述P34蛋白特异结合的抗体也无妨，也 可购买已商品化的P34抗体来使用。上述抗体可根据本发明所属领域公知的现有方法，通 过向外部宿主注射免疫原因 P34蛋白来制作。外部宿主包括小鼠、大鼠 、羊、兔子等的哺乳 动物。免疫原可采用肌肉注射、腹腔注射或皮下注射方法来注射，通常，可与用于提高抗原 性的助剂（adjuvant) -同注射。可通过收集定期从外部宿主采集血液而形成的效价及对 抗原表现出特异性的血清来分离抗体。
[0105] 根据本发明，在抑制p34的情况下，通过引起同源性磷酸酶-张力蛋白的单泛素 化，来促进同源性磷酸酶-张力蛋白的核定位，最终抑制与肿瘤的生存、增殖、侵入性及转 移性相关的蛋白激酶B通路，从而具有使同时表达同源性磷酸酶-张力蛋白及NEDD4-1的 各种癌细胞的肿瘤发生率及集落形成能力明显减少的效果。因此，P34基因的表达抑制剂 或P34蛋白的活性抑制剂可有效用作癌的治疗剂或癌转移抑制剂。
[0106] 上述癌包括口腔癌、肝癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头部 癌、颈癌、子宫颈癌、卵巢癌、大肠癌、小肠癌、直肠癌、输卵管癌、肛门癌、子宫内膜癌、阴道 癌、外阴癌、霍奇金病（Hodgkin' s disease)、食道癌、淋巴腺癌、膀胱癌，胆囊癌、内分泌腺 癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴莖癌、前列腺癌、慢性白血病、 急性白血病、淋巴细胞淋巴瘤、肾癌、输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤、一次 中枢神经系统淋巴瘤、脊髓肿瘤、脑干胶质瘤及脑垂体腺瘤，优选地，包含乳腺癌、结肠癌、 胃癌、肝癌、肺癌、前列腺癌等，但并不局限于此。
[0107] 并且，上述癌包含全部同时表达p34及NEDD4-1的癌，但并不局限于此。
[0108] 本发明的组合物还可包含一种以上具有抗癌效果的公知的有效成分。
[0109] 本发明的组合物可通过与药学上允许的载体一同以适当的形态剂型化。作为药 学上允许的载体，例如有乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等的口服给药用载 体及水、适当的油、食盐水，水溶性葡萄糖及乙二醇等的非口服给药用载体等，其中还可 包含稳定化剂及保鲜剂。适当的稳定化剂有亚硫酸氢钠 （sodium bisulfite)、亚硫酸钠 (sodium sulfite)或抗坏血酸（ascorbic acid)等的抗氧化剂。适当的保鲜剂有苯扎氯 铵（benzalkonium chloride)、对羟基苯甲酸甲酯（methylparaben)或对羟基苯甲酸丙 酯（propylparaben)及氯丁醇（Chlorobutanol)。除此之外的药学上允许的载体可参考 以下文南犬的记载（Remington' s Pharmaceutical Sciences, 19th ed. , Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995)〇
[oho] 对本发明的药学组合物，可通过所需的方法来进行口服给药或非口服给药（例 如，适用于静脉注射、皮下注射、腹腔注射或局部注射），给药量可根据个体的体重、年龄、性 另IJ、健康状况、饮食、注射时间、注射方法、注射期间或间隔、排泄率、体质特性、制剂的性质 等来采用多种范围。本发明的药学组合物的日给药量为约0. 001~1000mg/kg，但是，可根 据临床实验结果来进行增减，优选地，一日一次给药或一日分多次给药。
[0111] 本发明的药学组合物可以以给药单位形态剂型化。例如，上述剂型化的给药单位 可包括上述有效化合物的日个别给药量的1倍、2倍、3倍或4倍，或日给药量的1 /2倍、1 /3 倍或1/4倍。优选地，上述个别给药量包含有效化合物的单次给药量，这相当于常规日给药 量的全部给药量、1/2倍给药量、1/3倍给药量或1/4倍给药量。
[0112] 并且，本发明的组合物可以多种方式用于有效预防或改善癌的药剂、食品及饮料 等。
[0113] 可添加本发明的p34基因的表达抑制剂或p34蛋白的活性抑制剂的食品有如各种 食品类、饮料、口香糖、茶、维生素复合剂、保健辅助食品类等，并可以以粉末、颗粒、片剂、胶 囊或饮料形态来使用。此时，通常，可添加的食品或饮料中的上述有效成分的量为整体食品 重量的0.0 l重量百分比至15重量百分比，而在保健饮料中，以100mL为基准，可按0. 02g 至IOg的比率添加保健饮料组合物，优选地，可按0. 3g至Ig的比率添加保健饮料组合物。
[0114] 本发明的保健功能食品除了按所提出的上述比率包含作为必要成分的上述有效 成分之外，还可包含食品学上可允许的食品辅助添加剂作为追加成分，例如，各种香味剂或 天然碳水化合物等。上述天然碳水化合物有：葡萄糖、果糖等的单糖类，麦芽糖、蔗糖等的二 糖类，及糊精、环糊精等的多糖类等的常规的糖；以及木糖醇、山梨醇、赤藻糖醇等的糖醇。 作为除上述的化合物之外的香味剂，可有效使用天然香味剂（索马甜、甜叶菊提取物（例 如，莱苞迪甙A、甘草素等）及合成香味剂（糖精、阿斯巴甜等）。通常，上述天然碳水化合 物的比率为，在每100mL的本发明的保健功能食品中含有约Ig至20g的上述天然碳水化合 物。除此之外，本发明的保健功能食品可包含各种营养剂、维生素、矿物（电解质）、合成风 味剂及天然风味剂等的风味剂、着色剂及填充剂（奶酪、巧克力等）、果胶酸及其盐、褐藻酸 及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、PH调