一种检测食管癌相关标志物的探针组合及其试剂盒的制作方法

文档序号:11145668阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种探针组合物,其特征在于,所述探针组合物能够检测食管癌相关标志物,所述标志物选自hsa-miR-25-3p、hsa-miR-373-3p、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-208a-3p、hsa-miR-518b、hsa-miR-138-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-296-5p、hsa-miR-21-5p、hsa-miR-223-3p、hsa-miR-192-5p或hsa-miR-194-5p中一种或以上。

2.根据权利要求1所述的探针组合物,其特征在于,包括捕获探针:

所述捕获探针的核苷酸序列自5’端至3’端依次为P1序列、间隔臂序列、P2序列;

所述P1序列与权利要求1所述的标志物特异性结合;

所述间隔臂序列为5个~10个T。

3.根据权利要求2所述的探针组合物,其特征在于,所述P1序列选自SEQ ID NO:1~12,所述P2序列选自SEQ ID NO:13~24。

4.根据权利要求3所述的探针组合物,其特征在于,所述捕获探针选自以下序列:

自5’端至3’端顺序连接的SEQ ID NO:1、5个T、SEQ ID NO:13;

自5’端至3’端顺序连接的SEQ ID NO:2、5个T、SEQ ID NO:14;

自5’端至3’端顺序连接的SEQ ID NO:3、5个T、SEQ ID NO:15;

自5’端至3’端顺序连接的SEQ ID NO:4、5个T、SEQ ID NO:16;

自5’端至3’端顺序连接的SEQ ID NO:5、5个T、SEQ ID NO:17;

自5’端至3’端顺序连接的SEQ ID NO:6、5个T、SEQ ID NO:18;

自5’端至3’端顺序连接的SEQ ID NO:7、5个T、SEQ ID NO:19;

自5’端至3’端顺序连接的SEQ ID NO:8、5个T、SEQ ID NO:20;

自5’端至3’端顺序连接的SEQ ID NO:9、5个T、SEQ ID NO:21;

自5’端至3’端顺序连接的SEQ ID NO:10、5个T、SEQ ID NO:22;

自5’端至3’端顺序连接的SEQ ID NO:11、5个T、SEQ ID NO:23;

自5’端至3’端顺序连接的SEQ ID NO:12、5个T、SEQ ID NO:24。

5.一种食管癌相关标志物检测试剂盒,其特征在于,包括权利要求2~4任一项所述的捕获探针和信号放大组合物。

6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述信号放大组合物为:

一级信号放大探针,在一级信号放大探针的5’端修饰荧光基团;

或一级信号放大探针,二级信号放大探针,在二级信号放大探针的3’端修饰荧光基团;

或一级信号放大探针、二级信号放大探针,三级信号放大探针,在三级信号放大探针的5’端修饰荧光基团;

针对所述捕获探针中的任一种,所述一级信号放大探针与所述捕获探针特异性结合;

针对所述一级信号放大探针中的任一种,所述二级信号放大探针与所述一级信号放大探针特异性结合;

针对所述二级信号放大探针中的任一种,所述三级信号放大探针与所述二级信号放大探针特异性结合。

7.根据权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述:

一级信号放大探针自5’端至3’端依次为P4序列、间隔臂序列、P3序列;

二级信号放大探针自5’端至3’端依次为P5序列、间隔臂序列、P6序列;

三级信号放大探针自5’端至3’端依次为P8序列、间隔臂序列、P7序列;

所述P3序列与P2序列特异性结合;

所述P5序列与P4序列特异性结合;

所述P6序列与P7序列特异性结合;

所述间隔臂序列独立的为2个~20个T;

所述P8序列为5个T。

8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述P4序列选自SEQ ID NO:25~36。

9.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述P6序列选自SEQ ID NO:49~60。

10.根据权利要求5~9任一所述的试剂盒,其特征在于,所述荧光基团选自FAM、TET、JOE、HEX、Cy3、TAMRA、ROX、Texas Red、LC RED640、Cy5、LC RED705或Alexa Fluor 488,且针对不同捕获探针的信号放大探针上修饰的荧光基团互不相同。

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